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四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒感染情况调查 被引量:7
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作者 任玉鹏 张焕容 +3 位作者 王小楠 索化夷 汤承 岳华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期162-166,共5页
对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃... 对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃炎症状的鸡只样本进行PCR检测,同时将扩增片段克隆测序以确定其正确性。结果表明,6个鸡群REV群体阳性率均为100%(6/6),其中外表健康鸡REV检出率为65.8%(79/120),患腺胃炎病鸡REV检出率为82.5%(33/40);同一只鸡不同组织器官样本的检测结果显示,REV在骨髓和法氏囊中的检出率最高,分别为30%(36/120)和28.3%(34/120),提示骨髓和法氏囊是REV检测的主要靶器官;患腺胃炎鸡的腺胃中REV检出率达25%(10/40),而外表健康鸡腺胃样本REV阳性率仅0.8%(1/120),表明REV是导致鸡腺胃炎的重要病原之一。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 靶器官 腺胃炎 PCR检测
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量:6
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作者 庄金秋 毕研丽 +3 位作者 梅建国 王金良 苗立中 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期36-39,共4页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量:6
3
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法检测禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量:4
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作者 黄小洁 杨承槐 +5 位作者 刘丹 陈晓春 侯力丹 李启红 李慧姣 李俊平 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第7期7-13,共7页
为快速、准确检测禽活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),根据REV p30基因上的一段保守序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法,并以常规PCR产物为标准品绘制了... 为快速、准确检测禽活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),根据REV p30基因上的一段保守序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法,并以常规PCR产物为标准品绘制了标准曲线,对方法的特异性、敏感性、重复性、与经典方法的符合率进行了评价。结果表明:扩增产物片段大小为222 bp,与预期片段大小相符,测序结果证实为REV靶序列;标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为1.0,扩增效率为94.2%,溶解温度Tm=(86.0±0.50)℃,无引物二聚体;该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,其他病原无扩增信号,特异性好;最低可检测26.97拷贝数的阳性标准品,比常规PCR敏感1000倍;组内变异系数、组间变异系数分别为0.79%-5.36%,1.61%-5.25%。运用建立的实时荧光PCR方法对17批禽用活疫苗进行检测,并与间接免疫荧光法(IFA)进行同步比较试验,结果两者符合率为100%。且实时荧光PCR法更快捷、更方便,结果判定更为直观可用于疫苗中REV污染情况的监测。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 实时荧光PCR 禽活疫苗
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量:2
5
作者 庄金秋 梅建国 +3 位作者 毕研丽 王金良 苗立中 沈志强 《中国动物检疫》 CAS 2012年第2期52-54,共3页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法。经与间接免疫荧光法进行同步比较试... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,而且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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ELISA法检测种蛋卵黄中禽网状内皮组织增生症病毒抗体的研究 被引量:2
6
作者 黄小洁 姚文生 +5 位作者 杨承槐 孙莹 安肖 任小侠 李慧姣 李俊平 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第2期7-11,共5页
为研究种蛋卵黄中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体的检测方法,运用IDEXX公司的REV抗体ELISA检测试剂盒,比较了不同提取方法、不同稀释倍数、不同洗液对卵黄中REV抗体检测结果的影响。结果显示:当用直接提取的卵黄液做300倍稀释检测,... 为研究种蛋卵黄中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体的检测方法,运用IDEXX公司的REV抗体ELISA检测试剂盒,比较了不同提取方法、不同稀释倍数、不同洗液对卵黄中REV抗体检测结果的影响。结果显示:当用直接提取的卵黄液做300倍稀释检测,用含0.05%吐温-20的蒸馏水洗涤时,卵黄抗体的S/P比值与相应鸡群的血清抗体的S/P比值吻合度最高。应用本方法分别对50枚SPF种蛋和50枚普通鸡蛋进行检测,SPF种蛋均为REV抗体阴性;普通鸡蛋有4枚为REV抗体阳性,阳性率为8%。实验表明,种蛋卵黄ELISA抗体检测法可以代替传统血清抗体检测,为SPF鸡群的REV感染监测奠定了基础。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 ELISA 卵黄抗体
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鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究 被引量:4
7
作者 孙淼 李岭 +4 位作者 李启红 夏业才 李慧姣 李俊平 杨承槐 《中国兽药杂志》 2018年第5期24-28,共5页
通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID_(50)的REV。使用该方法对国内16家企业生产的60... 通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID_(50)的REV。使用该方法对国内16家企业生产的60批鸡痘病毒活疫苗进行了检验,结果显示2个企业生产的4批疫苗REV检测为阳性。随机选取5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染的检测结果的符合率为100%。 展开更多
关键词 鸡痘病毒活疫苗 网状内皮组织增生症病毒 间接免疫荧光法
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SPF鸡感染网状内皮组织增生症病毒后血清和卵黄的抗体反应相关性比较
8
作者 黄小洁 陈晓春 +5 位作者 刘丹 朱真 侯力丹 李慧姣 李俊平 杨承槐 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第7期6-9,共4页
为进一步研究采用卵黄抗体检测代替血清抗体检测的可行性,采用已建立的卵黄抗体ELISA检测方法,比较同一时期卵黄抗体与血清抗体的相关性。人工感染23周龄无特定病原体(SPF)鸡,每周采集全血分离血清,每天收集种蛋,ELISA方法检测血清、种... 为进一步研究采用卵黄抗体检测代替血清抗体检测的可行性,采用已建立的卵黄抗体ELISA检测方法,比较同一时期卵黄抗体与血清抗体的相关性。人工感染23周龄无特定病原体(SPF)鸡,每周采集全血分离血清,每天收集种蛋,ELISA方法检测血清、种蛋中的REV抗体,并进行比较,结果表明:攻毒后第2周开始血清抗体和卵黄抗体呈阳性,并达到峰值,之后抗体水平缓慢下降,两者具有相似的消长规律;对同一时期的卵黄抗体和血清抗体S/P比值进行统计学比较,P值小于0.05,相关系数为0.931,表明两者差异性不显著,相关性很好;阴阳性符合率比较,阳性符合率为97.8%,阴性符合率为100%,总体符合率为98.4%,阴阳性复合率很高。试验证明,同一时期的卵黄抗体和血清抗体的相关性很好,可用卵黄抗体检测方法代替血清抗体检测,从而为监测SPF鸡群感染REV提供新的技术手段。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 血清 卵黄 抗体 ELISA 相关性
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禽网状内皮组织增生症病毒单抗制备及在外源病毒检测中的应用
9
作者 陈晓春 赵炜 +5 位作者 苏佳 王嘉 侯力丹 黄小洁 吴华伟 李俊平 《中国兽药杂志》 2022年第6期1-8,共8页
将禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白gp90(SU)的基因合成后连接至原核表达载体中进行表达,获得REV-SU蛋白,通过Ni柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得1株分泌特异性抗REV-SU蛋白的单克隆抗体杂交瘤细... 将禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白gp90(SU)的基因合成后连接至原核表达载体中进行表达,获得REV-SU蛋白,通过Ni柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得1株分泌特异性抗REV-SU蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞系(2A2株),该细胞株制备的腹水与不同REV毒株具有良好的反应性,荧光效价可达1∶51200,与不同禽白血病病毒毒株和其他常见禽的病原均没有交叉反应,特异性良好。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光法能检出至少5 TCID_(50)REV感染,与多克隆抗体作为检测一抗具有同等的效力,且检测背景更加纯净,适用于外源性REV检验。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 外源病毒检验 gp90 单克隆抗体 间接免疫荧光法
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禽网状内皮组织增生症病毒检测技术研究进展 被引量:1
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作者 邓小芸 《北方牧业》 2022年第18期28-28,共1页
禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发... 禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发或继发感染其他疫病。作为逆转录病毒,REV基因组容易整合到马立克病病毒、禽痘病毒等的基因组中,还能通过鸡胚污染相关疫苗。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 继发感染 马立克病病毒 禽痘病毒 感染鸡 淋巴组织 网状细胞 免疫抑制
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不可忽视的禽网状内皮组织增生症病毒
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作者 张月 兰邹然 +1 位作者 王贵升 孙圣福 《中国畜禽种业》 2012年第10期129-130,共2页
禽网状内皮组织增生症(RE)是由网状内皮组织增生症病毒引起的一种传染病,此病性质为肿瘤性,会引起病禽多种临床症状,贫血、消瘦、生长缓慢等。目前,对本病尚无有效治疗方法。因此,对REV的结构功能的研究,有效的检测鉴定技术的研发是目... 禽网状内皮组织增生症(RE)是由网状内皮组织增生症病毒引起的一种传染病,此病性质为肿瘤性,会引起病禽多种临床症状,贫血、消瘦、生长缓慢等。目前,对本病尚无有效治疗方法。因此,对REV的结构功能的研究,有效的检测鉴定技术的研发是目前禽网状内皮组织增生症防控工作的重点。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 免疫抑 鉴定检测技术
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禽网状内皮组织增生症病毒的分离鉴定、全基因序列分析及致病性试验 被引量:3
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作者 王建丽 郭凯 +6 位作者 刘正伟 刘郁夫 刘传高 赵大伟 李慧敏 董楠 陈瑞爱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期210-215,共6页
本试验采集广东某鸡场疑似禽网状内皮组织增生症患病鸡病料并进行处理,经接种DF1细胞、聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离鉴定出1株禽网状内皮组织增生症病毒(REV),命名为GD1210。依据已发表的REV前病毒全基因组... 本试验采集广东某鸡场疑似禽网状内皮组织增生症患病鸡病料并进行处理,经接种DF1细胞、聚合酶链式反应(PCR)及特异性间接免疫荧光试验(IFA),分离鉴定出1株禽网状内皮组织增生症病毒(REV),命名为GD1210。依据已发表的REV前病毒全基因组序列设计并合成6对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示,该分离株基因组序列全长8443bp。将该分离株的基因序列与国内外各参考株相应序列进行同源性比对分析,与SNV株亲缘关系最近,核苷酸同源性最高。将该分离株感染1日龄SPF鸡以鉴定其致病性,结果显示该分离株使SPF鸡产生严重的免疫抑制作用。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 序列分析 致病性
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禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测 被引量:1
13
作者 孔斌 陈雪锋 +1 位作者 唐德宏 胡敬东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期963-966,共4页
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处... 建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。 展开更多
关键词 肉鸡 网状内皮组织增生症病毒 白细胞介素18 荧光定量RT-PCR
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禽网状内皮组织增生症病毒感染雏鸡血液T细胞数量和细胞因子含量变化 被引量:1
14
作者 张国勍 边洋 +4 位作者 高海婷 刘超男 高雪丽 吕晓萍 郑世民 《动物医学进展》 北大核心 2021年第7期69-74,共6页
为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,... 为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,以及其免疫相关因子含量等动态变化的检测,系统地研究REV感染对SPF雏鸡血液细胞免疫功能的影响。结果显示,REV感染SPF雏鸡外周血液CD4+T淋巴细胞在整个试验期间均明显低于对照雏鸡(P<0.05),而CD8+T淋巴细胞数量除病毒感染后第7天明显增加(P<0.01)外,其余被检时间点均显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),CD4+与CD8+T淋巴细胞比值在病毒感染早期较对照雏鸡明显增加,而病毒感染后期显著低于对照雏鸡,与相应对照雏鸡比较,REV感染SPF雏鸡血液IL-2和IFN-γ含量明显降低(P<0.05),而IL-4和IL-10含量显著上升(P<0.05)。结果表明,REV感染所致的SPF雏鸡血液免疫功能抑制与其降低雏鸡外周血液免疫增强因子含量,增加免疫抑制因子含量及减少CD4+和CD8+T淋巴细胞数量密切相关。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 SPF雏鸡 外周血液 T淋巴细胞 细胞因子
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禽网状内皮组织增生症病毒山东SD2101株的分离鉴定及全基因组序列和致病性分析 被引量:4
15
作者 桑淼 盖小君 +5 位作者 刘玲 尹明荣 张传强 李玉燕 郭龙宗 王一新 《中国动物检疫》 CAS 2022年第6期37-43,72,共8页
禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)是一种常见的禽肿瘤性病毒,可诱发感染鸡群免疫抑制,给我国养禽业带来巨大经济损失。本试验运用DF-1细胞接种方法,在山东省某父母代白羽肉种鸡场鸡群中分离到1株REV,将其命名... 禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)是一种常见的禽肿瘤性病毒,可诱发感染鸡群免疫抑制,给我国养禽业带来巨大经济损失。本试验运用DF-1细胞接种方法,在山东省某父母代白羽肉种鸡场鸡群中分离到1株REV,将其命名为SD2101株。为掌握SD2101株基因组遗传演化特征,设计合成6对引物,通过PCR扩增获得了SD2101株的前病毒全基因组序列,并与GenBank下载的参考毒株进行了序列比对和遗传进化分析。结果显示:SD2101株前病毒全基因组具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构,与2011年分离自江苏省的鸡源REV野毒株HA1101同源性最高;遗传进化分析发现,SD2101株与大部分国内分离株处于同一进化支上。为了解SD2101株的致病性,将分离毒株接种于1日龄SPF鸡,通过体质量、免疫器官指数和灭活疫苗免疫应答等指标进行评价。结果显示,SD2101株对1日龄SPF鸡的生长和免疫功能具有明显的抑制作用。综上,与参考毒株相比,SD2101株基因组序列变异程度较小,具有一定致病作用,提示在生产中应加强对REV的关注和监测。本研究为REV的流行病学研究提供了信息资料。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 分离鉴定 序列分析 致病性
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基于p30-gp90融合蛋白的禽网状内皮组织增生症病毒抗体间接ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 栾晓宁 郭龙宗 +3 位作者 马广斌 李玉燕 王一新 巩新民 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期107-114,共8页
禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表... 禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表达了重组REV p30-gp90融合蛋白,随后建立了基于该融合蛋白的REV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA),并对反应条件进行了优化。结果显示,p30-gp90间接ELISA的灵敏度(1:51200)是间接免疫荧光法(IFA)(1:6400)的8倍,与其他常见禽类病毒无交叉反应,且具有良好的批内和批间重复性。对从山东省部分地区养殖场采集的690份血清样品,同时利用p30-gp90间接ELISA和IFA进行检测,发现20.87%的血清样品经间接ELISA检测为阳性,间接ELISA和IFA的总体符合率为96.96%。结果表明,本研究建立的间接ELISA检测方法具有特异性强、敏感性高和重复性好的优势,为REV的快速诊断、流行病学调查和血清学监测提供了技术支持。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 p30-gp90融合蛋白 间接ELISA 抗体
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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定 被引量:5
17
作者 姜莉莉 祁小乐 +9 位作者 高玉龙 邓小芸 柴洪亮 张礼洲 贠炳岭 秦立廷 王永强 高宏雷 王笑梅 华育平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1277-1282,共6页
利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV... 利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5%;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7%、94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2%、93.7%和97.7%;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7%和94.2%;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2%~100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。 展开更多
关键词 野鸟 网状内皮组织增生病毒 分离 鉴定
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网状内皮组织增生症病毒改良型LAMP检测方法的建立
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作者 曾婷婷 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 刘加波 庞耀珊 范晴 罗思思 邓显文 谢志勤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期30-34,共5页
根据网状内皮组织增生症病毒的基因,设计一套环介导等温扩增LAMP)引物,在此基础上加入一条加速引物,进行LAMP反应,优化反应条件,进行特异性和敏感性试验,同时与不加入加速引物的体系比较其敏感性。经过反应条件优化,可通过肉眼观察颜色... 根据网状内皮组织增生症病毒的基因,设计一套环介导等温扩增LAMP)引物,在此基础上加入一条加速引物,进行LAMP反应,优化反应条件,进行特异性和敏感性试验,同时与不加入加速引物的体系比较其敏感性。经过反应条件优化,可通过肉眼观察颜色直接判定结果,在1h内完成整个反应,改良型LAMP检测的敏感性最低达到7fg,是普通PCR方法的200倍,对其他常见免疫抑制性病原体的检测结果均为阴性。本试验建立的检测网状内皮组织增生症病毒的改良型LAMP方法,具有良好的特异性和敏感性,可以在短时间内检测网状内皮组织增生症病毒,在基层兽医工作中具有良好的诊断应用价值。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 改良型环介导等温扩增 可视化检测 加速引物
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3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较
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作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期80-85,共6页
为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量... 为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7~70日龄鸡(每隔1周)的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。结果显示:对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。对7~70日龄鸡(每隔1周)进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方法检测REV人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒情况,为实施REV净化奠定了基础。 展开更多
关键词 网状内皮组织增殖病毒 病毒分离 RT-PCR 荧光定量RT-PCR
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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展 被引量:11
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作者 邓小芸 祁小乐 +4 位作者 高玉龙 高宏雷 秦立廷 王永强 王笑梅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期93-96,共4页
禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症 流行 感染 基因重组 检测技术
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