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产甘油假丝酵母与酿酒酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因的功能比较 被引量:5
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作者 陈献忠 方慧英 +4 位作者 饶志明 沈微 诸葛斌 王正祥 诸葛健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期198-205,共8页
胞浆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酿酒酵母细胞甘油合成过程中的关键限速酶.尽管高产甘油菌株产甘油假丝酵母基因组中编码该酶的基因CgGPD已经被克隆出来,但是具体的功能,特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究.以酿酒酵... 胞浆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酿酒酵母细胞甘油合成过程中的关键限速酶.尽管高产甘油菌株产甘油假丝酵母基因组中编码该酶的基因CgGPD已经被克隆出来,但是具体的功能,特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究.以酿酒酵母渗透压敏感型的gpd1/gpd2和gpd1突变株为宿主,分别导入CgGPD、GPD1和GPD2基因,比较分析了CgGPD、GPD1和GPD2基因在高渗透压胁迫条件下和厌氧环境中的表达调控,及其对细胞甘油合成能力的影响.研究发现,GPD1基因受到渗透压诱导表达,GPD2基因在细胞厌氧条件下起着氧化还原平衡调节作用,而CgGPD基因不仅能够在渗透压胁迫条件下通过过量快速合成甘油调节渗透压平衡,而且能够在厌氧培养环境中互补GPD2基因的缺失,使gpd1/gpd2缺失突变株能够正常生长,同时提高了突变株的甘油合成能力.结果表明,CgGPD基因在gpd1/gpd2缺失突变株中既具有GPD1基因的功能,又能发挥GPD2基因的功能. 展开更多
关键词 甘油假丝酵母 3-磷酸甘油 甘油合成 渗透压调节 氧化还原平衡
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牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 李昂 徐红艳 +3 位作者 石建峰 朱春晖 饶国洲 苟建重 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期199-202,共4页
目的克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),并将其置于大肠杆菌中作融合表达。方法利用PCR技术,克隆GAPDH,插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH。克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pE... 目的克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),并将其置于大肠杆菌中作融合表达。方法利用PCR技术,克隆GAPDH,插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH。克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pET-32a-GAPDH。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果核酸序列测定与分析表明:表达重组子pET-32a-GAPDH与NCBI核酸数据库中收录的GAPDH序列同源性达99.802%;在最佳浓度的IPTG诱导下,GAPDH可高效表达。结论本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中表达了GAPDH蛋白,为后续实验研究GAPDH的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单 3-磷酸甘油 原核表达
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环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、多克隆抗体制备及亚细胞定位
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作者 赵洪喜 刘军龙 +6 位作者 杨聪山 赵帅阳 刘娟 刘光远 殷宏 关贵全 罗建勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期304-310,共7页
为了研究环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的功能,本试验利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增环形泰勒虫GAPDH(TaGAPDH)基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,并转入大肠... 为了研究环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的功能,本试验利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增环形泰勒虫GAPDH(TaGAPDH)基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合蛋白诱导表达,融合蛋白纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blotting检测抗体的效价和特异性;利用激光共聚焦荧光显微镜观察TaGAPDH蛋白在环形泰勒虫裂殖体中的亚细胞定位。结果显示,克隆得到了TaGAPDH全长基因,大小为1 020bp;SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白大小约44ku,且以包涵体形式存在。制备的多克隆抗体效价高达1∶12 800,具有很高的特异性;亚细胞定位显示TaGAPDH蛋白主要分布于环形泰勒虫裂殖体细胞质内。以上结果表明本试验成功克隆表达了TaGAPDH基因,并制备了针对TaGAPDH蛋白的兔多克隆抗体,为筛选环形泰勒虫病疫苗、药物靶点及研究环形泰勒虫能量代谢奠定了基础。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 3-磷酸甘油 多克隆抗体
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胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶在ABA与H2O2介导的氧化应激中的潜在作用
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作者 罗娅 杨敏 葛聪 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期805-811,861,共8页
【目的】研究胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶(cytosolic glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC)在植物脱落酸(abscisic acid,ABA)和过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)介导的氧化应激中的潜在作用。【方法】通过目前的研究结果对ABA和H... 【目的】研究胞质3-磷酸甘油醛脱氢酶(cytosolic glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC)在植物脱落酸(abscisic acid,ABA)和过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)介导的氧化应激中的潜在作用。【方法】通过目前的研究结果对ABA和HO信号转导过程及GAPC的多功能性进行总结。【结果】ABA是响应植物非生物胁迫和气孔关闭的重要激素,HO是ABA介导应激反应的关键信号分子,GAPC因半胱氨酸残基上存在易被氧化修饰的巯基分子,所以在本身的催化功能之外还具有信号转导功能。在氧化胁迫下,GAPC参与了植物HO依赖性信号转导的过程,并作为修饰蛋白发挥其多功能性。【结论】GAPC通过“兼职”或调控初生代谢的转变来响应氧化胁迫。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 氧化胁迫 过氧化 落酸
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谷子3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆与结构分析 被引量:10
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作者 崔润丽 王永芳 +4 位作者 智慧 李伟 李海权 黄占景 刁现民 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期10-14,共5页
3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)在谷子盐旱胁迫早期高频率表达,为研究该基因在胁迫反应及其他代谢中的详细功能,本研究利用RACE技术克隆了谷子的GAPDH基因。该基因cDNA全长1 328 bp,包括1 008 bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸,肽段的... 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)在谷子盐旱胁迫早期高频率表达,为研究该基因在胁迫反应及其他代谢中的详细功能,本研究利用RACE技术克隆了谷子的GAPDH基因。该基因cDNA全长1 328 bp,包括1 008 bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸,肽段的分子量为35 911.03 Da,极性氨基酸占29.12%。序列比较分析发现,谷子的GAPDH同玉米的同源序列表现了最高的相似性,同水稻和小麦同源序列的相似性次之,同双子叶植物的同源序列则相差较远。 展开更多
关键词 谷子 3-磷酸甘油(GAPDH) 基因克隆
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植物3-磷酸甘油醛脱氢酶的多维本质(英文) 被引量:26
6
作者 王幼宁 刘孟雨 李霞 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期607-614,共8页
3-磷酸甘油醛脱氢酶 GAPDH 作为一种糖酵解蛋白在糖酵解的能量产生中发挥着重要作用 .它通常作为一种模式蛋白用于蛋白和酶的分析 ,也可以用作研究基因表达量的内在对照 .然而 ,最近的相关研究表明 ,真核及原核生物的 3-磷酸甘油醛脱... 3-磷酸甘油醛脱氢酶 GAPDH 作为一种糖酵解蛋白在糖酵解的能量产生中发挥着重要作用 .它通常作为一种模式蛋白用于蛋白和酶的分析 ,也可以用作研究基因表达量的内在对照 .然而 ,最近的相关研究表明 ,真核及原核生物的 3-磷酸甘油醛脱氢酶实际上存在着一种多维本质 ,研究证明它在 DNA修复、细胞凋亡、核 RNA输出、及其在细胞周期中都发挥着重要的作用 .尽管该酶在植物中的研究不如在哺乳动物中的深入 ,但研究已经陆续证明 ,3-磷酸甘油醛脱氢酶在植物中同样具有许多未被发现的功能 ,目前已经报道该酶在厌氧、热激、伤害以及能量供应中可能发挥着重要作用 .本文旨在就国内外对于该酶在植物中的研究作一总结论述 ,以期推进科学界对它的更深入认识和研究 . 展开更多
关键词 3-磷酸甘油(GAPDH) 光和CO2依赖的厌氧诱导 时空调控诱导 热激胁迫 糖源效应
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龙眼子叶胚3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的cDNA克隆及序列分析 被引量:8
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作者 卢秉国 何炜毅 +4 位作者 申艳红 蒋际谋 陈晓静 陈伟 吕柳新 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第5期507-511,共5页
从龙眼子叶胚中分离得到一个大量表达的表达序列标签(EST),该EST编码序列与金鱼草3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的同源性为84%,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了龙眼GAPDH基因全长序列.序列分析表明,龙眼GAPDH基因的cDNA全长... 从龙眼子叶胚中分离得到一个大量表达的表达序列标签(EST),该EST编码序列与金鱼草3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的同源性为84%,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了龙眼GAPDH基因全长序列.序列分析表明,龙眼GAPDH基因的cDNA全长为1395 bp,包括一个长1008 bp、编码336个氨基酸的开放阅读框(ORF),5′端非编码区(UTR)长71 bp,3′-UTR长316 bp.龙眼GAPDH基因编码的氨基酸序列与水稻、葡萄、小果野蕉、拟南芥、银杏等GAPDH基因的氨基酸序列同源性均高达85%以上,该基因在GenBank中的登录号为FJ694011. 展开更多
关键词 龙眼 子叶胚 3-磷酸甘油 基因克隆 序列分析
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顶复门原虫3-磷酸甘油醛脱氢酶功能及其应用研究进展 被引量:2
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作者 廖申权 戚南山 +4 位作者 吴彩艳 吕敏娜 袁建丰 余劲术 孙铭飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期71-74,共4页
糖酵解途径广泛存在于各类生物中,是顶复门原虫的主要供能方式。3-磷酸甘油醛脱氢酶是糖酵解途径的重要酶,与顶复门原虫的生存密切相关,可以作为抗寄生虫药物研发的重要靶标。文章主要从顶复门原虫糖酵解途径、3-磷酸甘油醛脱氢酶的基... 糖酵解途径广泛存在于各类生物中,是顶复门原虫的主要供能方式。3-磷酸甘油醛脱氢酶是糖酵解途径的重要酶,与顶复门原虫的生存密切相关,可以作为抗寄生虫药物研发的重要靶标。文章主要从顶复门原虫糖酵解途径、3-磷酸甘油醛脱氢酶的基因分析、作用机理及应用等方面进行综述。 展开更多
关键词 顶复门原虫 3-磷酸甘油 药物靶标
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NaCl浓度对杜氏盐藻中1种NAD^+依赖的3-磷酸甘油脱氢酶基因表达的影响 被引量:1
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作者 蔡马 姜建国 余土元 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期77-83,共7页
考察NaCl浓度变化对杜氏盐藻细胞形态和单细胞甘油含量变化的影响,并应用实时定量PCR技术检测NaCl浓度变化对杜氏盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶中1种NAD+依赖的3-磷酸甘油脱氢酶基因表达的影响。结果表明:不同浓度NaCl长期培养时杜氏盐藻... 考察NaCl浓度变化对杜氏盐藻细胞形态和单细胞甘油含量变化的影响,并应用实时定量PCR技术检测NaCl浓度变化对杜氏盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶中1种NAD+依赖的3-磷酸甘油脱氢酶基因表达的影响。结果表明:不同浓度NaCl长期培养时杜氏盐藻细胞形态和体积的变化较小,但当NaCl浓度快速变化时细胞形态和体积变化显著。杜氏盐藻在不同浓度NaCl条件下长期培养,随着NaCl浓度增长,单细胞甘油含量不断积累,且杜氏盐藻能通过快速降低或提高单细胞甘油含量来应对低渗或高渗震动。不同浓度NaCl长期培养时,杜氏盐藻中3-磷酸甘油脱氢酶基因的表达水平与NaCl浓度呈显著负相关,但低渗或高渗震动处理2 h后,3-磷酸甘油脱氢酶基因的表达水平与NaCl浓度无显著性关系。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 NaCl浓度 形态 甘油含量 3-磷酸甘油 实时定量PCR
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美洲大蠊3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及表达 被引量:1
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作者 龙高群 王赟 张春林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期113-117,共5页
旨在通过5'-RACE获得美洲大蠊3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,为进一步研究其功能奠定基础。通过3'-RACE技术,PCR扩增获取编码美洲大蠊GAPDH蛋白的全长cDN... 旨在通过5'-RACE获得美洲大蠊3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,为进一步研究其功能奠定基础。通过3'-RACE技术,PCR扩增获取编码美洲大蠊GAPDH蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法推导出该序列编码的氨基酸序列及其理化性质;预测信号肽、蛋白疏水性、可溶性、跨膜区结构、二级结构、三级结构,并构建系统发育树;构建原核表达载体pET28a-GAPDH,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,美洲大蠊GAPDH基因,其完整阅读框含999个碱基,编码332个氨基酸。序列分析显示,该蛋白与家蚕GAPDH相似性为89%,具有GAPDH保守功能域,经IPTG诱导获得重组蛋白。 展开更多
关键词 美洲大蠊 3-磷酸甘油 克隆 序列分析 原核表达
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细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡及表达3-磷酸甘油醛脱氢酶的影响
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作者 田香珠 刘学源 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第8期818-821,共4页
目的铁是重要的金属元素,参与了各种生命活动。文中探讨细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡的影响,及其对3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehy de-3-phospha te dehydrog enase,GAPDH)表达的影响。方法实验分为对照组、50μmol/L FeCl_3组、100μm... 目的铁是重要的金属元素,参与了各种生命活动。文中探讨细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡的影响,及其对3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehy de-3-phospha te dehydrog enase,GAPDH)表达的影响。方法实验分为对照组、50μmol/L FeCl_3组、100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组。以FeCl_3与PC12细胞共育,建立体外铁沉积于细胞模型,CCK-8检测细胞增殖生长能力;TUNEL法观察细胞凋亡情况;荧光定量PCR测定GAPDH基因mRNA表达;Western blot测定GAPDH蛋白的表达情况;免疫荧光法检测细胞核内GAPDH表达。结果 CCK-8检测结果显示,与对照组的细胞增殖率(100%)比较,50μmol/L FeCl_3组增殖率[(77.13±3.9)%]下降,但差异无统计学意义(P>0.05);100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组增殖率[(66.19±3.37)%、(13.84±0.43)%]明显下降(P<0.05)。荧光定量PCR检测GAPDH mRNA表达显示,与对照组GAPDH mRNA表达量(1.00±0.00)相比,50μmol/L FeCl_3组表达量升高(1.42±0.03),但差异无统计学意义(P>0.05),100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组表达量(1.93±0.07、2.33±0.15)明显升高(P<0.05)。与对照组GAPDH蛋白表达(1.00±0.00)比较,50μmol/L FeCl_3组表达(0.94±0.11)下降(P>0.05),50μmol/L FeCl_3组、100μmol/L FeCl_3组表达(1.45±0.13、1.79±0.07)明显升高(P<0.05)。免疫荧光结果显示,铁沉积后,细胞GAPDH发生亚细胞定位改变,由细胞浆转移至细胞核,发生核聚集现象。结论铁沉积于PC12细胞致细胞凋亡增加,其原因与核内GAPDH表达增强有关。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 凋亡
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优化简并引物PCR克隆Candida glycerinogenes 3-磷酸甘油脱氢酶基因片段
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作者 陈献忠 饶志明 +4 位作者 沈微 诸葛斌 方慧英 王正祥 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期91-96,共6页
为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计... 为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计了4对简并引物用于扩增C.glycerinogenes的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)基因片段,经过优化PCR反应条件,利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPD基因中约600 bp的保守核心片段。DNA序列及推绎的氨基酸序列进行比对分析表明,该基因片段与其他酵母的胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因的对应区域具有典型的保守区域,并且与安格斯毕赤酵母的GPD基因相似性较高。 展开更多
关键词 PCR NAD^+依赖3-磷酸甘油 甘油假丝酵母 克隆 简并引物
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3-磷酸甘油醛脱氢酶与酵母线粒体基因组维持蛋白Mgm101的相互作用
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作者 薛冬桦 王丽 左小明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期646-650,共5页
采用酵母双杂交方法,以Mgm101p为诱饵,筛选酵母cDNA文库.分离鉴定15个与Mgm101p相互作用的蛋白因子,其中5个阳性克隆均为GPD1编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH).克隆了GPD1在S.cerevisi-ae的同系物ScTDH2基因,进行绿色荧光蛋白GFP标记、... 采用酵母双杂交方法,以Mgm101p为诱饵,筛选酵母cDNA文库.分离鉴定15个与Mgm101p相互作用的蛋白因子,其中5个阳性克隆均为GPD1编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH).克隆了GPD1在S.cerevisi-ae的同系物ScTDH2基因,进行绿色荧光蛋白GFP标记、亚细胞组分分离和蛋白质印迹分析,结果表明,GAP-DH除了在细胞质为糖酵解酶的主要作用外,可能为多功能蛋白,在酵母线粒体中与Mgm101p相互作用参与线粒体DNA维持的生物过程. 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 酵母线粒体DNA 酵母双杂交 Mgm101蛋白
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葡萄糖对杜氏盐藻3-磷酸甘油脱氢酶活性的影响 被引量:3
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作者 魏娟 吕芳芳 +3 位作者 唐欣昀 张海生 曹媛媛 赵良侠 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期556-560,共5页
杜氏盐藻是一种抗渗透能力强的单细胞绿藻,甘油在其渗透调节过程中具有重要作用。葡萄糖对杜氏盐藻细胞数量的增加效果不明显,但对盐藻细胞内甘油积累有显著促进作用,在0~15g/L范围内葡萄糖的浓度与胞内甘油积累显著相关(R2=0.9604,P=0... 杜氏盐藻是一种抗渗透能力强的单细胞绿藻,甘油在其渗透调节过程中具有重要作用。葡萄糖对杜氏盐藻细胞数量的增加效果不明显,但对盐藻细胞内甘油积累有显著促进作用,在0~15g/L范围内葡萄糖的浓度与胞内甘油积累显著相关(R2=0.9604,P=0.01);葡萄糖浓度达到15g/L时,胞内甘油积累量达到最高值7.80pg/cell,是对照的1.88倍,胞内甘油积累量与葡萄糖的消耗量极显著相关(R2=0.9982,P=0.01)。葡萄糖对盐藻细胞内总蛋白、3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)酶活和比活都有显著影响,在15g/L葡萄糖时这3个值达到最大值,分别是对照的1.354、4.384、3.229倍。数据显示葡萄糖浓度在15g/L时细胞内蛋白质含量增加不多,但GPDH酶活和比活却大幅度增加;葡萄糖导致的渗透压的变化可能诱导新的同功酶的合成。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 葡萄糖 甘油 3-磷酸甘油
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家蚕3-磷酸甘油脱氢酶基因BmGpd的结构特征与表达谱分析 被引量:2
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作者 鲁延军 季明明 +3 位作者 牛艳山 张升祥 司马杨虎 徐世清 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期269-278,共10页
3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是真核细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性酶,具有能量传递等重要功能。家蚕Bombyxmori是重要的变态和能量代谢研究模式动物,为了明确GPDH在家蚕中的作用,本研究根据果蝇lethal(2)k05713的蛋白质序列,从家蚕C108... 3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是真核细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性酶,具有能量传递等重要功能。家蚕Bombyxmori是重要的变态和能量代谢研究模式动物,为了明确GPDH在家蚕中的作用,本研究根据果蝇lethal(2)k05713的蛋白质序列,从家蚕C108品种克隆了2个完整的mRNA转录体,长度分别为3456bp和2979bp(GenBank登录号为GQ865685和GQ865686),具有相同的2166bpORF,编码721个氨基酸。克隆拼接了548bp的第9内含子后,参照大造品种的全基因组数据,推测出BmGpd基因全长27983bp(GenBank登录号为EF154335),包含16个外显子和15个内含子。编码蛋白具跨膜螺旋结构,pI为8.22,分子量为80.5kD,1~20氨基酸区域为信号肽序列。分子同源进化和蛋白质基序分析表明,BmGPD是家蚕中一种新GPDH成员,能在大肠杆菌Escherichiacoli中诱导大量表达。RT-PCR分析表明,BmGpd基因表达量在5龄中期最高,在3d的蛹中明显下调,进入滞育时表达量更低;血液中较低,中肠、丝腺、生殖腺和脂肪体中有大量表达。芯片表达谱显示,5龄第3天幼虫头和体壁中表达丰度最高,脂肪体和马氏管中最低,性别差异不显著。EST表达谱显示,4龄第2天中肠中表达丰度最高。RNAi结果显示,家蚕体内存在BmGpd基因产物代谢补偿途径。本研究为深入研究家蚕GPDH的表达调控以及与变态和能量代谢的关系创造了条件。 展开更多
关键词 家蚕 3-磷酸甘油 基因克隆 结构特征 表达谱
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加强表达3-磷酸甘油醛脱氢酶对谷氨酸棒杆菌产L-丝氨酸的影响 被引量:2
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作者 郭雯 赖联贺 +2 位作者 张晓梅 史劲松 许正宏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期15-20,共6页
在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中,由3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)催化的反应是糖酵解途径的限速步骤,该反应还直接影响了L-丝氨酸的前体3-磷酸甘油酸的合成。研究首先比较了产L-... 在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中,由3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)催化的反应是糖酵解途径的限速步骤,该反应还直接影响了L-丝氨酸的前体3-磷酸甘油酸的合成。研究首先比较了产L-丝氨酸的野生型菌株C.glutamicum SYPS-062与模式菌株C.glutamicum ATCC14067的GAPDH酶活力,发现SYPS-062的GAPDH酶活力比ATCC14067高了55.8%。进一步采用在C.glutamicum33a△SS基因组上增加gap A拷贝数的方法加强表达GAPDH,构建了重组菌C.glutamicum33a△SS-2gap A。重组菌GAPDH转录水平和酶活力分别提高119%和53%,最大比生长速率提高10.6%,总糖耗速率提高4.4%,L-丝氨酸产量提高17.4%,糖酸转化率提高12.2%,生产强度提高17.4%。结果表明,加强表达GAPDH能够提高重组菌的生长和糖耗速率,并能够提高L-丝氨酸的产量、糖酸转化率和生产强度。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 谷氨酸棒杆菌 L-丝氨酸
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3-磷酸甘油醛脱氢酶促进谷氨酸棒杆菌发酵生产L-精氨酸和L-鸟氨酸 被引量:1
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作者 阚宝军 董晋军 +4 位作者 刘晖 占米林 许国超 韩瑞枝 倪晔 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期9-16,共8页
在谷氨酸棒状杆菌( Corynebacterium glutamicum )SNK118中表达NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因,提高胞内NADPH水平,以提高 L -精氨酸( L -Arginine)和 L -鸟氨酸(L-Ornithine)发酵产量。通过NCBI数据库检索,选取了3个不同来... 在谷氨酸棒状杆菌( Corynebacterium glutamicum )SNK118中表达NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因,提高胞内NADPH水平,以提高 L -精氨酸( L -Arginine)和 L -鸟氨酸(L-Ornithine)发酵产量。通过NCBI数据库检索,选取了3个不同来源的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因。经测定酶活力,最终选择糖丁基梭菌( Clostridium saccharobutylicum) DSM13864来源的NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因( CsgapC )。构建了产 L -精氨酸的重组菌SNK118/pXMJ19- CsgapC,当摇瓶发酵70 h时产 L -精氨酸11.55 g/L,糖酸转化率0.13 g/g,与对照菌SNK118/pXMJ19相比,精氨酸产量和糖酸转化率分别提高了26%和10.2%。在 L -鸟氨酸生产菌株SNK118Δ argF Δ argR 中重组表达 CsgapC,重组菌SNK118Δ argF Δ argR /pXMJ19- CsgapC 摇瓶发酵70 h产 L -鸟氨酸27.76 g/L,糖酸转化率0.274 g/g,与对照菌SNK118Δ argF Δ argR /pXMJ19相比, L -鸟氨酸产量和糖酸转化率分别提高了20.1%和15.6%。结果表明,异源表达 CsgapC 有助于提高谷氨酸棒杆菌发酵生产 L -精氨酸和 L -鸟氨酸的水平。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 3-磷酸甘油 NADPH L-精氨酸 L-鸟氨酸
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3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成 被引量:1
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作者 刘姗姗 郑凌 黄昆 《临床肝胆病杂志》 CAS 2017年第6期1151-1151,共1页
【据《Hepatology)2017年4月报道】题:3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成(作者Liuss等)
关键词 3-磷酸甘油 磷酸甘油 肝癌 调控
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胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPC2参与番茄果实成熟的调控 被引量:1
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作者 杨敏 龙宇 +4 位作者 王良新 刘晓阳 侯国艳 蒋语嫣 罗娅 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期156-162,171,共8页
【目的】研究异源胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶2(cytoplasm glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC2)对番茄果实成熟的影响。【方法】构建“红颜”草莓FaGAPC2过表达载体,采用瞬时过表达技术在樱桃番茄“罗纳”的破色期过表达FaGA... 【目的】研究异源胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶2(cytoplasm glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC2)对番茄果实成熟的影响。【方法】构建“红颜”草莓FaGAPC2过表达载体,采用瞬时过表达技术在樱桃番茄“罗纳”的破色期过表达FaGAPC2。【结果】FaGAPC2的表达量为对照组的2.39倍,过表达FaGAPC2能够显著抑制番茄果皮颜色变红并显著提高其硬度(3.76N)、降低可溶性糖含量,其类胡萝卜素含量和总叶绿素含量分别是对照组的0.37倍和1.5倍。进一步通过实时荧光定量分析结果表明,过表达FaGAPC2较对照能显著降低乙烯合成途径中ACO1(12.89倍)、ACO3(3.87倍)和ERF1(3.51倍);类胡萝卜合成途径中PSY1(12.39倍)、CYC-B(1.49倍);果实成熟相关基因E4(4.48倍)、PG(41.35倍)和MADS转录因子RIN(6.67倍)的表达量,其中果实成熟相关基因E8、LOXB相比于对照表达量几乎为零。【结论】表明FaGAPC2作为一个负调节因子参与番茄果实成熟的调控。 展开更多
关键词 樱桃番茄 果实成熟 甘油-3-磷酸2
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睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达 被引量:5
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作者 张国华 徐国宾 +1 位作者 刘英民 夏铁安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期966-969,共4页
从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析... 从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。 展开更多
关键词 睾酮假单 3α-羟类固醇基因 质粒载体 构建 表达 胆汁酸 血清
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