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利用细菌人工染色体构建人SIRPα转基因兔模型
1
作者 杨素杰 陶源 +6 位作者 耿阳 赵多维 李传沛 尹智 赵祥杰 刘忠华 宋军 《东北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期171-180,共10页
异种细胞和组织移植是免疫缺陷动物主要研究方向之一,为增强免疫缺陷动物对人源细胞与组织的亲和性,降低免疫排斥反应,常通过转入人SIRPα(Signal regulatory proteinα)基因使其免疫细胞表达人源SIRPA蛋白。hSIRPA蛋白可识别并结合人... 异种细胞和组织移植是免疫缺陷动物主要研究方向之一,为增强免疫缺陷动物对人源细胞与组织的亲和性,降低免疫排斥反应,常通过转入人SIRPα(Signal regulatory proteinα)基因使其免疫细胞表达人源SIRPA蛋白。hSIRPA蛋白可识别并结合人源移植细胞上的CD47分子,形成“不要吃我”信号,抑制吞噬细胞吞噬,显著降低受体动物对外来细胞和组织的免疫排斥反应,提高其在动物体内的移植效果。研究通过显微操作技术将含有hSIRPα基因的BAC质粒注射到兔受精卵原核中,经胚胎移植成功获得h SIRPα转基因兔。通过PCR、real-time PCR、流式细胞术等方法检测转基因兔基因型与表型。结果表明:通过检测F0和F1两代hSIRPα转基因兔基因型,hSIRPα基因被完整地转入兔体内。在转基因各组织中hSIRPα基因表达水平存在差异,在回肠、胃、脾脏中,hSIRPα基因表达水平显著高于野生型兔;外周血流式细胞技术检测结果可知,hSIRPα在转基因兔的表达水平高于野生型,不影响兔免疫细胞及组分正常发育。综上,试验成功获得hSIRPα转基因兔,为获得类似于NSG、NOG小鼠的免疫缺陷兔模型奠定基础。 展开更多
关键词 细菌人工染色体(BAC) 转基因兔模型 h SIRPα基因 SIRPα-CD47抑制性信号
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云南疣粒野生稻细菌人工染色体(BAC)文库的构建与分析 被引量：8
2
作者 阿新祥 程在全 +4 位作者 吴成军 鄢波 陈善娜 杨明挚 黄兴奇 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期815-817,共3页
关键词 云南 疣粒野生稻 细菌人工染色体文库 核基因组
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猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量：5
3
作者 刘娅梅 乔永峰 +7 位作者 顾一奇 柳畅 许梦微 王志胜 郭容利 张传建 侯继波 王继春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期880-885,共6页
为构建猪源伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA的细菌人工染色体(BAC),本研究将转移载体pHA2-pUC19-H1-H2的DNA与PRV AH02LA株基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,利用转移载体中的GFP为筛选标记,获得携带GFP基因的gE/gI基因... 为构建猪源伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA的细菌人工染色体(BAC),本研究将转移载体pHA2-pUC19-H1-H2的DNA与PRV AH02LA株基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,利用转移载体中的GFP为筛选标记,获得携带GFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV-AH02LA(gE-/gI-)-pHA2。提取纯化的该重组病毒DNA转化E.coli DH10B,对获得的阳性克隆命名为BAC^(PRV-G)。提取BAC^(PRV-G)的DNA,将含gE、gI和其上下游同源片段的DNA与BAC^(PRV-G)的DNA共转染CEF,获得gE、gZ基因恢复的病毒命名为PRVAH02LA^(Rec)。比较亲本株PRV AH02LA、基因缺失株和恢复株的生长动力学,结果表明,恢复株的生长特性与亲本株无显著差异。本研究成功构建了PRV变异株AH02LA的BAC,并证实其为全基因组的感染性克隆,为PRV变异株的致病机理研究和新型疫苗研制提供了重要的平台。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异株 猪源 细菌人工染色体 生长特性
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棉花细菌人工染色体的荧光原位杂交(BAC-FISH)技术 被引量：5
4
作者 王凯 张燕洁 +2 位作者 关兵 郭旺珍 张天真 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1216-1222,共7页
细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组... 细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组区的微卫星位点(simple sequence repeats,SSR)标记的策略,筛选到不含或含有少量重复序列的细菌人工染色体(BAC)克隆,同时,在通用FISH技术程序基础上,通过改进发根、变性、洗脱条件等步骤,构建出适合于棉花的BAC-FISH技术,简化了操作流程的同时,获得稳定的杂交结果及较高的检出率;并通过将一随机获得的BAC进行染色体的物理定位,进一步引入双探针、双色及重复杂交技术,显示了该技术的成熟与良好的应用前景和价值. 展开更多
关键词 棉花 细菌人工染色体 荧光原位杂交
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细菌人工染色体(BAC)及其分析和修饰方法简介 被引量：8
5
作者 黄粤 刘德培 梁植权 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期309-313,共5页
细菌人工染色体是一种新发展起来的DNA载体系统 ,它具有容量大、遗传特性稳定、易于操作等优点 .在基因文库构建和基因功能分析等方面有广泛的应用 .综述了近年来发展起来的对BAC进行分析和修饰的一些方法 .
关键词 细菌人工染色体 定位修饰 同源重组 BAC
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用同源重组法修饰含人α类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 被引量：5
6
作者 冯东晓 刘德培 +1 位作者 黄粤 梁植权 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期187-191,共5页
采用RecA蛋白介导的同源重组的方法 ,对本实验室筛选出的包含完整人α 类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 (BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法 ,分别在预删除的HS - 40增强子区域的上游和下游克隆长度约为 5 0 0bp的两段同源序列 ,... 采用RecA蛋白介导的同源重组的方法 ,对本实验室筛选出的包含完整人α 类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体 (BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法 ,分别在预删除的HS - 40增强子区域的上游和下游克隆长度约为 5 0 0bp的两段同源序列 ,并一起克隆到构建载体 pBV的XbaI和HindIII位点上 ,SalI酶切后回收 1kb左右的片段并克隆到温度敏感的穿梭质粒 pSV -RecA中 ,转化带有人α 类珠蛋白基因簇的BACDNA的感受态大肠杆菌DH10B ,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选 ,获得发生两次同源重组后只含BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株 ,经Southern杂交鉴定 ,获得了HS - 40被定位删除的BAC突变体克隆。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 同源重组 Α-珠蛋白 修饰
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高产优质抗病棉花品种中棉所12号细菌人工染色体(BAC)文库构建 被引量：3
7
作者 郑拥民 王省芬 +2 位作者 张桂寅 李喜焕 马峙英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期17-20,共4页
中棉所12号是我国自育的高产、优质、抗枯萎病、耐黄萎病棉花品种,其重要创新是使抗性和产量、品质得到结合改良和提高。本研究以plndigoBAC-5为载体,对中棉所12号进行了细菌人工染色体(BAC)文库构建。初步建立的文库含有38800个克隆,覆... 中棉所12号是我国自育的高产、优质、抗枯萎病、耐黄萎病棉花品种,其重要创新是使抗性和产量、品质得到结合改良和提高。本研究以plndigoBAC-5为载体,对中棉所12号进行了细菌人工染色体(BAC)文库构建。初步建立的文库含有38800个克隆,覆盖2倍基因组。对文库中132个重组克隆的分析表明:插入片段为50～150kb,平均大小为120kb;大于100kb的克隆占87 7%,大于110kb的克隆占56%;空载率小于1%。该文库的构建为深入开展棉花基因组有关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 中棉所12号 细菌人工染色体 文库构建
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马立克氏病病毒meq基因缺失株细菌人工染色体序列自我敲除的分子鉴定 被引量：3
8
作者 孙鹏 苏帅 +2 位作者 李延鹏 丁家波 崔治中 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期285-291,共7页
本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒（MDV）感染性克隆基因组中细菌人工染色体（BAC）序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1... 本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒（MDV）感染性克隆基因组中细菌人工染色体（BAC）序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1重组病毒在CEF细胞上进行连续传代培养，利用病毒表达的cre重组酶在传代过程中逐步敲除病毒的BAC序列。分别提取1～10代不同代次SC9—1重组病毒的DNA作为模板，利用BAC序列特异性引物对病毒基因组中的BAC进行PCR检测。利用针对BAC序列gpt基因的特异性检测引物，以MDV保守基因pp38作为内参，对不同代次病毒基因组中BAc序列进行荧光定量PCR的检测。利用PCR扩增SC9—1病毒敲除BAC序列后基因组中残留loxp位点两端序列，通过测序分析进一步验证BAC序列的敲除。利用BAC序列特异性引物对不同代次病毒基因组中BAC序列的检测结果显示，1～5代病毒DNA均能扩增出600bp的特异性目的条带，证实病毒的基因组中含有BAC序列。6～10代病毒DNA均不能扩增出特异性目的条带，证实病毒基因组中没有BAC序列。荧光定量PCR结果显示，病毒基因组中的BAC序列随着病毒的传代逐渐减少，直至第6代已经完全检测不到BAC序列。在病毒BAC序列敲除的过程中，对每代病毒BAC序列敲除后残留loxp位点序列进行PCR测序鉴定，结果显示BAC序列敲除后基因组中仅留下一个loxp位点，序列同源性均在99．7％以上。结果表明，利用cre／loxp系统将病毒在CEF细胞上连续6代传代培养可将MDVmeq基因缺失株SC9—1的BAC序列完全敲除掉，且同源重组酶敲除BAC序列具有高度一致性。 展开更多
关键词 马立克氏病 MEQ基因 细菌人工染色体 敲除 鉴定
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细菌人工染色体基因组文库构建关键技术研究 被引量：4
9
作者 刘长青 吴宏梅 +6 位作者 包阿东 陆涛峰 刘帅 张洪海 唐学玺 关伟军 马月辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期66-69,共4页
基因组文库是进行分子克隆和基因结构与功能研究的基础,完整覆盖的基因组文库的构建,使基因组任何DNA片段的筛选和获得成为可能。细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)与其它载体系统相比具有转化效率高、嵌合体少、插... 基因组文库是进行分子克隆和基因结构与功能研究的基础,完整覆盖的基因组文库的构建,使基因组任何DNA片段的筛选和获得成为可能。细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)与其它载体系统相比具有转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收,高覆盖率、稳定性强,并且具有易分离和操作等特性等优点而被广泛应用。作为物种保护策略的重要部分,构建我国濒危动植物品种基因组BAC文库,对于其遗传资源的保护和研究具有非常重要的作用。在查阅大量国内外相关资料的基础上,就BAC基因组文库构建过程中载体的制备、高分子量DNA的制备、大片段DNA的回收、连接与电击转化、基因组BAC文库质量鉴定等几个重点、难点问题进行了详细的论述和分析,对于构建高分子量插入片段、高覆盖率和稳定性的基因组文库提供理论基础与技术支撑。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 基因组文库构建 质粒纯化 高分子量DNA
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东乡野生稻双元细菌人工染色体(BIBAC)文库的构建 被引量：4
10
作者 成志伟 曹筑荣 +1 位作者 陈良碧 曹孟良 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期272-275,282,共5页
双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成... 双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成,平均插入片段大小为65kb,覆盖率为2倍基因组。稳定性检测结果表明,东乡野生稻基因组DNA能够在BIBAC载体中稳定存在。 展开更多
关键词 东乡野生稻 双元细菌人工染色体文库 基因组 DNA
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一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量：2
11
作者 王志胜 刘芳 +3 位作者 许梦微 乔永峰 侯继波 王继春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2071-2080,共10页
拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获... 拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获得BAC,拯救病毒获得mini-F重组病毒和gC恢复病毒后,与亲本病毒(HVT FC126)比较生长动力学和对鸡马立克病的免疫效力。结果:获得数个BAC阳性克隆,取其中一个克隆(BAC^(HVT-G))成功拯救出HVT mini-F重组病毒(HVT^(BAC-ΔgC)),并成功获得了gC恢复毒株(HVT^(BAC-gC-R))。生长特性和免疫效力试验表明HVT^(BAC-gC-R)与HVT FC126无显著差异,而HVT^(BAC-ΔgC)增殖能力和免疫效力均明显下降。成功构建了HVT全基因组的感染性BAC;HVT的gC基因是一个非必需基因,但对病毒的增殖能力和免疫效力有重要影响。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 细菌人工染色体 糖蛋白C 生长动力学 免疫效力
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石麦15细菌人工染色体文库构建与鉴定 被引量：2
12
作者 李孟军 杨煜 +4 位作者 高欣娜 郭晓 何明琦 史占良 郭进考 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期164-168,共5页
为给小麦功能基因研究提供参考信息,以冬小麦栽培品种石麦15（Triticum aestivum L.）为试材,从暗培养7~10d的黄化幼苗地上部提取高分子量基因组DNA,使用载体pCC1BAC的HindⅢ位点构建了六倍体小麦细菌人工染色体文库。该文库由1 000 00... 为给小麦功能基因研究提供参考信息,以冬小麦栽培品种石麦15（Triticum aestivum L.）为试材,从暗培养7~10d的黄化幼苗地上部提取高分子量基因组DNA,使用载体pCC1BAC的HindⅢ位点构建了六倍体小麦细菌人工染色体文库。该文库由1 000 000个以上克隆组成,保存在1 020个混合池中,克隆插入片段平均大小为85kb,空载率为2.5%;覆盖小麦基因组5倍以上;挑取7个克隆培养5d后,经HindⅢ完全酶切检测,其指纹图谱稳定一致。石麦15细菌人工染色体文库的构建为小麦基因克隆、调控序列克隆以及比较基因组学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 细菌人工染色体文库 插入片段 稳定性
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毛竹大片段双元细菌人工染色体基因组文库的构建 被引量：2
13
作者 管雨 杨洋 +2 位作者 张智俊 罗淑萍 汤定钦 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期527-532,共6页
从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia... 从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia coli DH10B感受态细胞进行蓝白斑筛选,挑取白色克隆,获得重组率较高的阳性克隆,构建了含有104个克隆的双元细菌人工染色体(BIBAC)基因组文库,并通过脉冲场电泳检测分析后确定,所构建的毛竹BIBAC文库平均插入片段为105 kb,约覆盖5倍毛竹基因组。该文库的构建为毛竹基因组研究做好了前期的基础工作。 展开更多
关键词 分子生物学 毛竹 双元细菌人工染色体 基因组文库
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鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量：2
14
作者 张传健 许梦微 +2 位作者 王志胜 侯继波 王继春 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1064-1070,共7页
为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli D... 为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli DH10B中,对获得的克隆用酶切、PCR方法进行鉴定并测序。提取阳性克隆的DNA转染CEF,以拯救重组病毒。再通过将带有相同同源臂和UL44(糖蛋白质C,gC)基因的片段和阳性克隆的DNA共转染鸡胚成纤维细胞进行重组,以获得gC恢复病毒。采用0.01感染复数(MOI)感染CEF对亲本病毒、恢复病毒进行多步法生长曲线测定,比较其有无差异。结果显示:成功获得了DEV的mini-F重组病毒,命名为DEV(atten)-mini-F,获得2个阳性克隆S1、S2,将S1命名为pDEV(atten),应用pDEV(atten)拯救重组病毒获得gC恢复病毒DEV(atten)ΔgC-R,生长特性的结果显示亲本病毒与恢复病毒间无显著性差异。表明成功构建的DEV(atten)的细菌人工染色体为全基因组的感染性克隆。 展开更多
关键词 鸭瘟 鸡胚化弱毒株 细菌人工染色体
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高效制备双元细菌人工染色体(BIBAC)载体DNA的研究 被引量：1
15
作者 成志伟 曹筑荣 +5 位作者 李磊 邢俊杰 罗赫荣 王正华 陈良碧 曹孟良 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期98-100,共3页
高质量的BIBAC载体DNA的制备受到酶切、脱磷等许多因素的影响,是构建BIBAC文库的关键步骤之一.以BIBAC2载体为材料,对其进行了BamHI限制性酶切和CIAP脱磷,制备了可用于进一步构建文库的线性载体.在此基础上确定了适宜的酶量、酶切时间... 高质量的BIBAC载体DNA的制备受到酶切、脱磷等许多因素的影响,是构建BIBAC文库的关键步骤之一.以BIBAC2载体为材料,对其进行了BamHI限制性酶切和CIAP脱磷,制备了可用于进一步构建文库的线性载体.在此基础上确定了适宜的酶量、酶切时间、脱磷酶的用量及失活等步骤的反应条件. 展开更多
关键词 基因组 双元细菌人工染色体 载体 脱磷
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长片段水稻细菌人工染色体DNA的亚克隆文库的构建 被引量：2
16
作者 王世全 李平 +3 位作者 翟文学 王文明 朱立煌 包其郁 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第3期197-200,共4页
利用超声波振断法将水稻细菌人工染色体 (BAC)基因组文库———Nipponbare库中的一个BAC克隆 (E5 0 )振断 ,产生许多大小不同的DNA随机片段 ,回收其中 1 7～ 3 5kb的片段 ,并将这些随机片段克隆入质粒载体pUC18。
关键词 细菌人工染色体 亚克隆库 水稻 基因文库
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绒山羊细菌人工染色体BAC文库构建条件的优化 被引量：1
17
作者 刘志红 李宁 +6 位作者 任立明 胡晓湘 郭英 崔文涛 尹俊 张文广 李金泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期55-58,共4页
近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的... 近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的构建条件进行了研究,用HindⅢ部分酶切绒山羊基因组,脉冲场凝胶电泳分离大片段DNA,以电洗脱法回收DNA后,与BAC载体连接,将连接产物点透析后,电转化DH10B感受态细胞,最后对转化的片段小提质粒进行NotⅠ酶切,脉冲电泳鉴定其大小。结果表明,本试验采用的方法既可获得较大的插入片段又可获得较高的转化效率,是较好的用于构建大基因组文库的方法。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 文库 构建条件
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河豚鱼基因组细菌人工染色体文库的构建 被引量：1
18
作者 刘山鸣 刘勇 +11 位作者 张小晓 周巍 杨立 张秀清 吴东颖 蔡胜和 高春生 郞铁明 丁立 戴理 刘国仰 杨焕明 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期161-167,共7页
目的研究模式生物——河豚鱼的基因组以及利用河豚鱼基因组"小而全"的特点研究人类基因组。方法以红鳍东方豚(Fugu rubripes)的精子DNA为材料,以pBelo BAC 11为载体,构建河豚鱼基因组的细菌人工染色体(bacterial artifi-cial ... 目的研究模式生物——河豚鱼的基因组以及利用河豚鱼基因组"小而全"的特点研究人类基因组。方法以红鳍东方豚(Fugu rubripes)的精子DNA为材料,以pBelo BAC 11为载体,构建河豚鱼基因组的细菌人工染色体(bacterial artifi-cial chromosome,BAC)格式化文库(gridded library)。结果该文库包含23 040个克隆,分别保存在240块96孔细胞培养板中。经对100个随机抽样的克隆分析表明,插入片段平均大小为100 kb,因此,该文库相当于河豚鱼单倍体基因组(400Mb)的6倍,即6个库容量。酶切分析10个克隆证明,经100代繁殖其插入片段仍然稳定不变。结论该文库符合BAC基因组文库的所有要求。 展开更多
关键词 河豚鱼 细菌人工染色体 格式化基因组文库
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细菌人工染色体文库的构建方法分析 被引量：1
19
作者 吴宏梅 刘长青 +4 位作者 刘帅 包阿东 陆涛峰 关伟军 马月辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期83-87,共5页
细菌人工染色体是一种承载大片段DNA的新型载体系统,它具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。在高等生物基因组文库的构建和基因功能的分析等方面有广泛应用。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的... 细菌人工染色体是一种承载大片段DNA的新型载体系统,它具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。在高等生物基因组文库的构建和基因功能的分析等方面有广泛应用。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的重要基础。介绍了近年来细菌人工染色体文库构建方法上的研究进展,对其中载体的制备和高分子量DNA的制备这两个关键环节作了较深入的探讨。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 基因组文库 构建方法 载体制备 大片段基因DNA制备
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细菌人工染色体文库基因组DNA制备技术 被引量：1
20
作者 陈献伟 王会 +1 位作者 关伟军 高剑峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期79-82,共4页
试验旨在对基因组DNA的制备进行研究,为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的构建奠定基础。以豁眼鹅全血为试验材料,提取高质量的基因组DNA,分别采用HindⅢ、EcoRⅠ和BamHⅠ3种限制性内切酶对所提基因组DNA进行... 试验旨在对基因组DNA的制备进行研究,为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的构建奠定基础。以豁眼鹅全血为试验材料,提取高质量的基因组DNA,分别采用HindⅢ、EcoRⅠ和BamHⅠ3种限制性内切酶对所提基因组DNA进行部分酶切,并利用控制酶切时间、设置不同的HindⅢ酶切浓度梯度对基因组DNA进行部分酶切。结果表明,HindⅢ为最佳限制性内切酶,并得到了最佳酶切用量(40U/μL)。该方法所制备的基因组DNA质量较好,可用于BAC文库的构建。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 基因组DNA 限制性内切酶 酶切
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