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结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达模型的建立及鉴定 被引量:3
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作者 董江涛 徐芳 +6 位作者 田玺择 姚楠 吴芳 章乐 王远志 曹旭东 张万江 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第2期198-201,共4页
为了建立及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。采用将0.3mL浓度约为1.0×107个/mL结核分枝杆菌菌悬液经昆明小鼠尾静脉注射,复制结核分枝杆菌感染小鼠模型,经鉴定小鼠... 为了建立及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。采用将0.3mL浓度约为1.0×107个/mL结核分枝杆菌菌悬液经昆明小鼠尾静脉注射,复制结核分枝杆菌感染小鼠模型,经鉴定小鼠感染模型复制成功后第15天,进行小鼠肺泡的灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取感染小鼠肺泡巨噬细胞,以提取的感染小鼠肺泡巨噬细胞内的结核分枝杆菌基因组DNA为模版PCR扩增结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3的基因,同时进一步利用激光共聚焦显微镜观察小鼠肺泡巨噬细胞的方法进行研究。PCR结果证实感染结核分支杆菌的巨噬细胞内有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的基因表达;同时激光共聚焦显微镜下可见感染小鼠肺泡巨噬细胞内吞噬有大量结核分枝杆菌,并且证实有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的分泌表达。成功建立了结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 肺泡巨噬细胞 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白hsp16.3 表达 模型
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结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的高效自发再折叠和再组装 被引量:5
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作者 毛启龙 冯修光 昌增益 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期87-90,共4页
来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色... 来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色性光谱比较了变性 复性前后Hsp16 3的各个层次高级结构 .结果显示 ,变性的Hsp16 3几乎可以完全恢复至天然构象 ,这表明小分子热休克蛋白Hsp16 3具有很强的自发折叠和组装能力 . 展开更多
关键词 休克蛋白 变性 复性 再折叠 再组装 结核杆菌 hsp16.3 分子
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结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究 被引量:12
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作者 师长宏 江鹰 +4 位作者 赵勇 毛峰峰 张彩琴 白冰 张海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1301-1303,共3页
目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬... 目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 自噬 休克蛋白hsp16.3 微管相关蛋白轻链3
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结核分枝杆菌Hsp16.3刺激小鼠巨噬细胞向M2分化 被引量:8
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作者 李姗姗 秦欢 +6 位作者 丁陈波 李龙梅 刘梅 李娜娜 张继东 徐林 罗军敏(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1595-1600,共6页
目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Mycobacterium tuberculosis heat shock proteins 16.3,MTB Hsp16.3)在体外细胞水平对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞的影响作用。方法:从BALB/c小鼠的胫股骨中取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获取骨髓来源... 目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Mycobacterium tuberculosis heat shock proteins 16.3,MTB Hsp16.3)在体外细胞水平对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞的影响作用。方法:从BALB/c小鼠的胫股骨中取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获取骨髓来源的M0型巨噬细胞,流式检测CD11b和F4/80的表达;分别用IFN-γ、IL-4诱导M0型巨噬细胞,光镜下观察细胞形态,荧光定量PCR、ELISA检测各组细胞IL-12、TNF-α、i NOS、IL-10、TGF-β、Arg-1的表达情况,构建小鼠骨髓来源M1/M2型巨噬细胞的技术平台;用MTB Hsp16.3刺激M0、M1型巨噬细胞,分别孵育24、48、72、96 h,采用ELISA、qRT-PCR检测不同时间点细胞培养液上清和细胞内的IL-12、TNF-α、i NOS、IL-10、IL-4、TGF-β、Arg-1的表达情况。结果:光镜下观察M0型巨噬细胞形态不规则,细胞伪足较短;M1型巨噬细胞形状呈长梭形,并有伪足伸出现,突触很长;M2型巨噬细胞伪足较短,细胞整体形态较为收拢。FCM检测有90%以上的骨髓细胞细胞具有CD11b和F4/80双阳性的特征。ELISA和qRT-PCR检测发现,M1型巨噬细胞高表达IL-12、TNF-α、i NOS;M2型巨噬细胞高表达IL-4、TGF-β、IL-10、Arg-1。MTB Hsp16.3刺激巨噬细胞后,M0和M1型巨噬细胞均高表达IL-10、TGF-β,低表达TNF-α、i NOS,且在48-72 h增加或降低的水平达到峰值。结论:成功诱导了小鼠骨髓来源的M1、M2型巨噬细胞;MTB Hsp16.3促进M1型巨噬细胞高表达M2型相关的细胞因子,可促进M1型巨噬细胞向M2型样巨噬细胞转换。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 巨噬细胞 结核分枝杆菌休克蛋白16.3
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Hsp16.3在结核分枝杆菌潜伏感染中的作用 被引量:1
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作者 张彩勤 师长宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期493-497,共5页
结核病(Tuberculosis,TB)主要是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的细菌感染性疾病.当宿主免疫力减弱,潜伏感染的Mtb得以复苏,导致TB感染的复发.巨噬细胞自噬作为宿主先天性和适应性免疫反应的重要组成部分,在保护宿主... 结核病(Tuberculosis,TB)主要是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的细菌感染性疾病.当宿主免疫力减弱,潜伏感染的Mtb得以复苏,导致TB感染的复发.巨噬细胞自噬作为宿主先天性和适应性免疫反应的重要组成部分,在保护宿主抗Mtb感染方面发挥着重要作用.热休克蛋白16.3(Hsp16.3)是Mtb潜伏感染(LTBI)期间表达的重要蛋白,它可能通过抑制巨噬细胞自噬而维持Mtb长期生存,从而导致LTBI的发生.本文综述了Hsp16.3在LTBI中调控巨噬细胞自噬的作用,期望Hsp16.3能够成为LTBI的生物标志物和抗结核药物的新靶点. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 潜伏感染 自噬 休克蛋白16.3
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重组结核分枝杆菌Hsp16.3的纳米金免疫传感器检测Hsp16.3抗体
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作者 贺靖 杨双 +4 位作者 刘娟 刘达琳 郭婧玮 谭云洪 袁仕善 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第4期42-47,共6页
克隆和表达结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Hsp16.3),建立纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体。PCR扩增hsp16.3基因,构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,表达和纯化Hsp16.3,Western blot分析其反应原性;晶种生长法制备金纳米棒并连... 克隆和表达结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Hsp16.3),建立纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体。PCR扩增hsp16.3基因,构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,表达和纯化Hsp16.3,Western blot分析其反应原性;晶种生长法制备金纳米棒并连接Hsp16.3,建立纳米金免疫传感器检测血清Hsp16.3抗体,接受者操作特性(ROC)曲线评价其灵敏度和特异性。成功构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,纯化Hsp16.3具有良好的反应原性;Hsp16.3的纳米金免疫传感器分别检测50例结核病患者、42例非结核肺病患者和50例体检健康者血清,红移值大于3.5的例数分别为42、7、1例;ROC曲线显示,曲线下面积0.888(P<0.01),界值3.5,灵敏度82%,特异性98%。结果表明,Hsp16.3的纳米金免疫传感器可用于检测结核病血清Hsp16.3抗体。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 休克蛋白16.3 纳米金免疫传感器 结核 检测
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Leu122对Hsp16.3组装过程中亚基相互作用的影响 被引量:2
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作者 黄素芳 古良才 +1 位作者 毛启龙 昌增益 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期99-104,共6页
小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp... 小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp16 3及其L12 2A突变体蛋白为模型 ,采用高效液相分子筛层析、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和脲梯度凝胶电泳等方法进行研究 .结果表明 ,Hsp16 3在体外能自发地再组装成九聚体 .12 2位的亮氨酸残基对Hsp16 3体外再组装过程中的亚基相互作用有重要的影响 ,并且在Hsp16 3的组装过程中 ,亚基之间的相互识别是高度灵敏和特异的 ,野生型蛋白的亚基和L12 2A突变体蛋白的亚基并不能形成杂合体 。 展开更多
关键词 小分子热休克蛋白 组装 杂合中间体 亚基相互作用 亚基特异性识别 Leu122 hsp16.3
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