急性B淋巴细胞白血病BCL-2抑制剂耐药细胞系的构建及耐药机制研究 被引量：2

1

作者 吴沂璇 段永娟 +4 位作者 蔡玉丽 魏璇 张英驰 章婧嫽 竺晓凡 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1305-1312,共8页

目的:利用急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞系RS4;11构建对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用BCL-2抑制剂navitoclax和venetoclax小剂量低浓度递增的方法间歇诱导RS4;11细胞系,构建RS4;11/Nav和RS4;11/Ven... 目的:利用急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞系RS4;11构建对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用BCL-2抑制剂navitoclax和venetoclax小剂量低浓度递增的方法间歇诱导RS4;11细胞系,构建RS4;11/Nav和RS4;11/Ven耐药细胞系,通过MTT法检测不同药物浓度下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,转录组测序技术(RNA-seq)检测RS4;11耐药细胞系和亲本细胞系中的差异表达基因(DEGs),RRT-PCR检测耐药细胞系与亲本细胞系中差异表达基因的mRNA表达水平,Western blot检测耐药细胞系和亲本细胞系中BCL-2家族抗凋亡蛋白的表达水平。结果:成功构建了对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系RS4;11/Nav和RS4;11/Ven,RS4;11/Nav对navitoclax的耐药指数为328.655±47.377,RS4;11/Ven对venetoclax的耐药指数为2 894.027±300.311。流式细胞术检测细胞凋亡发现,相比耐药细胞系,RS4;11亲本细胞系明显被BCL-2抑制剂抑制,而耐药细胞系的凋亡率基本未受药物的影响。Western blot检测结果表明,BCL-2家族抗凋亡蛋白在耐药细胞系中的表达无明显增多。RNA-seq、RT-PCR和Western blot检测发现EP300在耐药细胞系中的表达较亲本细胞系明显增高(P<0.05)。结论:小剂量低浓度递增间歇诱导法可成功构建对BCL-2抑制剂耐药的B-ALL细胞系,并且其耐药机制可能与EP300的表达上调有关。 展开更多

关键词 急性B淋巴细胞白血病 BCL-2抑制剂 耐药细胞系 RNA-SEQ EP300

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细胞因子诱导的杀伤细胞降低乳腺癌耐药细胞系对阿霉素的耐受效应 被引量：20

2

作者 石永进 虞积仁 +4 位作者 朱平 马明信 岑溪南 董玉君 袁家颖 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期415-418,共4页

目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokine inducedkiller,CIK)与化疗药物对多药耐药 (multidrugre sistance,MDR)肿瘤细胞产生协同杀伤效应的机制。方法 :用细胞培养法加细胞因子在体外诱导并扩增CIK细胞 ,应用MTT法测定CIK细胞、... 目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokine inducedkiller,CIK)与化疗药物对多药耐药 (multidrugre sistance,MDR)肿瘤细胞产生协同杀伤效应的机制。方法 :用细胞培养法加细胞因子在体外诱导并扩增CIK细胞 ,应用MTT法测定CIK细胞、阿霉素及二者联合对靶细胞的杀伤活性 ,用流式细胞术检测靶细胞上P糖蛋白 (P gp)的表达和细胞内药物积累 ,用细胞免疫组化方法检测P gp在MDR靶细胞MCF7adr内的分布。结果 :CIK细胞可使MCF7adr细胞P gp的表达活性下降 82 .5 % ,耐药靶细胞内阿霉素积累增加 3.2倍 ,使联合杀伤率比单纯加阿霉素(同等剂量 )组增加 7.8倍 ,比单纯加CIK细胞 (相同效靶比 )组增加 1.3倍。结论 :CIK细胞可明显抑制MCF7adr肿瘤细胞系的P gp表达 ,可协同阿霉素提高对MCF7adr肿瘤细胞系的杀伤活性。 展开更多

关键词 乳腺癌 杀伤细胞 耐药细胞系 阿霉素 耐受效应 细胞因子 治疗

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A549/CDDP多药耐药细胞系的建立 被引量：17

3

作者 陈杰 白春学 +1 位作者 钱桂生 黄桂君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第2期186-187,共2页

关键词 A549 CDDP 多药耐药细胞系 建立 肺癌 化疗

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人小细胞肺癌SH77多药耐药细胞系的建立及其生物学特征分析 被引量：6

4

作者 周向东 钱桂生 刘凌志 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第16期1405-1407,共3页

目的　建立人小细胞肺癌SH77/CDDPMDR细胞株并检测其生物学特性。方法　应用肺癌化疗的一线药物顺铂采用逐步增加剂量的方法诱导人SCLC细胞系SH77,建立MDR细胞系SH77/CDDP ;检测耐药细胞及其亲代细胞对 7种化疗药物的敏感性 ;观察细胞... 目的　建立人小细胞肺癌SH77/CDDPMDR细胞株并检测其生物学特性。方法　应用肺癌化疗的一线药物顺铂采用逐步增加剂量的方法诱导人SCLC细胞系SH77,建立MDR细胞系SH77/CDDP ;检测耐药细胞及其亲代细胞对 7种化疗药物的敏感性 ;观察细胞形态和超微结构 ;测定细胞生长曲线和细胞周期。结果　在国内首次成功建立了SCLCMDR细胞系SH77/CDDP ,药敏结果显示该细胞对 7种化疗药物有不同程度的抗药性 ;耐药细胞较其亲代略增大 ,核浆比例减小 ,线粒体、高尔基体、粗面内质网和游离核糖体增多 ,细胞表面指状突起明显 ;耐药细胞与其亲代细胞增殖速度接近 ;其S期细胞增多 (P <0 .0 5 ) ,提示耐药细胞DNA合成增加。结论　SH77/CDDP是可靠的人SCLCMDR细胞模型 ,SH77/CD 展开更多

关键词 肺肿瘤 顺铂 人 小细胞肺癌 生物学特性 多药耐药细胞系

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赛庚啶对K562/A02多药耐药细胞系细胞增殖的影响

5

作者 祁明芳 汪明春 +2 位作者 魏素芳 许敏华 杨纯正 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1997年第2期43-45,共3页

赛庚啶对Ｋ５６２／Ａ０２多药耐药细胞系细胞增殖的影响祁明芳１）汪明春魏素芳许敏华杨纯正（暨南大学医学院第一附属医院内科）（中国医学科学院血液学研究所）关键词：赛庚啶；多药耐药细胞系；细胞增殖中图分类号：Ｒ７３３由ｍｄ... 赛庚啶对Ｋ５６２／Ａ０２多药耐药细胞系细胞增殖的影响祁明芳１）汪明春魏素芳许敏华杨纯正（暨南大学医学院第一附属医院内科）（中国医学科学院血液学研究所）关键词：赛庚啶；多药耐药细胞系；细胞增殖中图分类号：Ｒ７３３由ｍｄｒ－１基因偏码膜糖蛋白Ｐ－１７０介... 展开更多

关键词 赛庚啶 多药耐药细胞系 细胞增殖 肿瘤药

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人鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系与其亲代细胞系比较基因组杂交研究

6

作者 李维 马艳红 +2 位作者 董运鹏 张心丽 谭国林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期241-245,共5页

目的:比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)是一种在荧光原位杂交(fltuorescence in situ hybridiza-tion,FISH)技术上发展起来的用于检测两个基因组间相对DNA拷贝数的改变(缺失或扩增),并将这些变化在染色体上进行... 目的:比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)是一种在荧光原位杂交(fltuorescence in situ hybridiza-tion,FISH)技术上发展起来的用于检测两个基因组间相对DNA拷贝数的改变(缺失或扩增),并将这些变化在染色体上进行定位的分子细胞遗传学方法。为了解鼻咽癌紫杉醇耐药细胞(CNEl/Taxol,HNE2/Taxol,5-8F/Taxol)与亲代细胞(CNEl,HNE2,5-8F)在基因组DNA水平上可能存在的差异,以及这种差异在肿瘤获得性耐药产生中的意义,采用CCH技术对鼻咽癌紫杉醇耐药细胞与亲本细胞的基因组DNA进行检测和分析。方法:三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞采用大剂量冲击与剂量逐渐递加相结合的方法诱导而成。采用集落形成实验测定药物的敏感性,利用比较基因组杂交技术(CGH)对耐药细胞和其亲本细胞的基因组DNA进行检测和分析,比较耐药细胞与亲本细胞在染色体扩增与缺失上的共同点和差异。结果:三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞耐药指数分别为8.43、8.27和5.26。鼻咽癌亲本细胞存在广泛的染色体改变,主要表现在3q21-qter,5p13-pter,12和20q11-qter的共同扩增以及l0q11-qter,18和X染色体的共同缺失,从亲本细胞系诱导的三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系表现为3q21-qter,5p13-pter,12,20q11-qter和8q21-qter的共同扩增,无明显共同缺失区域。与亲本细胞共同扩增区域相比,其中最有意义的是8q2l-qter区域在三株耐药细胞中出现了新的共同扩增。结论:3q21-qter,5p13-pter,12和20q11-qter的共同扩增以及10q11-qter,18和X染色体的共同缺失可能与鼻咽癌的发生有关,而8q21-qter染色体扩增可能与鼻咽癌获得性紫杉醇耐药相关,对这些区域的进一步研究,有可能为肿瘤发生及耐药机制研究提供新的线索. 展开更多

关键词 鼻咽癌 紫杉醇耐药细胞系 CGH

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耐顺铂人肺腺癌细胞系A_（549）DDP的建立及耐药机制 被引量：29

7

作者 蔡鹏 刘叙仪 +1 位作者 韩复生 王萍 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1995年第8期582-587,共6页

采用递增顺铂（ＤＤＰ）浓度的方法，体外连续培养建成一株耐ＤＤＰ的人肺腺癌细胞系Ａ（５４９）ＤＤＰ，耐ＤＤＰ为亲代Ａ（５４９）的２４．４倍。在无ＤＤＰ的培养基中培养５月余，其耐药性仍稳定。Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞内谷胱甘... 采用递增顺铂（ＤＤＰ）浓度的方法，体外连续培养建成一株耐ＤＤＰ的人肺腺癌细胞系Ａ（５４９）ＤＤＰ，耐ＤＤＰ为亲代Ａ（５４９）的２４．４倍。在无ＤＤＰ的培养基中培养５月余，其耐药性仍稳定。Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞内谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平显著高于亲代细胞（Ｐ＜０．０１）。ＢＳＯ耗竭细胞内ＧＳＨ后，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ敏感性增加５倍，ＢＳＯ对亲代Ａ（５４９）细胞无增敏作用，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞ＧＳＴ酶同功酶ＧＳＴ—π含量较Ａ（５４９）高１．６倍，却无ＧＳＴ基因扩增，表明ＧＳＨ／ＧＳＴ解毒系统参与Ａ（５４９）ＤＤＰ耐药性的产生。实验结果亦示Ａ（５４９）ＤＤＰ与卡铂及氨甲喋呤间存在交叉耐药，而与易产生ＭＤＲ或ａｔＭＤＲ之ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＶＰ－１６、ＶＭ－２６无交叉耐药，Ａ（５４９）细胞无Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ研究Ａ（５４９）ＤＤＰ无ｍｄｒｌＴｏｐｏⅡ基因扩增，提示Ａ（４５９）ＤＤＰ细胞系与ＭＤＲ及ａｔ－ＭＤＲ无交叉耐药。 展开更多

关键词 顺铂 耐药细胞系 谷胱甘肽 肺肿瘤 抗癌药 腺癌

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逆转录病毒转染法建立耐药性大鼠CRBH-7919细胞系 被引量：7

8

作者 樊爱琳 王执民 +6 位作者 刘国鹏 郭卫平 张洪新 王义清 曹伟 李文献 倪代会 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期555-558,共4页

目的 :建立高效、稳定的大鼠 CRBH- 7919多药耐药细胞系。 方法 :利用逆转录病毒转染法将带有 mdr1c DNA全序列的逆转录病毒载体 p Ha MDR转入到大鼠 CRBH- 7919细胞中 ,MTT法检测细胞系在不同化疗药物作用下的存活率 ;免疫组化检测细胞... 目的 :建立高效、稳定的大鼠 CRBH- 7919多药耐药细胞系。 方法 :利用逆转录病毒转染法将带有 mdr1c DNA全序列的逆转录病毒载体 p Ha MDR转入到大鼠 CRBH- 7919细胞中 ,MTT法检测细胞系在不同化疗药物作用下的存活率 ;免疫组化检测细胞的 P-糖蛋白 (P- GP)表达 ,RT- PCR检测细胞内 mdr1m RNA的表达量 ,PCR检测 mdr1基因转移到细胞内的基因片段。 结果 :转基因的细胞系对阿霉素、丝裂霉素的耐药性分别提高 9和 7.9倍 ,免疫组化见转基因细胞系 P- GP表达增加 ,RT- PCR示细胞内 mdr1m RNA的表达量增加 ,PCR表明转基因细胞内扩增出 m dr1片段。结论 :利用逆转录病毒转染法成功建立了大鼠 CRBH - 7919多药耐药细胞系 ,该细胞系具有耐药强度高。 展开更多

关键词 肿瘤化疗 动物模型 CRBH-7919多药耐药细胞系 大鼠 逆转录病毒转法

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裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究 被引量：9

9

作者 陈莉 许小平 +4 位作者 王健民 吕书晴 居小萍 周虹 黄正霞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期507-511,共5页

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内... 目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性。方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K56g-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性。结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n／VCR。与K562-n细胞比较,K562-n／VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大。结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR具有其独特的生物学特性。 展开更多

关键词 裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系 建立 生物学特性 长春新碱 致癌性试验

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CIK细胞联合顺铂对卵巢癌耐药细胞SKOV3/CDDP的杀伤作用 被引量：10

10

作者 张辉 赵群 +4 位作者 左连富 焦琨 程建新 贾金华 康山 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期381-384,共4页

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞联合顺铂对卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CD-DP小鼠腹腔移植模型的体内外杀伤作用。方法:取正常人的外周血单个核细胞(PBMC),加入IFN-γ、IL-2、CD3McAb和IL-1,体外诱导成CIK... 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞联合顺铂对卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CD-DP小鼠腹腔移植模型的体内外杀伤作用。方法:取正常人的外周血单个核细胞(PBMC),加入IFN-γ、IL-2、CD3McAb和IL-1,体外诱导成CIK细胞。用MTT法测定CIK细胞、顺铂及两者联合对人卵巢癌细胞株SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性。在SCID小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3/CDDP细胞,观察CIK细胞对荷瘤鼠的体内抑瘤作用,并用RIA法检测各组血清中CA125的含量。结果:顺铂对SKOV3/CDDP细胞的IC50为315.5μg/ml,较其对SKOV3细胞的IC50(85μg/ml)增加了4倍;CIK细胞对SKOV3与SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性均在48h最高,且随效靶比的增高而增强,其对SKOV3/CDDP细胞的杀伤活性明显高于SKOV3(P<0.05)。仅25μg/ml的顺铂即可使效靶比为12.5∶1组中的联合杀伤率比单纯顺铂组增加5.8倍,比单纯加CIK(相同效靶比)细胞杀伤率增加2.3倍,且随效靶细胞比值和顺铂浓度的升高呈依赖性增加。与对照组相比,CIK组与CIK+顺铂组均能显著抑制癌性结节的生长,抑瘤率达100%,且3组SCID鼠血中CA125值有显著性差异(P<0.05)。结论:正常人CIK细胞联合顺铂对清除晚期卵巢癌表达耐药蛋白的腹腔种植转移病灶可能会有较好的效果,并有希望成为前景良好的综合治疗方案。 展开更多

关键词 卵巢癌 多药耐药 细胞因子诱导的杀伤细胞 顺铂 卵巢癌耐药细胞系SKOV3/CDDP

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CIK细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用的实验研究 被引量：8

11

作者 刘鹏英 陈龙邦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1079-1083,共5页

目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶... 目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定多西紫杉醇、CIK细胞及两者联合对耐药细胞SPC-A1/DTX体外的细胞毒活性。用肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX建立裸鼠皮下移植瘤模型,2周后腹腔给予生理盐水(对照组)、多西紫杉醇(单纯化疗组)、CIK细胞和CIK细胞联合多西紫杉醇(联合治疗组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:体外实验表明,SPC-A1/DTX对多西紫杉醇的耐受性(IC50为110.5μg/ml)较亲代敏感株SPC-A1(IC50为8.5μg/ml)增加了13倍。CIK细胞对人肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的杀伤活性,明显高于其亲代敏感株SPC-A1(P<0.05)。经CIK细胞作用后的SPC-A1/DTX细胞,仅10μg/ml的DTX即可使CIK:SPC-A1/DTX效靶比为5:1组中的联合杀伤率比单纯加DTX(同等剂量)组增加6.1倍,比单纯加CIK(相同效靶比)细胞杀伤率增加1.4倍,联合杀伤率的大小随效靶细胞比值和DTX浓度的升高呈依赖性增加。体内实验表明,CIK细胞联合多西紫杉醇可明显抑制裸鼠皮下肺腺癌耐药细胞移植瘤的生长,联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润明显。结论:CIK细胞联合多西紫杉醇能够显著抑制体内外肺腺癌多药耐药细胞SPC-A1/DTX的生长,为临床上应用CIK细胞联合化疗治疗放、化疗等无效的中晚期耐药肺癌患者提供了实验依据。 展开更多

关键词 肺癌 多药耐药 过继性细胞免疫治疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 肺腺癌耐药细胞系SPC-A1/DTX

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慢病毒介导BC047440基因沉默逆转HepG2/ADM细胞化疗耐药性机制的探讨 被引量：2

12

作者 王峥 郑璐 +3 位作者 黄小兵 杨彤翰 李靖 梁平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期705-709,共5页

目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组... 目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组。CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化;Real-time PCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化。结果成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型;NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69%,约为control-shRNA组67.39%;细胞毒性实验中24、48 h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强;流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多,细胞周期分布多停留于G1/G0期,S期细胞明显减少。Real-time PCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为con-trol-shRNA组37%,约为HepG2/ADM组42%;检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍,约为HepG2/ADM组2.4倍。结论沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一。 展开更多

关键词 BC047440 人多药耐药细胞系HepG2/ADM 核转录因子-ΚB Survivin CCNL1

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