鳜肌球蛋白轻链2基因cDNA的克隆及其发育表达分析 被引量：14

1

作者 周瑞雪 蒙涛 +4 位作者 褚武英 成嘉 李志英 宾石玉 张建社 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2009年第3期78-83,共6页

通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1206bp,编码区长度为579bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2... 通过构建肌肉组织cDNA文库分离到鳜肌球蛋白轻链2基因(MLC2),基因登录号为FJ428249.MLC2基因cDNA序列全长1206bp,编码区长度为579bp.MLC2基因开放阅读框编码170个氨基酸,具有EF-手相家族蛋白全部4个EF-手相结构.与已报道的其他动物MLC2相比较,所推导氨基酸序列同源性在66.3%～97.6%,其中与Ca2+结合区域非常保守,7种鱼氨基酸序列同源性为100%.采用实时荧光定量PCR方法对鳜MLC2发育表达分析表明,MLC2在原肠期开始有低量表达,与原肠期相比,尾芽期、肌肉效应期和仔鱼阶段MLC2表达量随发育阶段渐进而升高. 展开更多

关键词 鳜 肌球蛋白轻链2 CDNA克隆 发育表达

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桔小实蝇肌球蛋白轻链2基因的克隆及表达分析 被引量：4

2

作者 申建梅 胡黎明 +1 位作者 宾淑英 林进添 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期508-514,共7页

肌球蛋白轻链在生物的运动过程中具有重要作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术获得了桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2)的cDNA全长序列,命名为BdorMLC2。测序结果表明,BdorMLC2开放阅读框全长6... 肌球蛋白轻链在生物的运动过程中具有重要作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术获得了桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)肌球蛋白轻链2(myosin light chain 2,MLC2)的cDNA全长序列,命名为BdorMLC2。测序结果表明,BdorMLC2开放阅读框全长669 bp,编码222个氨基酸残基。在线软件SMART分析显示,BdorMLC2具有2个Ca2+结合基序(EFh)结构域,可以结合Ca2+,属于肌钙蛋白C超家族成员。氨基酸序列比对表明,BdorMLC2与其他昆虫的肌球蛋白具有较高的序列一致性,其中与黑腹果蝇Drosophila melanogasterMLC2的序列一致性高达93.2%。BdorMLC2在不同组织和时期的荧光定量PCR分析表明,BdorMLC2在桔小实蝇雄虫胸部的含量最高,在前足、中足、后足和翅中也有较高的表达;BdorMLC2几乎在桔小实蝇发育的各个时期都有表达,刚羽化成虫的表达量显著高于其他发育阶段。结果提示,BdorMLC2可能与桔小实蝇的肌肉收缩运动密切相关。本研究为深入研究桔小实蝇肌球蛋白的功能提供了理论依据。 展开更多

关键词 桔小实蝇 肌球蛋白轻链2 基因克隆 表达谱分析 荧光定量PCR

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野桑蚕肌球蛋白轻链2基因(MLC2)的克隆和序列分析 被引量：3

3

作者 许西奎 徐升胜 +2 位作者 李兵 许雅香 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期71-77,共7页

利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了野桑蚕间接飞行肌(in-direct flight muscle,IFM)的肌球蛋白轻链2(myosin light chain2,MLC2)基因(GenBank登录号:EU332913),其cDNA序列全长979 bp,包括63 bp的5′... 利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了野桑蚕间接飞行肌(in-direct flight muscle,IFM)的肌球蛋白轻链2(myosin light chain2,MLC2)基因(GenBank登录号:EU332913),其cDNA序列全长979 bp,包括63 bp的5′端非翻译区序列(5′-UTR)、603 bp的开放读码框(ORF)、终止密码子TAA和310bp的3′端非翻译区序列(3′-UTR)。克隆该基因的内含子序列并分析基因结构表明,该基因包括3个外显子和2个内含子,编码201个氨基酸,预测蛋白质分子质量约22.0 kD,等电点4.67。用在线软件SMART分析显示,野桑蚕MLC2蛋白有2个Ca2+结合基序(EFh)结构域,可以结合Ca2+,属于肌钙蛋白C超家族成员,并且含有保守的可以磷酸化的氨基酸残基,有可能具有磷酸化过程,参与肌动球蛋白ATPase活性的调节。 展开更多

关键词 野桑蚕 肌球蛋白轻链2基因 序列分析 Ca2+结合基序 磷酸化

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绵羊肌球蛋白轻链2基因的分子克隆与表达分析 被引量：2

4

作者 张春兰 王建民 王桂芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1347-1353,共7页

肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序... 肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序、利用相关生物学软件对所得c DNA序列进行生物信息学预测、并利用qRT-PCR和Western印迹法对其在绵羊各种组织中的表达进行分析。结果获得该基因c DNA序列全长为776 bp,提交至Gen Bank中获得相应的登录号为KJ710702;该序列中的498 bp的开放读码框编码含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测发现该蛋白质无信号肽和二硫键,但存在N-糖基化和磷酸化位点;二级结构中以α-螺旋为主;蛋白质序列比较发现绵羊MYL2与小鼠、人、大鼠、猪、牛等哺乳动物的同源性均在95%以上。mRNA和蛋白质表达谱均显示该基因在绵羊心肌中表达量最高,其次为背最长肌。 展开更多

关键词 绵羊 肌球蛋白轻链2 克隆 特征 表达谱

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松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式 被引量：2

5

作者 吴华俊 蔡紫玲 +1 位作者 罗淋淋 林同 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期25-30,共6页

为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸... 为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸,推测的蛋白等电点为4.66,分子量为22.26 k Da。Ma MLC-2的氨基酸序列与赤拟谷盗同源性最高,为96%,与东方蝼蛄等8种昆虫同源性为85%-88%。松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一分支上。Ma MLC-2属于亲水性氨基酸,存在2个EF-hand结构域,长度均为29个氨基酸,其中第1个EF-hand结构域含有Ca2＋结合位点。SWISS-MODEL预测结果显示,Ma MLC-2有2个螺旋-环-螺旋结构。用RT-q PCR分析了Ma MLC-2基因的相对表达量,结果显示：蛹和幼虫的表达量高于成虫;成虫中足表达量最高,腹部表达量最低,各部位均有表达,且有显著差异（P〈0.05）。 展开更多

关键词 松墨天牛 肌球蛋白轻链2 基因表达模式 RT-q PCR

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银鲫3个肌球蛋白轻链基因cDNA的克隆与特征分析 被引量：7

6

作者 石耀华 刘军 桂建芳 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期308-313,共6页

关键词 银鲫 肌球蛋白轻链 克隆 基因 CDNA

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鳜鱼与鲢鱼肌球蛋白轻链2启动子的克隆及其序列比较分析 被引量：4

7

作者 赵发兰 周瑞雪 +5 位作者 成嘉 陈敦学 农小献 蒙涛 张建社 褚武英 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2011年第1期75-79,共5页

采用PCR方法从鳜鱼(Siniperca chuasti)基因组DNA中分离得到了鳜鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为890 bp,包含1个TATA框、3个MEF2结合位点和5个与b HLH转录因子相结合的E-框(CANNTG).用同样的方法从鲢鱼基因组DNA中分离得到鲢鱼... 采用PCR方法从鳜鱼(Siniperca chuasti)基因组DNA中分离得到了鳜鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为890 bp,包含1个TATA框、3个MEF2结合位点和5个与b HLH转录因子相结合的E-框(CANNTG).用同样的方法从鲢鱼基因组DNA中分离得到鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为870bp,包含了1个TATA框、1个MEF2结合位点和3个与bHLH转录因子相结合的E-框.鳜鱼比鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子转录调控元件更加丰富. 展开更多

关键词 鳜鱼 鲢鱼 肌球蛋白轻链2 启动子 序列分析

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中国少棘蜈蚣与家蚕和野桑蚕肌球蛋白轻链2的结构功能分析比较 被引量：3

8

作者 华卫建 任玫 吴晓菁 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期663-669,共7页

从中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)毒腺cDNA文库中克隆的肌球蛋白轻链2(MLC2)基因的cDNA,其开放阅读框为606 bp(GenBank登陆号为FJ262953),编码201个氨基酸,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的MLC2等长,... 从中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)毒腺cDNA文库中克隆的肌球蛋白轻链2(MLC2)基因的cDNA,其开放阅读框为606 bp(GenBank登陆号为FJ262953),编码201个氨基酸,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的MLC2等长,序列一致性达52%。3种MLC2都包含:1个同位且完整的EF-H功能域和Ca2+结合位,1个N端poly-lys基序及相同的丝氨酸磷酸化修饰位点。三级结构预测显示中国少棘蜈蚣MLC2的三维结构相似于乌贼(Loligo pealei)的同源模型,而家蚕和野桑蚕的则与淡色库蚊(Culexpipiens pallens)的MLC2一样类似于扇贝(Aequipecten irradians)的同源结构。分析结果有助于进一步研究家蚕和野桑蚕MLC2的结构功能及其功能应用。 展开更多

关键词 少棘蜈蚣 家蚕 野桑蚕 肌球蛋白轻链2 结构功能

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人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化 被引量：1

9

作者 葛宏华 肖亚中 姚建平 《安徽大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第6期76-80,共5页

通过聚合酶链式反应方法扩增人心室肌球蛋白轻链1的基因片段,并将其克隆到pET-22b质粒,构建表达重组体,转化大肠杆菌BL21细胞,转化子细胞经IPTG诱导,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,凝胶成像扫描检测,其表达量接近细胞总蛋白的40%,经... 通过聚合酶链式反应方法扩增人心室肌球蛋白轻链1的基因片段,并将其克隆到pET-22b质粒,构建表达重组体,转化大肠杆菌BL21细胞,转化子细胞经IPTG诱导,目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,凝胶成像扫描检测,其表达量接近细胞总蛋白的40%,经Ni2+亲和层析使目的蛋白得到纯化。 展开更多

关键词 心室肌 轻链 体外 肌球蛋白 克隆 基因 细胞 转化子 IPTG 高效表达

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肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动 被引量：15

10

作者 梁明丽 崔颖 +1 位作者 吕广艳 高颖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-96,共6页

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析技术纯化表达的MLCK片段,应用EnzChek磷分析试剂盒检测MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavy meromyosin,HMM)及肌球蛋白亚片段1(subfragment1,S1)ATP酶活性的影响,体外检测MLCK片段对肌动蛋白肌丝运动的调节.研究结果显示,pGEX-F6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性GST融合蛋白的形式表达.该融合蛋白经Glutathione-Sepharose4B纯化、SDS-PAGE鉴定得到较纯的单一表达条带.纯化的MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、HMM和S1的ATP酶活性均有明显激活作用.MLCK片段激活磷酸化肌球蛋白ATP酶活性为:Vmax=(19.426±1.669)倍;Km=(0.486±0.106)μmol/L,MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用.体外肌丝运动研究表明,随着MLCK片段浓度的增加,磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加,肌丝运动的速度也随之增加.上述结果表明,MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用. 展开更多

关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白 肌球蛋白轻链激酶(MLCK) 肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性 体外肌丝运动

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平滑肌肌球蛋白轻链激酶的非激酶作用及对ATP酶活性的调节 被引量：6

11

作者 崔颖 李晓丽 +2 位作者 梁明丽 陈海波 高颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期375-381,共7页

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,以进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制.... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,以进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制.采用PCR技术构建MLCK部分氨基酸缺失的重组表达载体pGEX-F6·5/D,经大肠杆菌表达得到可溶性GST融合蛋白,利用SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达的MLCK在细胞中的分布,结果还显示,提取液的上清和沉淀中均有MLCK片段的表达.运用亲和层析技术分离并纯化删除前、后表达的MLCK片段(F6·5和F6·5/D),经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化,SDS-PAGE鉴定显示为单一表达条带.应用EnzChek磷分析试剂盒和孔雀绿两种方法分别测定不同浓度的MLCK对非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响.两种MLCK的片段均具有激活ATP酶活性的作用,并随MLCK浓度的增加,酶的活性增加.比较删除前后不同MLCK片段对ATP酶活性的影响结果显示,删除MLCK片段1002位丙氨酸至1019位亮氨酸后,对ATP酶的激活作用较删除前明显降低,表明删除的部分氨基酸序列为MLCK非激酶活性所必需的区域.利用电镜技术观察到MLCK片段(F6·5)使非磷酸化肌球蛋白构象发生明显的变化.加入MLCK片段后肌球蛋白的构象由非活性型转化为活性型,并且MLCK片段还具有促进肌球蛋白单体形成肌丝的作用. 展开更多

关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白 肌球蛋白Mg^2+ -ATP 酶活性

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抑制肌球蛋白轻链激酶减轻大鼠压力超负荷诱导的心脏肥大 被引量：3

12

作者 朱丽 周敬群 +2 位作者 吴钢 王顺 毛帅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1603-1611,共9页

目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+M... 目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+ML-7组。用RT-qPCR和免疫荧光法检测心肌细胞肥大标志物和心肌细胞表面积。此外,将大鼠随机分为6组:(1)腹主动脉缩窄(AB)0周组;(2)AB 2周组;(3)AB 4周组;(4)假手术组;(5)AB组;(6)AB+ML-7组。前3组分别在手术后0、2和4周取材,后3组在手术4周后通过超声心动图、组织病理学和RT-qPCR检测大鼠心脏结构、心功能、心肌细胞横截面积、心肌纤维化及心脏肥大标志物表达。Western blot用于检测心肌细胞和大鼠心脏组织中MLCK、p-MLC2和MLC2的表达水平。结果:Ang Ⅱ处理可显著上调心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)与β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,增加心肌细胞表面积,上调MLCK表达,增加p-MLC2水平,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。MLCK和p-MLC2在大鼠AB术2周后增加,4周后减少。AB术4周后大鼠心功能降低,心重指数、心肌细胞横截面积、心肌纤维化和心脏肥大标志物表达增加,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。抑制MLCK可在心肌细胞和心脏组织中降低p-MLC2水平而不影响MLCK的表达。结论:抑制MLCK和p-MLC2可减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和压力超负荷诱导的心脏肥大。 展开更多

关键词 心脏肥大 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白轻链2 血管紧张素Ⅱ

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哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶的表达 被引量：1

13

作者 王勇生 桂淑玉 +4 位作者 李永怀 周青 胡向阳 吴强 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第1期1-3,共3页

目的探讨哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的变化。方法SD大鼠24只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型激发1周组(B组)和哮喘模型激发2周组(C组)。以卵蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,用免疫组织化学和... 目的探讨哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的变化。方法SD大鼠24只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型激发1周组(B组)和哮喘模型激发2周组(C组)。以卵蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,用免疫组织化学和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果哮喘模型激发1周组大鼠支气管平滑肌MLCK表达较正常对照组明显增加,2周组增加更明显,差异均有显著性(P<0·05)。结论支气管平滑肌MLCK表达增加可能与哮喘发病有关。 展开更多

关键词 哮喘 肌球蛋白轻链激酶 基因表达 大鼠

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人心肌内肌球蛋白轻链mRNA测定新方法

14

作者 孔祥清 黄峻 马文珠 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第5期444-446,共3页

采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取心肌内总ＲＮＡ，随机引物将所有ｍＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ；用特异肌球蛋白轻链２（ＭＬＣ２）ｃＤＮＡ扩增引物扩增ＭＬＣ２ｃＤＮＡ，以１８ｓｒＲＮＡ为内标，用激光光密度扫描仪扫描ＭＬＣ２... 采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取心肌内总ＲＮＡ，随机引物将所有ｍＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ；用特异肌球蛋白轻链２（ＭＬＣ２）ｃＤＮＡ扩增引物扩增ＭＬＣ２ｃＤＮＡ，以１８ｓｒＲＮＡ为内标，用激光光密度扫描仪扫描ＭＬＣ２及１８ｓｒＲＮＡ之扩增条带，计算出ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的相对量。依此确定在不同心脏疾病状态下心肌内ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的量。此方法重复性好。 展开更多

关键词 心脏疾病 心肌 肌球蛋白 轻链2 逆转录 PCR MRNA

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AT2R基因可调控表达对体外培养VSMC基质金属蛋白酶2表达的影响

15

作者 景涛 何国祥 +3 位作者 刘建平 王耿 冉擘力 王海东 《介入放射学杂志》 CSCD 2003年第S1期135-,共1页

目的　研究血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2R)基因可调控表达对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶 2形成的影响 ,旨在探讨AT2R基因在VSMC上条件表达在再狭窄防治中的潜在意义。方法　本研究通过常规分子生物学方法 ,建立四环素类似... 目的　研究血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2R)基因可调控表达对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶 2形成的影响 ,旨在探讨AT2R基因在VSMC上条件表达在再狭窄防治中的潜在意义。方法　本研究通过常规分子生物学方法 ,建立四环素类似物Doxycycline可调控表达AT2 R基因的双重稳定VSMC细胞系。应用RT PCR和免疫细胞化学染色技术 ,观察该双重稳定表达AT2R的VSMC细胞系中基质金属蛋白酶 2的mRNA及蛋白表达情况 ;采用血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及其Ⅰ型、Ⅱ型其受体拮抗剂干预上述细胞 ,观测上述指标的变化。结果　Doxycycline干预前 ,AT2R的表达处于静止状态 ,通过Doxycycline(1μg/ml)的干预 ,可以使该VSMC系稳定表达AT2R。加入Doxycycline前转染组低水平基质金属蛋白酶 2 ;AngⅡ 10 - 7mol/L干预VSMC后基质金属蛋白酶 2的mRNA及蛋白表达均显著增加 (P <0 .0 1) ;在AngⅡ干预的同时加入Doxycycline后 ,基质金属蛋白酶 2的mRNA及蛋白表达受到显著抑制 (P<0 .0 1) ;ATIR拮抗剂CV 11974可进一步下调上述mRNA及蛋白的表达 ;AT2R拮抗剂PD12 3319干预组基质金属蛋白酶 2mRNA及蛋白仍旧强表达 (与AngⅡ组比较 ,P >0 .0 5 )。 结论　AngⅡ干预VSMC后通过ATIR介导引起基质金属蛋白酶 2表达增强 ; 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶 MRNA VSMC 调控表达 AT2R 体外培养 基因

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组蛋白变体H2A.Z的转录调控功能与动态作用机制

16

作者 孙朝冉 吴旭东 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期279-289,共11页

H2A.Z是组蛋白H2A常见的组蛋白变体。近年来,人们通过多学科手段探究了H2A.Z对于基因转录的激活或抑制作用。本文在概述组蛋白变体和H2A.Z发展史的基础上,重点阐述了H2A.Z不同亚型、不同翻译后修饰和基因组分布在转录调控过程中的作用,... H2A.Z是组蛋白H2A常见的组蛋白变体。近年来,人们通过多学科手段探究了H2A.Z对于基因转录的激活或抑制作用。本文在概述组蛋白变体和H2A.Z发展史的基础上,重点阐述了H2A.Z不同亚型、不同翻译后修饰和基因组分布在转录调控过程中的作用,明确了其生物学意义和在肿瘤发生发展、神经系统分化发育过程中的病理生理学意义,并总结了H2A.Z在染色质沉积或者移除的动态调控机制方面的研究进展,以期为深入了解组蛋白变体的多样性,并为寻找相关疾病诊疗的新靶点提供参考。 展开更多

关键词 表观遗传调控 核小体 基因转录 组蛋白变体 H2A.Z

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运用基因调控技术探析膜联蛋白A2的病理作用 被引量：3

17

作者 贾梦真 黄岩杰 +2 位作者 杨晓青 韩红艳 张建江 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期125-131,共7页

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一种多功能的钙依赖性磷脂结合蛋白,既往报道ANXA2与多种肿瘤疾病的发生发展密切相关。近年来利用基因调控技术敲低、敲除和过表达ANXA2的实验研究发现:ANXA2功能复杂,参与了细胞增殖、肿瘤细胞侵袭、新... 膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一种多功能的钙依赖性磷脂结合蛋白,既往报道ANXA2与多种肿瘤疾病的发生发展密切相关。近年来利用基因调控技术敲低、敲除和过表达ANXA2的实验研究发现:ANXA2功能复杂,参与了细胞增殖、肿瘤细胞侵袭、新血管生成、纤溶酶系统、炎症反应、上皮-间充质转化和抗癌药物的耐药性及副作用等病理过程,因此涉及多种肿瘤和非肿瘤疾病的发生发展。本文根据国内外最新进展在基因层面对ANXA2上述病理作用及其机制进行综述,精准揭示ANXA2能否作为相关疾病早期筛查和治疗的靶点。 展开更多

关键词 膜联蛋白A2 基因调控 病理作用

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芍药苷抑制肌球蛋白轻链激酶缓解肠上皮细胞屏障功能紊乱 被引量：9

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作者 王亮 杨芳 +5 位作者 回斯美 周子娟 陈军 詹红微 陈大朋 王靖宇 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1541-1545,共5页

目的考察芍药苷对肿瘤坏死因子α(TNF-α)所致Caco-2模拟的肠上皮细胞屏障功能紊乱的保护作用及相关机制。方法体外培养Caco-2细胞,采用MTT法研究芍药苷对Caco-2细胞活性的影响;建立TNF-α所致Caco-2细胞的屏障功能紊乱模型,研究芍药苷... 目的考察芍药苷对肿瘤坏死因子α(TNF-α)所致Caco-2模拟的肠上皮细胞屏障功能紊乱的保护作用及相关机制。方法体外培养Caco-2细胞,采用MTT法研究芍药苷对Caco-2细胞活性的影响;建立TNF-α所致Caco-2细胞的屏障功能紊乱模型,研究芍药苷对屏障功能的影响。结果TNF-α孵育Caco-2细胞,明显降低了Caco-2细胞屏障的跨膜电阻,肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达明显增加,紧密连接蛋白occludin和ZO-1表达明显下降,提示Caco-2细胞屏障功能紊乱;芍药苷明显逆转TNF-α所造成的Caco-2细胞屏障功能紊乱,即抑制MLCK的表达,促进紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达,芍药苷的这种保护细胞屏障的作用可被MLCK的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)所阻断。结论芍药苷可明显缓解TNF-α诱导的肠上皮屏障功能紊乱,该作用与降低MLCK,促进紧密连接蛋白表达有关。 展开更多

关键词 溃疡性结肠炎 芍药苷 肿瘤坏死因子Α CACO-2细胞 肠上皮屏障 肌球蛋白轻链激酶

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MYLK2基因突变与一家族性扩张型心肌病的相关性分析

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作者 任重远 陶琴 +4 位作者 张郁青 程维礼 张莱 梁晴 方旭 《中国心血管杂志》 北大核心 2025年第3期292-298,共7页

目的对肌球蛋白轻链激酶2(MYLK2)基因c.704C>T(p.S235L)突变导致1例家族性扩张型心肌病(DCM)进行分析,探讨基因型与表型的相关性。方法临床观察性研究。收集2012年3月至2023年10月于南京医科大学附属江宁医院心血管内科诊治的1例72... 目的对肌球蛋白轻链激酶2(MYLK2)基因c.704C>T(p.S235L)突变导致1例家族性扩张型心肌病(DCM)进行分析,探讨基因型与表型的相关性。方法临床观察性研究。收集2012年3月至2023年10月于南京医科大学附属江宁医院心血管内科诊治的1例72岁男性先证者及其家系成员共48例的临床资料,并采集外周血样本进行全基因组测序,筛选可能的致病基因,通过Sanger测序进行一代验证。结合家系成员基因型与表型的关联性,通过一系列生物信息学分析手段对致病基因进行挑选和筛查。结果该家系筛查出包括先证者(Ⅱ5)在内的5例DCM患者(Ⅱ2、Ⅲ3、Ⅲ5、Ⅲ7),且基因检测发现均存在MYLK2基因的c.704C>T(p.S235L)突变。其他家系成员未见异常,均无临床表型,排除家族性DCM。生物信息学分析提示,该突变位点在多个物种之间保守性较高,氨基酸突变后极性发生改变,突变型MYLK2和野生型MYLK2蛋白二级结构无明显差异,三级结构突变位点处发生了变化。结论MYLK2基因c.704C>T(p.S235L)突变可能导致家族性DCM。 展开更多

关键词 扩张型心肌病 基因突变 蛋白质结构 肌球蛋白轻链激酶2

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山羊β-酪蛋白基因调控区的克隆及启动子活性的检测 被引量：1

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作者 郑艳玲 唐爽 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期1-5,共5页

为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片... 为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点HindⅢ融合成一个长为6.7 kb的片段,用其替代表达载体pEGFP-C1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达。结果表明,克隆的GC 3.3、GC 4.3、GC 6.6 3个片段与GenBank中登录的山羊CSN2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了TATA box、GC island、CAAT box、SAR、AP1、Oct-1、Sm、Glyco、Pu-1、CAC等复合元件和转录翻译调节因子的作用位点,并且5′调控区可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊CSN2基因5′调控区的有效性,表明克隆的调控区可用于乳腺生物反应器的研究。 展开更多

关键词 山羊 β-酪蛋白基因(CSN2) 调控区 PCR GFP基因

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