兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体的制备和应用 被引量：1

1

作者 袁露 徐文华 +5 位作者 葛婷婷 周慧萍 杨玲 杨凡 牛长敏 郑英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期846-851,共6页

目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫... 目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用组氨酸融合蛋白纯化柱纯化蛋白,使用梯度浓度的尿素复性原核蛋白。蛋白复性后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫完成后ELISA测定多克隆抗体效价,应用Western blot及免疫荧光染色分析多克隆抗体的有效性与特异性。结果 成功构建了pET-30a-IQUB重组质粒,并通过IPTG诱导成功表达了原核蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶1 000 000,制备的多克隆抗体能识别成年野生型小鼠睾丸组织中的内源性IQUB蛋白,IQUB在成年小鼠睾丸的各级生精细胞表达,在成熟精子中定位于顶体及鞭毛。结论 成功制备出高特异性的兔抗小鼠IQUB多克隆抗体,可用于Western blot及免疫荧光组织化学染色。 展开更多

关键词 含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB) 多克隆抗体 精子发生

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DYRK1A参与急性髓系白血病细胞阿糖胞苷耐药的机制研究

2

作者 冯佳巍 于洪娟 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第3期648-652,共5页

目的:探讨DYRK1A在急性髓系白血病细胞阿糖胞苷(Ara-C)耐药机制中的作用。方法:在THP-1细胞中过表达及沉默DYRK1A基因,观察THP-1细胞对Ara-C敏感性是否发生改变。RT-PCR检测Ara-C转运或代谢过程中相关基因m RNA表达变化。Western blot及... 目的:探讨DYRK1A在急性髓系白血病细胞阿糖胞苷(Ara-C)耐药机制中的作用。方法:在THP-1细胞中过表达及沉默DYRK1A基因,观察THP-1细胞对Ara-C敏感性是否发生改变。RT-PCR检测Ara-C转运或代谢过程中相关基因m RNA表达变化。Western blot及RT-PCR检测调节DYRK1A对Ara-C处理细胞SAMHD1表达的影响。免疫共沉淀技术检测Cyclin L2与DYRK1A及SAMHD1之间的相互作用。结果:过表达DYRK1A组THP-1细胞对Ara-C敏感性下降,而基因沉默组对Ara-C敏感性上升。DYRK1A过表达及沉默不影响Ara-C转运或代谢基因表达。过表达DYRK1A可以增加细胞内SAMHD1的表达,而沉默DYRK1A降低SAMHD1表达。Cyclin L2与DYRK1A及SAMHD1在THP-1细胞内存在相互作用。结论:DYRK1A参与急性髓系白血病细胞Ara-C耐药,其机制可能是通过与Cyclin L2相互作用,增加SAMHD1表达。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1A 阿糖胞苷耐药 细胞周期蛋白L2 不育ɑ基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1

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丙酮丁醇梭菌钙离子结合蛋白多样性研究

3

作者 董雨衡 毛国涛 +3 位作者 谢慧 张宏森 王风芹 宋安东 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期254-261,共8页

为了探讨钙离子对产溶剂梭菌的影响,通过生物信息学方法对丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824进行蛋白质组学分析,预测可能存在的钙离子结合蛋白(calcium binding proteins,CaBPs)。利用EF手型(EF-hand)、希腊钥匙(Greek ... 为了探讨钙离子对产溶剂梭菌的影响,通过生物信息学方法对丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824进行蛋白质组学分析,预测可能存在的钙离子结合蛋白(calcium binding proteins,CaBPs)。利用EF手型(EF-hand)、希腊钥匙(Greek key)、β桶状结构(β-roll)、免疫球蛋白质类似蛋白质(Big-like)结构域基序预测丙酮丁醇梭菌蛋白质组中含有钙离子结合区域的蛋白质,建立本地BLAST数据库,通过GO和KEGG数据库分析所预测到的蛋白质。研究最终预测出228个含有相关位点的蛋白质,利用GO注释在生物过程、细胞组分和代谢过程对蛋白质进行了功能分类。KEGG代谢通路分析表明,该类蛋白质主要参与代谢途径、生物抗性基因合成、次级代谢物生物合成和信号传导等过程。 展开更多

关键词 丙酮丁醇梭菌 蛋白质组 钙离子结合蛋白 生物信息学 结构域基序

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灵长类动物限制性因子SAMHD1的生物学功能分析 被引量：1

4

作者 李爽 郭浩然 魏伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期484-490,I0001,共8页

目的:探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素(IFN)产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1的研究提供依据。方法:构建稳定... 目的:探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素(IFN)产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1的研究提供依据。方法:构建稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为阴性对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系为实验组。经佛波酯(PMA)刺激分化成巨噬样细胞后,流式细胞术分析各组HIV-1病毒感染率。以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAMHD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48h收获细胞,采用Western blotting法检测SAMHD1蛋白表达水平,免疫荧光检测法观察不同SAMHD1蛋白的细胞内定位。以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率,代表SAMHD1对LINE-1转座子的活性。以单独转染IFN-luc报告质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染IFN-luc和SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶的表达水平。结果:与阴性对照组比较,灵长类动物SAMHD1稳定表达的实验组HIV-1病毒感染率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物SAMHD1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。免疫荧光检测,灵长类动物SAMHD1蛋白均定位于细胞核中。与对照组比较,实验组GFP阳性细胞率明显降低,即SAMHD1对LINE-1转座子活性降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,实验组灵长类动物HEK293T细胞中荧光素酶表达水平明显降低(P<0.05)。结论:不同灵长类动物SAMHD1蛋白具有抵抗HIV-1病毒感染、抑制逆转录转座子LINE-1以及拮抗天然免疫系统产生IFN的作用。 展开更多

关键词 灵长类动物 限制因子 不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 逆转录病毒 逆转录转座子 VPX

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SAMHD1通过调控p27表达抑制肝细胞癌细胞增殖的研究 被引量：3

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作者 皮思蝶 郑小川 +2 位作者 毛彬力 崔静 胡源 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期489-496,共8页

背景与目的:不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1,SAMHD1)具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用,但其调节肝细胞癌(hepatocellular c... 背景与目的:不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1,SAMHD1)具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用,但其调节肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用及机制尚未见报道。探究SAMHD1调控p27的表达对HCC细胞Huh7的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:首先通过蛋白质印迹法(Western blot)检测正常肝细胞和不同类型HCC细胞中SAMHD1的表达情况。利用基因修饰技术构建过表达SAMHD1、dNTP酶活性位点突变体(SAMHD1-D207N)和磷酸化位点突变体(SAMHD1-T592E)的重组质粒,然后利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测过表达SAMHD1及其突变体或siRNA干扰沉默SAMHD1对HCC细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡情况。在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中分析SAMHD1和p27表达的相关性。结果:HCC细胞中SAMHD1表达上调,过表达SAMHD1、SAMHD1-D207N和SAMHD1-T592E可以抑制Huh7细胞增殖,细胞周期停滞在G1/G0期;相反,干扰SAMHD1后细胞增殖加快,细胞周期停滞在G2/M期。机制研究表明,SAMHD1上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p27的表达。在HCC组织中,p27的表达与SAMHD1表达呈正相关。结论:过表达SAMHD1可以上调p27的表达,导致细胞周期停滞在G1/G0期,从而抑制HCC细胞增殖,这种抑制作用不依赖于其dNTP酶活性和磷酸化修饰。 展开更多

关键词 肝细胞癌 不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 增殖 P27

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免疫抑制性受体TIGIT在病原体感染中的作用机制研究进展 被引量：5

6

作者 李浩然 张富强 +2 位作者 张振超 李祥瑞(指导) 王帅(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期632-637,共6页

T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT)是主要表达于活化的T细胞、调节性T细胞(Tregs)和自然杀伤(NK)细胞表面的免疫抑制性受体。最近的研究表明TIGIT可通过与癌细胞或病原体感染细胞表面的多种配体相结合,直接抑制... T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT)是主要表达于活化的T细胞、调节性T细胞(Tregs)和自然杀伤(NK)细胞表面的免疫抑制性受体。最近的研究表明TIGIT可通过与癌细胞或病原体感染细胞表面的多种配体相结合,直接抑制免疫细胞的活化、增殖或间接诱导免疫抑制性因子的产生。用TIGIT单克隆抗体干预可明显改善免疫细胞的功能,有望成为类似于PD-1的全新治疗靶点。因此,阐明TIGIT在感染性免疫应答中发挥作用的具体机制将有助于揭示多种疾病中免疫细胞功能低下的原因,并为病原体感染的治疗提供新方案。本文简要介绍TIGIT分子的结构与功能,并且就TIGIT在细菌、病毒和寄生虫感染中发挥的作用及作用机制进行了系统综述。 展开更多

关键词 T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域(TIGIT) 免疫抑制性受体 病原体感染 作用机制

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TIGIT在自身免疫性肝炎免疫机制中的作用及治疗前景 被引量：1

7

作者 韩琳 张明月 孙颖 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期656-659,共4页

免疫耐受失衡在自身免疫性肝炎(AIH)的发病过程中发挥关键作用。免疫调节性T淋巴细胞(Treg)的共抑制信号分子表达异常可能是导致自身抗原耐受性破坏的重要原因之一。共抑制信号分子T淋巴细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(T... 免疫耐受失衡在自身免疫性肝炎(AIH)的发病过程中发挥关键作用。免疫调节性T淋巴细胞(Treg)的共抑制信号分子表达异常可能是导致自身抗原耐受性破坏的重要原因之一。共抑制信号分子T淋巴细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(TIGIT)是一种主要表达在Treg上的抑制性受体。本文阐述了Treg与AIH相关的免疫机制以及TIGIT在自身免疫性疾病发生、发展及治疗中的作用,以寻找TIGIT作为AIH候选靶点的治疗策略。 展开更多

关键词 肝炎 自身免疫性 治疗学 T淋巴细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域

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免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立 被引量：1

8

作者 穆业腾 郭冲 +5 位作者 胡楠楠 杨馥旭 薛晗 范宇鑫 郭峰霖 关新刚 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1341-1347,共7页

目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别... 目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。结果:酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。结论:成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系,TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达。 展开更多

关键词 T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域 绿色荧光蛋白 慢病毒表达载体 稳定转染 单克隆细胞

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用于肿瘤治疗的免疫检查点及其抑制剂研究进展 被引量：4

9

作者 王立韬 白丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期663-670,共8页

肿瘤免疫检查点的发现为肿瘤免疫治疗提供了全新的思路。除了传统免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、程序性死亡蛋白1(PD-1)之外,T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3/CD223)、具有免疫球蛋白和免疫... 肿瘤免疫检查点的发现为肿瘤免疫治疗提供了全新的思路。除了传统免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、程序性死亡蛋白1(PD-1)之外,T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3/CD223)、具有免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫球蛋白(TIGIT)、B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、含免疫球蛋白V结构域T细胞活化抑制因子(VISTA)等新型免疫检查点也逐渐被发现,极大的丰富了肿瘤免疫治疗的选择维度。与之相关的免疫检查点抑制剂如CTLA4抑制剂伊匹单抗(ipilimumab)和替西木单抗(tremelimumab), PD-1/PD-1配体1(PD-L1)抑制剂纳武单抗(nivolumab)、帕姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)等相继问世,其在黑素瘤、非小细胞肺癌、消化道肿瘤等实体瘤的治疗方面获得了极大的成功。然而,免疫相关不良事件、耐药性等问题也应该引起足够的重视。本文主要对免疫检查点、免疫检查点抑制剂及其在恶性肿瘤中的应用等方面的研究进展进行综合评述。 展开更多

关键词 免疫检查点 程序性死亡蛋白1(PD-1) 细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4) T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM-3) 淋巴细胞活化基因3(LAG-3/CD223) 具有免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫球蛋白(TIGIT) B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA) 含免疫球蛋白V结构域T细胞活化抑制因子(VISTA) 免疫检查点抑制剂 综述

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约氏疟原虫感染小鼠肺组织TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加但细胞因子分泌能力降低

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作者 谢安琪 黎家杰 +6 位作者 方超 石飞虎 邢俊敏 莫峰 谢红艳 黄俊 魏海霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期673-679,共7页

目的研究含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)对疟原虫感染小鼠肺脏中CD8^(+)T细胞功能的影响。方法约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠12 d后,分离肺脏,称体质量,拍照;消化后分离肺脏淋巴细胞,计数、... 目的研究含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)对疟原虫感染小鼠肺脏中CD8^(+)T细胞功能的影响。方法约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠12 d后,分离肺脏,称体质量,拍照;消化后分离肺脏淋巴细胞,计数、染色,流式细胞术检测CD8^(+)、TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的含量;流式细胞术检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的L选择素(CD62L)、CD69、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD25和CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)的表达情况;佛波酯(PMA)和离子霉素刺激后,检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素21(IL-21)、IL-4、IL-17和IL-10的能力。结果疟原虫感染小鼠体质量减轻,肺脏变黑变暗,肺脏质量和占体质量比明显增加。与正常组小鼠相比,疟原虫感染后小鼠肺组织CD8^(+)T细胞和TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞百分比和绝对数量显著升高。与正常小鼠TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞相比,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞中表达CD62L的细胞百分比显著降低,表达CD69、PD-1、CX3CR1的细胞百分比显著升高,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞可分泌IL-21、IL-4、IL-17、IL-10的细胞百分比显著降低。结论疟原虫感染后,小鼠肺脏病变明显,TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加,该细胞群表达多种活化相关分子,但分泌细胞因子的能力降低。 展开更多

关键词 约氏疟原虫(Plasmodium yoelii) 肺脏 CD8^(+)T淋巴细胞 含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)

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TIGIT在类风湿性关节炎患者外周血CD56^(+)T细胞的表达及作用

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作者 朱晓旭 李鑫 +3 位作者 刘鑫莹 单颖 李诗楠 沈晓锟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1010-1018,共9页

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD56^(+)T细胞的比例变化以及含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)在CD56^(+)T细胞表面的表达,探讨TIGIT在RA中对CD56^(+)T细胞功能的影响。方法选取50例RA患者及2... 目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD56^(+)T细胞的比例变化以及含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)在CD56^(+)T细胞表面的表达,探讨TIGIT在RA中对CD56^(+)T细胞功能的影响。方法选取50例RA患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血CD56^(+)T细胞的比例,并且分析CD56^(+)T细胞比例与疾病临床指标的相关性;流式细胞术检测RA患者外周血CD56^(+)T细胞表达TIGIT的水平;密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并进行培养;流式细胞术检测RA患者外周血表达γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17A(IL-17A)的CD56^(+)T细胞的比例;探究IFN-γ和IL-17A在TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞之间的表达差异;ELISA检测RA患者血清IL-17A的水平。结果与健康对照组相比,RA患者外周血CD56^(+)T细胞的比例降低,表达IL-17A的CD56^(+)T细胞的比例显著降低;RA患者血清中IL-17A的水平升高。RA患者的CD56^(+)T细胞高表达TIGIT分子,IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞;表达IL-17A的TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞的比例无明显差异。结论TIGIT的异常表达影响CD56^(+)T细胞分泌因子的功能,进而参与RA疾病进程。并且IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞,TIGIT可能不影响CD56^(+)T细胞的IL-17A分泌水平。 展开更多

关键词 含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT) 类风湿性关节炎(RA) CD56+T细胞 γ干扰素(IFN-γ) 白细胞介素17A(IL-17A)

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