检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达被引量：1: 1; 作者张晓娟李旭 +1 位作者栾正刚马晓春《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期143-145,共3页; 目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测... 展开更多; 关键词高迁移率族蛋白1基因人脐静脉血管内皮细胞真核细胞表达载体转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠神经肽Y前体cDNA克隆、测序及哺乳动物细胞表达载体的构建被引量：2: 2; 作者张亮林杨贵贞《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期69-71,共3页; 利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从大鼠脑组织中钓得神经肽Ｙ前体ｃＤＮＡ编码区序列，将该ｃＤＮＡ定向亚克隆入哺乳动物细胞表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ中，构建了重组质粒ｐＲｃ／ＣＭＶ－ＮＰＹ。经双脱氧核苷酸终止法对插入... 展开更多; 关键词神经肽Y 聚合酶链反应哺乳动物细胞表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究被引量：3: 3; 作者陈创夫乔军 +2 位作者王金富田晶华张高轩《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页; 应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的... 展开更多; 关键词 VP2基因基因疫苗免疫真核细胞表达载体鸡病传染性法氏囊病病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达被引量：2: 4; 作者张明霞周福元 +3 位作者刁志宏何海棠侯金林骆抗先《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页; 目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感... 展开更多; 关键词乙型肝炎病毒变异真核细胞表达载体永生化B淋巴母细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建被引量：1: 5; 作者黄环吴永忠 +3 位作者李少林郭启帅林远洪彭志平《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期399-402,共4页; 目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家... 展开更多; 关键词 EGFR家族 RNA干扰真核细胞表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定被引量：1: 6; 作者公茂庆顾燕 +4 位作者胡小邦孙艳马磊李秀兰朱昌亮《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期454-457,共4页; 目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载... 展开更多; 关键词胰蛋白酶基因昆虫细胞表达载体抗药性基因转染 C6/36细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建被引量：2: 7; 作者闻晓波宋佰芬 +1 位作者姜海芳崔玉东《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期54-57,共4页; 根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表... 展开更多; 关键词新城疫病毒 F基因 HN基因真核细胞表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1: 8; 作者张小鹰吴风云 +3 位作者何金花廖晓莉王威蒋建伟《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期278-287,共10页; 为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRN... 展开更多; 关键词 RNA干扰增殖细胞核抗原真核细胞表达载体 HEPG2细胞肝癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染: 9; 作者肖长峰卢永红易建中《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期23-27,共5页; 从患病小猪粪便中提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)的核衣壳蛋白VP4、VP7基因,将目的基因片段克隆到昆虫表达载体PFastbacl;然后将重组载体转化入DH_(10)Bacl感受态细胞中转座重组后,纯化该重组杆状病... 展开更多; 关键词猪轮状病毒核衣壳蛋白昆虫细胞表达载体转染 sf9昆虫细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达被引量：1: 1; 作者张晓娟李旭栾正刚马晓春; 机构中国医科大学附属第一医院重症医学科; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期143-145,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30901438/C160402); 文摘目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测转染后HMGB1基因的表达改变。结果构建HMGB1全长基因真核细胞表达载体成功,酶切鉴定及测序鉴定表明载体构建正确,转染HUVEC后可检测到外源性蛋白的表达,对照组无外源性蛋白表达。结论成功构建了HMGB1全长基因真核细胞表达载体并可转染至HUVEC中。; 关键词高迁移率族蛋白1基因人脐静脉血管内皮细胞真核细胞表达载体转染; Keywords high-mobility group box 1 human umbilical venular endothelial cell eukaryotic expression plasmid transfect; 分类号 R364.5 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠神经肽Y前体cDNA克隆、测序及哺乳动物细胞表达载体的构建被引量：2: 2; 作者张亮林杨贵贞; 机构白求恩医科大学免疫学教研室; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期69-71,共3页; 基金国家自然科学基金; 文摘利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从大鼠脑组织中钓得神经肽Ｙ前体ｃＤＮＡ编码区序列，将该ｃＤＮＡ定向亚克隆入哺乳动物细胞表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ中，构建了重组质粒ｐＲｃ／ＣＭＶ－ＮＰＹ。经双脱氧核苷酸终止法对插入片段作序列分析，证明ＮＰＹｃＤＮＡ序列的准确性及插入方向正确。; 关键词神经肽Y 聚合酶链反应哺乳动物细胞表达载体; Keywords Neuropeptide Y PCR Mammalian expression vector; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究被引量：3: 3; 作者陈创夫乔军王金富田晶华张高轩; 机构石河子大学塔里木农垦大学; 出处《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页; 文摘应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的蛋白。免疫雏鸡后 2 0 d,在体内可检测到特异性抗体。; 关键词 VP2基因基因疫苗免疫真核细胞表达载体鸡病传染性法氏囊病病毒; Keywords chicken infectious bursal disease virus VP 2 gene DNA vaccines immune; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达被引量：2: 4; 作者张明霞周福元刁志宏何海棠侯金林骆抗先; 机构南方医科大学南方医院感染内科; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页; 基金全军医学科学技术研究"十五"计划重点课题(01Z046); 文摘目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶SacⅠ和KpnⅠ分别将野生型和突变型p3.8Ⅱ质粒进行双酶切,插入EBV-plpp真核细胞表达载体,转染LCLs,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞能够稳定表达。结果与结论DNA序列分析表明,野型HBVDNA核心区第60、87、97位氨基酸发生了预期的突变,WesternBlotting和微粒子免疫荧光法证明转染的LCLs能稳定表达HBV抗原,证实成功构建了预期细胞模型。; 关键词乙型肝炎病毒变异真核细胞表达载体永生化B淋巴母细胞; Keywords hepatitis B virus mutation eukaryotic expression vector immortalized B-lymphoblasts; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建被引量：1: 5; 作者黄环吴永忠李少林郭启帅林远洪彭志平; 机构重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆市肿瘤研究所重庆医科大学基础医学院放射医学教研室; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期399-402,共4页; 基金重庆市自然科学基金资助课题(2005-BB-5134); 文摘目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家族同源性基因为靶基因,根据shRNA的设计原则,设计实验组及对照组shRNA。体外合成2段编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火,克隆到相应载体pGensil-1的polⅢ启动子下游。结果:经酶切和DNA测序鉴定成功构建了EGFR家族同源性基因的RNA干扰表达载体,分别命名为pGensil-1-E及pGensil-1-C。为下一步体外、体内实验奠定了基础。; 关键词 EGFR家族 RNA干扰真核细胞表达载体; Keywords EFGR family RNA interference Eukarvotic expression vector; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定被引量：1: 6; 作者公茂庆顾燕胡小邦孙艳马磊李秀兰朱昌亮; 机构南京医科大学病原生物学系; 出处《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期454-457,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30170835) 江苏省高校自然科学基金资助项目(03KJB180082); 文摘目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/try。经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊虫细胞C6/36,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞。用RTPCR、Westernblotting鉴定胰蛋白酶基因的转录表达。结果酶切和PCR鉴定表明,成功构建昆虫细胞表达载体pIE13/try;证实胰蛋白酶基因已转入C6/36细胞,并建立稳定转染细胞系,成功地表达目的基因。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究胰蛋白酶与抗药性的关系提供了良好的实验基础。; 关键词胰蛋白酶基因昆虫细胞表达载体抗药性基因转染 C6/36细胞; Keywords trypsin gene expression vector for insect cell insecticide resistance gene transfection C6/36 cell; 分类号 R384.1 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建被引量：2: 7; 作者闻晓波宋佰芬姜海芳崔玉东; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江八一农垦大学生命科技学院; 出处《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期54-57,共4页; 文摘根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表达载体pEGPF-N1上,经鉴定,成功构建含有NDVF和HN基因的真核细胞表达载体pEGPF-N1-F和pEGPF-N1-HN,为下一步研究NDVF和HN蛋白在细胞凋亡中的生物学功能奠定基础。; 关键词新城疫病毒 F基因 HN基因真核细胞表达载体; Keywords Newcastle disease F gene HN gene eukaryotic cell expression vector; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1: 8; 作者张小鹰吴风云何金花廖晓莉王威蒋建伟; 机构暨南大学医学院生化教研室广东省佛山市南海区妇幼保健院检验科浙江省温州市平阳县人民医院广东省广州市番禺区中心医院检验科; 出处《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期278-287,共10页; 基金广东省科技计划(2009B080701051) 广东省医学科研基金(A2007322)资助项目~~; 文摘为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.; 关键词 RNA干扰增殖细胞核抗原真核细胞表达载体 HEPG2细胞肝癌; Keywords RNA interference proliferating cell nuclear antigen eukaryotic expression vector HepG2 cell line hepatocelluar carcinoma; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤] R73-362 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染: 9; 作者肖长峰卢永红易建中; 机构上海市农业科学院畜牧兽医研究所; 出处《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期23-27,共5页; 基金上海市浦江人才计划(PJ[20])资助; 文摘从患病小猪粪便中提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)的核衣壳蛋白VP4、VP7基因,将目的基因片段克隆到昆虫表达载体PFastbacl;然后将重组载体转化入DH_(10)Bacl感受态细胞中转座重组后,纯化该重组杆状病毒并转染昆虫细胞sf9。结果表明:成功获得了含有目的基因的杆状病毒的阳性重组子,并将重组病毒成功转染sf9细胞。; 关键词猪轮状病毒核衣壳蛋白昆虫细胞表达载体转染 sf9昆虫细胞; Keywords Porcine rotavirus Nucleocapsid protein Insect cell ,expression vector Transfection In-sect cell sf9; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达	张晓娟李旭栾正刚马晓春	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	大鼠神经肽Y前体cDNA克隆、测序及哺乳动物细胞表达载体的构建	张亮林杨贵贞	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	1996	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究	陈创夫乔军王金富田晶华张高轩	《动物科学与动物医学》	2001	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达	张明霞周福元刁志宏何海棠侯金林骆抗先	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建	黄环吴永忠李少林郭启帅林远洪彭志平	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定	公茂庆顾燕胡小邦孙艳马磊李秀兰朱昌亮	《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心	2005	1	在线阅读下载PDF 职称材料
7	新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建	闻晓波宋佰芬姜海芳崔玉东	《黑龙江八一农垦大学学报》	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
8	靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响	张小鹰吴风云何金花廖晓莉王威蒋建伟	《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
9	猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染	肖长峰卢永红易建中	《上海农业学报》 CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料