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内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究 被引量：2
1
作者 辛华 韩振国 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期145-150,共6页
目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制。方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放... 目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制。方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平。结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高。内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性。结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走。 展开更多
关键词 纤维肉瘤/病理学 肌球蛋白轻链激酶/生理学 纤维肉瘤细胞 血管外游走 血管内皮细胞
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白藜芦醇下调肌球蛋白轻链激酶过表达抑制大鼠肝肿瘤增生 被引量：9
2
作者 张孝林 俞浩 +6 位作者 熊友谊 刘汉珍 赵磊 马世堂 周国梁 秦梅颂 周丽丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期540-543,共4页
目的研究白藜芦醇(Res)通过影响肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在肝脏中表达水平抑制原发性肝癌的增生。方法采用口服饮水中含0.9 mmol.L-1二乙基亚硝胺10周诱发原发性肝肿瘤;20周后,治疗组大鼠每天给予肌肉注射Res 50 mg.kg-16周;26周后,处死... 目的研究白藜芦醇(Res)通过影响肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在肝脏中表达水平抑制原发性肝癌的增生。方法采用口服饮水中含0.9 mmol.L-1二乙基亚硝胺10周诱发原发性肝肿瘤;20周后,治疗组大鼠每天给予肌肉注射Res 50 mg.kg-16周;26周后,处死大鼠,计数肝表面癌结节数,称量和计算体重、肝重,肝/体重比,测定血清中甲胎蛋白的变化,观察大鼠肝脏的病理改变;用免疫组化和Westernblot法检测Res对MLCK的表达影响,用细胞凋亡试剂盒检测Res诱导肿瘤细胞的凋亡。结果 Res治疗组大鼠和模型组大鼠相比,体重增加,肝肿瘤结节数和肝/体重比和血清甲胎蛋白值减少或降低(P<0.05)。模型组大鼠肝组织MLCK的表达水平明显增加,而Res治疗可逆转MLCK的过表达水平,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 Res通过下调肝组织MLCK的表达水平诱导凋亡,抑制大鼠肝肿瘤细胞的增生。 展开更多
关键词 白藜芦醇 肌球蛋白轻链激酶 大鼠 肝肿瘤 凋亡 增生
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平滑肌肌球蛋白轻链激酶的非激酶作用及对ATP酶活性的调节 被引量：6
3
作者 崔颖 李晓丽 +2 位作者 梁明丽 陈海波 高颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期375-381,共7页
肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,以进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制.... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,以进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制.采用PCR技术构建MLCK部分氨基酸缺失的重组表达载体pGEX-F6·5/D,经大肠杆菌表达得到可溶性GST融合蛋白,利用SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达的MLCK在细胞中的分布,结果还显示,提取液的上清和沉淀中均有MLCK片段的表达.运用亲和层析技术分离并纯化删除前、后表达的MLCK片段(F6·5和F6·5/D),经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化,SDS-PAGE鉴定显示为单一表达条带.应用EnzChek磷分析试剂盒和孔雀绿两种方法分别测定不同浓度的MLCK对非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响.两种MLCK的片段均具有激活ATP酶活性的作用,并随MLCK浓度的增加,酶的活性增加.比较删除前后不同MLCK片段对ATP酶活性的影响结果显示,删除MLCK片段1002位丙氨酸至1019位亮氨酸后,对ATP酶的激活作用较删除前明显降低,表明删除的部分氨基酸序列为MLCK非激酶活性所必需的区域.利用电镜技术观察到MLCK片段(F6·5)使非磷酸化肌球蛋白构象发生明显的变化.加入MLCK片段后肌球蛋白的构象由非活性型转化为活性型,并且MLCK片段还具有促进肌球蛋白单体形成肌丝的作用. 展开更多
关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白 肌球蛋白Mg^2+ -ATP 酶活性
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肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动 被引量：15
4
作者 梁明丽 崔颖 +1 位作者 吕广艳 高颖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-96,共6页
肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析技术纯化表达的MLCK片段,应用EnzChek磷分析试剂盒检测MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavy meromyosin,HMM)及肌球蛋白亚片段1(subfragment1,S1)ATP酶活性的影响,体外检测MLCK片段对肌动蛋白肌丝运动的调节.研究结果显示,pGEX-F6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性GST融合蛋白的形式表达.该融合蛋白经Glutathione-Sepharose4B纯化、SDS-PAGE鉴定得到较纯的单一表达条带.纯化的MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、HMM和S1的ATP酶活性均有明显激活作用.MLCK片段激活磷酸化肌球蛋白ATP酶活性为:Vmax=(19.426±1.669)倍;Km=(0.486±0.106)μmol/L,MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用.体外肌丝运动研究表明,随着MLCK片段浓度的增加,磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加,肌丝运动的速度也随之增加.上述结果表明,MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用. 展开更多
关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白 肌球蛋白轻链激酶(MLCK) 肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性 体外肌丝运动
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电针对骶上脊髓损伤后逼尿肌亢进大鼠逼尿肌中环腺苷酸和蛋白激酶A含量及肌球蛋白轻链激酶磷酸化的影响 被引量：17
5
作者 艾坤 许明 +6 位作者 刘琼 邓石峰 刘继生 祁芳 易细芹 瞿启睿 张泓 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2021年第2期137-144,共8页
目的探讨电针改善骶上脊髓损伤休克期后逼尿肌反射亢进的可能机制。方法60只雌性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表抽取12只作为空白组,12只作为假手术组,剩余36只采用改良T10脊髓横断法制作神经源性膀胱模型,从符合要求的模型大鼠中二次... 目的探讨电针改善骶上脊髓损伤休克期后逼尿肌反射亢进的可能机制。方法60只雌性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表抽取12只作为空白组,12只作为假手术组,剩余36只采用改良T10脊髓横断法制作神经源性膀胱模型,从符合要求的模型大鼠中二次随机抽取12只作为模型组,12只作为电针组。造模术后第19天取次髎、中极、三阴交行电针干预,连续治疗7 d后行尿流动力学检测,ELISA法测定逼尿肌环腺苷酸(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含量、Western blotting法测定逼尿肌磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)水平。结果与空白组和假手术组比较,模型组膀胱最大容量及膀胱顺应性明显降低(P<0.01),膀胱基础压和漏尿点压明显升高(P<0.01);逼尿肌cAMP和PKA含量明显降低(P<0.01),逼尿肌p-MLCK水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,电针组膀胱最大容量及膀胱顺应性明显增加(P<0.01),膀胱基础压和漏尿点压降低(P<0.05);逼尿肌内cAMP和PKA含量升高(P<0.05),逼尿肌p-MLCK水平升高(P<0.05)。结论电针次髎、中极、三阴交穴可改善完全性脊髓损伤后逼尿肌亢进大鼠膀胱功能,其作用机制可能与电针上调逼尿肌中cAMP、PKA表达,使MLCK磷酸化而失活,从而促进逼尿肌舒张有关。 展开更多
关键词 电针 骶上脊髓损伤 神经源性膀胱 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 肌球蛋白轻链激酶 逼尿肌亢进 大鼠
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褪黑素对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达及活性的影响 被引量：5
6
作者 朱华庆 程筱雯 +7 位作者 江志奎 肖林林 左莉 胡若磊 张素梅 周青 桂淑玉 汪渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期606-610,共5页
目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达与活性的影响。方法复制动脉粥样硬化兔模型,采用免疫组化和Western blot分析主动脉MLCK蛋白表达,γ-32P-ATP参入法检测MLCK活性。结果成功建立动脉... 目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达与活性的影响。方法复制动脉粥样硬化兔模型,采用免疫组化和Western blot分析主动脉MLCK蛋白表达,γ-32P-ATP参入法检测MLCK活性。结果成功建立动脉粥样硬化兔模型,高脂喂食12wk,兔主动脉MLCK蛋白表达水平增加,活性上升,经MLT治疗后动脉粥样硬化斑块减少,MLCK蛋白表达下降,活性下降。结论动脉粥样硬化的形成与MLCK蛋白表达与活性升高有关,MLT能降低动脉MLCK蛋白表达和活性。 展开更多
关键词 褪黑素 动脉粥样硬化 肌球蛋白轻链激酶 Western BLOT
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Vit E对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的影响 被引量：4
7
作者 江志奎 朱华庆 +4 位作者 胡勇 王健 周青 桂淑玉 汪渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期652-656,共5页
目的　研究动脉粥样硬化 (AS)模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的变化以及VitE对MLCK表达的影响。方法　复制AS兔模型 ;颈动脉取血后检测血清标本中各种血脂成分的变化 ,用免疫组化法和Westernblot分析动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK的表达... 目的　研究动脉粥样硬化 (AS)模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的变化以及VitE对MLCK表达的影响。方法　复制AS兔模型 ;颈动脉取血后检测血清标本中各种血脂成分的变化 ,用免疫组化法和Westernblot分析动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK的表达。结果　成功建立AS兔模型 ,模型血清中各种脂质发生显著变化。免疫组化和West ernblot实验表明 ,动脉粥样硬化模型兔在喂食胆固醇膳食 4wk和 12wk后动脉MLCK的表达增强 ,在喂食胆固醇膳食12wk同时添加VitE时 ,MLCK表达降低。结论　AS模型兔动脉MLCK的表达增强与动脉粥样硬化的形成相关。VitE可能是降低动脉MLCK表达的因素 ,同时抑制动脉粥样硬化的形成。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 VITE 肌球蛋白轻链激酶 免疫组化试验 Western BLOT
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VitE对动脉粥样硬化模型兔肝脏肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响 被引量：3
8
作者 朱华庆 任斌 +3 位作者 江志奎 周青 桂淑玉 汪渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1299-1302,共4页
目的　探讨维生素E(VitE)对动脉粥样硬化模型兔肝脏MLCK活性及表达的影响。方法　复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 3 2 P参入法检测肝脏MLCK活性 ,免疫荧光法检测肝组织MLCK的表达。结果　动脉粥样硬化兔模型建立成功 ,在喂胆固醇 4wk及 1... 目的　探讨维生素E(VitE)对动脉粥样硬化模型兔肝脏MLCK活性及表达的影响。方法　复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 3 2 P参入法检测肝脏MLCK活性 ,免疫荧光法检测肝组织MLCK的表达。结果　动脉粥样硬化兔模型建立成功 ,在喂胆固醇 4wk及 12wk的动物组 ,肝脏MLCK活性[分别为 (1884 8 7± 74 34 3)、(18818 3± 346 9 9)cpm·mg-1protein]与正常对照比较 [(6 6 77 5± 10 9 6 0 )cpm·mg-1pro tein]升高 (P <0 0 5 ) ;但在喂胆固醇同时添加VitE后 ,肝脏MLCK活性 [(10 898 8± 2 0 4 1 2 )cpm·mg-1protein]与正常对照组比较升高不明显 (P >0 0 5 )。荧光显微镜下观察显示 ,兔肝在喂食胆固醇膳食 4wk后MLCK的表达有所增强 ,12wk后显著增强 ,12wk组的膳食中同时加VitE后 ,MLCK表达有所下降。结论　在动脉粥样硬化过程中 ,肝脏病变可能与MLCK活性增强有关 ,VitE可能是降低肝脏MLCK活性的因素 。 展开更多
关键词 肌球蛋白轻链激酶 VITE 动脉粥样硬化 肝脏
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胰岛素对糖尿病模型大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达的影响 被引量：3
9
作者 张孝林 朱华庆 +7 位作者 卜丽佳 任传利 周青 吴学平 贾雪梅 王勇生 桂淑玉 汪渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1407-1408,共2页
关键词 肌球蛋白轻链激酶 肾脏 胰岛素 大鼠
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内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在肉瘤细胞向血管外游走过程中的调节作用 被引量：7
10
作者 辛华 郑雅娟 韩振国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期612-614,共3页
目的 :阐明肉瘤细胞向血管外游走的过程及游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶的调节作用。方法 :利用体外肉瘤细胞向血管外游走模型 ,观察肉瘤细胞的血管外游走状况 ;并测定肉瘤细胞向血管外游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化。结... 目的 :阐明肉瘤细胞向血管外游走的过程及游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶的调节作用。方法 :利用体外肉瘤细胞向血管外游走模型 ,观察肉瘤细胞的血管外游走状况 ;并测定肉瘤细胞向血管外游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化。结果 :肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞间缝隙游走至血管外 ;肉瘤细胞向血管外的游走能够引起单层血管内皮细胞的电阻下降 ;而内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂 (ML - 7)能够抑制肉瘤细胞向血管外的游走、并抑制游走过程中引起的血管内皮单细胞层电阻下降。结论 :内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可以升高血管内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平 。 展开更多
关键词 肉瘤 细胞运动 内皮细胞 肌球蛋白轻链激酶 肉瘤细胞 血行转移
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高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响 被引量：3
11
作者 朱华庆 程筱雯 +3 位作者 张慧 周青 桂淑玉 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第6期504-507,共4页
目的探讨高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响。方法胆固醇喂食大鼠4周和12周,颈动脉取血后检测血清标本中血脂成分的变化,免疫组化和Westernblot分析动脉肌球蛋白轻链激酶的表达,γ32P参入法检测动脉肌球蛋白轻链激酶... 目的探讨高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响。方法胆固醇喂食大鼠4周和12周,颈动脉取血后检测血清标本中血脂成分的变化,免疫组化和Westernblot分析动脉肌球蛋白轻链激酶的表达,γ32P参入法检测动脉肌球蛋白轻链激酶活性。结果血清中各种脂质发生显著变化,大鼠在喂食胆固醇膳食4周和12周后动脉肌球蛋白轻链激酶表达显著增强,肌球蛋白轻链激酶活性显著升高。结论胆固醇对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶的表达与活性变化相关,肌球蛋白轻链激酶表达与活性变化可能是高脂血症形成的因素。 展开更多
关键词 胆固醇 膳食 高脂血症 肌球蛋白轻链激酶
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肌球蛋白轻链激酶和Rho激酶在兔脑血管平滑肌细胞迁移中的作用 被引量：8
12
作者 李胜 高颖 +3 位作者 雷阳 齐中华 王莹 崔颖 《中国卒中杂志》 2008年第8期566-571,共6页
目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和Rho激酶在颅内血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用。方法体外培养兔大脑中动脉VSMC。构建携带反义MLCK cDNA的腺病毒载体并转染VSMC以降低MLCK表达。应用Rho激酶特异性抑制剂Y-27632来抑制Rho激酶的活... 目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和Rho激酶在颅内血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用。方法体外培养兔大脑中动脉VSMC。构建携带反义MLCK cDNA的腺病毒载体并转染VSMC以降低MLCK表达。应用Rho激酶特异性抑制剂Y-27632来抑制Rho激酶的活性。免疫印迹法测定细胞内MLCK和Rho激酶的表达水平;改良Boyden小室法检测血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)诱导的VSMC迁移;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平。结果反义MLCK cDNA转染后,MLCK表达量较LacZ基因转染组下降(84.6±5.8)%(P<0.01),但ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化和VSMC迁移未受明显影响(P均>0.05)。Y-27632预处理反义MLCK cDNA转染后的VSMC可明显降低基础水平以及ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化,并部分阻断VSMC迁移(P均<0.05)。结论颅内、外动脉VSMC迁移的分子机制不同,在ATⅡ诱导的颅内VSMC迁移中MLCK作用有限,而Rho激酶可能通过非钙依赖型MLC磷酸化途径发挥重要作用。 展开更多
关键词 颅内动脉硬化 肌球蛋白轻链激酶 RHO激酶 迁移
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抑制肌球蛋白轻链激酶减轻大鼠压力超负荷诱导的心脏肥大 被引量：3
13
作者 朱丽 周敬群 +2 位作者 吴钢 王顺 毛帅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1603-1611,共9页
目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+M... 目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+ML-7组。用RT-qPCR和免疫荧光法检测心肌细胞肥大标志物和心肌细胞表面积。此外,将大鼠随机分为6组:(1)腹主动脉缩窄(AB)0周组;(2)AB 2周组;(3)AB 4周组;(4)假手术组;(5)AB组;(6)AB+ML-7组。前3组分别在手术后0、2和4周取材,后3组在手术4周后通过超声心动图、组织病理学和RT-qPCR检测大鼠心脏结构、心功能、心肌细胞横截面积、心肌纤维化及心脏肥大标志物表达。Western blot用于检测心肌细胞和大鼠心脏组织中MLCK、p-MLC2和MLC2的表达水平。结果:Ang Ⅱ处理可显著上调心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)与β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,增加心肌细胞表面积,上调MLCK表达,增加p-MLC2水平,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。MLCK和p-MLC2在大鼠AB术2周后增加,4周后减少。AB术4周后大鼠心功能降低,心重指数、心肌细胞横截面积、心肌纤维化和心脏肥大标志物表达增加,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。抑制MLCK可在心肌细胞和心脏组织中降低p-MLC2水平而不影响MLCK的表达。结论:抑制MLCK和p-MLC2可减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和压力超负荷诱导的心脏肥大。 展开更多
关键词 心脏肥大 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白轻链2 血管紧张素Ⅱ
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肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义 被引量：3
14
作者 李锦师 白建文 +1 位作者 林闽加 张斗霞 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1424-1427,共4页
目的通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用。方法20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻... 目的通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用。方法20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水。比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达。结果与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高。结论LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用。 展开更多
关键词 肌球蛋白轻链激酶 急性肺损伤 炎症
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肌球蛋白轻链激酶介导内皮细胞屏障功能变化的研究进展 被引量：9
15
作者 吴洁 张伟金 黄巧冰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期572-576,共5页
血管内皮细胞是连续被覆于全身血管内膜的一层细胞群,不仅构成一道半选择通透性屏障,还合成和分泌多种生物活性物质,维持正常的心血管功能。血管内皮细胞的完整和屏障功能完好对于维持心血管稳态有至关重要的作用。内皮细胞受损所致屏... 血管内皮细胞是连续被覆于全身血管内膜的一层细胞群,不仅构成一道半选择通透性屏障,还合成和分泌多种生物活性物质,维持正常的心血管功能。血管内皮细胞的完整和屏障功能完好对于维持心血管稳态有至关重要的作用。内皮细胞受损所致屏障功能下降是血管病变的始动环节,如脑血管内皮连接受损导致的脑水肿[1]。 展开更多
关键词 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白 内皮细胞 通透性
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姜黄素对非酒精性脂肪肝大鼠肠黏膜肌球蛋白轻链激酶的影响 被引量：3
16
作者 侯洪涛 裘艳梅 +4 位作者 张建 胡义亭 白云 王存凯 郑吉敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第20期3363-3367,共5页
目的探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠黏膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响。方法 35只SD大鼠随机分为3组,正常对照组(NC)10只、高脂饲料喂养组(HF)15只、姜黄素组(Cur)10只,后两组予高脂饲料喂养16周,其中Cur组在高脂饲料喂... 目的探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠黏膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响。方法 35只SD大鼠随机分为3组,正常对照组(NC)10只、高脂饲料喂养组(HF)15只、姜黄素组(Cur)10只,后两组予高脂饲料喂养16周,其中Cur组在高脂饲料喂养8周后,予姜黄素灌胃200 mg/(kg·d),每天1次,共8周。检测大鼠血ALT、AST、LPS、DAO水平及肠黏膜MLCK的表达;观察肝脏病理学及肠黏膜紧密连接。结果与NC组比,HF组大鼠血ALT、AST、LPS及DAO均明显升高(P<0.05);与HF组比,Cur组大鼠血ALT、AST、LPS及DAO均明显下降(P<0.05)。HF组大鼠肝细胞脂肪变性明显,Cur组肝细胞脂肪变减轻。HF组紧密连接间隙较NC组明显增宽(P<0.05),Cur组紧密连接间隙较HF组变窄(P<0.05)。HF组MLCK表达较NC组明显升高,Cur组阳性染色较HF组减弱(P<0.05)。结论姜黄素能够通过下调NAFLD大鼠肠黏膜MLCK的表达,改善肠黏膜紧密连接结构。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 姜黄素 肌球蛋白轻链激酶 肠黏膜
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抑制肌球蛋白轻链激酶活性对内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡失衡的影响 被引量：3
17
作者 杨永曜 杨天和 +3 位作者 蒋清安 杨龙 唐峰 谭洪文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期256-260,共5页
目的:观察抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖与凋亡失衡的影响。方法:细胞分成3组:对照组;内皮素-1组;内皮素-1+肌球蛋白轻链激酶抑制剂组(ET-... 目的:观察抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖与凋亡失衡的影响。方法:细胞分成3组:对照组;内皮素-1组;内皮素-1+肌球蛋白轻链激酶抑制剂组(ET-1+M组)。干预72 h后,免疫印迹法测定细胞内MLCK表达水平;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平,MTT比色法及[3H]-TdR掺入法检测PASMCs的增殖情况,流式细胞仪检测PASMCs的细胞周期变化及凋亡率。结果:同对照组比较,ET-1刺激后肺动脉平滑肌细胞MLCK蛋白表达显著增强、MLC磷酸化上调、增殖增多、凋亡率明显降低(均P<0.05);加入MLCK抑制剂干预后,MLCK表达明显下降(P<0.05)、MLC去磷酸化显著增强、逆转了ET-1对PASMCs增殖及凋亡的影响。结论:抑制MLCK能显著逆转内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的失衡。 展开更多
关键词 肌球蛋白轻链激酶 内皮素-1 肺动脉平滑肌细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化 被引量：4
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作者 林原 唐泽耀 +3 位作者 陈华 戴淑芳 杨静娴 王晓明 《科学技术与工程》 2002年第6期37-40,共4页
发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提... 发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。 展开更多
关键词 平滑肌 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白 非钙依赖性 磷酸化
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miR-200b调控肌球蛋白轻链激酶／磷酸化肌球蛋白轻链信号通路对肠上皮紧密连接的影响 被引量：3
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作者 沈玉洁 张琮 陈颖伟 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期538-541,共4页
目的探究mi R-200b对肠上皮紧密连接的影响及作用机制。方法利用阴性对照慢病毒及表达mi R-200b的慢病毒感染Caco-2细胞形成NC株和200b株,以10 ng/m L肿瘤坏死因子(TNF-α)处理建立体外肠上皮损伤模型,并分为NC组、NC+TNF-α组、200b组... 目的探究mi R-200b对肠上皮紧密连接的影响及作用机制。方法利用阴性对照慢病毒及表达mi R-200b的慢病毒感染Caco-2细胞形成NC株和200b株,以10 ng/m L肿瘤坏死因子(TNF-α)处理建立体外肠上皮损伤模型,并分为NC组、NC+TNF-α组、200b组和200b+TNF-α组。测量4组细胞对肠上皮跨膜电阻抗(TEER)及对异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FITC-dextran)的通透性;Western blot检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及磷酸化肌球蛋白轻链(P-MLC)表达。结果与NC组相比,NC+TNF-α组TEER值降低、对FITC-dextran通透量显著增高、MLCK和P-MLC表达上调,差异均有统计学意义(P?<0.05)。与NC+TNF-α组相比,200b+TNF-α组TEER显著升高、FITC-dextran通透量显著降低、MLCK和P-MLC表达显著下调,差异均有统计学意义(P?<0.05)。结论 mi R-200b可调控MLCK/P-MLC信号通路修复TNF-α导致的肠上皮紧密连接损伤。 展开更多
关键词 miR-200b 肠上皮紧密连接 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白轻链磷酸化 细胞
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硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响 被引量：1
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作者 杨锐 贾强 +3 位作者 刘小粉 王元元 高琴 马善峰 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期353-358,共6页
目的:观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、Na HS治疗组(DM+Na HS组)和Na HS对照组(Na HS组),每组... 目的:观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、Na HS治疗组(DM+Na HS组)和Na HS对照组(Na HS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+Na HS组和Na HS组大鼠腹腔注射Na HS溶液28μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK m RNA和蛋白表达。结果:与NC组比较,Na HS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK m RNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+Na HS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK m RNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论:外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。 展开更多
关键词 硫化氢 糖尿病 大鼠 心肌 肌球蛋白轻链激酶
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