产单核细胞李氏杆菌Lm4b_02325/26双基因缺失株构建及部分生物学特性试验

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作者 任慧杰 马勋 +7 位作者 王静 刘彩霞 曾东东 寇丽君 史唯地 吕双飞 钱瑞宣 高盛杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2578-2587,共10页

旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株,研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的部分生物学特性的影响。利用同源重组... 旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株,研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的部分生物学特性的影响。利用同源重组技术构建LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株,测定LM928和LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株在脑心浸出液肉汤(brain heart infusion broth, BHI)、不同EtOH浓度、不同NaCl浓度、不同pH、不同温度下的D_(600 nm),绘制生长曲线;RT-qPCR检测双基因缺失前后体外BHI培养环境下部分毒力因子转录水平;平板计数测定其对鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭与胞内增殖情况;感染C57BL/6小鼠后检测肝、脾、脑组织中的细菌数量。结果表明,成功构建具有遗传稳定性的双缺失株LM928ΔLm4b_02325/26。在含0.5%~10%NaCl或3%~4.5%EtOH的培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异,在pH=5条件下,双缺失株的生长率显著高于野毒株,pH=9条件下双缺失株的生长率显著低于野毒株。在不同温度(4℃、37℃、42℃)BHI培养基中,双缺失株与野毒株生长没有明显差异。Lm4b_02325/26基因双缺失株在BHI培养基中毒力因子hly、inlC和PlcA极显著上调(P<0.01),mpl、inlB、actA、inlP、PlcB、prfA、SigB、iap和inlA极显著下调(P<0.01);双缺失株对RAW264.7细胞的黏附率(14.86%)和侵袭率(2.23%)明显低于野毒株的黏附率(22.93%)和侵袭率(4.28%)(P<0.01);3、6、12 h时胞内增殖数量极显著低于野毒株(P<0.01);双缺失株与野毒株感染小鼠后,载菌量在肝、脾中没有显著差异,在脑组织中双缺失株载菌量为10~4,高于野毒株的10~(3.07),差异极显著(P<0.01)。综上认为,LIPI-4的Lm4b_02325和Lm4b_02326基因参与LM毒力因子的表达和脑组织的定植能力,与弱酸强碱条件下适应力及对RAW264.7细胞的黏附、侵袭和胞内增殖有关。本研究为LIPI-4的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 产单核细胞李氏杆菌 双缺失株 黏附侵袭 胞内增殖 载菌量 生长曲线

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产单核细胞李氏杆菌内化素G单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

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作者 马金锐 史文静 +8 位作者 田常青 董志杰 赵学慧 芝吉 曹青 魏衍全 宋维丽 薛惠文 苟惠天 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4069-4076,共8页

本研究旨在建立一种快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法。通过PCR扩增产单核细胞李氏杆菌(LM)内化素G(InlG)基因,构建pET-32a-InlG重组表达载体,通过诱导表达获得InlG重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100μg·只^(-1)),经细胞融合、克... 本研究旨在建立一种快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法。通过PCR扩增产单核细胞李氏杆菌(LM)内化素G(InlG)基因,构建pET-32a-InlG重组表达载体,通过诱导表达获得InlG重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100μg·只^(-1)),经细胞融合、克隆和筛选共获得了3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、1D2-1和2H10。经鉴定,其分泌抗体亚型均为IgG 1。利用制备的1D2-1作为捕获抗体,产单核细胞李氏杆菌兔多抗作为检测抗体,初步建立检测产单核细胞李氏杆菌的双抗体夹心ELISA方法。Western blot结果显示3株单克隆抗体(mAb)与InlG均可发生特异性反应。双抗体夹心ELISA方法的特异性试验结果显示,与沙门菌、大肠杆菌、枯草杆菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌均不发生反应。灵敏度试验结果显示,该方法检测LM纯培养物的检测限为1.0×10^(6)CFU·mL^(-1)。重复性试验结果显示,各组变异系数在5%~10%之间(<10%)。综上,本研究利用抗内化素G蛋白的mAb和兔多抗建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于产单核细胞李氏杆菌感染的快速诊断检测。 展开更多

关键词 产单核细胞李氏杆菌 内化素G 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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单核细胞增多性李氏杆菌人工感染绵羊试验 被引量：1

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作者 剡根强 马勋 +4 位作者 屈勇刚 田晶华 王晓兰 蒋建军 沈文 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期197-198,共2页

将从病羊脑分离纯化的单核细胞增多性李氏杆菌经静脉接种于健康美利奴绵羊 3只 ,结果被感染绵羊均表现出与自然感染绵羊相同的临床症状和病理变化 ,并从脑、心血、淋巴结中回收到了单核细胞增多性李氏杆菌 ,从而证明了该分离株单核细胞... 将从病羊脑分离纯化的单核细胞增多性李氏杆菌经静脉接种于健康美利奴绵羊 3只 ,结果被感染绵羊均表现出与自然感染绵羊相同的临床症状和病理变化 ,并从脑、心血、淋巴结中回收到了单核细胞增多性李氏杆菌 ,从而证明了该分离株单核细胞增多性李氏杆菌具有较强的致病性。 展开更多

关键词 绵羊 单核细胞增多性李氏杆菌 人工感染

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绵羊单核细胞增多性李氏杆菌带菌情况的调查研究 被引量：2

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作者 王一明 张海兰 杨菊清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期174-176,共3页

对伊犁部分地区健康绵羊的鼻拭子、肛拭子、青贮、土壤进行检测,共检测280个样本,经培养特性、生化特性鉴定,并针对单核细胞增多性李氏杆菌高度保守的hly基因设计的特异性引物进行PCR扩增,同时对扩增产物进行分析,结果有5株分离株为单... 对伊犁部分地区健康绵羊的鼻拭子、肛拭子、青贮、土壤进行检测,共检测280个样本,经培养特性、生化特性鉴定,并针对单核细胞增多性李氏杆菌高度保守的hly基因设计的特异性引物进行PCR扩增,同时对扩增产物进行分析,结果有5株分离株为单核细胞增多性李氏杆菌,分布率达1.78%。ERIC-PCR结果表明,此5株单核细胞增多性李氏杆菌与标准单核细胞增多性李氏杆菌对照株指纹图谱有差异,属于不同基因型。 展开更多

关键词 绵羊 单核细胞增多性李氏杆菌 带菌情况

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脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响

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作者 秦祎 胡文洁 +4 位作者 方小伟 郭骞 田篮鑫 刘芳 方春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期670-679,共10页

本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株,探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体... 本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株,探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体形态的影响,Western blot试验探究亲本株EGDe-prfA、缺失株ΔltaS对InlA和InlB在细菌表面的锚定情况;使用鸡胚成纤维DF-1细胞进行细胞黏附侵袭试验、小鼠RAW264.7细胞进行吞噬试验与巨噬细胞内增殖试验测定ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌侵染能力的影响;小鼠脏器细菌载量和小鼠存活试验评估ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响。结果显示:利用同源重组技术成功构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,生长曲线试验和光学显微镜观察发现ltaS基因不影响产单核细胞李氏杆菌在BHI中正常生长和细菌形态,通过Western blot试验验证ltaS基因缺失导致细菌表面毒力的InlA和InlB锚定量降低。细胞黏附侵袭试验结果表明,ΔltaS对DF-1的黏附率极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01)并且侵袭率也极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01);吞噬试验结果显示,小鼠巨噬细胞RAW264.7对ΔltaS的吞噬率与亲本株EGDe-prfA相比无显著性差异(P>0.05);而在增殖试验中,ΔltaS在RAW264.7中增殖量与亲本株EGDe-prfA存在显著差异(P<0.05)。小鼠致病力试验结果显示,经ΔltaS感染的小鼠的肝、脾内细菌载量均显著低于EGDe-prfA(P<0.01)并且EGDe-prfA感染后的小鼠96 h内全部死亡,而缺失株ΔltaS感染的小鼠存活率为80%,测定出亲本株EGDe-prfA半数致死量LD 50为1.7×104 CFU,缺失株ΔltaS半数致死量LD 50为7.49×106 CFU。综上所述,ltaS基因缺失显著减少表面InlA和InlB的锚定量,减弱产单核细胞李氏杆菌对DF-1细胞的黏附侵袭能力与RAW264.7内细菌增殖能力,并且降低对小鼠的致病性。 展开更多

关键词 产单核细胞李氏杆菌 磷壁酸 脂磷壁酸合成酶 基因缺失 致病性

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T6SS效应蛋白Tae4对金黄色葡萄球菌和产单核细胞李氏杆菌的抑菌作用

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作者 占乐杨 苟婧萱 +6 位作者 张曼琪 傅唯轩 兰守信 涂健 王振宇 邵颖 宋祥军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4660-4669,共10页

旨在探究Ⅵ型分泌系统(TypeⅥsecretion systems,T6SS)的毒力效应蛋白Tae4酰胺酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)及产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)的抑菌作用。将pET-28a-Tae4重组质粒... 旨在探究Ⅵ型分泌系统(TypeⅥsecretion systems,T6SS)的毒力效应蛋白Tae4酰胺酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)及产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)的抑菌作用。将pET-28a-Tae4重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(Escherichia coli BL21,E.coli BL21)进行目的蛋白诱导表达,优化IPTG的诱导时间、浓度、温度,最后纯化后的Tae4蛋白通过琼脂孔扩散试验、最小抑菌浓度测定、抗生素联用抑菌试验分别作用于S.aureus和L.monocytogenes。SDS-PAGE电泳结果显示,本试验中重组蛋白诱导表达最佳条件为:IPTG终浓度为0.5 mmol·L^(-1),16℃诱导16 h。重组蛋白大小约为21 ku,可溶性表达于培养上清中。琼脂孔扩散试验结果显示,Tae4蛋白浓度500μg·mL^(-1)时S.aureus菌株均出现13mm以上抑菌圈,效果与菌株血清型有关,L.monocytogenes菌株均出现18mm以上抑菌圈;最小抑菌浓度试验结果显示,Tae4蛋白对S.aureus的MIC约为250μg·mL^(-1),对L.monocytogenes的MIC约为125μg·mL^(-1),点板法和微量肉汤稀释法结果一致;抗生素联用抑菌试验结果显示,Tae4蛋白与青霉素(penicillin,PG)联合使用均比单独使用的抑菌效果要好,且对L.monocytogenes的抑菌效果优于S.aureus。综上,Tae4蛋白对金黄色葡萄球菌和产单核细胞李氏杆菌具有抑菌效果,与青霉素联用抑菌效果得到了增强,为后续抗生素替代提供理论依据。 展开更多

关键词 Tae4 Ⅵ型分泌系统 金黄色葡萄球菌 产单核细胞李氏杆菌 抗生素替代

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致绵羊脑炎单核细胞增多症李氏杆菌的分离与鉴定

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作者 马勋 剡根强 +1 位作者 王晓兰 蒋建军 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期194-195,共2页

新疆生产建设兵团 (以下简称兵团 )某些团的羊群发生以神经症状为主的疾病 ,采集病死绵羊的脑和肝、脾进行病原菌分离和鉴定。共分离出 90SB1、90SB2、90SB5、90SS1和 12 5SL15株单核细胞增多症李氏杆菌。动物接种试验表明 ,90SB2 具有... 新疆生产建设兵团 (以下简称兵团 )某些团的羊群发生以神经症状为主的疾病 ,采集病死绵羊的脑和肝、脾进行病原菌分离和鉴定。共分离出 90SB1、90SB2、90SB5、90SS1和 12 5SL15株单核细胞增多症李氏杆菌。动物接种试验表明 ,90SB2 具有较强的致病性 ,对家兔耳缘静脉注射和结膜囊内接种、小白鼠腹腔注射 90SB2 均可引起发病。 展开更多

关键词 脑炎 单核细胞增多症李氏杆菌 致病性

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鸡肉中单核细胞增生性李氏杆菌的毒力试验 被引量：1

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作者 肖成蕊 李天松 +4 位作者 孟日增 周宇 魏柏友 吴剑 梁基 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第3期26-27,共2页

关键词 单核细胞增生 脑膜脑炎 败血症 主要症状 恶寒 食源性病原菌 呕吐 李氏杆菌病 毒力试验 鸡肉

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检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用 被引量：3

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作者 江玲丽 高有领 +4 位作者 胡兴娟 章先 杨云凯 魏华 方维焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1841-1848,共8页

产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后,制备单克隆抗体,测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试... 产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后,制备单克隆抗体,测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测,并初步应用于实际海产品的检测。结果发现,制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高,亲和力好,亲和力常数为4.25×10^(8) L·mol^(-1)。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致,为3.0×10^(5)CFU·mL^(-1)。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中,产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20%(11/500),略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500),三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min,检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。 展开更多

关键词 产单核细胞李氏杆菌 李氏杆菌溶血素 单克隆抗体 胶体金试纸 海产品初步应用

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片球菌素对酸奶中单核细胞增多症李氏杆菌的抑菌作用 被引量：3

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作者 檀茜倩 韩烨 +1 位作者 周志江 丁成为 《湖南农业科学》 2009年第9期107-110,共4页

将从泡菜中分离出的一株产片球菌素的乳酸片球菌接种至MRS培养基,培养后采用基于pH的吸附和解吸附法提取片球菌素,以单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595(4.55×108cfu/mL)为指示菌,采用琼脂扩散法,测定片球菌素的抑菌活性。结果表明,... 将从泡菜中分离出的一株产片球菌素的乳酸片球菌接种至MRS培养基,培养后采用基于pH的吸附和解吸附法提取片球菌素,以单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595(4.55×108cfu/mL)为指示菌,采用琼脂扩散法,测定片球菌素的抑菌活性。结果表明,其对单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595的最小抑菌浓度为1.6g/mL,随机活性单位为21.875AU/mg。将片球菌素(0.01mg/mL)添加到人工污染单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595的酸奶(6.305logcfu/mL)中,1d以后其菌落数下降为4.301logcfu/mL,并可以在30d的实验周期内保持抑菌作用。 展开更多

关键词 片球菌素 单核细胞增多症李氏杆菌 酸奶 抑菌作用

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单核细胞增生李氏杆菌有强大的抵抗力

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作者 ScxottRussell 盛维新 《国外畜牧学（猪与禽）》 1997年第5期40-42,共3页

单核细胞增生李氏杆菌是一种条件性致病菌，对恶劣环境有强大的抵抗力，不大可能由食品中和加工设施中将其清除。这对加工厂的管理和公共卫生都有意义。

关键词 单核细胞增生 李氏杆菌 食品 质量控制

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家禽的单核细胞增生李氏杆菌污染

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作者 盛维新 《国外畜牧学（猪与禽）》 1997年第3期38-39,共2页

家禽中所见的单核细胞增生李氏杆菌低水平污染并不是家禽胴体有时所见这种细菌高水平污染的原因。进行良好的消毒可略微降低污染的比例。

关键词 家禽 单核细胞增生 李氏杆菌污染

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一起羊李氏杆菌病的诊断及病因分析 被引量：4

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作者 肖开提 冬不拉提 +1 位作者 白军民 兰玲 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第11期117-118,共2页

塔城某养殖户饲养羊400只,2007年2月22日饲喂驱虫药后开始发病,先后死亡30多只,3月1日实验室接到病料,我们根据临床症状、流行病学特点,结合病理剖检变化、实验室检验,诊断为羊单核细胞增生李氏杆菌病。

关键词 羊单核细胞增生李氏杆菌 诊断 病因分析

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小尾寒羊李氏杆菌病的诊治

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作者 李花太 江少龙 张爱昌 《河北农业科技》 2007年第8期46-46,共1页

1病原特征 李氏杆菌病又称转圈病，小尾寒羊发病较多，病原为单核细胞增生李氏杆菌。单核细胞增生李氏杆菌在分类上属李氏杆菌属，是一种规整革兰氏阳性小杆菌。无荚膜，无芽孢，有周身鞭毛，能运动。本菌对青霉素有抵抗力，对链霉素... 1病原特征 李氏杆菌病又称转圈病，小尾寒羊发病较多，病原为单核细胞增生李氏杆菌。单核细胞增生李氏杆菌在分类上属李氏杆菌属，是一种规整革兰氏阳性小杆菌。无荚膜，无芽孢，有周身鞭毛，能运动。本菌对青霉素有抵抗力，对链霉素、氯霉素、四环素族抗生素和磺胺类药物敏感。 展开更多

关键词 李氏杆菌病 小尾寒羊 单核细胞增生 四环素族抗生素 诊治 病原特征 药物敏感 转圈病

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李氏杆菌研究进展 被引量：21

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作者 骆学农 曹晓瑜 才学鹏 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期28-31,共4页

李氏杆菌病是一种重要的人畜共患传染病 ,主要由单核细胞增多性李氏杆菌引起 ,呈世界性分布。文章回顾了李氏杆菌的分离鉴定、培养、分型等生物学特性以及与其毒力有关的基因功能方面的研究进展 ,着重就该病诊断和检测的重要性以及 EL ... 李氏杆菌病是一种重要的人畜共患传染病 ,主要由单核细胞增多性李氏杆菌引起 ,呈世界性分布。文章回顾了李氏杆菌的分离鉴定、培养、分型等生物学特性以及与其毒力有关的基因功能方面的研究进展 ,着重就该病诊断和检测的重要性以及 EL ISA和 PCR检测方法进行了概述 。 展开更多

关键词 李氏杆菌病 人畜共患传染病 单核细胞 生物学特性 基因功能 免疫预防

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绵羊李氏杆菌病的诊治

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作者 李飞苑 吴群 《北方牧业》 2006年第7期23-23,共1页

李氏杆菌病是由单核细胞李氏杆菌引起的一种散发性传染病，常呈散发性或地方流行性。多在冬季和春季流行，李氏杆菌病不仅可引起羊、猪、兔发病，也可引起家禽发病。

关键词 李氏杆菌病 绵羊 散发性传染病 诊治 地方流行性 单核细胞 发病 家禽 猪 兔

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黄牛李氏杆菌病的病原菌临床鉴定及治疗措施 被引量：1

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作者 连杰 苗翠萍 左光大 《养殖技术顾问》 2010年第12期145-145,共1页

牛李氏杆菌病是由单核细胞增多性李氏杆菌引起牛的散发性传染病,多发生于冬季和春季,对人畜都具有较大的威胁性,不同年龄的牛均可感染,但最易感。本文将1例黄牛李氏杆菌病病原菌的临床鉴定和治疗过程进行详细阐述。

关键词 李氏杆菌病 病原菌 黄牛 单核细胞增多性李氏杆菌 治疗 鉴定 临床 散发性传染病

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浅析猪李氏杆菌病的诊断和防治 被引量：1

18

作者 杭国东 顾丽 《中国畜禽种业》 2014年第2期112-113,共2页

猪李氏杆菌病是由产单核细胞李氏杆菌引起的各种家畜及野生动物和人共患的传染病.在猪主要表现为脑膜脑炎、败血症和流产的特征.因此,要根据临床和剖检特点、鉴别诊断,制定科学的防控措施.

关键词 李氏杆菌病 鉴别诊断 防治 猪 脑膜脑炎 野生动物 单核细胞 防控措施

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家畜李氏杆菌病的流行病学与防治措施

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作者 闫明 《现代畜牧科技》 2015年第12期59-59,共1页

1病原学李氏杆菌病是由单核细胞增多性李氏杆菌所致的一种传染病，以脑膜炎、流产或败血症为特征。病原菌是单核细胞增多性李氏杆菌，从患病动物体可分得此菌的纯培养。已经鉴定的有五个血清型及若干亚型。所有血清型菌种的传染病和致... 1病原学李氏杆菌病是由单核细胞增多性李氏杆菌所致的一种传染病，以脑膜炎、流产或败血症为特征。病原菌是单核细胞增多性李氏杆菌，从患病动物体可分得此菌的纯培养。已经鉴定的有五个血清型及若干亚型。所有血清型菌种的传染病和致病性都很弱，当宿主的抵抗力降低后方能产生疾病。 展开更多

关键词 李氏杆菌病 单核细胞增多性李氏杆菌 流行病学 防治 家畜 传染病 血清型 病原学

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1株跨种裂解李氏杆菌噬菌体的分离鉴定 被引量：1

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作者 李天昊 赵学慧 +7 位作者 宋晨 委慧玲 齐玉梅 田常青 祁国军 史文静 苟惠天 薛慧文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1544-1552,共9页

本研究旨在获得天然李氏杆菌噬菌体,提供防治李氏杆菌病新型生物制剂,减少抗微生物药物的使用,抑制病原菌耐药性的产生。利用产单核细胞李氏杆菌作为宿主菌对屠宰场污水进行双层琼脂平板法筛选,获得噬菌体,并对其进行透射电镜观察、生... 本研究旨在获得天然李氏杆菌噬菌体,提供防治李氏杆菌病新型生物制剂,减少抗微生物药物的使用,抑制病原菌耐药性的产生。利用产单核细胞李氏杆菌作为宿主菌对屠宰场污水进行双层琼脂平板法筛选,获得噬菌体,并对其进行透射电镜观察、生长特性检测(温度、pH、一步生长曲线、最佳感染复数、有机溶剂影响)、基因组酶切鉴定和全基因组测序分析。分离出的产单核细胞李氏杆菌噬菌体中,选取1株裂解性强,遗传稳定的噬菌体进行后续试验,并命名为LP8;经电镜观察为肌尾科噬菌体,可以跨种裂解18株产单核细胞李氏杆菌和5株威尔斯李氏杆菌,确定LP8的最佳感染复数为1、最适生长温度为45℃、最适pH为7;在6种有机溶剂中,仅异戊醇可导致LP8活性丧失;对提取的基因组进行酶切鉴定,确定为双链DNA;LP8全基因组测序结果表明,基因组大小为87038 bp、含有120个编码基因、编码基因的累计长度为76326 bp、编码基因的平均长度为636 bp、编码区域长度占基因组的比例为87.69%。本试验分离出产单核细胞李氏杆菌噬菌体,并对其噬菌能力和应用价值进行鉴定。分离出的LP8噬菌体相较于李氏杆菌的噬菌体,细菌裂解能力更强,适应环境范围更广。本研究为实验室后续建立产单核细胞李氏杆菌噬菌体库和产单核细胞李氏杆菌噬菌体的其他应用提供了良好的基础。 展开更多

关键词 产单核细胞李氏杆菌 噬菌体 分离 鉴定

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