胰腺十二指肠同源盒-1在乳腺癌分子亚型中的表达及临床意义 被引量：2

1

作者 施华 宋旭东 +2 位作者 张晓霞 张志勇 朱海燕 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第17期1908-1909,共2页

目的通过检测乳腺癌病变中胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白及mRNA的表达情况,分析其与乳腺癌分子亚型之间的关系。方法采用免疫组织化学EnVision法检测PDX-1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第二号人类表皮生长因子受体(Her-2)、细... 目的通过检测乳腺癌病变中胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白及mRNA的表达情况,分析其与乳腺癌分子亚型之间的关系。方法采用免疫组织化学EnVision法检测PDX-1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第二号人类表皮生长因子受体(Her-2)、细胞角蛋白5&6(CK5/6)和上皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达,实时定量RT-PCR法检测PDX-1mRNA的表达。结果 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著低于在Her-2过表达型、基底细胞样型和未分类型中的表达(P<0.05)。结论 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著降低,PDX-1有望成为乳腺癌基因分型的筛选新指标。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源盒-1 乳腺肿瘤 分子亚型

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胰升糖素样肽-1对胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1表达的调节 被引量：2

2

作者 董凌燕 刘超 +2 位作者 张梅 刘翠萍 覃又文 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第10期1045-1048,共4页

目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX... 目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX-1)表达的调节作用,探讨GLP-1对胰岛素基因转录的调节机制和临床意义。方法不同刺激浓度GLP-1(0、1、10、100、1000 nmol/L)与葡萄糖浓度分别为2.2、5.5、11.1 mmol/L的RPMI1640营养液共培养24 h后,提取胰岛细胞总RNA。运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化。结果葡萄糖浓度为2.2和5.5 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈钟型方式升高;葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈浓度依赖性升高。结论 GLP-1以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进PDX-1基因的表达。 展开更多

关键词 胰岛 胰升糖素样肽-1 胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1 葡萄糖

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胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞 被引量：2

3

作者 孙吉平 杨于嘉 贾延劼 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期980-983,I0008-I0009,共6页

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均... 目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框-1基因 骨髓间充质干细胞 胰岛 糖尿病

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胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

4

作者 金彩霞 李文林 +3 位作者 朱吉 田棣 张南 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期834-836,共3页

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。... 目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒基因-1 逆转录病毒科 肝 干细胞

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胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达 被引量：1

5

作者 王海澜 潘明新 +2 位作者 张会迎 安靓 高毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期528-531,共4页

目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计... 目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h用RT-PCR检测目的基因的表达情况。结果质粒2～10μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率。RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。 展开更多

关键词 nestin阳性细胞 胰十二指肠同源框基因-1 电转染 糖尿病

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高糖通过调控miR-429/ZEB1轴对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响

6

作者 张志超 李光辉 +3 位作者 朱学河 魏强 王飞 赵海平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1166-1174,共9页

目的探究高糖干预对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响及作用分子机制。方法采用不同浓度葡萄糖(0、7.5、15、30 mmol/L)处理PANC-1细胞24 h构建高糖干预的PANC-1细胞。将miR-429 mimics及其阴性对照(mimics NC)转染至PANC-1细胞,分为对照组、H... 目的探究高糖干预对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响及作用分子机制。方法采用不同浓度葡萄糖(0、7.5、15、30 mmol/L)处理PANC-1细胞24 h构建高糖干预的PANC-1细胞。将miR-429 mimics及其阴性对照(mimics NC)转染至PANC-1细胞,分为对照组、HG组、HG+mimics NC组、HG+mimics组、HG+mimics+oe-NC组和HG+mimics+oe-ZEB1组。流式细胞术检测细胞表面分子细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达水平;qRT-PCR检测细胞miR-429和锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)mRNA表达水平;Western blot检测细胞ZEB1蛋白表达水平。将以上各组PANC-1细胞与CD8^(+)T细胞建立共培养体系,CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8^(+)T细胞对PANC-1细胞的杀伤作用;采用双荧光素酶报告系统验证miR-429和ZEB1的靶向调控关系。结果HG可促进PANC-1细胞表面分子PD-L1及ZEB1表达(P<0.05),抑制miR-429表达,且呈浓度依赖性。miR-429过表达可显著抑制HG诱导的PANC-1细胞表面分子PD-L1表达,而过表达ZEB1可逆转miR-429过表达对HG诱导PANC-1细胞表面分子PD-L1表达的抑制作用。建立与CD8^(+)T细胞共培养体系后,与对照组比较,HG组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P<0.05);与HG+mimics NC组比较,HG+mimics组PANC-1细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡水平和杀伤活性明显升高(P<0.05)。与HG+mimics+oe-NC组比较,HG+mimics+oe-ZEB1组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-429靶向负调控ZEB1。结论高糖通过下调miR-429表达水平,靶向负调控ZEB1 mRNA的表达,提高PANC-1细胞表面分子PD-L1表达水平,进而促进PANC-1细胞免疫逃逸。 展开更多

关键词 miR-429 胰腺癌 锌指E-盒结合同源盒蛋白1 高糖 免疫逃逸

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大鼠肝脏干细胞的胰十二指肠同源盒基因表达系的构建与初步鉴定

7

作者 任吴超 李冬民 +6 位作者 王璇 高玉 韩燕 宁启兰 张富军 宋天保 吕社民 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期17-21,共5页

目的建立大鼠肝脏干细胞的Pdx-1基因表达系。方法逆行穿刺SD大鼠乳鼠肝脏门静脉,经胶原酶Ⅳ消化并分离肝脏干细胞;免疫组织化学鉴定大鼠肝脏干细胞标志物细胞角蛋白18/19、甲胎蛋白的表达;构建pEGFP-Pdx-1表达载体并酶切鉴定,用脂质体2... 目的建立大鼠肝脏干细胞的Pdx-1基因表达系。方法逆行穿刺SD大鼠乳鼠肝脏门静脉,经胶原酶Ⅳ消化并分离肝脏干细胞;免疫组织化学鉴定大鼠肝脏干细胞标志物细胞角蛋白18/19、甲胎蛋白的表达;构建pEGFP-Pdx-1表达载体并酶切鉴定,用脂质体2000介导表达载体转染大鼠肝脏干细胞后,荧光显微镜观察GFP表达,免疫组织化学鉴定Pdx-1的表达。结果肝脏门静脉逆行穿刺分离培养大鼠肝脏干细胞具有分裂增殖能力、角蛋白18/19、甲胎蛋白表达阳性;pEGFP-Pdx-1表达载体转染后的肝脏干细胞可表达绿色荧光蛋白报告基因和Pdx-1蛋白。结论成功建立了大鼠肝脏干细胞Pdx-1表达系。 展开更多

关键词 大鼠 肝脏干细胞 胰腺十二指肠同源盒 表达载体

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肌节同源盒-1基因A448T多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂发病的相关性

8

作者 谢耕耘 南欣荣 李点典 《国际口腔医学杂志》 CAS 2010年第5期516-518,共3页

目的探讨肌节同源盒(msx)-1基因A448T的多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发病间的关系。方法以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法行msx-1基因A448T的多态性检测,并行其遗传统计分析。结果 msx-1等位基因频率在对照组... 目的探讨肌节同源盒(msx)-1基因A448T的多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发病间的关系。方法以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法行msx-1基因A448T的多态性检测,并行其遗传统计分析。结果 msx-1等位基因频率在对照组和NSCL/P组之间的差异有显著性统计学意义(P<0.01),对照组T位点频率明显高于NSCL/P组(对照组0.55,NSCL/P组0.26)。结论 msx-1/A448T(rs13127820)基因的多态性与山西部分人群NSCL/P发病可能相关,此位点的T等位基因在NSCL/P的发生中可能起保护效应。 展开更多

关键词 肌节同源盒-1基因 非综合征性唇腭裂 基因多态性

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同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4成骨效应中的作用 被引量：2

9

作者 蒋少云 汪建涛 +1 位作者 宋萌 王建广 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2007年第5期492-495,共4页

目的:研究同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)成骨效应中的作用,并探讨Msx1与BMP-4的调控关系。方法:体外培养成纤维细胞C2C12,BMP-4处理C2C12细胞24h和36h后,用携带Msx1基因的腺病毒转染C2C12细胞,过... 目的:研究同源盒蛋白Msx1在骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)成骨效应中的作用,并探讨Msx1与BMP-4的调控关系。方法:体外培养成纤维细胞C2C12,BMP-4处理C2C12细胞24h和36h后,用携带Msx1基因的腺病毒转染C2C12细胞,过度表达同源盒蛋白Msx1,4d后检测细胞中碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)的活性,单独用BMP-4处理组和BMP-4连同空白腺病毒组为对照组,未用BMP-4处理组为阴性对照组。结果:在BMP-4处理24h后,Msx1腺病毒转染的细胞ALP活性非常低,而BMP-4处理36h后,Msx1腺病毒转染的细胞显示强ALP活性,单独用BMP-4处理和BMP-4连同空白腺病毒处理的细胞同样显示强ALP活性。结论:同源盒蛋白Msx1能抑制BMP-4的成骨效应,且具有一定的时段特性。 展开更多

关键词 同源盒蛋白Msx1 骨形成蛋白-4 成骨

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同源异型盒基因-1与非综合征型多数牙先天性缺失 被引量：1

10

作者 方静娴 宋光泰 叶晓茜 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第2期227-230,共4页

牙缺失是常见的颌面发育异常之一,在恒牙列中的发病率高达20%,而其表现程度也存在较大差异。在过去的数十年中,遗传连锁和分子生物学研究使得部分综合征和非综合征型牙缺失的基因突变得以定位。尽管作用机制尚未明了,但现已知其中所涉... 牙缺失是常见的颌面发育异常之一,在恒牙列中的发病率高达20%,而其表现程度也存在较大差异。在过去的数十年中,遗传连锁和分子生物学研究使得部分综合征和非综合征型牙缺失的基因突变得以定位。尽管作用机制尚未明了,但现已知其中所涉及的重要突变因子包括了编码转录因子的同源异型盒基因(msx)-1、双链复合蛋白基因(pax)-9和轴抑制基因(axin)-2。下面从近年来国内外有关先天性牙缺失的病例报告、致病基因分析以及分子生物学和生物化学等研究方面就msx-1基因与非综合征型牙缺失的关系进行综述。 展开更多

关键词 多数牙先天性缺失 同源异型盒基因-1 非综合征

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miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为 被引量：1

11

作者 韩向阳 张荣花 +5 位作者 李玉凤 苏静慧 曹雨萌 黄金平 章广玲 李景武 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期879-888,共10页

目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法... 目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果:胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织(P<0.01),且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关(r=-0.419,P<0.01)。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达(均P<0.01)。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果(P<0.05或P<0.01)。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论:miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 胰腺癌 miR-192-5p E盒锌指结合同源框2 PANC-1细胞 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化

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miR-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为与裸鼠移植瘤生长 被引量：4

12

作者 柳君君 张燕燕 雷衡阳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期557-566,共10页

目的:探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临... 目的:探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qPCR法检测正常胰腺HPDE6-C7细胞和胰腺癌PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过Lipofectamine^(TM)2000将miR-NC、miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染PANC-1细胞,其分为对照组(不转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-32-5p mimic组(转染miR-32-5p mimic)、Anti-miR-32-5p组(转染miR-32-5p inhibitor)、miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC+pcDNA-NC)、miR-NC+pcDNA EZH2组(转染miR-NC+pcDNA EZH2)、miR-32-5p mimic+pcDNA-NC组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA-NC)、miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2组(转染miR-32-5p mimic+pcDNA EZH2)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-32-5p与EZH2的靶向关系;MTT法及克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力,WB法检测各组细胞EZH2、E-cadherin、N-cadherin的表达;裸鼠成瘤实验检测转染后各组PANC-1细胞移植瘤的生长情况,免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和MMP-2的表达。结果:GEPIA数据库显示胰腺癌组织中EZH2的表达水平高于癌旁组织,患者预后生存期与EZH2的表达水平呈负相关(均P<0.05);miR-32-5p表达水平与胰腺癌神经浸润、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有明显的关联(均P<0.05);与HPDE6-C7细胞相比,PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p呈高表达、EZH2 mRNA呈低表达、miR-32-5p表达水平与EZH2表达水平呈负相关(均P<0.05)。miR-32-5p靶向EZH2且抑制其表达(均P<0.05);过表达miR-32-5p能够下调Ki67、MMP-2、N-cadherin表达水平、上调E-cadherin表达水平,抑制PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制移植瘤质量增加(均P<0.05)。结论:miR-32-5p能够靶向调控EZH2从而影响胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT进程及裸鼠体内移植瘤的生长。 展开更多

关键词 miR-32-5p zeste基因增强子人类同源物2 胰腺癌 PANC-1细胞 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化

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LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移 被引量：9

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作者 熊伟 张洪涛 +2 位作者 杨之斌 余昆 张旋 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期173-181,共9页

目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-(1zine finger E box binding homeobox 1, ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制。方法:收集2013年1月至2018年1月云南... 目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-(1zine finger E box binding homeobox 1, ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制。方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况。通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、ɑ-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系。建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P<0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P<0.05或P<0.01)。敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P<0.05)。敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P<0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P<0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P<0.05)。结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点。 展开更多

关键词 长链非编码RNA HCG11 miR-144-3p 锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1 结直肠癌 转移

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PDX-1联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的效果 被引量：4

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作者 闫淑芳 吴敬 +5 位作者 刘宏霞 杜少斐 张会峰 史晓阳 袁倩 袁慧娟 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第2期161-166,共6页

目的:探讨胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞(IPCs)的效果。方法:构建真核表达载体p EGFP-pc DNA3.1(+)-PDX-1,脂质体介导其转染贴壁培养法分离得到的大鼠BMSCs,用潮霉素筛选稳定... 目的:探讨胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞(IPCs)的效果。方法:构建真核表达载体p EGFP-pc DNA3.1(+)-PDX-1,脂质体介导其转染贴壁培养法分离得到的大鼠BMSCs,用潮霉素筛选稳定转染细胞PDX-1-BMSCs。将BMSCs和PDX-1-BMSCs分别用50 nmol/L利拉鲁肽或培养液培养10 d,然后ELISA法检测细胞上清胰岛素浓度,real-time PCR法检测细胞中Tle、Nkx6.1、Ngn3、Nestin、PDX-1 mRNA的表达。结果:4组细胞诱导过程中形态上趋向胰岛样细胞分化;利拉鲁肽和PDX-1均可诱导BMSCs胰岛素分泌水平增加(P<0.05);PDX-1可促进BMSCs中PDX-1、Ngn3、Nkx6.1、Tle mRNA的表达(P<0.05);利拉鲁肽可促进PDX-1、Ngn3 mRNA的表达(P<0.05);两者有协同作用的趋势。结论:PDX-1联合利拉鲁肽可以诱导BMSCs向IPCs分化并分泌胰岛素。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒-1 利拉鲁肽 大鼠 骨髓间充质干细胞 胰岛样细胞

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烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响(英文) 被引量：3

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作者 盛飞凤 任贤 +7 位作者 戴幸平 徐潇静 董敏 裴奇 屈健 周智广 周宏灏 刘昭前 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期958-963,共6页

目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead... 目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead box-containing protein O-1,FoxO1)基因表达的影响。方法:采用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-time PCR检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用Western印迹检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。结果:用瑞格列奈10 nmol/L+NMN 100μmol/L处理RIN-m5f细胞48 h,与空白对照及DMSO对照组相比,胰岛素分泌量均显著增高(P<0.05);与NMN 50μmol/L组比较,胰岛素分泌量的增高也有统计学意义(P<0.05)。10,50和100μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36 h,PDX-1的mRNA表达量均上调(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.001)。100μmol/L剂量组与10μmol/L和50μmol/L剂量组比较差异也有统计学意义(P<0.001)。50,100和200μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36或48 h,PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。 展开更多

关键词 烟酰胺单核苷酸 胰十二指肠同源盒基因 分叉头框家族转录因子1 RIN-m5f

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Pdx1与Ngn3协同诱导LO2细胞分化为胰腺β样细胞 被引量：3

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作者 郭敏 唐小龙 张洹 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期351-356,共6页

目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克... 目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建pEGFP-C1/Pdx1与pEGFP-C1/Ngn3真核表达质粒,并共转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法检测目的基因及胰岛素相关基因葡萄糖转运体2(GLUT2)与胰岛素的表达情况。结果:目的基因克隆正确,RT-PCR、免疫组化、间接荧光证实转染后LO2细胞中有Pdx1、Ngn3和胰岛素及胰岛素相关基因GLUT2的表达。结论:Pdx1与Ngn3协同作用可诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框蛋白1 神经源素3 LO2细胞 转分化 胰腺β样细胞

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Superfect高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达 被引量：2

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作者 孙吉平 贾延劼 +1 位作者 王晓莉 杨于嘉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期12-17,共6页

目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载... 目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体,对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定;利用Percoll细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞周期后,Superfect介导正确重组的载体转染骨髓MSCs,检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化;G418筛选阳性细胞后,RT-PCR和Western blotting检测PDX-1基因在骨髓MSCs中的表达。结果:重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示85.9%的MSCs处于G0/G1期,提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能;荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光,Superfect介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关;RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓MSCs表达,随转染时间延长,表达逐渐增强,与Western blotting结果一致。结论:成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;Superfect能高效介导外源性基因在骨髓MSCs中表达;转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。 展开更多

关键词 骨髓间质干细胞 基因 胰腺十二指肠同源框1 糖尿病

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PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用 被引量：4

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作者 杨川 程桦 +3 位作者 王川 严励 黎锋 魏菁 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期409-412,共4页

【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检... 【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检测细胞内和培养基中是否存在胰岛素。【结果】GLP-1可以直接诱导C2C12细胞表达PDX-1;PDX-1瞬时转染C2C12细胞后,胰岛素分泌细胞阳性率比值(1.19±0.10)、培养基中的胰岛素含量(2.45±1.48)×10-6U/mL均明显升高(P<0.05);单独的40nmol/LGLP-1诱导与瞬间转染PDX-1相比,阳性率比值及胰岛素浓度的差别均无统计学意义。【结论】GLP-1可以诱导C2C12表达PDX-1,而且PDX-1可以促进C2C12分泌胰岛素。提示GLP-1诱导C2C12分化为胰岛素分泌细胞可能与PDX-1有关。 展开更多

关键词 胰岛素分泌细胞 PDX-1 成肌细胞株 分化 C2C12细胞 GLP-1 RT-PCR检测 胰腺十二指肠 胰高血糖素 流式细胞仪 免疫法检测 胰岛素含量 mol/L 胰岛素浓度 分泌胰岛素 不同浓度 细胞表达 瞬时转染 培养基 阳性率 同源框 细胞内

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pEGFP-N1/PDX1真核载体的构建与表达 被引量：1

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作者 唐小龙 郭敏 +1 位作者 张洹 朱康儿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期121-124,共4页

目的:构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,Pdx1)转录因子真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达能力及其生物活性。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1基因编码序列,... 目的:构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,Pdx1)转录因子真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达能力及其生物活性。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1基因编码序列,克隆到真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中,构建pEGFP-N1/Pdx1真核表达质粒,并转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western Blot检测目的基因表达情况。结果:酶切与测序结果表明目的基因序列克隆正确;RT-PCR检测目的基因Pdx1 mRNA在靶细胞L02中表达;免疫组化和间接荧光结果证实Pdx1主要存在于细胞核内;Western blot检测到细胞核内Pdx1目的蛋白。结论:完成人Pdx1基因克隆,成功构建了目的基因Pdx1真核表达载体,并在L02细胞中获得有效表达。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框蛋白1 质粒 转录因子 内切酶

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利用Tet-On系统构建稳定表达Pdx1的小鼠ESC细胞株 被引量：1

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作者 钟娃 夏忠胜 +3 位作者 于涛 倪楚燕 黎洁瑶 陈其奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期187-192,共6页

目的:利用Tet-On系统构建稳定表达胰十二指肠同源异形框1(Pdx1)的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为进一步研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化奠定了基础。方法:采用Tet-On系统构建具有绿色荧光蛋白标记及嘌呤霉素抗性的Pdx1过表达慢病毒载... 目的:利用Tet-On系统构建稳定表达胰十二指肠同源异形框1(Pdx1)的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为进一步研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化奠定了基础。方法:采用Tet-On系统构建具有绿色荧光蛋白标记及嘌呤霉素抗性的Pdx1过表达慢病毒载体并感染胚胎干细胞。实验分为空白对照组(ESC组)、空载慢病毒对照组(PDX1−ESC组)和Pdx1慢病毒转染组(PDX1+ESC组)。流式细胞术检测多西环素(DOX)筛选后转染细胞的阳性率;检测Tet-On系统功能及Pdx1的mRNA和蛋白表达。流式细胞分选仪分选转染细胞,构建稳定表达Pdx1基因的ESC株及阴性对照ESC株。结果:(1)DOX筛选后PDX1−ESC组的转染细胞阳性率为90.72%,PDX1+ESC组的转染细胞阳性率为94.01%。用流式细胞分选仪分选后PDX1−ESC组的转染细胞阳性率为97.84%,PDX1+ESC组为98.13%。(2)加入DOX后,PDX1−ESC组和PDX1+ESC组可见绿色荧光。PDX1+ESC组Pdx1的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.05)。不加DOX,则3组细胞均未见绿色荧光,且Pdx1 mRNA和蛋白表达的差异无统计学显著性(P>0.05)。(3)细胞株冻存3个月后复苏培养仍然存活,并受DOX调控。结论:利用Tet-On系统成功构建可诱导表达Pdx1的小鼠ESC株,为研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化提供了有效的细胞模型。 展开更多

关键词 Tet-On系统 胰十二指肠同源异形框1 胚胎干细胞 胰腺细胞

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