日粮能量水平对蛋鸡性成熟过程中卵巢重和E_2及P_4水平的影响 被引量：9

1

作者 杨玉 黄应祥 +1 位作者 贺俊平 耿建军 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期365-369,共5页

本文以研究日粮能量水平对蛋鸡性成熟过程中卵巢重、E2及P4水平的影响为目的。结果表明:在性成熟过程中,卵巢重和卵巢表面卵泡数随着年龄和能量水平的提高而增多,22周龄时,除低能Ⅱ组外,其他各组卵巢质量和优势卵泡(10mm以上)明显增多,... 本文以研究日粮能量水平对蛋鸡性成熟过程中卵巢重、E2及P4水平的影响为目的。结果表明:在性成熟过程中,卵巢重和卵巢表面卵泡数随着年龄和能量水平的提高而增多,22周龄时,除低能Ⅱ组外,其他各组卵巢质量和优势卵泡(10mm以上)明显增多,与低能Ⅱ组差异达显著水平;血清E2和P4含量持续上升,22周龄时均达较高水平;高能组E2和P4水平显著高于低能组,到22周龄,对照组E2水平显著高于其他各组,高能组又显著高于低能Ⅱ组;其他4组P4水平显著高于低能Ⅱ组,说明过低的能量水平通过影响E2和P4水平的分泌进而影响卵巢卵泡的发育。 展开更多

关键词 日粮能量 蛋鸡 卵巢重 e2 p4

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不同能量摄入水平对围产期奶牛肝载脂蛋白E mRNA丰度的影响 被引量：6

2

作者 孙玉成 王雪莹 +2 位作者 李红梅 王哲 张嘉保 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期342-347,共6页

将年龄、胎次相同,年产奶量大于5 000 kg的围产期健康奶牛30头随机分为3组,每组10头。低能组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)减少20%日粮(能量摄入80%组)、对照组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)日粮(能量摄入100%组)和高能组饲喂中国奶牛饲养标... 将年龄、胎次相同,年产奶量大于5 000 kg的围产期健康奶牛30头随机分为3组,每组10头。低能组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)减少20%日粮(能量摄入80%组)、对照组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)日粮(能量摄入100%组)和高能组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)增加20%日粮(能量摄入120%组),试验从产前28 d开始至产后56 d结束,产后各组奶牛均饲喂标准日粮。采用内对照RT-PCR方法检测了不同能量摄入围产期奶牛肝组织载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)mRNA丰度。结果表明:apoE mRNA相对表达量从产前28 d至产后56 d各组均呈现先升高后降低的趋势,各组apoE mRNA水平均在产后一天达到最大值(P<0.01),且产后均高于产前(产后56 d除外);产前14 d至产后28 d低能组apoE mRNA相对表达量均高于其他两组(P<0.05或P<0.01),高能组在产后28 d和56 d高于对照组(P<0.01)。可见,围产期奶牛能量摄入水平对肝组织载脂蛋白E mRNA丰度有显著影响。 展开更多

关键词 能量摄入 载脂蛋白e mRNA 围产期 奶牛

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HPV16/18-E6、p53和MDM2蛋白在人喉鳞癌中的表达及相关性研究 被引量：4

3

作者 强笔 马纪清 +5 位作者 邱杰 何金 赵舒薇 郎军添 叶青 王海青 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1320-1323,共4页

目的：探讨HPV16／18-E6、p53和MDM2蛋白在人喉鳞状细胞癌（鳞癌）组织中的表达及其在喉鳞癌发生和发展过程中的相互关系。方法：用EnVision免疫组织化学法检测72例喉鳞癌、24例喉癌前病变、15例声带息肉和8例癌周正常喉组织标本中HPV16... 目的：探讨HPV16／18-E6、p53和MDM2蛋白在人喉鳞状细胞癌（鳞癌）组织中的表达及其在喉鳞癌发生和发展过程中的相互关系。方法：用EnVision免疫组织化学法检测72例喉鳞癌、24例喉癌前病变、15例声带息肉和8例癌周正常喉组织标本中HPV16／18-E6、p53和MDM2蛋白的表达并比较，对喉鳞癌与临床病理因素进行相关性分析。、结果：癌周正常喉组织、声带息肉、喉癌前病变和喉鳞癌组织中HPV16／18-E6蛋白的阳性表达率分别为0（0／8）、6．7％（1／15）、12．5％（3／24）和37．5％（27／72），p53蛋白的阳性表达率分别为0（0／8）、13．3％（2／15）、25．0％（6／24）和52．8％（38／72），MDM2蛋白的阳性表达率分别为0（0／8）、6．7％（1／15）、37．5％（9／24）和70．8％（51／72），HPV16／18-E6、p53和MDM2蛋白的阳性表达在声带息肉、喉癌前病变与喉鳞癌组之间均有显著性差异（P〈0．05）。HPV16／18-E6蛋白和MDM2蛋白的阳性表达在病理Ⅰ～Ⅲ级肿瘤之间呈明显升高趋势，有显著性差异（P〈0．05）。HPV16／18E6蛋白的阳性表达与临床分期和淋巴结转移明显相关（P〈0．05）。p53蛋白阳性表达与HPV16／18-E6蛋白、MDM2蛋白阳性表达有显著正相关性（P〈0．05）。结论：HPV16／18-E6、MDM2蛋白的过表达和p53的失活与人喉鳞癌的发生发展密切相关。 展开更多

关键词 喉肿瘤 癌 鳞状细胞 乳头状瘤病毒 人 e6蛋白 p53蛋白 MDM2蛋白

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细胞周期蛋白E和p27在鲍温样丘疹病和外生殖器表皮原位癌中的表达 被引量：10

4

作者 蔓小红 王家璧 +3 位作者 刘跃华 方凯 刘方 左亚刚 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期515-517,共3页

目的:探讨细胞周期相关因子细胞周期蛋白E及其依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27,在高危型人乳头瘤病毒(HPV)相关的鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌中的变化及意义。方法:采用通用型引物聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对5... 目的:探讨细胞周期相关因子细胞周期蛋白E及其依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27,在高危型人乳头瘤病毒(HPV)相关的鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌中的变化及意义。方法:采用通用型引物聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对51例外生殖器部位上述病变进行HPV DNA的检测和分型,应用免疫组化方法检测病变中细胞周期蛋白E和p27的表达。结果:40例鲍温样丘疹病、5例生殖器鲍温病及6例Queyrat增殖性红斑HPV DNA的阳性率分别为55.0％、100.0％和33.3％,HPV16为主要型别;高危型HPV相关的病变中细胞周期蛋白E的表达明显高于正常上皮,且HPV阳性组明显高于HPV阴性组,而p27表达明显低于正常上皮,且HPV阳性组明显低于HPV阴性组。上述疾病中细胞周期蛋白E与p27的表达呈负相关。结论:HPV16感染与鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌的发生有密切关系,并可能通过影响细胞周期蛋白E和p27表达及两者的相互作用引起感染上皮的增生及恶变。 展开更多

关键词 表皮原位癌 外生殖器 鲍温样丘疹病 人乳头瘤病毒 细胞周期蛋白e 蛋白激酶抑制蛋白p27

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蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939增殖及cyclin E和P27蛋白表达影响的研究 被引量：5

5

作者 梁军才 张秀华 +2 位作者 游思洪 何伟 缪林 《医学研究生学报》 CAS 2010年第11期1136-1139,共4页

目的已有诸多研究显示中药蟾蜍灵具有明显抑制肿瘤增殖的作用,观察蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939的cyclin E和P27表达的影响,探讨其调控胆管癌细胞增殖的途径和机制。方法 MTT比色法观察不同浓度蟾蜍灵(0.1、1、10μmol/L)对人胆管癌细胞Q... 目的已有诸多研究显示中药蟾蜍灵具有明显抑制肿瘤增殖的作用,观察蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939的cyclin E和P27表达的影响,探讨其调控胆管癌细胞增殖的途径和机制。方法 MTT比色法观察不同浓度蟾蜍灵(0.1、1、10μmol/L)对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)实验检测蟾蜍灵毒性;流式细胞术检测人胆管癌细胞QBC939细胞周期的变化;Western blot法测定cyclin E、P27蛋白水平变化。结果 MTT比色法结果表明蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939生长具有较强的抑制作用,并在一定范围内具有时间和浓度依赖性,流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G0/G1期,具有良好的量效关系。Western blot测定cyclin E蛋白表达量下降,P27蛋白表达量升高。结论蟾蜍灵可能是通过阻滞细胞周期,减少cyclinE蛋白表达,增加P27蛋白表达,来达到抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 胆管癌细胞 蟾蜍灵 细胞周期 Cyclin e蛋白 p27蛋白

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胃癌中RUNX3、cyclinE和P21蛋白表达与患者生存的关系 被引量：6

6

作者 陈金明 干建新 +5 位作者 喻春钊 王沈华 伍峻松 易建华 杨检新 周海波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1766-1770,共5页

目的:探讨胃癌RUNX3蛋白表达对细胞周期蛋白的影响及其与胃癌患者生存和生物学特性的关系。方法:应用免疫组化,分析RUNX3蛋白的表达;应用流式细胞术,分析cyclinE和P21蛋白表达;采用Kaplan-Meier限乘法计算生存率。结果:在56例胃癌中RUNX... 目的:探讨胃癌RUNX3蛋白表达对细胞周期蛋白的影响及其与胃癌患者生存和生物学特性的关系。方法:应用免疫组化,分析RUNX3蛋白的表达;应用流式细胞术,分析cyclinE和P21蛋白表达;采用Kaplan-Meier限乘法计算生存率。结果:在56例胃癌中RUNX3蛋白、cyclinE和P21蛋白的阳性表达率分别为44.6%、64.3%和32.1%。胃癌细胞RUNX3蛋白表达与淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞cyclinE的表达与浸润深度、淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。而胃癌细胞P21的表达与远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞中RUNX3和P21的表达之间呈明显正相关(r=0.57,P<0.05),而与cyclinE的表达之间无相关性(r=0.25,P>0.05)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,RUNX3和cyclinE的阳性表达与生存相关(P<0.05),P21的阳性表达与生存无关(P>0.05)。结论:RUNX3蛋白可能通过影响P21蛋白的表达影响胃癌的发生发展;检测RUNX3和cyclinE的表达可作为反映胃癌临床病理学特点和预后的指标。 展开更多

关键词 胃肿瘤 基因 RUNX3 蛋白质p21 幸存 细胞周期蛋白e

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细胞周期素E和P53蛋白在胃癌组织中表达及预后意义 被引量：4

7

作者 赵仲生 茹国庆 马杰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第3期211-214,共4页

目的 :研究细胞周期素E(cyclinE)和P53蛋白在胃癌组织中的表达水平及其与生物学行为和对预后的作用。方法 :应用免疫组化方法检测 1 2 8例胃癌组织中cyclinE和P53蛋白表达水平。 结果 :本组 1 2 8例中 ,cyclinE蛋白阳性 57例 ,占 44 .5 ... 目的 :研究细胞周期素E(cyclinE)和P53蛋白在胃癌组织中的表达水平及其与生物学行为和对预后的作用。方法 :应用免疫组化方法检测 1 2 8例胃癌组织中cyclinE和P53蛋白表达水平。 结果 :本组 1 2 8例中 ,cyclinE蛋白阳性 57例 ,占 44 .5 % ;P53蛋白阳性 67例 ,占 52 .3 % ,P53 +/cyclinE +者 48例 ,占 37.5 %。胃癌组织中cyclinE和P53蛋白表达水平与肿瘤大小、浸润深度、局部淋巴结转移、脉管侵犯和远处转移均相关。单因素生存分析显示 ,cyclinE阳性表达组五年生存率 (5 .3 % )显著低于cyclinE表达阴性组 (36 .6 % ,P <0 .0 0 1 ) ,P53蛋白表达阳性的病例五年生存率 (7.8% )显著低于P53表达阴性的病例 (2 2 .6 % ,P <0 .0 0 1 ) ,cyclinE和P53均阳性的病例五年生存率 (2 .3 % ) ,明显低于其他组的病例 (2 7.3 % ,P <0 .0 0 5)。COX模型多因素分析显示 ,cyclinE蛋白表达水平是独立的预后指标 ,P53蛋白表达水平不能作为独立的预后指标。结论 :CyclinE在胃癌中表达具有一定的预后意义 。 展开更多

关键词 细胞周期素e p53蛋白 胃癌 表达 预后 癌组织

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HPV E6蛋白及其在致癌过程中作用的靶蛋白 被引量：6

8

作者 赵思成 骆丹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期225-228,共4页

高危型人乳头瘤病毒(high-risk strains of human papillomavirus,HR-HPV)感染人类生殖器官和口腔上皮细胞,引起一系列恶性肿瘤.E6是高危型HPV的一个重要的致癌基因,它在致癌过程中的发挥了重要作用.但其编码的E6蛋白不具有内在酶活性,... 高危型人乳头瘤病毒(high-risk strains of human papillomavirus,HR-HPV)感染人类生殖器官和口腔上皮细胞,引起一系列恶性肿瘤.E6是高危型HPV的一个重要的致癌基因,它在致癌过程中的发挥了重要作用.但其编码的E6蛋白不具有内在酶活性,它可通过直接或间接的与各种靶蛋白相互作用,如通过抑制P53和PDZ蛋白家族的活性,以及增强端粒酶的活性等致癌.现将E6蛋白促进癌发生过程中的靶蛋白做一综述. 展开更多

关键词 人类乳头瘤病毒 e6蛋白 癌症 靶蛋白 p53 pDZ蛋白 端粒酶

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胰腺癌组织p57^(kip2)和cyclin E蛋白表达及其临床意义 被引量：2

9

作者 岳辉 赵昕 +2 位作者 宋福林 冯新莉 唐谊海 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期201-203,207,共4页

目的:探讨p57kip2蛋白和cyclinE(周期蛋白E)在胰腺癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法,检测p57kip2和cyclinE蛋白在32例胰腺癌和癌旁胰腺组织中的表达。结果:p57kip2蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为46.9%,显著低于癌旁胰腺组织(... 目的:探讨p57kip2蛋白和cyclinE(周期蛋白E)在胰腺癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法,检测p57kip2和cyclinE蛋白在32例胰腺癌和癌旁胰腺组织中的表达。结果:p57kip2蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为46.9%,显著低于癌旁胰腺组织(χ2=5.317,P<0.05),并与胰腺癌组织分化程度有关(χ2=4.979,P<0.05),而与淋巴结转移无关(χ2=3.698,P>0.05);cyclinE蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为68.8%,显著高于癌旁胰腺组织(χ2=4.036,P<0.05),并与胰腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2=5.128,χ2=4.693,P<0.05);p57kip2蛋白阳性表达组cyclinE蛋白阳性表达率低于p57kip2蛋白阴性表达组,但两者之间无相关性(酌=-0.11211,P>0.05)。结论:p57kip2蛋白的低表达和/或cyclinE的高表达可能在胰腺癌发生发展中发挥重要作用。 展开更多

关键词 胰腺癌 p57^KIp2 周期蛋白e 免疫组织化学

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逆转录病毒壳蛋白p15E在人肿瘤细胞的表达

10

作者 罗利群 袁维华 +1 位作者 田京燕 张友会 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期416-422,共7页

肿瘤生长经常伴发免疫抑制。在其成因中有源于肿瘤的免疫抑制活性物质，但其性质大多未阐明。本文报道，采用免疫组化、酶联吸附、流式细胞、核酸原位杂交等技术，观察有免疫抑制活性的逆转录病毒壳蛋白ｐ１５Ｅ在人肿瘤细胞中不同水平... 肿瘤生长经常伴发免疫抑制。在其成因中有源于肿瘤的免疫抑制活性物质，但其性质大多未阐明。本文报道，采用免疫组化、酶联吸附、流式细胞、核酸原位杂交等技术，观察有免疫抑制活性的逆转录病毒壳蛋白ｐ１５Ｅ在人肿瘤细胞中不同水平的表达情况。结果揭示：肿瘤细胞表达ｐ１５Ｅ比较普遍，从人食管癌、鼻咽癌、直肠癌、卵巢癌（包括癌性腹水和建株细胞系）、胃癌、乳癌等均可被检出。ＲＴ－ＰＣＲ检测显示癌患者的活化淋巴细胞ｐ１５Ｅ表达略高。这些结果提示：来自肿瘤，也许还有来自活化淋巴细胞的ｐ１５Ｅ在肿瘤伴发的免疫抑制中可能起重要作用。 展开更多

关键词 p15e CKS-17 逆转录病毒 壳蛋白 肿瘤

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不同pH和离子强度条件下青鱼(Mylopharyngodon piceus)肌浆蛋白IgG/IgE结合能力的变化 被引量：4

11

作者 朱一丹 谢国锦 +6 位作者 高岭 杨方 高沛 余达威 姜启兴 许艳顺 夏文水 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期34-39,共6页

该文以青鱼为研究对象,研究肌浆蛋白在不同p H和离子强度条件下,Ig G/Ig E结合能力及结构的变化。通过间接酶联免疫吸附测定(indirect-enzyme linked immunosorbent assay,间接ELISA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecy... 该文以青鱼为研究对象,研究肌浆蛋白在不同p H和离子强度条件下,Ig G/Ig E结合能力及结构的变化。通过间接酶联免疫吸附测定(indirect-enzyme linked immunosorbent assay,间接ELISA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和免疫印迹试验测定肌浆蛋白Ig G/Ig E结合能力的变化,并结合二级结构变化、表面疏水性变化和内源荧光值变化所反映的蛋白结构改变来分析其变化机理。结果表明,p H从4. 0升高到7. 0会小幅度降低肌浆蛋白Ig G/Ig E结合能力,二级结构中α-螺旋增加而不规则卷曲减少,表面疏水性大幅减小且色氨酸疏水基向极性环境暴露。离子强度从0增加到1. 0则不会对Ig G/Ig E结合能力产生显著影响。由此可知,肌浆蛋白Ig G/Ig E结合能力变化与其构象表位有关,初步判断主要由二级结构的改变引起,但仍需要进一步研究。 展开更多

关键词 p H 离子强度 Ig G/Ig e结合能力 青鱼 蛋白结构

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E3泛素连接酶WWP2通过蛋白酶体途径调控p21的稳定性 被引量：1

12

作者 董超 张丽君 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1126-1130,共5页

目的 探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2 (WWP2)调控p21稳定性的潜在作用机制。方法 通过免疫共沉淀及Western blotting检测HEK 293T细胞中WWP2与p21的结合情况。用蛋白酶体抑制剂(MG132)和放线菌酮(CHX)处理过表达或敲减WWP2 HEK 293... 目的 探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2 (WWP2)调控p21稳定性的潜在作用机制。方法 通过免疫共沉淀及Western blotting检测HEK 293T细胞中WWP2与p21的结合情况。用蛋白酶体抑制剂(MG132)和放线菌酮(CHX)处理过表达或敲减WWP2 HEK 293T细胞0、4、8 h,通过Western blotting检测p21的表达情况。结果 WWP2与p21间存在结合。过表达WWP2的293T细胞中,p21的表达水平明显降低,且随WWP2表达量增加逐渐降低。敲减WWP2的293T细胞中,p21表达水平增加。随着CHX作用时间延长,对照组和实验组的p21表达水平均逐渐下降。过表达组p21半衰期较对照组缩短;敲减组p21半衰期较对照组延长。随着MG132作用时间延长,对照组和实验组p21表达水平均逐渐上升。空载组较过表达组、敲减组较对照组p21积累均更显著。结论 E3泛素连接酶WWP2可与p21结合,并通过蛋白酶体途径降解p21。 展开更多

关键词 含WW结构域的e3泛素蛋白连接酶2 p21 泛素化

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miR-146b-5p靶向E3泛素蛋白连接酶促进高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮间质转化

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作者 吴锦 李嘉嘉 +1 位作者 王笑薇 王娟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1087-1093,共7页

目的探讨miR-146b-5p与E3泛素蛋白连接酶(ZNRF3)对高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮间质转化(EMT)进程的影响及作用机制。方法正常培养的小鼠为对照组,采用4.25%葡萄糖透析液和0.1 mg/kg的脂多糖诱导腹膜纤维化小鼠模型,收集小鼠腹膜组织... 目的探讨miR-146b-5p与E3泛素蛋白连接酶(ZNRF3)对高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮间质转化(EMT)进程的影响及作用机制。方法正常培养的小鼠为对照组,采用4.25%葡萄糖透析液和0.1 mg/kg的脂多糖诱导腹膜纤维化小鼠模型,收集小鼠腹膜组织,Masson染色观察腹膜组织胶原纤维变化,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(COL I)表达。Western blot检测腹膜组织上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、α-SMA和COL I表达。qRT-PCR检测腹膜组织中miR-146b-5p和ZNRF3表达。双荧光素酶报告基因检测验证miR-146b-5p和ZNRF3靶向关系。分离对照组小鼠腹膜间皮细胞,高糖诱导构建小鼠腹膜间皮细胞纤维化模型,将细胞分为对照组、模型组、mimic-NC组、miR-146b-5p-mimic组和miR-146b-5p-inhibitor组。Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测EMT相关蛋白表达。结果与对照组小鼠比较,模型组小鼠腹膜组织增厚,胶原纤维增多,α-SMA和COL I表达增加(P<0.05),miR-146b-5p表达升高(P<0.05),E-cadherin和ZNRF3表达降低(P<0.05)。miR-146b-5p靶向负调控ZNRF3表达。细胞水平检测结果显示,与对照组比较,模型组和mimic-NC组小鼠腹膜间皮细胞迁移和侵袭细胞数增多(P<0.05),E-cadherin表达降低(P<0.05),波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达升高(P<0.05)。与模型组比较,miR-146b-5p-mimic组小鼠腹膜间皮细胞变化趋势更为显著,miR-146b-5p-inhibitor组细胞EMT进程受到抑制。结论miR-146b-5p可靶向ZNRF3基因促进高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞EMT进程。 展开更多

关键词 miR-146b-5p e3泛素蛋白连接酶 腹膜透析 上皮间质转化 侵袭 迁移

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资生肾气丸对尿酸钠诱导大鼠滑膜细胞中P62/Nrf2通路调控机制的研究 被引量：1

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作者 范嘉懿 高一煊 +3 位作者 梁蓝云 贾凯杰 刘春红 韩洁茹 《世界中医药》 北大核心 2025年第3期404-410,共7页

目的:探讨资生肾气丸对尿酸单钠晶体(MSU)诱导的痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(GA-FLS)P62/Nrf2信号转导通路的影响。方法:按随机数字表法将18只雄性SD大鼠分为中药低、中、高3种剂量组,每组6只,连续灌胃7 d后,统一麻醉,分离血清备... 目的:探讨资生肾气丸对尿酸单钠晶体(MSU)诱导的痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(GA-FLS)P62/Nrf2信号转导通路的影响。方法:按随机数字表法将18只雄性SD大鼠分为中药低、中、高3种剂量组,每组6只,连续灌胃7 d后,统一麻醉,分离血清备用,用低、中、高3种剂量的含药血清体外干预GA-FLS,设为正常滑膜细胞组,MSU组,GA-FLS+中药低、中、高剂量组,共5组,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞增殖能力;蛋白质免疫印迹法检测P62、Kelch样ECH相关蛋白-1(Keap-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)含量;RT-PCR检测P62、Nrf2含量。结果:MTT结果表明,与模型组比较,各剂量资生肾气丸含药血清组FLS细胞增殖均受到抑制,其中高剂量差异有统计学意义(P<0.01);蛋白质免疫印迹法结果显示,就p62、Nrf2、NLRP3蛋白的表达水平度而言,模型组相对于空白组明显增高(均P<0.01);与模型组比较,低、中、高资生肾气丸含药血清组蛋白表达含量均降低(均P<0.05);RT-PCR结果显示,与空白组比较,模型组细胞中p62、Nrf2表达明显升高(均P<0.01);与模型组比较,加入中药血清滑膜细胞中,p62、Nrf2表达下降(均P<0.05)。结论:资生肾气丸可通过调控P62/Nrf2信号转导通路抑制GA-FSL细胞增殖,下调P62、Keap-1、Nrf2蛋白的表达、抑制Nod样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体产生,具有抗炎作用,从而对GA具有防治效果。 展开更多

关键词 资生肾气丸 痛风性关节炎 成纤维样滑膜细胞 尿酸单钠晶体 p62/核因子e2相关因子2(Nrf2)信号通路 Nod样受体家族pyrin结构域蛋白3炎症小体 3-(4 5-二甲基噻唑-2)-2 5-二苯基四氮唑溴盐 实验研究

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miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究 被引量：4

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作者 王一霖 滕亮 +3 位作者 王中志 王妍 林文婷 陈江汉 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期542-547,共6页

目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,... 目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0h、3h、6h、9h和12h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA,观察在6hmiR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化。结果新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5pmimics作用后IKBKE3'UTR活性下降,将IKBKE3'UTR进行突变后,IKBKE3'UTR活性较野生型增加;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA后,在6hTNF-α和IL-6的表达量实验组均较对照组明显增加。结论THP-1细胞中miR-155-5p可通过靶向降解IKBKE信使RNA(mRNA)促进TNF-α和IL-6的表达增加,表明其在THP-1细胞抗新生隐球菌中发挥着促炎作用,可作为将来隐球菌性脑膜炎的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 新生隐球菌 人单核巨噬细胞 miR-155-5p 核因子κB抑制蛋白e 免疫反应

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miR-34a-5p对颞叶癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及其机制

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作者 李佳芮 杨振林 +2 位作者 高帆 郭晶晶 李今子 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期939-947,共9页

目的:探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)对颞叶癫痫大鼠海马组织中神经元凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:52只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组,每组13只。采用PONEMAH 6.X实验动物遥测平台... 目的:探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)对颞叶癫痫大鼠海马组织中神经元凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:52只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组,每组13只。采用PONEMAH 6.X实验动物遥测平台记录各组大鼠脑电图,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平,HE染色观察各组大鼠海马组织形态表现,TUNEL法检测各组大鼠海马神经元凋亡率,免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(p-Rb)和E2F转录因子1(E2F1)蛋白表达水平。结果:对照组大鼠无异常表现;模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组大鼠出现不同程度流口水、颤抖、血泪、凝视和咀嚼震颤,随后点头眨眼,最后有前肢痉挛、直立及跌倒。与对照组比较,模型组大鼠癫痫发作总时间明显延长(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠癫痫发作总时间缩短(P<0.01);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠癫痫发作总时间延长(P<0.01)。RT-qPCR法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高(P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组细胞排列紊乱;与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组细胞排列整齐;与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组细胞形态不规整。TUNEL染色,与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马CA1区神经元凋亡率降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高(P<0.05)。免疫组织化学法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织CA1区中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率降低(P<0.05);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与miR-34a-5p抑制剂组比较,抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:颞叶癫痫大鼠海马组织中miR-34a-5p表达上调,神经元凋亡率升高,抑制miR-34a-5p表达能减少海马神经元凋亡,其机制可能与miR-34a-5p调控海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达有关。 展开更多

关键词 微小RNA-34a-5p 癫痫 细胞凋亡 细胞周期蛋白依赖性激酶6 磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 e2F转录因子1

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蛋白质水平及能量蛋白比对克氏原螯虾生长与蛋白酶活力的影响 被引量：8

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作者 何吉祥 丁凤琴 +1 位作者 宋光同 汪翔 《水产科学》 CAS 北大核心 2009年第12期741-744,共4页

用3种不同蛋白质水平及能量蛋白比(E/P)水平饲料投喂克氏原螯虾,分析比较不同饲料对克氏原螯虾生长及蛋白酶活力的影响。试验结果表明,当饲料蛋白质水平为31.86%、E/P为35.85kJ/g时,克氏原螯虾生长最快。随着饲料蛋白质含的上升,克氏原... 用3种不同蛋白质水平及能量蛋白比(E/P)水平饲料投喂克氏原螯虾,分析比较不同饲料对克氏原螯虾生长及蛋白酶活力的影响。试验结果表明,当饲料蛋白质水平为31.86%、E/P为35.85kJ/g时,克氏原螯虾生长最快。随着饲料蛋白质含的上升,克氏原螯虾肠蛋白酶活力无显著变化(P>0.05),肝胰脏、胃蛋白酶活力显著增强(P<0.05);饲料E/P水平未引起胃、肠、肝胰脏蛋白酶活力的显著变化(P>0.05),当饲料蛋白质水平为31.47%、E/P为40.42 kJ/g时,克氏原螯虾蛋白酶活力最高。 展开更多

关键词 克氏原螯虾 蛋白质 能量蛋白比(e/p) 生长性能 蛋白酶活力

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截短的弓形虫P30基因在E.coli中的高效表达及纯化条件的探索 被引量：13

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作者 龚娅 陈晓光 杨培梁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期14-18,共5页

目的　构建能在E .coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原 (P30 )基因的重组表达质粒 ,并对纯化条件进行优化。方法　对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍 ,用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,插入载体pET ... 目的　构建能在E .coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原 (P30 )基因的重组表达质粒 ,并对纯化条件进行优化。方法　对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍 ,用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,插入载体pET 30 (a)中 ,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达 ,包涵体经洗涤、变性、复性及不同程度的浓缩后 ,进行SDS PAGE及免疫印迹分析。结果　从弓形虫ZS1株基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段 ,成功构建重组表达质粒 pET P30 ;SDS -PAGE显示蛋白表达带的分子量约为 31kD ,表达量占菌体总蛋白的 31.5 8% ,经 1M及 2M尿素洗涤后 ,其纯度分别达 6 3.42 %及 75 .74% ;免疫印迹显示 ,该纯化蛋白能被弓形虫病人阳性血清所识别 ,而且当浓缩至初始体积的 1/ 3～ 1/ 6时 ,纯化蛋白与DNA免疫鼠血清的反应最强。结论　成功构建重组质粒 pET P30 ,并以融合蛋白的形式进行了高效表达 ,经变性、复性后 ,该蛋白具有特异的免疫反应性 ,为弓形虫诊断试剂盒的研制打下基础。 展开更多

关键词 弓形虫 p30基因 蛋白表达 e.COLI 纯化

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细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展 被引量：26

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作者 刘晨晖 乐江 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期155-160,共6页

细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表... 细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。 展开更多

关键词 细胞色素p450 CYp2e1 蛋白质结构 二级 基因表达调控 自由基

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荧光共振能量转移技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用 被引量：2

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作者 袁顺宗 谭江琳 +9 位作者 彭旭 马兵 曹红卫 贺伟峰 陈希炜 易绍萱 胡晓红 张小容 罗高兴 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1555-1558,共4页

目的利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用。方法分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的... 目的利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用。方法分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293(HEK293)细胞48h后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R)。结果重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在细胞质和细胞核中存在着共定位,FRET检测结果显示其能量转移率为14%,两个分子间的作用距离为6.3nm。结论成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实了活体细胞内ITGB4BP和P311间存在着相互作用。 展开更多

关键词 ITGB4Bp p311 荧光共振能量转移 蛋白相互作用

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