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脂蛋白电子显微结构研究的优化负染方法
被引量：
1
1
作者
童慧敏
张磊
+1 位作者
黄丽清
任罡
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期972-978,共7页
人类心血管等疾病与胆固醇含量的高低有着十分密切的关系.人体内胆固醇主要通过血液中的脂蛋白来调节和运载.因此,新一代调节胆固醇的药物设计迫切地需要揭示脂蛋白分子结构与功能之间的关系.由于脂蛋白分子的成分高度复杂、结构特征灵...
人类心血管等疾病与胆固醇含量的高低有着十分密切的关系.人体内胆固醇主要通过血液中的脂蛋白来调节和运载.因此,新一代调节胆固醇的药物设计迫切地需要揭示脂蛋白分子结构与功能之间的关系.由于脂蛋白分子的成分高度复杂、结构特征灵活、尺寸微小,传统的蛋白质结构标定技术,如X射线衍射、核磁共振谱、质谱和冷冻电子显微镜等手段都面临着巨大的困难.针对这一问题,任罡小组最近提出一种优化的电镜负染制备方法,可以观测到单个脂蛋白分子的空间结构.此方法应用的成功,使得对单个脂蛋白分子的结构研究成为可能.同时也证明该负染色技术作为一种普遍的实验手段,可以用于对蛋白质小分子的结构研究,从而将促进新一代蛋白质分子药物的研发.
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关键词
透射电子显微镜
冷冻电镜法
脂蛋白结构
优化的负染色方法
蛋白
质
结构
与功能
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职称材料
干扰PAG1介导肿瘤相关巨噬细胞自噬状态提高放射抗拒喉鳞癌的放射敏感性研究
2
作者
张鄂
黄畅
+2 位作者
费永光
岑瑞祥
陈沛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期131-138,共8页
目的:探究鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(PAG1)在喉鳞癌(LSCC)组织中的表达,以及干扰肿瘤相关巨噬细胞PAG1表达对放射抗拒喉鳞癌细胞敏感性的影响。方法:收集武汉市第一医院收治的40例LSCC肿瘤组织及邻近癌旁组织,免疫组织化学染色和RT...
目的:探究鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(PAG1)在喉鳞癌(LSCC)组织中的表达,以及干扰肿瘤相关巨噬细胞PAG1表达对放射抗拒喉鳞癌细胞敏感性的影响。方法:收集武汉市第一医院收治的40例LSCC肿瘤组织及邻近癌旁组织,免疫组织化学染色和RT-qPCR检测PAG1表达;将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型肿瘤相关巨噬细胞,通过脂质体介导法将PAG1-siRNA转染至M2型肿瘤相关巨噬细胞,RT-qPCR和蛋白质印迹法检测转染效果,ELISA法检测巨噬细胞分泌相关细胞因子IL-6、IL-12、IL-4及IL-10含量;建立肿瘤相关巨噬细胞与放射抗拒人喉鳞癌细胞Hep-2max的共培养体系,培养4 d后收集Hep-2max细胞,经8 Gy X射线照射24 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡,免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测细胞自噬水平。结果:喉鳞癌肿瘤组织中PAG1蛋白和mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01);THP-1细胞诱导后呈不规则多边形,且胞体有尾足伸出,CD86表达减少,CD206表达明显增加(P<0.01),提示成功诱导肿瘤相关巨噬细胞;在PAG1-siRNA转染肿瘤相关巨噬细胞后,细胞中PAG1 mRNA和蛋白相对表达量较对照组均显著下降(P<0.01),培养液上清中IL-6和IL-12水平升高,IL-4和IL-10水平降低(P<0.01);诱导后的肿瘤相关巨噬细胞转染PAG1-siRNA与Hep-2max共培养,再经过8 Gy X射线照射,细胞活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.01),TUNEL阳性率升高(P<0.01),同时,LC3蛋白绿色荧光强度明显减弱,细胞中Beclin-1蛋白表达水平下降(P<0.01),P62蛋白表达水平升高(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下调(P<0.01)。结论:干扰肿瘤相关巨噬细胞中PAG1表达可改变放射抗拒人喉鳞癌细胞自噬状态,增强放射抗拒人喉鳞癌细胞的放射敏感性,诱导放疗后细胞凋亡发生。
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关键词
鞘糖
脂
微
结构
域1相关磷酸化
蛋白
喉鳞癌
自噬
凋亡
放射敏感性
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职称材料
题名
脂蛋白电子显微结构研究的优化负染方法
被引量：
1
1
作者
童慧敏
张磊
黄丽清
任罡
机构
物质非平衡合成与调控教育部重点实验室
The Molecular Foundry
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期972-978,共7页
基金
美国能源部基础能源科学办公室资助项目(DE-AC02-05CH11231)
文摘
人类心血管等疾病与胆固醇含量的高低有着十分密切的关系.人体内胆固醇主要通过血液中的脂蛋白来调节和运载.因此,新一代调节胆固醇的药物设计迫切地需要揭示脂蛋白分子结构与功能之间的关系.由于脂蛋白分子的成分高度复杂、结构特征灵活、尺寸微小,传统的蛋白质结构标定技术,如X射线衍射、核磁共振谱、质谱和冷冻电子显微镜等手段都面临着巨大的困难.针对这一问题,任罡小组最近提出一种优化的电镜负染制备方法,可以观测到单个脂蛋白分子的空间结构.此方法应用的成功,使得对单个脂蛋白分子的结构研究成为可能.同时也证明该负染色技术作为一种普遍的实验手段,可以用于对蛋白质小分子的结构研究,从而将促进新一代蛋白质分子药物的研发.
关键词
透射电子显微镜
冷冻电镜法
脂蛋白结构
优化的负染色方法
蛋白
质
结构
与功能
分类号
Q33 [生物学—遗传学]
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
干扰PAG1介导肿瘤相关巨噬细胞自噬状态提高放射抗拒喉鳞癌的放射敏感性研究
2
作者
张鄂
黄畅
费永光
岑瑞祥
陈沛
机构
武汉市第一医院耳鼻咽喉头颈外科
赤壁市人民医院耳鼻咽喉头颈外科
鄂东医疗集团黄石市中心医院耳鼻咽喉头颈外科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期131-138,共8页
基金
湖北省卫生健康委员会联合基金项目(WJ2019H459)。
文摘
目的:探究鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(PAG1)在喉鳞癌(LSCC)组织中的表达,以及干扰肿瘤相关巨噬细胞PAG1表达对放射抗拒喉鳞癌细胞敏感性的影响。方法:收集武汉市第一医院收治的40例LSCC肿瘤组织及邻近癌旁组织,免疫组织化学染色和RT-qPCR检测PAG1表达;将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型肿瘤相关巨噬细胞,通过脂质体介导法将PAG1-siRNA转染至M2型肿瘤相关巨噬细胞,RT-qPCR和蛋白质印迹法检测转染效果,ELISA法检测巨噬细胞分泌相关细胞因子IL-6、IL-12、IL-4及IL-10含量;建立肿瘤相关巨噬细胞与放射抗拒人喉鳞癌细胞Hep-2max的共培养体系,培养4 d后收集Hep-2max细胞,经8 Gy X射线照射24 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡,免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测细胞自噬水平。结果:喉鳞癌肿瘤组织中PAG1蛋白和mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01);THP-1细胞诱导后呈不规则多边形,且胞体有尾足伸出,CD86表达减少,CD206表达明显增加(P<0.01),提示成功诱导肿瘤相关巨噬细胞;在PAG1-siRNA转染肿瘤相关巨噬细胞后,细胞中PAG1 mRNA和蛋白相对表达量较对照组均显著下降(P<0.01),培养液上清中IL-6和IL-12水平升高,IL-4和IL-10水平降低(P<0.01);诱导后的肿瘤相关巨噬细胞转染PAG1-siRNA与Hep-2max共培养,再经过8 Gy X射线照射,细胞活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.01),TUNEL阳性率升高(P<0.01),同时,LC3蛋白绿色荧光强度明显减弱,细胞中Beclin-1蛋白表达水平下降(P<0.01),P62蛋白表达水平升高(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下调(P<0.01)。结论:干扰肿瘤相关巨噬细胞中PAG1表达可改变放射抗拒人喉鳞癌细胞自噬状态,增强放射抗拒人喉鳞癌细胞的放射敏感性,诱导放疗后细胞凋亡发生。
关键词
鞘糖
脂
微
结构
域1相关磷酸化
蛋白
喉鳞癌
自噬
凋亡
放射敏感性
Keywords
Glycosphingolipid microdomain 1 related phosphorylation protein
Laryngeal squamous cell carcinoma
Autophagy
Apoptosis
Radiosensitivity
分类号
R739.65 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
脂蛋白电子显微结构研究的优化负染方法
童慧敏
张磊
黄丽清
任罡
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
干扰PAG1介导肿瘤相关巨噬细胞自噬状态提高放射抗拒喉鳞癌的放射敏感性研究
张鄂
黄畅
费永光
岑瑞祥
陈沛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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