抗结核治疗中患者外周结核分枝杆菌抗原水平与特异性免疫应答相关性分析 被引量：12

1

作者 梁宇硕 陈颖盈 +4 位作者 蔡潭溪 季萍 胡晔 程齐俭 王颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期203-209,共7页

目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原... 目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原特异性T细胞应答水平的动态变化,探讨外周抗结核特异性细胞免疫应答的理论依据。方法:利用外周血抗原富集-质谱鉴定技术动态检测外周血浆中结核特异性抗原CFP-10在患者抗结核治疗过程中含量的动态变化,并采用流式细胞术同步分析CFP-10刺激后的T细胞应答水平,分析CFP-10含量变化与不同细胞因子分泌T细胞数量的相关性。结果:CFP-10抗原水平在患者治疗过程中呈现个体化差异,同时在TB治疗中CFP-10含量与CFP-10特异性IFN-γ^+CD4^+T细胞比例具有显著相关性(P=0.029),但是CFP-10的含量与TNF-α^+CD4^+T细胞比例之间则无相关性(P=0.98)。结论:本研究获得了结核病患者治疗过程中外周结核病原菌抗原的动态变化特征,据此可推断目前所采用的IFN-γ释放实验某种程度上可以反映患者外周结核分枝杆菌抗原的载量,上述基于结核病原学和机体免疫应答水平的同步检测,有利于进一步解析抗结核免疫应答的抗原驱动因素,并为建立新型抗结核治疗疗效评价的生物标志物提供前期理论依据。 展开更多

关键词 结核病 结核分枝杆菌特异性抗原 CFP-10 抗原特异性细胞免疫反应

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结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值 被引量：7

2

作者 周鹏 丁莹莹 +7 位作者 林子玉 冯娇娇 高彩霞 王锦红 杨华 温宗梅 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1404-1409,共6页

目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病... 目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637-731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Rv3388 特异性 敏感性

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结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数鉴别儿童活动性结核病与潜伏结核感染的价值 被引量：11

3

作者 田建岭 刘晓灵 +8 位作者 孙琳 焦伟伟 肖婧 尹青琴 吴喜蓉 郭雅洁 韩锐 李勤静 申阿东 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2013年第4期272-276,共5页

目的通过γ干扰素释放试验探讨结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数(简称T细胞斑点数)鉴别儿童活动性结核病(TB)与潜伏结核感染(LTBI)的价值。方法纳入T细胞斑点试验(T.SPOT.TB)阳性且未经过抗结核治疗的93例活动性TB(重症TB27例,非重症T... 目的通过γ干扰素释放试验探讨结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数(简称T细胞斑点数)鉴别儿童活动性结核病(TB)与潜伏结核感染(LTBI)的价值。方法纳入T细胞斑点试验(T.SPOT.TB)阳性且未经过抗结核治疗的93例活动性TB(重症TB27例,非重症TB66例)和47例LTBI儿童,根据T.SPOT.TB结果对T细胞斑点数进行比较分析。结果活动性TB组T细胞斑点数中位数84(6～710)显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;非重症TB患儿的T细胞斑点数中位数为99(6～710),显著高于重症TB的44(6～268),P=0.011,也显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;重症TB儿童T细胞斑点数中位数高于LTBI组儿童(44vs17),但差异无统计学意义(P=0.084),T细胞斑点数分布在活动性TB、重症TB、非重症TB和LTBI之间均有较大范围重叠。受试者工作特征曲线分析显示以T细胞斑点数43.5作为区分活动性TB与LTBI的最佳界值,其敏感度与特异度分别为69.9%和70.2%。结论 T细胞斑点数在活动性TB尤其是非重症TB患儿显著高于LTBI儿童;T细胞斑点数的数量可反映体内的结核分枝杆菌负荷,但不能用于区分儿童活动性TB与LTBI。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌特异性效应T细胞 儿童 活动性结核病 潜伏结核感染 Γ干扰素释放试验

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结核分枝杆菌DnaG引物酶与ssDNA模板相互作用的研究 被引量：1

4

作者 陈江 罗昊 +2 位作者 张知明 宋旭 王刚刚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1920-1934,共15页

目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引物酶DnaG(MtuDnaG)在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用,因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚,这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定M... 目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引物酶DnaG(MtuDnaG)在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用,因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚,这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定MtuDnaG结合模板的特异性识别位点,探讨MtuDnaG与ssDNA模板之间的相互作用。方法本研究以MtuDnaG的双结构域蛋白MtuP49(包含了锌指结合结构域和RNA聚合酶结构域)为研究对象,利用生物化学和生物物理学方法,研究MtuDnaG与含不同三联体的ssDNA模板之间的相互作用,鉴定MtuDnaG的特异性识别位点。结果5'-GCG/C-3'三联体可能是MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点。此外,在结核分枝杆菌基因组的复制起始点附近也存在可以与MtuP49特异结合的5'-GCG/C-3'位点,其3'端侧翼序列显著影响ssDNA与MtuP49的亲和力。突变实验表明,位于锌指结合结构域中的Arg31对MtuP49结合ssDNA的活性具有重要贡献。基于预测的MtuP49结构,推测在MtuP49结合模板ssDNA过程中,锌指结合结构域会发生分子内重排。结论本研究首次鉴定了MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点,揭示了影响MtuDnaG与模板ssDNA相互作用的主要因素。本文的研究结果不但有助于阐明MtuDnaG起始引物合成的机制,也为靶向DnaG的新型抗结核药物开发提供了新的信息。 展开更多

关键词 引物酶DnaG 结核分枝杆菌 特异性识别位点 结构域重排 DNA复制

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结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径 被引量：7

5

作者 侯彦强 李柏青 +1 位作者 胡建国 陈勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期530-533,共4页

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧... 目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原特异性 ΓΔT细胞 活化信号 Ras/Erk

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胶体金法结合涂片形态学特征快速鉴别结核分枝杆菌复合群的应用评价 被引量：5

6

作者 黄明翔 张丽水 +1 位作者 陈新朝 毛文捷 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第12期830-834,共5页

目的探讨结核分枝杆菌抗原胶体金法结合涂片形态学特征鉴别结核分枝杆菌复合群的应用价值。方法采用涂片形态学特征和结核分枝杆菌抗原胶体金法对853株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并与传统菌种鉴定结果进行比较。结果涂片法鉴别结核分... 目的探讨结核分枝杆菌抗原胶体金法结合涂片形态学特征鉴别结核分枝杆菌复合群的应用价值。方法采用涂片形态学特征和结核分枝杆菌抗原胶体金法对853株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并与传统菌种鉴定结果进行比较。结果涂片法鉴别结核分枝杆菌的敏感度为98.4%(750/762),特异度为96.7%(88/91);胶体金试验鉴别结核分枝杆菌的敏感度为99.0%(754/762),特异度为98.9%(90/91);两种方法均为阳性,可报告菌株中含有结核分枝杆菌复合群(MTC),其阳性预测值为100.0%(741/741);两种方法均为阴性,可报告非结核分枝杆菌(NTM),其阴性预测值为100.0%(87/87)。结论结合涂片形态和结核分枝杆菌抗原胶体金两种方法鉴别结核分枝杆菌可以提高检测的准确性,是一种快速、简便,适于各级实验室使用的方法。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌 非典型性 胶体金 细菌学技术 敏感性与特异性

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结核杆菌特异性诊断抗原的研究 被引量：6

7

作者 宫强 刘思国 《中国动物检疫》 CAS 2003年第6期45-47,共3页

关键词 结核杆菌 特异性诊断 抗原 细菌学 临床症状 血清学 人类 动物

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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究 被引量：97

8

作者 张治国 欧喜超 +3 位作者 孙倩 杜春英 高铁杰 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第1期13-16,共4页

目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能。方法选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和XpertMtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰... 目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能。方法选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和XpertMtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本中Mtb及其耐药性的敏感度和特异度。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度为95.0%(345/363)和89.6%(147/164),以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.1%(41/46)和96.3%(289/300)。结论Xpert Mtb/RIF检测敏感度和特异度较高,在Mtb及其利福平耐药快速检测方面具有比较好的应用前景。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 利福平 抗药性 细菌 核酸扩增技术 敏感性与特异性

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两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究 被引量：27

9

作者 李晓非 赵勤 +1 位作者 汪亚玲 余文林 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第5期267-270,共4页

目的评价新的国产结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒(TB-IGRA)——体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性。方法采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检... 目的评价新的国产结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒(TB-IGRA)——体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性。方法采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检测,同时与澳大利亚Cellestis公司的QuantiFERON-TB GOLDin tube(QFT-GIT)试剂进行平行比较分析。结果采用TB-IGRA试剂,检测肺结核病人的敏感性为90.9%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为76.9%;采用QFT-GIT试剂,检测肺结核病人的敏感性为88.4%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为80.4%,2种试剂进行平行比较,敏感性和特异性方面差异无统计学意义。结论 TB-IGRA试剂盒对诊断结核病有较高的敏感性和特异性,可用于结核病尤其是涂阴肺结核和肺外结核的辅助诊断。 展开更多

关键词 结核/诊断 分枝杆菌 结核 干扰素Ⅱ型 试剂盒 诊断 敏感性与特异性

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环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的系统评价 被引量：13

10

作者 于霞 马异峰 +3 位作者 付育红 刘冠 王晓波 黄海荣 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第4期260-266,共7页

目的采用Meta分析的方法评价环介导等温扩增法（LAMP）检测临床标本中结核分枝杆菌的准确性。方法通过检索PubMed、Embase、WebofScience、CochraneLibrary、CNKI、万方、维普数据库广泛收集文献，根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献... 目的采用Meta分析的方法评价环介导等温扩增法（LAMP）检测临床标本中结核分枝杆菌的准确性。方法通过检索PubMed、Embase、WebofScience、CochraneLibrary、CNKI、万方、维普数据库广泛收集文献，根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量，最终纳入16篇相关文献，共计18项研究。应用Meta—Disc软件对环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度、诊断比值比进行合并分析，对纳入的研究绘制受试者工作特征曲线。对纳入的研究进行异质性检验，采用Meta回归分析异质性的来源。Meta回归会生成相对诊断比值比（relativediagnosticoddsratios，RDOR）。当RDOR〉1．0，表明某个研究特征比没有这个特征的诊断准确性要高。结果最终纳入16篇文献，共计18项研究综合分析所有数据，合并敏感度为0．91（95％CI：0．90～0．93）；合并特异度为0．97（95％CI：0．96～0．97）；合并诊断比值比为283．02（95％CI：157．37～509．00）；受试者工作曲线曲线下面积为0．9829。研究间异质性来源与结果判断相关，紫外灯判读试验的精确性比肉眼判读试验的精确性高5．66倍（RDOR--5．66，95％CI：1.32-24．22，P=0．0225）。结论对纳入的研究分析证实，环介导等温扩增法检测临床标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度很高，表明该方法在结核病的快速诊断方面具有优势。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 核酸扩增技术 敏感性与特异性

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rRNA扩增方法对结核分枝杆菌临床诊断作用的评估 被引量：8

11

作者 夏辉 尚美 +7 位作者 刘冠 李辉 王海英 闫国蕊 杨红艺 马晓光 景辉 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第9期576-580,共5页

目的评价rRNA扩增方法在临床应用的效果。方法选取到北京胸科医院、山东省胸科医院、河南疾控中心结核病防治所3个机构就诊的肺结核可疑症状者及健康志愿者的痰标本为研究对象,共纳入551例痰标本,对每例痰标本均进行涂片显微镜检查、罗... 目的评价rRNA扩增方法在临床应用的效果。方法选取到北京胸科医院、山东省胸科医院、河南疾控中心结核病防治所3个机构就诊的肺结核可疑症状者及健康志愿者的痰标本为研究对象,共纳入551例痰标本,对每例痰标本均进行涂片显微镜检查、罗氏培养、rRNA扩增试验以及实时荧光定量PCR。与罗氏培养方法比较分析rRNA扩增方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值以及与实时荧光定量PCR扩增方法的一致性。结果 rRNA扩增方法的敏感性为98.5%,特异性为95.0%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值为98.5%,rRNA扩增方法在涂阳标本和涂阴标本间的敏感度和特异度差异均有统计学意义(χ2=9.60,P=0.002;2χ=79.80,P<0.01)。与PCR检测结果的一致性为93.8%,涂阳和涂阴标本中2种方法的一致性差异有统计学意义(2χ=4.45,P=0.035)。结论 rRNA扩增方法的敏感度和特异度均较好,且能明显缩短诊断时间,该方法是一种较有前景的结核病实验室诊断方法。 展开更多

关键词 结核 肺/诊断 分枝杆菌 结核 rRNA扩增技术 敏感性与特异性

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结核分枝杆菌胶体金法快速鉴别试剂盒的临床应用观察 被引量：4

12

作者 王易伟 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第5期468-469,共2页

关键词 结核分枝杆菌 特异性 结核杆菌 分枝杆菌属 试剂盒 胶体金法 快速鉴别

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结核分枝杆菌Rv0440 CTL表位肽的免疫原性研究 被引量：2

13

作者 王海霞 孙燕妮 +3 位作者 王甦民 赵亭 平国玲 张力平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期489-493,共5页

目的体外鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0440蛋白序列中表位肽362-370aa和369-377aa的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据。方法根据T2细胞HLA-A*0201分子与多肽结合力... 目的体外鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0440蛋白序列中表位肽362-370aa和369-377aa的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据。方法根据T2细胞HLA-A*0201分子与多肽结合力分析实验结果,选取结核分枝杆菌Rv0440蛋白质氨基酸序列中对HLA-A*0201分子高亲合力的Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)和Rv0440-2(369-377aa,KLAGGVAVI)作为候选表位肽。用候选表位肽刺激PPD(+++)健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)检测细胞分泌IFN-γ的水平。用候选表位肽诱导特异性CTL细胞,检测特异性CTL细胞对负载表位肽的T2细胞的杀伤活性,观察Rv0440-1和Rv0440-2的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性。结果 ELISPOT实验结果显示,表位肽Rv0440-1能够明显诱导HLA-A*0201(+)、PPD(+++)健康志愿者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05);且表位肽Rv0440-1负载DC诱导的CTL在效靶比为10∶1时对负载相应表位肽的T2细胞的特异性杀伤活性高于对照组(P<0.05);与对照组相比,表位肽Rv0440-2没有诱导能力。结论表位肽Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)具有良好的免疫原性,是有效的结核分枝杆菌的HLA-A*0201限制性CTL表位。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 表位肽 CD8+CTL 特异性杀伤活性

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LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响 被引量：6

14

作者 赵勇 梁丽丽 江南 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第8期744-751,共8页

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例... 目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 RNA探针 生长停滞特异性转录本5 分枝杆菌 结核 巨噬细胞

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荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的研究 被引量：10

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作者 王嫩寒 田丽丽 +11 位作者 陈双双 赵琰枫 樊瑞芳 陈昊 任怡宣 张洁 易俊莉 杨新宇 于兰 丁北川 李传友 代小伟 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第6期583-588,共6页

目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve,MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊... 目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve,MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的GeneXpert MTB/RIF检测阳性的初治肺结核患者的痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术利福平耐药性检测。分析痰标本荷菌量对MeltPro技术耐药性检测结果的影响;培养阳性菌株行利福平比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),比较比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF和MeltPro技术检测利福平耐药率的差异;并以培养阳性菌株利福平比例法药敏试验结果为参考标准,评价MeltPro技术耐药性检测的效能。结果:研究共收集结核分枝杆菌阳性合格痰标本158份(例),经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。MeltPro技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药的成功率为79.1%(125/158),且随着痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”的59.3%(32/54)上升至“+++”标本的100.0%(18/18);同时,随着GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌等级的升高,检测成功率也由“极低”的64.5%(20/31)上升至“高”的92.9%(26/28),各等级间差异均有统计学意义(H=22.271,P=0.001;H=15.637,P=0.001)。MeltPro技术的利福平耐药检出率为17.6%(22/125),GeneXpert MTB/RIF方法的利福平耐药检出率为12.7%(20/158),比例法药敏试验的利福平耐药检出率为13.1%(17/130),三者比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.537,P=0.464)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,MeltPro技术和GeneXpert MTB/RIF方法检测利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为100.0%(17/17)、94.6%(88/93)、77.3%(17/22)、100.0%(88/88)、0.845和100.0%(17/17)、97.3%(110/113)、85.0%(17/20)、100.0%(110/110)、0.906。结论:MeltPro技术检测肺结核患者痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的敏感度和特异度均较高,可快速准确筛查患者利福平耐药情况,但在基层实验室推广应用时需注意痰标本的质量。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 聚合酶链反应 抗药性 敏感性与特异性

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荧光PCR探针熔解曲线技术检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的价值 被引量：17

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作者 赵国连 崔晓利 +2 位作者 康磊 刘元 党丽云 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第2期149-155,共7页

目的评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB/RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT ... 目的评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB/RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养、表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并应用MeltPro法检测痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼、二线注射类和氟喹诺酮类等抗结核药物的耐药性,并以表型药敏试验为标准,评价MeltPro法的检测效能。结果以表型药敏试验结果为标准,MeltPro法检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为98.7%(76/77)和94.2%(343/364),检测对异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为82.3%(102/124)和96.2%(304/316),检测对阿米卡星耐药性的敏感度和特异度分别为8/9和99.5%(432/434),检测对卷曲霉素耐药性的敏感度和特异度分别为6/7和99.1%(432/436),检测对左氧氟沙星耐药性的敏感度和特异度分别为90.6%(48/53)和99.2%(386/389),检测对莫西沙星耐药性的敏感度和特异度分别为88.1%(37/42)和96.5%(386/400)。以表型药敏试验结果为标准,GeneXpertMTB/RIF检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为94.8%(73/77)和94.0%(342/364)。GeneXpert-MTB/RIF和MeltPro法与表型药敏试验结果一致性均较好(Kappa值分别为0.81和0.84),但MeltPro法检测效能与表型药敏试验检测结果的一致性更高。结论MeltPro法检测涂阳患者痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼,以及二线注射类和氟喹诺酮类抗结核药物耐药性有较好的效能。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 微生物敏感性试验 分子探针技术 结核 抗多种药物性 敏感性与特异性 对比研究

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结核分枝杆菌基因敲除技术的研究进展 被引量：4

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作者 王海宁 金珊珊 +3 位作者 徐正中 王蕾 焦新安 陈祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期928-933,共6页

结核分枝杆菌是十分重要的人兽共患病原菌,基因缺失株的构建在该菌致病与免疫机制、基因功能解析和防控技术中意义重大,而该菌特有的复杂结构和生理生化特性也给缺失株的构建带来难度,为此有关结核分枝杆菌基因敲除技术的研究一直是重... 结核分枝杆菌是十分重要的人兽共患病原菌,基因缺失株的构建在该菌致病与免疫机制、基因功能解析和防控技术中意义重大,而该菌特有的复杂结构和生理生化特性也给缺失株的构建带来难度,为此有关结核分枝杆菌基因敲除技术的研究一直是重要课题。本文重点介绍了结核分枝杆菌基于特异性转导噬菌体、线性DNA片段、反选择标记、CRISPR技术以及ORBIT系统的基因敲除方法,同时对分枝杆菌的分子遗传操作发展进行了展望。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 基因敲除 特异性转导 线性DNA片段 反选择标记 CRISPR ORBIT

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IS6110基因缺失结核分枝杆菌感染的肺结核一例 被引量：1

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作者 谈小文 王媛 +4 位作者 崔晓利 党丽云 雷静 任斐 赵国连 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第3期302-304,共3页

分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强和时效性高等特点,成为结核病快速诊断的重要检测手段。对于分子生物学检测,寻找检测效率高且存在特异性的靶基因尤为重要,分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是确保检测结果准... 分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强和时效性高等特点,成为结核病快速诊断的重要检测手段。对于分子生物学检测,寻找检测效率高且存在特异性的靶基因尤为重要,分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是确保检测结果准确性和高效性的重要因素。 展开更多

关键词 分子生物学检测 种属特异性 结核分枝杆菌感染 快速诊断 肺结核 结核病 分子检测 检测敏感度

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分枝杆菌病患者抗干扰素γ自身抗体识别的主要抗原表位的鉴定

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作者 范冲竹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2146-2146,共1页

分枝杆菌病患者中,自身抗体与干扰素γ（IFN-γ）的结合已成为一个新兴的医学关注点。许多临床患者表现为特定的人白细胞抗原Ⅱ类单倍型,表明一个T细胞依赖性和B细胞依赖性的共同机制可能是产生特异性抗IFN-γ自身抗体的基础。

关键词 自身抗体 分枝杆菌病 抗原表位 干扰素Γ 人白细胞抗原 临床患者 特异性 单倍型 靶向 蛋白免疫

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携带结核杆菌Ag85B靶细胞的构建、鉴定及应用 被引量：1

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作者 李惠 王利娴 +1 位作者 卢贤瑜 阳强 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期214-217,共4页

目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表... 目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表达水平;同时,用接种过BCG,pTB30s或生理盐水(NS)小鼠脾脏单个核细胞作为效应细胞,G418高压筛选的阳性克隆细胞为靶细胞,用MTT法检测各组CTL杀伤活性。结果RT-PCR以及免疫组化结果显示,阳性细胞能稳定表达Ag85B。CTL杀伤实验:BCG、pTB30s及NS对照组杀伤率分别为28.14%、45.18%和5.13%。结论含有Ag85B靶细胞构建成功及应用,为研究结核疫苗的免疫效果提供了较好的研究手段。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B 特异性CTL杀伤活性

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