甘蔗细胞质型苹果酸脱氢酶基因的克隆及其表达分析 被引量：3

1

作者 徐景升 阙友雄 +6 位作者 颜克伟 唐唯其 许莉萍 高三基 郭晋隆 董萌 陈如凯 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期455-461,共7页

对甘蔗(Saccharum officinarum L.)叶片全长cDNA文库进行测序,获得了1个细胞质型苹果酸脱氢酶(cMDH)基因的全长cDNA序列,命名为Sc-cMDH。生物信息学分析表明,该基因全长1314 bp,开放阅读框为999 bp,编码332个氨基酸。Sc-cMDH与其他植物c... 对甘蔗(Saccharum officinarum L.)叶片全长cDNA文库进行测序,获得了1个细胞质型苹果酸脱氢酶(cMDH)基因的全长cDNA序列,命名为Sc-cMDH。生物信息学分析表明,该基因全长1314 bp,开放阅读框为999 bp,编码332个氨基酸。Sc-cMDH与其他植物cMDH的氨基酸序列同源性高达86.5%～97.0%。Sc-cMDH包含典型的NAD+结合基元T11GAAGQI17和催化基元I184WGNH188,还有相当保守的6个半胱氨酸残基,因此推断该基因为细胞质型NAD-MDH。定量PCR分析结果表明,该基因在甘蔗叶片和根中的表达量高于茎。 展开更多

关键词 甘蔗 细胞质型苹果酸脱氢酶基因 实时定量PCR

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低温冷藏提高家蚕滞育卵NAD含量和胞质苹果酸脱氢酶活性 被引量：7

2

作者 王启龙 万华星 +2 位作者 姚金美 司马杨虎 赵林川 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1031-1036,共6页

为了调查5℃低温处理是否改变家蚕Bombyxmori卵滞育NAD代谢,本研究利用HPLC和分光光度法测定了经25℃和5℃分别处理的滞育卵中NADH含量、NAD+含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性和胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)活性。结果表明:5℃处理的NAD(NADH+NAD+... 为了调查5℃低温处理是否改变家蚕Bombyxmori卵滞育NAD代谢,本研究利用HPLC和分光光度法测定了经25℃和5℃分别处理的滞育卵中NADH含量、NAD+含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性和胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)活性。结果表明:5℃处理的NAD(NADH+NAD+)含量和cMDH活性分别增加了106%和53%,并且显著高于25℃处理(P<0.01);但是两种处理的NADH/NAD+比值和LDH活性没有显著差异(P>0.05)。据此推测,5℃低温处理加强了家蚕滞育卵NAD+合成和再生能力。 展开更多

关键词 家蚕 滞育解除 辅酶NAD 乳酸脱氢酶 胞质苹果酸脱氢酶

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草鱼胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)的序列克隆及分析 被引量：5

3

作者 朱文漓 顾继锐 +3 位作者 辜文博 吴江 刘汉元 徐恒 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第4期66-72,共7页

以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU56... 以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比对显示草鱼胞质苹果酸脱氢酶具有典型的苹果酸脱氢酶功能区保守序列,该酶与斑马鱼cMDH相似度最高达到95.5%,与模式植物拟兰介的相似度为57.8%,其预测三级结构具有典型cMDH功能区。Southern杂交结果表明草鱼cMDH属于多拷贝基因家族。 展开更多

关键词 草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 肠道 胞质苹果酸脱氢酶 CDNA 克隆 序列分析

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亚洲牛带绦虫36kDa胞浆型苹果酸脱氢酶基因的表达、纯化及免疫学分析

4

作者 黄江 胡旭初 +4 位作者 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 廖兴江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期655-658,共4页

目的对亚洲牛带绦虫胞浆型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆、表达和免疫学研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫MDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-... 目的对亚洲牛带绦虫胞浆型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆、表达和免疫学研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫MDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-30a(+)-TaMDH重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫苹果酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 亚洲牛带绦虫 苹果酸脱氢酶基因 基因克隆 原核表达

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西方蜜蜂六个亚种苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异 被引量：7

5

作者 刘艳荷 陈盛禄 +1 位作者 童富淡 张传溪 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期188-192,共5页

研究了西方蜜蜂Apismellifera 6亚种———浙农大 1号意蜂 (ZND A .m .ligustica)、东北黑蜂 (A .m .ssp .)、卡尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、喀尔巴阡蜂 (A .m .carpatica)、高加索蜂 (A .m .caucasica)和乌克兰蜂 (A .m .acervorum)苹... 研究了西方蜜蜂Apismellifera 6亚种———浙农大 1号意蜂 (ZND A .m .ligustica)、东北黑蜂 (A .m .ssp .)、卡尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、喀尔巴阡蜂 (A .m .carpatica)、高加索蜂 (A .m .caucasica)和乌克兰蜂 (A .m .acervorum)苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率、基因频率和杂合纯合度。浙农大 1号意蜂、喀尔巴阡蜂和高加索蜂的纯合度较高 ,但浙农大 1号意蜂等位基因c频率最高 ,喀尔巴阡蜂等位基因b频率最高 ,高加索蜂等位基因a频率最高 ;东北黑蜂、卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂是高度杂合的亚种 ,但东北黑蜂等位基因a、b、c的频率差异较小 ,卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂主要存在a、c两个等位基因 ,b出现频率很小 ;6亚种的基因型频率、基因频率和杂合纯合度都有极显著差异。这些差异将从遗传和生化角度为西方蜜蜂 6个亚种的鉴别提供依据。 展开更多

关键词 西方密蜂 苹果酸脱氢酶Ⅱ基因 遗传差异 亚种

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华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响 被引量：4

6

作者 郑南才 黄宝明 +4 位作者 徐劲 黄善盛 胡旭初 陈金中 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期575-579,共5页

目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质... 目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性。结果H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63.5℃和64℃,比Cs cMDH的tm值分别下降了4℃和3.5℃。结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降。 展开更多

关键词 华支睾吸虫 胞浆苹果酸脱氢酶 点突变 圆二色性

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大豆苹果酸脱氢酶基因的电子克隆与生物信息学分析 被引量：3

7

作者 李文爽 刘渊 +2 位作者 常文锁 刘梦星 李喜焕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期23-28,共6页

利用电子克隆技术获得大豆中的苹果酸脱氢酶基因cDNA序列,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析和预测,为进一步克隆该基因、解决植物磷高效基因数量缺乏等问题提供依据。结果表明,大豆中的苹果酸脱氢酶基因(GmMDH1)cDNA序列长度为1 ... 利用电子克隆技术获得大豆中的苹果酸脱氢酶基因cDNA序列,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析和预测,为进一步克隆该基因、解决植物磷高效基因数量缺乏等问题提供依据。结果表明,大豆中的苹果酸脱氢酶基因(GmMDH1)cDNA序列长度为1 574 bp,开放阅读框1 230 bp,编码409个氨基酸残基;编码蛋白含有NAD bindingsite,Dimerization interface,Substrate binding site,MDH_glyoxysomal_mitochondrial结合位点和保守域,属于LDH_MDH_like Superfamily家族;亚细胞定位分析显示,编码蛋白位于植物细胞的叶绿体中。 展开更多

关键词 磷高效基因 大豆 苹果酸脱氢酶 电子克隆

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猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫学分析 被引量：2

8

作者 江楠 席晓兰 +3 位作者 王杰 戴佳琳 廖兴江 黄江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期423-426,共4页

目的对猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆,表达及免疫学特性的初步研究。方法将猪带绦虫MDH基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙基--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过... 目的对猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆,表达及免疫学特性的初步研究。方法将猪带绦虫MDH基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙基--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blot)进行免疫学分析。结果成功构建pET-28a(+)-MDH重组质粒,并获得高纯度蛋白,该重组蛋白可被其免疫SD大鼠血清识别,同时也能被感染猪带绦虫的病人及猪、感染牛带绦虫病人及感染亚带绦虫病人血清所识别。结论猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪带绦虫 苹果酸脱氢酶基因 基因克隆 原核表达

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殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定

9

作者 刘晓红 何钟勤 +3 位作者 孙晓宇 高心 薛莹 李倪娜 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第11期1008-1011,1015,共5页

目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5... 目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。 展开更多

关键词 韦荣菌 苹果酸脱氢酶 基因克隆 重组表达 活性测定

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黄瓜胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因克隆及序列分析 被引量：6

10

作者 魏跃 王永平 +3 位作者 李为观 吴志明 张蜀宁 陈劲枫 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1954-1961,共8页

根据6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6PGDH)基因的保守氨基酸序列设计简并引物,应用RT-PCR技术从黄瓜栽培种品种'北京截头'(Cucumis sativus'Beijingjietou')叶片中获得了640bp的特异片段,以... 根据6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6PGDH)基因的保守氨基酸序列设计简并引物,应用RT-PCR技术从黄瓜栽培种品种'北京截头'(Cucumis sativus'Beijingjietou')叶片中获得了640bp的特异片段,以该序列在EST数据库进行同源检索筛选,发现甜瓜EST序列AM715537.2与之高度一致,据此设计引物经RT-PCR扩增、分子克隆和序列拼接,获得了黄瓜6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因全长序列,命名为Cs6PGDH(GenBank登录号FJ610345)。序列分析表明,该基因全长1829bp,其中开放读码框(ORF)长1488bp编码495个氨基酸组成的多肽,编码区内无内含子存在,5′、3′端非翻译区长度各为70bp和271bp。Blast同源性分析显示该基因编码的氨基酸序列与拟南芥、大豆、水稻、玉米、菠菜等物种6PGDH基因有74%以上的一致性。由于与其他物种胞质6PGDH相类似氨基酸N端都缺少长度约为40aa的转运肽,推断Cs6PGDH为黄瓜胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因。 展开更多

关键词 黄瓜 胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 表达序列标签 克隆

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睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达 被引量：5

11

作者 张国华 徐国宾 +1 位作者 刘英民 夏铁安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期966-969,共4页

从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析... 从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。 展开更多

关键词 睾酮假单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶基因 质粒载体 构建 表达 胆汁酸 血清

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意蜂苹果酸脱氢酶同工酶的电泳表型和基因型 被引量：11

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作者 李举怀 李绍文 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期237-242,共6页

用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定了意蜂不同级别和不同发育阶段的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶。意蜂的MDH有3个区带,其中MDHⅡ由3个等位基因编码,雌性峰是双倍体,有6种电泳表型,纯合子和杂合子各3种。雄性蜂是单倍体,有3种电泳表型。雌... 用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定了意蜂不同级别和不同发育阶段的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶。意蜂的MDH有3个区带,其中MDHⅡ由3个等位基因编码,雌性峰是双倍体,有6种电泳表型,纯合子和杂合子各3种。雄性蜂是单倍体,有3种电泳表型。雌蜂和雄雌的幼虫与其成虫的酶谱相同。蛹期有1～2条附加带,卵期测不出MDHⅡ的活性。 展开更多

关键词 意蜂 苹果酸脱氢酶 同功酶 基因型

全文增补中

儿童琥珀酸脱氢酶缺陷型胃肠间质瘤伴肝转移1例

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作者 赵丽 赵林胜 +2 位作者 陈静 詹江华 胡晓丽 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期781-782,共2页

患儿,男,6岁,主因间断呕吐伴黑便、乏力2个月入院。体格检查:中度贫血貌,腹平软,未触及明显肿块,肝脏右肋下2 cm, 脾脏肋下未触及。血常规HGB 42 g/L;凝血功能:纤维蛋白原0.998 g/L。腹部MR示邻近肝左叶胃小弯侧实性包块伴较明显强化,... 患儿,男,6岁,主因间断呕吐伴黑便、乏力2个月入院。体格检查:中度贫血貌,腹平软,未触及明显肿块,肝脏右肋下2 cm, 脾脏肋下未触及。血常规HGB 42 g/L;凝血功能:纤维蛋白原0.998 g/L。腹部MR示邻近肝左叶胃小弯侧实性包块伴较明显强化,考虑来源于胃壁(图1)。CT示胃壁小弯侧软组织密度肿块,向胃腔内生长,病变密度较均匀,最大面31.1 mm×18.8 mm;肝实质内可见低密度结节影。 展开更多

关键词 胃肠间质瘤 儿童 琥珀酸脱氢酶 基因检测 免疫组织化学 病例报道

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土壤假单胞菌亚磷酸盐脱氢酶的基因克隆和原核表达及其酶活分析 被引量：6

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作者 袁航 罗著 +5 位作者 杨玉梅 刘延娟 高艳秀 刘娴 龚明 邹竹荣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期130-137,共8页

亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将... 亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将它克隆到质粒pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET(PsPtx)。序列分析表明,PsPtx基因的完整编码区大小为1 011 bp,其推导蛋白由336个氨基酸组成,理论分子量大小为36.5 kD。保守结构域预测分析表明PsPtx编码蛋白属于亚磷酸盐脱氢酶,含有保守的NAD+结合基序和催化功能残基。系统进化树分析显示PsPtx基因来源于一无法确定种名的土壤假单胞菌。另外,PsPtx基因经IPTG诱导能在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,重组PsPtx蛋白用组氨酸标签亲合层析纯化,其以亚磷酸钠盐为底物的酶比活性为3.75 U/mg。该PsPtx功能基因的获得为其后续应用研究打下了必要的基础。 展开更多

关键词 土壤假单胞菌 亚磷酸盐脱氢酶 基因克隆 原核表达

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假单胞菌(Pseudomonas sp. cn 4902)甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及表达 被引量：4

15

作者 刘广发 谭静 +3 位作者 陈启伟 刘广发 谭静 陈启伟 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期183-188,共6页

参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究... 参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明 ,克隆获得一长为 114 9bp的基因。经蛋白质保守区域研究 ,初步判别该基因为mtlD结构基因。将该基因与pBV2 2 0质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS PAGE电泳表明 ,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为 4 1kD的蛋白带 ,表达量约占菌体可溶性蛋白 6 7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约 1/5。在含 0 9mol/LNaCl的液体培养基中 ,转化子培养 2 4h后其生物量约是对照的 10 2倍 ,甘露醇含量约是对照的 4 1倍。可见 ,假单胞菌的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因 ,该基因已在GenBank登记 ,代号为AY112 6 96。 展开更多

关键词 假单胞菌 甘露醇-1-磷酸脱氢酶 基因 克隆

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荧光假单胞菌香兰素脱氢酶基因的克隆及表达 被引量：2

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作者 赵建芬 张广 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期51-54,共4页

对荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens ATCC13525)香兰素脱氢酶基因vdh进行了克隆、序列分析以及表达。PCR扩增获得了长度为1 449 bp的核苷酸序列,该序列编码含438个氨基酸,分子量约为50 ku的多肽。序列分析表明该基因与GenBank提供... 对荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens ATCC13525)香兰素脱氢酶基因vdh进行了克隆、序列分析以及表达。PCR扩增获得了长度为1 449 bp的核苷酸序列,该序列编码含438个氨基酸,分子量约为50 ku的多肽。序列分析表明该基因与GenBank提供的部分已知vdh基因具有高度的同源性。该基因在大肠杆菌DH5α中能高效表达,而在野生型P.fluorescens ATCC13525中本身并不表达出功能。Vdh基因表达产物香兰素脱氢酶(Vdh)在细胞中主要以可溶性蛋白的形式存在。同时研究表明诱导剂IPTG对vdh基因在大肠杆菌中的表达并不起作用。 展开更多

关键词 荧光假单胞菌 香兰素脱氢酶 基因克隆 表达

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烟草胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆及表达分析

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作者 林世锋 付强 +3 位作者 余婧 赵杰宏 任学良 王仁刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期113-119,共7页

采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,首次从烟草(Nicotiana tabacum)中克隆到1个胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)基因的c DNA序列,命名为Nt6PGDH(Gen Bank登录号:KM211534)。该基因c DNA全长1 932bp,开放阅读框1 455 bp,编... 采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,首次从烟草(Nicotiana tabacum)中克隆到1个胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)基因的c DNA序列,命名为Nt6PGDH(Gen Bank登录号:KM211534)。该基因c DNA全长1 932bp,开放阅读框1 455 bp,编码484个氨基酸,与番茄(Solanum lycopersicum)和马铃薯(Solanum tuberosum)的6PGDH氨基酸序列一致性最高,为95%。生物信息学分析表明,Nt6PGDH氨基酸序列不存在信号肽和转运肽,无跨膜结构域,定位于细胞质。对烟草不同发育时期Nt6PGDH基因的表达情况分析发现,Nt6PGDH基因在烟草旺长期根、茎、叶中的表达量均高于苗期,并且在同一发育时期,烟草根中表达量最强,茎次之,叶片最弱。 展开更多

关键词 烟草 胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 基因克隆 表达分析

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胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶在ABA与H2O2介导的氧化应激中的潜在作用

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作者 罗娅 杨敏 葛聪 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期805-811,861,共8页

【目的】研究胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶(cytosolic glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC)在植物脱落酸(abscisic acid,ABA)和过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)介导的氧化应激中的潜在作用。【方法】通过目前的研究结果对ABA和H... 【目的】研究胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶(cytosolic glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC)在植物脱落酸(abscisic acid,ABA)和过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)介导的氧化应激中的潜在作用。【方法】通过目前的研究结果对ABA和HO信号转导过程及GAPC的多功能性进行总结。【结果】ABA是响应植物非生物胁迫和气孔关闭的重要激素,HO是ABA介导应激反应的关键信号分子,GAPC因半胱氨酸残基上存在易被氧化修饰的巯基分子,所以在本身的催化功能之外还具有信号转导功能。在氧化胁迫下,GAPC参与了植物HO依赖性信号转导的过程,并作为修饰蛋白发挥其多功能性。【结论】GAPC通过“兼职”或调控初生代谢的转变来响应氧化胁迫。 展开更多

关键词 胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶 氧化胁迫 过氧化氢 脱落酸

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胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPC2参与番茄果实成熟的调控 被引量：1

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作者 杨敏 龙宇 +4 位作者 王良新 刘晓阳 侯国艳 蒋语嫣 罗娅 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期156-162,171,共8页

【目的】研究异源胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶2(cytoplasm glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC2)对番茄果实成熟的影响。【方法】构建“红颜”草莓FaGAPC2过表达载体,采用瞬时过表达技术在樱桃番茄“罗纳”的破色期过表达FaGA... 【目的】研究异源胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶2(cytoplasm glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC2)对番茄果实成熟的影响。【方法】构建“红颜”草莓FaGAPC2过表达载体,采用瞬时过表达技术在樱桃番茄“罗纳”的破色期过表达FaGAPC2。【结果】FaGAPC2的表达量为对照组的2.39倍,过表达FaGAPC2能够显著抑制番茄果皮颜色变红并显著提高其硬度(3.76N)、降低可溶性糖含量,其类胡萝卜素含量和总叶绿素含量分别是对照组的0.37倍和1.5倍。进一步通过实时荧光定量分析结果表明,过表达FaGAPC2较对照能显著降低乙烯合成途径中ACO1(12.89倍)、ACO3(3.87倍)和ERF1(3.51倍);类胡萝卜合成途径中PSY1(12.39倍)、CYC-B(1.49倍);果实成熟相关基因E4(4.48倍)、PG(41.35倍)和MADS转录因子RIN(6.67倍)的表达量,其中果实成熟相关基因E8、LOXB相比于对照表达量几乎为零。【结论】表明FaGAPC2作为一个负调节因子参与番茄果实成熟的调控。 展开更多

关键词 樱桃番茄 果实成熟 胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶2

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蜡样芽孢杆菌中甲酸脱氢酶基因产氢研究 被引量：4

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作者 王海燕 郝瑞霞 +4 位作者 赵雅琪 刘伟 程水源 王冕超 徐岚婷 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2018年第2期729-736,共8页

通过基因筛选,成功分离并克隆到蜡样芽胞杆菌XN12(Bacillus cereus XN12)的甲酸脱氢酶基因fdh F(formate dehydrogenase),该基因全长2937bp,GC含量39.3%,编码978个氨基酸,与已报道的蜡样芽孢杆菌Q1的fdh F基因(Gen Bank No.CP000227.1)... 通过基因筛选,成功分离并克隆到蜡样芽胞杆菌XN12(Bacillus cereus XN12)的甲酸脱氢酶基因fdh F(formate dehydrogenase),该基因全长2937bp,GC含量39.3%,编码978个氨基酸,与已报道的蜡样芽孢杆菌Q1的fdh F基因(Gen Bank No.CP000227.1)同源性达到100%.将其连接在表达载体p ET32a上并融合His标签,构建了重组质粒p ET32a-FDHF-His,转入大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)后获得了高效表达.重组菌株经IPTG诱导后经Western Blot分析表明,重组蛋白分子量约为108k Da.通过对重组菌株产氢性能试验表明,重组菌对提高产氢率具有一定促进作用,产氢量为每消耗1mol的葡萄糖和甲酸盐分别能产生0.73mol和0.20mol的氢气. 展开更多

关键词 甲酸脱氢酶基因(fdhF) 蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus) 产氢细菌 生物制氢

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