胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

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作者 金彩霞 李文林 +3 位作者 朱吉 田棣 张南 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期834-836,共3页

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。... 目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒基因-1 逆转录病毒科 肝 干细胞

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胰升糖素样肽-1对胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1表达的调节 被引量：2

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作者 董凌燕 刘超 +2 位作者 张梅 刘翠萍 覃又文 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第10期1045-1048,共4页

目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX... 目的胰升糖素样肽-1(glucagons-1ike peptide l,GLP-1)最重要的生理作用是葡萄糖依赖的胰岛素刺激作用,但其分子基础尚不清楚。文中研究不同浓度GLP-1对大鼠胰岛细胞胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox-1,PDX-1)表达的调节作用,探讨GLP-1对胰岛素基因转录的调节机制和临床意义。方法不同刺激浓度GLP-1(0、1、10、100、1000 nmol/L)与葡萄糖浓度分别为2.2、5.5、11.1 mmol/L的RPMI1640营养液共培养24 h后,提取胰岛细胞总RNA。运用RT-PCR技术检测PDX-1基因表达的变化。结果葡萄糖浓度为2.2和5.5 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈钟型方式升高;葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,随GLP-1浓度升高,PDX-1基因表达量呈浓度依赖性升高。结论 GLP-1以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进PDX-1基因的表达。 展开更多

关键词 胰岛 胰升糖素样肽-1 胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1 葡萄糖

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胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达 被引量：1

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作者 王海澜 潘明新 +2 位作者 张会迎 安靓 高毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期528-531,共4页

目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计... 目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h用RT-PCR检测目的基因的表达情况。结果质粒2～10μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率。RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。 展开更多

关键词 nestin阳性细胞 胰十二指肠同源框基因-1 电转染 糖尿病

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胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞 被引量：2

4

作者 孙吉平 杨于嘉 贾延劼 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期980-983,I0008-I0009,共6页

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均... 目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框-1基因 骨髓间充质干细胞 胰岛 糖尿病

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胰腺十二指肠同源盒-1在乳腺癌分子亚型中的表达及临床意义 被引量：2

5

作者 施华 宋旭东 +2 位作者 张晓霞 张志勇 朱海燕 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第17期1908-1909,共2页

目的通过检测乳腺癌病变中胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白及mRNA的表达情况,分析其与乳腺癌分子亚型之间的关系。方法采用免疫组织化学EnVision法检测PDX-1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第二号人类表皮生长因子受体(Her-2)、细... 目的通过检测乳腺癌病变中胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白及mRNA的表达情况,分析其与乳腺癌分子亚型之间的关系。方法采用免疫组织化学EnVision法检测PDX-1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第二号人类表皮生长因子受体(Her-2)、细胞角蛋白5&6(CK5/6)和上皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达,实时定量RT-PCR法检测PDX-1mRNA的表达。结果 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著低于在Her-2过表达型、基底细胞样型和未分类型中的表达(P<0.05)。结论 PDX-1蛋白和mRNA在乳腺癌管腔A型和管腔B型中的表达显著降低,PDX-1有望成为乳腺癌基因分型的筛选新指标。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源盒-1 乳腺肿瘤 分子亚型

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胰十二指肠同源基因1在胃癌中的表达及对胃癌生物学行为的影响 被引量：7

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作者 马娟 余莲英 +4 位作者 廖山婴 王蓓蓓 沙卫红 王启仪 刘庆华 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期215-223,共9页

【目的】明确PDX1基因在胃癌中的表达模式,探讨PDX1表达上调对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,从而揭示PDX1在胃癌发生发展中的作用。【方法】免疫组化法检测胃癌组织芯片的PDX1蛋白表达,RT-PCR和免疫印迹法检测3株胃癌细胞(AGS、SGC7901、BC... 【目的】明确PDX1基因在胃癌中的表达模式,探讨PDX1表达上调对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,从而揭示PDX1在胃癌发生发展中的作用。【方法】免疫组化法检测胃癌组织芯片的PDX1蛋白表达,RT-PCR和免疫印迹法检测3株胃癌细胞(AGS、SGC7901、BCG823)PDX1 mRNA表达;构建PDX1正义表达载体,瞬时转染胃癌细胞,免疫印迹法检测转染后PDX1、Ki-67、PCNA、Caspase3的表达,同时检测转染后胃癌细胞的增殖指数和凋亡指数。筛选PDX1稳定表达株,评价胃癌细胞伤口愈合、克隆形成、移植瘤形成等生物学行为。【结果】胃癌组织芯片包括171例腺癌,12例黏液腺癌,6例印戒细胞癌,5例未分化癌,7例恶性间质瘤,1例类癌,8例正常胃黏膜组织。PDX1蛋白在正常胃粘膜组织中腺上皮细胞的胞浆及胞核中高表达,胃癌组织中PDX1蛋白则表达下降甚至缺失(P<0.05);肿瘤分化级别越高,PDX1表达随之下降(P<0.05);与淋巴结无转移组比较,淋巴结转移组PDX1表达显著降低(P<0.05)。与正常对照相比,PDX1 mRNA和蛋白在胃癌细胞中表达微弱。瞬时转染PDX1正义表达载体后,PDX1表达明显上调,胃癌细胞增殖相关蛋白Ki67和PCNA下降,增殖指数显著下降;凋亡蛋白Caspase3被激活,cleaved-Caspase3被诱导表达,凋亡指数显著增加。与空质粒对照组比较,PDX1稳定过表达抑制了体外胃癌细胞的伤口愈合率以及克隆形成率和体内裸鼠移植瘤形成率(P<0.05)。【结论】PDX1基因在胃癌组织和细胞中表达下调,与癌组织淋巴结转移与分化程度有关;PDX1基因可能在胃癌发展过程中可能起着重要作用。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源基因1 PDX1 胃癌 生物学行为

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肌节同源盒-1基因A448T多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂发病的相关性

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作者 谢耕耘 南欣荣 李点典 《国际口腔医学杂志》 CAS 2010年第5期516-518,共3页

目的探讨肌节同源盒(msx)-1基因A448T的多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发病间的关系。方法以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法行msx-1基因A448T的多态性检测,并行其遗传统计分析。结果 msx-1等位基因频率在对照组... 目的探讨肌节同源盒(msx)-1基因A448T的多态性与山西部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发病间的关系。方法以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法行msx-1基因A448T的多态性检测,并行其遗传统计分析。结果 msx-1等位基因频率在对照组和NSCL/P组之间的差异有显著性统计学意义(P<0.01),对照组T位点频率明显高于NSCL/P组(对照组0.55,NSCL/P组0.26)。结论 msx-1/A448T(rs13127820)基因的多态性与山西部分人群NSCL/P发病可能相关,此位点的T等位基因在NSCL/P的发生中可能起保护效应。 展开更多

关键词 肌节同源盒-1基因 非综合征性唇腭裂 基因多态性

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腺相关病毒介导的pdx-1基因表达促进糖尿病大鼠肝脏细胞向胰岛素产生细胞转化的研究(英文) 被引量：1

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作者 李华 李欣燕 许瑞安 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第6期614-619,共6页

目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生... 目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,以进一步为糖尿病的细胞替代疗法提供信息。方法:门静脉途径注射AAV-pdx-1或AAV对照载体到大鼠体内。6周后,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测肝脏中胰岛素的基因表达及测定大鼠血糖、体重的变化。结果:AAV-pdx-1治疗组明显提高了糖尿病大鼠肝脏中胰岛素的基因表达和胰岛素阳性细胞数,改善了糖尿病大鼠的高血糖状态及增加了体重。结论:AAV-pdx-1可诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,缓解了糖尿病状态。其分化的机制及分化的肝脏细胞亚群需进一步实验研究,以提高分化效率。 展开更多

关键词 腺相关病毒 胰十二指肠同源盒基因-1 胰岛素 糖尿病 高血糖

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同源异型盒基因-1与非综合征型多数牙先天性缺失 被引量：1

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作者 方静娴 宋光泰 叶晓茜 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第2期227-230,共4页

牙缺失是常见的颌面发育异常之一,在恒牙列中的发病率高达20%,而其表现程度也存在较大差异。在过去的数十年中,遗传连锁和分子生物学研究使得部分综合征和非综合征型牙缺失的基因突变得以定位。尽管作用机制尚未明了,但现已知其中所涉... 牙缺失是常见的颌面发育异常之一,在恒牙列中的发病率高达20%,而其表现程度也存在较大差异。在过去的数十年中,遗传连锁和分子生物学研究使得部分综合征和非综合征型牙缺失的基因突变得以定位。尽管作用机制尚未明了,但现已知其中所涉及的重要突变因子包括了编码转录因子的同源异型盒基因(msx)-1、双链复合蛋白基因(pax)-9和轴抑制基因(axin)-2。下面从近年来国内外有关先天性牙缺失的病例报告、致病基因分析以及分子生物学和生物化学等研究方面就msx-1基因与非综合征型牙缺失的关系进行综述。 展开更多

关键词 多数牙先天性缺失 同源异型盒基因-1 非综合征

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烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响(英文) 被引量：3

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作者 盛飞凤 任贤 +7 位作者 戴幸平 徐潇静 董敏 裴奇 屈健 周智广 周宏灏 刘昭前 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期958-963,共6页

目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead... 目的:在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因(pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1)和分叉头框家族转录因子1(forkhead box-containing protein O-1,FoxO1)基因表达的影响。方法:采用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-time PCR检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用Western印迹检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。结果:用瑞格列奈10 nmol/L+NMN 100μmol/L处理RIN-m5f细胞48 h,与空白对照及DMSO对照组相比,胰岛素分泌量均显著增高(P<0.05);与NMN 50μmol/L组比较,胰岛素分泌量的增高也有统计学意义(P<0.05)。10,50和100μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36 h,PDX-1的mRNA表达量均上调(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.001)。100μmol/L剂量组与10μmol/L和50μmol/L剂量组比较差异也有统计学意义(P<0.001)。50,100和200μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36或48 h,PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。 展开更多

关键词 烟酰胺单核苷酸 胰十二指肠同源盒基因 分叉头框家族转录因子1 RIN-m5f

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PDX-1联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的效果 被引量：4

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作者 闫淑芳 吴敬 +5 位作者 刘宏霞 杜少斐 张会峰 史晓阳 袁倩 袁慧娟 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第2期161-166,共6页

目的:探讨胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞(IPCs)的效果。方法:构建真核表达载体p EGFP-pc DNA3.1(+)-PDX-1,脂质体介导其转染贴壁培养法分离得到的大鼠BMSCs,用潮霉素筛选稳定... 目的:探讨胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)联合利拉鲁肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞(IPCs)的效果。方法:构建真核表达载体p EGFP-pc DNA3.1(+)-PDX-1,脂质体介导其转染贴壁培养法分离得到的大鼠BMSCs,用潮霉素筛选稳定转染细胞PDX-1-BMSCs。将BMSCs和PDX-1-BMSCs分别用50 nmol/L利拉鲁肽或培养液培养10 d,然后ELISA法检测细胞上清胰岛素浓度,real-time PCR法检测细胞中Tle、Nkx6.1、Ngn3、Nestin、PDX-1 mRNA的表达。结果:4组细胞诱导过程中形态上趋向胰岛样细胞分化;利拉鲁肽和PDX-1均可诱导BMSCs胰岛素分泌水平增加(P<0.05);PDX-1可促进BMSCs中PDX-1、Ngn3、Nkx6.1、Tle mRNA的表达(P<0.05);利拉鲁肽可促进PDX-1、Ngn3 mRNA的表达(P<0.05);两者有协同作用的趋势。结论:PDX-1联合利拉鲁肽可以诱导BMSCs向IPCs分化并分泌胰岛素。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒-1 利拉鲁肽 大鼠 骨髓间充质干细胞 胰岛样细胞

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苯丙酸诺龙对胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌的影响

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作者 乔伟 农林琳 +5 位作者 冯乔 吴雅婷 胡婷婷 王平 梁瑜祯 冯乐平 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期720-724,I0001,共6页

目的:观察雄性激素苯丙酸诺龙(BPN)干预下胰岛NIT-1细胞中烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达、细胞周期和胰岛素分泌的变化,探讨高浓度葡萄糖氧化应激状态下BPN对NIT-1细胞Na... 目的:观察雄性激素苯丙酸诺龙(BPN)干预下胰岛NIT-1细胞中烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达、细胞周期和胰岛素分泌的变化,探讨高浓度葡萄糖氧化应激状态下BPN对NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素信号分子的影响。方法:应用4种不同浓度(5.6、11.1、16.7和27.6mmol·L-1)葡萄糖培养NIT-1细胞,以10mg·L-1 BPN干预NIT-1细胞48h,以未加BPN处理的相应浓度葡萄糖为对照组。应用Western blotting法检测各组细胞中Nampt、IRS-2和PDX-1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞周期;放射免疫法测定细胞胰岛素分泌水平。结果:与相应浓度葡萄糖对照组比较,各BPN处理组NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平增加(P<0.05或P<0.01);与相应对照组比较,在低糖(5.6mmol·L-1)时,BPN能够明显解除细胞G0/G1期阻滞(P<0.01),在高糖(27.6 mmol·L-1)时,能够解除细胞的G2/M阻滞(P<0.01);除正常葡萄糖浓度11.1mmol·L-1组之外,各处理组细胞的胰岛素分泌水平均明显增加(P<0.01)。结论:BPN能够增加胰岛NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平,NIT-1细胞中Nampt表达与胰岛素信号传导途径的相关分子间可能存在密切关联,雄性激素在一定条件下能够改善胰岛细胞的胰岛素抵抗状态。 展开更多

关键词 苯丙酸诺龙 烟酰胺磷酸核糖转移酶 胰岛十二指肠同源盒-1 细胞周期 胰岛素

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人PDX-1基因真核表达载体的构建及表达

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作者 陈寒蓓 董艳 苏青 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期85-87,共3页

目的构建人胰十二指肠同源盒(PDX-1)基因的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达。方法以人胰岛细胞瘤cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PDX-1基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,经限制性内切酶双酶切及... 目的构建人胰十二指肠同源盒(PDX-1)基因的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达。方法以人胰岛细胞瘤cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PDX-1基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。序列正确的重组质粒用脂质体转染NIH3T3细胞,Western blot观察基因表达情况。结果PCR扩增的特异性片段长度为852 bp,以此构建的重组质粒pcDNA3.1-PDX-1,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后显示5.5 kb和850 bp左右的两条片段,测序结果与GenBank中的人PDX-1基因cDNA(GenBank序列号NM_000209)序列一致。证明PDX-1基因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1中。Western blot证实pcDNA3.1-PDX-1转染NIH3T3细胞24 h后有PDX-1的表达。结论成功构建了pcDNA3.1-PDX-1重组真核表达载体,并在NIH3T3细胞中表达。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒 基因克隆 真核表达载体 转染

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构建EGFP-PDX-1融合表达载体电穿孔转染大鼠胎肝干细胞的研究

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作者 孙冰 孙晓艳 安靓 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期750-753,共4页

目的构建PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染入大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达。方法从SK900/BLSCRIPT质粒中扩增PDX-1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP-C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转... 目的构建PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染入大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达。方法从SK900/BLSCRIPT质粒中扩增PDX-1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP-C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转染;分析转染前后细胞生长曲线,荧光显微镜下观察、RT-PCR鉴定转染结果。结果重组质粒经酶切鉴定正确无误,经电穿孔转染后GFP和PDX-1基因均能在胎肝干细胞中保持较长时间稳定表达,并对胎肝干细胞的生长增殖影响较小。结论成功构建了PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,能在胎肝干细胞中较稳定表达,为研究PDX-1在干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞中的调控作用提供了物质基础。 展开更多

关键词 肝干细胞 绿色荧光蛋白 载体构建 胰十二指肠同源盒基因-1 电穿孔

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BMP-2、bFGF基因转染的大鼠骨髓干细胞与牙胚细胞在体外混合培养对成牙基因的影响 被引量：7

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作者 邬薇薇 胡杨 +2 位作者 何惠宇 韩祥祯 王欢欢 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页

目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响。方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BM... 目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响。方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BMP-2和(或)bFGF对成牙基因的影响。结果:对照组、bFGF组、BMP-2组、bFGF/BMP-2组四组间,AMBN、COLLAGEN-Ⅰ、DLX1、DMP1基因在mRNA和蛋白水平表达量上存在明显差异(P<0.05)。结论:BMP2和bFGF有一定的协同交互作用,BMP2/bFGF/BMSCs/牙胚细胞可以作为构建组织工程牙的种子细胞。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 牙本质基质蛋白1 成釉蛋白 Ⅰ型胶原蛋白同源异型盒基因1

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长牡蛎繁殖期糖原含量与类胰岛素基因表达的相关性分析

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作者 苗校静 邓少熙 +1 位作者 李良恒 许飞 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1-12,共12页

为探究长牡蛎在繁殖期间的糖原含量与类胰岛素基因(cgMIP123、cgMIP4、cgMILP7、cgILP)和相关转录调控因子(cgPdx)相对表达量的相关性,自2020年5月至2020年10月采集了山东胶南养殖海区的长牡蛎,测定了血糖含量、糖原含量、条件指数、类... 为探究长牡蛎在繁殖期间的糖原含量与类胰岛素基因(cgMIP123、cgMIP4、cgMILP7、cgILP)和相关转录调控因子(cgPdx)相对表达量的相关性,自2020年5月至2020年10月采集了山东胶南养殖海区的长牡蛎,测定了血糖含量、糖原含量、条件指数、类胰岛素基因相对表达量及环境因子(酸度、温度、盐度)等数据,采用多元统计方法对数据进行分析。logistic回归分析结果显示,长牡蛎配子排放前后血糖含量和内脏团糖原含量具有显著差异。构建的回归模型可以通过血糖含量和内脏团糖原含量准确判断配子是否已经排放,区分度C-index为0.903,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验χ^(2)值为9.06,P>0.05,验证结果显示该模型可靠。多元线性回归分析结果显示:条件指数与cgMIP123和cgMIP4基因的相对表达量具有相关性,R2为0.91,P值为0.0076,极显著相关;内脏团和唇瓣组织的糖原含量与ILPs和cgPdx相对表达量具有一定的相关性,其中cgMILP7的相对表达量与内脏团和唇瓣组织的糖原含量呈负相关,cgPdx相对表达量与唇瓣组织的糖原含量呈负相关,cgMIP4和cgILP的相对表达量与糖原含量呈正相关。 展开更多

关键词 长牡蛎 血糖 类胰岛素 胰十二指肠同源异型盒基因 多元统计

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胃癌中IRX1的表达与启动子区甲基化的相关性 被引量：7

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作者 潘玉申 于颖彦 +7 位作者 计骏 纪玉宝 瞿颖 李建芳 张俊 刘炳亚 朱正纲 林言箴 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期524-527,共4页

目的探讨胃癌中同源盒基因IRX1的表达与启动子区甲基化修饰之间的关系。方法生物信息学软件分析IRX1基因启动子区;RT-PCR检测胃癌细胞株及手术切除胃癌组织IRX1基因mRNA表达水平;MSP及BSP法检测启动子区甲基化状态;检测去甲基化试剂5-杂... 目的探讨胃癌中同源盒基因IRX1的表达与启动子区甲基化修饰之间的关系。方法生物信息学软件分析IRX1基因启动子区;RT-PCR检测胃癌细胞株及手术切除胃癌组织IRX1基因mRNA表达水平;MSP及BSP法检测启动子区甲基化状态;检测去甲基化试剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷的干预对胃癌细胞IRX1基因表达的逆转效应。结果经生物信息学预测IRX1基因转录起始点上游启动子区富含CpG岛;胃癌细胞株及胃癌组织IRX1基因表达有不同程度下调;MSP及BSP检测显示所有胃癌细胞株启动子区呈高甲基化状态;经5-Aza-CdR处理的细胞株IRX1基因的表达有不同程度上调。结论胃癌中IRX1基因的表达下调与启动子区甲基化修饰有一定关系,为探讨IRX1基因作为去甲基化治疗靶点的可能性提供了实验数据。 展开更多

关键词 IRX1 同源盒基因 胃癌 甲基化 5-杂氮-2'-脱氧胞苷

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一种高效诱导胚胎胰腺细胞分化为内分泌细胞培养方法的建立 被引量：3

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作者 陈芳 马凤霞 +4 位作者 池颖 赵钦军 杨少光 卢士红 韩忠朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期343-347,共5页

目的建立一种使胚胎胰腺细胞体外高效分化为成熟内分泌细胞的培养方法。方法体外分离小鼠12.5 d的胚胎胰腺,培养于下层为培养基的漂浮膜上7 d,采用免疫组织化学方法检测胰腺祖细胞标志胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)... 目的建立一种使胚胎胰腺细胞体外高效分化为成熟内分泌细胞的培养方法。方法体外分离小鼠12.5 d的胚胎胰腺,培养于下层为培养基的漂浮膜上7 d,采用免疫组织化学方法检测胰腺祖细胞标志胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)的表达及内、外分泌细胞的标志胰岛素、胰高血糖素、羧肽酶表达,定量PCR检测培养过程中胰腺标志表达的变化。结果胚胎胰腺培养1 d后,有大量胰腺祖细胞标志表达,且这些胰腺祖细胞处于增殖状态。培养3 d后,仍有胰腺祖细胞的标志大量表达。培养7 d后,分化的胰腺表达成熟内、外分泌细胞的标志,且胰腺标志的表达与体内表达模式一致。结论建立了一种使胚胎胰腺细胞体外高效分化为成熟内分泌细胞的培养方法。 展开更多

关键词 胰腺 胰岛素 腺十二指肠同源盒基因1 神经源素3

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悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞

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作者 马凤霞 陈芳 +3 位作者 池颖 杨少光 卢士红 韩忠朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期270-274,共5页

目的建立悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞的方法,研究该方法能否诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。方法体外分离小鼠12.5d胚胎胰腺,消化成单个细胞,悬滴法培养24h后细胞形成球体,将细胞球转移到下层为培养基漂浮的膜上培... 目的建立悬滴和悬浮法相结合培养胰腺祖细胞的方法,研究该方法能否诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。方法体外分离小鼠12.5d胚胎胰腺,消化成单个细胞,悬滴法培养24h后细胞形成球体,将细胞球转移到下层为培养基漂浮的膜上培养6d。培养过程中,采用免疫组织化学方法检测胰腺十二指肠同源盒基因1(PDX-1)和神经源素3(Ngn3)的表达及胰岛素、胰高血糖素、羧肽酶(CPA)的表达,酶联免疫吸附法检测葡萄糖刺激后细胞球分泌胰岛素的变化,定量PCR检测培养过程中胰腺标志表达的变化。结果细胞球培养1d后,有大量PDX-1表达,而且这些PDX-1阳性细胞增殖。细胞球培养3d后,Ngn3大量表达,Ngn3阳性细胞不增殖。培养7d后,分化的胰腺细胞表达成熟内、外分泌细胞的标志,而且胰腺标志的表达与体内表达模式一致。高糖能刺激细胞球分泌胰岛素。结论悬滴和悬浮法相结合能诱导胰腺祖细胞在体外分化为成熟的内分泌细胞。 展开更多

关键词 胰岛素 腺十二指肠同源盒基因1 神经源素3 胰腺祖细胞

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SNHG6通过上调ZEB1表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的侵袭和转移 被引量：1

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作者 王梦杰 刘琰 +4 位作者 吕微 田聪 王郁 赵连梅 刘丽华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期282-288,共7页

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6, SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法:使... 目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6, SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法:使用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测36例ESCC组织及其癌旁组织(标本收集自河北医科大学第四医院2019年2月至8月外科手术的ESCC患者)中SNHG6表达水平;使用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ESCC细胞系(TE1、Yes-2、Eca9706和Kyse150)中SNHG6表达水平,选用SNHG6高表达的TE1细胞,通过转染SNHG6-siRNA敲低该细胞中SNHG6表达;通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测SNHG6敲低前后TE1细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SNHG6敲低前后TE1细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化。结果:SNHG6在ESCC组织和细胞系中均呈高表达状态(均P<0.01),且在TE1细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA后TE1细胞中SNHG6表达水平显著降低(P<0.01),si-SNHG6-1和si-SNHG6-2组TE1细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(均P<0.01),两组细胞中MMP-2、MMP-9和ZEB1表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论:ESCC组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1细胞的恶性生物学行为,其机制可能涉及ZEB1表达的上调。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 核仁小RNA宿主基因6 锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1 侵袭 转移

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