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人Ⅳ型胶原的提纯及其抗血清制备 被引量:2
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作者 刘预 李伟道 +2 位作者 林丁 刘兴明 卢萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第2期164-165,共2页
采用胃蛋白酶限制性消化 ,NaCl分级盐析 ,还原和烷基化反应 ,纤维素离子交换层析从人胎盘组织分离纯化Ⅳ型胶原 .经SDS PAGE电泳鉴定符合Ⅳ型胶原α肽链电泳带 .
关键词 分离纯化 抗血清 制备
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重组类人Ⅰ型胶原蛋白分离与纯化 被引量:2
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作者 马晓轩 范代娣 +1 位作者 王晓军 米钰 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-421,共3页
目的研究重组类人Ⅰ型胶原蛋白基因工程的下游工艺。方法工程菌株Escherichia coliBL21 3.1在B ioengineering L1 523型12.8 L自控发酵罐中经24 h发酵,细胞干重达到77.3 g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4%。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀... 目的研究重组类人Ⅰ型胶原蛋白基因工程的下游工艺。方法工程菌株Escherichia coliBL21 3.1在B ioengineering L1 523型12.8 L自控发酵罐中经24 h发酵,细胞干重达到77.3 g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4%。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经DEAE52,Sephadex G-100柱层析分离纯化。结果最终产物纯度达到98%,回收率为80.5%。结论纯化的类人Ⅰ型胶原蛋白经SDS-PAGE电泳测定为电泳纯,分子质量为90ku,N端序列为NH2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G,与基因序列设计一致。 展开更多
关键词 重组类人Ⅰ蛋白 分离纯化 高密度发酵
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从癌性腹水中分离Ⅲ型前胶原氨基末端肽
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作者 李新民 殷蔚荑 +2 位作者 李忆梅 薛竹 马兰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1991年第6期456-459,共4页
采用(NH_4)_2SO_4沉淀,二次不同pH的DEAE-Sephacel离子交换柱层析及Sephacryl S-200分子筛柱层析从人癌性腹水中分离并纯化了PⅢP,并制备了抗血清。经SDS-PAGE鉴定为均一蛋白带,分子量约为47kD。经西德药盒测定,与西德、芬兰PⅢP抑制曲... 采用(NH_4)_2SO_4沉淀,二次不同pH的DEAE-Sephacel离子交换柱层析及Sephacryl S-200分子筛柱层析从人癌性腹水中分离并纯化了PⅢP,并制备了抗血清。经SDS-PAGE鉴定为均一蛋白带,分子量约为47kD。经西德药盒测定,与西德、芬兰PⅢP抑制曲线平行关系良好。氨基酸组成测定亦与文献报道基本一致。抗血清效价较高,特异性强。本研究在方法学上有一定创新,提纯方法简便易行。 展开更多
关键词 腹水 提纯
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乙酸溶解-酶消化法制备医用胶原膜 被引量:6
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作者 林崇韬 文胡实 +1 位作者 孙宏晨 欧阳喈 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-78,共4页
目的 :探讨 I型胶原的提取和胶原膜的制备方法。方法 :取新鲜成年牛跟腱 ,用乙酸溶解 -酶消化法提取 I型胶原 ,并进行盐析、透析、纯化得到精制的液态胶原 ,用戊二醛进行交联。结果 :提取的胶原紫外分光光谱最高吸收峰值为 2 30 nm左右 ... 目的 :探讨 I型胶原的提取和胶原膜的制备方法。方法 :取新鲜成年牛跟腱 ,用乙酸溶解 -酶消化法提取 I型胶原 ,并进行盐析、透析、纯化得到精制的液态胶原 ,用戊二醛进行交联。结果 :提取的胶原紫外分光光谱最高吸收峰值为 2 30 nm左右 ;聚丙酰胺凝胶电泳呈现 2条相邻带 (相对分子质量 980 0 0左右 ) ,符合 I型胶原的特性。冻干交联胶原膜呈白色海绵状 ,具有一定弹性。扫描电镜观察胶原膜为孔网状结构 ,孔径 1 5~ 5 0 μm。结论 :乙酸溶解 -酶消化法提取牛腱胶原是一种简单、理想的方法 ,可得到含量及纯度较高的 展开更多
关键词 胶原i型/分离和提纯 医用 乙酸溶解一酶消化法 显微镜检查 电子 扫描
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超声波条件下胰蛋白酶提取鳝鱼皮中胶原蛋白的工艺研究 被引量:9
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作者 李志洲 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期553-557,561,共6页
对鳝鱼皮中胶原蛋白的最佳提取工艺条件进行了研究。以超声提取时间、胰蛋白酶加入量、酶解时间、提取温度、pH5个因素对提取工艺条件进行了优化,结果表明,最佳提取工艺条件为:酶加入量125U/g、pH=7.2、温度35℃、超声波辅助提取时间3mi... 对鳝鱼皮中胶原蛋白的最佳提取工艺条件进行了研究。以超声提取时间、胰蛋白酶加入量、酶解时间、提取温度、pH5个因素对提取工艺条件进行了优化,结果表明,最佳提取工艺条件为:酶加入量125U/g、pH=7.2、温度35℃、超声波辅助提取时间3min、酶解时间7h,胶原蛋白的提取率达92.4%。利用紫外光谱和傅立叶变换红外光谱对胶原蛋白进行分析,结果表明,胶原蛋白的紫外特征吸收波长为226nm,结构中含有肽键,羰基,羧基等蛋白质的特征官能团。 展开更多
关键词 鳝鱼皮 蛋白 胰蛋白酶 分离提纯技术
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大鼠胰岛细胞的分离纯化及培养 被引量:7
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作者 鞠海兵 王力 +4 位作者 舒子正 胡灯明 朱姿英 沈菲菲 杨举伦 《中国比较医学杂志》 CAS 2005年第2期71-72,i001,共3页
目的 探讨大鼠胰岛细胞分离纯化和培养的方法。方法 采用胰导管逆行灌注Hanks液分离成年大鼠胰岛,Ⅴ型胶原酶消化,不连续密度梯度Ficoll 4 0 0纯化胰岛。用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功... 目的 探讨大鼠胰岛细胞分离纯化和培养的方法。方法 采用胰导管逆行灌注Hanks液分离成年大鼠胰岛,Ⅴ型胶原酶消化,不连续密度梯度Ficoll 4 0 0纯化胰岛。用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果 胰岛细胞的收获量为5 4 0±15 0个胰岛 胰腺,活性>90 % ,纯度>90 % ,高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激的2倍多。结论 胰导管灌注Hanks液,Ⅴ型胶原酶消化和不连续密度梯度葡聚糖纯化胰岛,可以获取数量多。 展开更多
关键词 胰岛细胞 分离纯化 培养 胰岛素释放试验 密度梯度 成年大鼠 逆行灌注 染色检测 胰岛功能 高糖刺激 导管灌注 酶消化 双硫腙 台盼蓝 葡萄糖 收获量 释放量 葡聚糖 纯度 活性
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