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副猪格拉瑟菌5型细胞致死性膨胀毒素CdtB破坏猪呼吸道上皮屏障的机制
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作者 陈敏 刘明星 +2 位作者 张鹏云 蔺辉星 范红结 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期304-316,共13页
旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示,蛋白质条带分布在55~100 ku,... 旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示,蛋白质条带分布在55~100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察,OMVs的粒径在100~200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示,样品在100~200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证,证实所提取的样品为外膜囊泡,且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平,并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现,OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋白cleaved-caspase3表达水平升高,ZO-1和Occludin的表达水平降低,FD-4渗透率升高,同时,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试验发现,当CdtB与STEC单层细胞共孵育24 h、OMVs与STEC单层细胞共孵育36 h后,STEC存活率显著降低。而Pifithrin-α预处理STEC可抑制OMVs和CdtB引起的细胞凋亡和屏障通透性的增加。另外,用免疫磁珠捕获的方法去除OMVs中的CdtB(OMVs-ΔCdtB),OMVs-ΔCdtB处理STEC 36 h后cleaved-caspase3、ZO-1、Occludin表达水平与对照组相比无显著差异。综上,成功提取并纯化GPS OMVs,且试验证明GPS可通过OMVs转运CdtB诱导STEC凋亡和屏障损伤,为副猪格拉瑟菌突破呼吸道上皮屏障的机制提供新思路。 展开更多
关键词 副猪格拉瑟菌 外膜囊泡 细胞致死性膨胀毒素cdtb 猪呼吸道上皮细胞
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猪源结肠弯曲菌分离鉴定及细胞致死性膨胀毒素三重PCR分子检测 被引量:4
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作者 李海利 徐引弟 +9 位作者 方剑玉 焦文强 王治方 张青娴 朱文豪 王克领 郎利敏 张立宪 游一 侯自花 《上海畜牧兽医通讯》 2018年第6期6-9,共4页
为了探明河南省及周边地区猪源结肠弯曲菌病(campylobacteriosis)的流行情况,本研究对从省内外的猪场和屠宰场采集的猪结肠及粪便样品,进行了病原菌的初步分离培养鉴定。对结肠弯曲菌细胞致死性膨胀毒素(cytolethal distending toxin,CD... 为了探明河南省及周边地区猪源结肠弯曲菌病(campylobacteriosis)的流行情况,本研究对从省内外的猪场和屠宰场采集的猪结肠及粪便样品,进行了病原菌的初步分离培养鉴定。对结肠弯曲菌细胞致死性膨胀毒素(cytolethal distending toxin,CDT)A、B、C型毒素基因进行了单一PCR检测与扩增,在此基础上建立了结肠弯曲菌细胞致死性膨胀毒素A、B、C型三重PCR检测方法。该三重PCR方法可同时扩增出结肠弯曲菌A、B、C毒素型基因,具有较好的特异性。从97份猪结肠样品中分离128株细菌,经16SrRNA基因扩增和结肠弯曲菌特异性引物PCR扩增,确定12株为结肠弯曲菌。本研究为猪源结肠弯曲菌的分离鉴定及结肠弯曲菌细胞致死性膨胀毒素A、B、C型毒素基因扩增提供基础,可用于猪源结肠弯曲菌的鉴定及毒素鉴定、食品安全检测与监测等。 展开更多
关键词 结肠弯曲菌 多重PCR 致死膨胀毒素
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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素的细胞毒性研究 被引量:7
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作者 陈西 王湘如 +3 位作者 徐晓娟 郭凤娟 陈焕春 蔡旭旺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1750-1755,共6页
本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列... 本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531bp。将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达3h,SDS-PAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28ku。通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72h观察细胞形态学变化。结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著。结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 细胞致死膨胀毒素 毒素 细胞
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伴放线放线杆菌产生的细胞致死膨胀毒素及其与牙周病的关系 被引量:1
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作者 孟姝 吴亚菲 杨禾 《国外医学(口腔医学分册)》 CAS 2005年第6期458-460,共3页
伴放线放线杆菌能产生一种热不稳定蛋白——细胞致死膨胀毒素。该毒素主要由三个相邻的基因编码,分别为cdtA,cdtB,cdtC,对应的蛋白产物分别是CDTA,CDTB,CDTC,它们构成三聚体的全毒素。它能引起细胞体积膨胀,使细胞停滞在G2/M周期而不能... 伴放线放线杆菌能产生一种热不稳定蛋白——细胞致死膨胀毒素。该毒素主要由三个相邻的基因编码,分别为cdtA,cdtB,cdtC,对应的蛋白产物分别是CDTA,CDTB,CDTC,它们构成三聚体的全毒素。它能引起细胞体积膨胀,使细胞停滞在G2/M周期而不能进入分裂期,通过线粒体途径导致淋巴细胞凋亡,诱导细胞因子的合成和分泌。由于该毒素具有多种细胞毒性,在牙周炎的发生发展中可能具有重要的致病作用。 展开更多
关键词 细胞致死膨胀毒素 伴放线放线杆菌 牙周炎
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细胞致死性扩张毒素和外膜蛋白的结构功能和致病机制
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作者 孙菲 张建刚 肖水清 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第5期565-568,共4页
伴放线放线杆菌是青少年牙周病的主要致病菌,与侵袭性牙周炎密切相关。伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素(CDT)和外膜蛋白(OMP)等毒力因子使其更易定植到宿主体内,破坏宿主的免疫调节,从而进一步引起牙周组织破坏和加速牙周病的进展。... 伴放线放线杆菌是青少年牙周病的主要致病菌,与侵袭性牙周炎密切相关。伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素(CDT)和外膜蛋白(OMP)等毒力因子使其更易定植到宿主体内,破坏宿主的免疫调节,从而进一步引起牙周组织破坏和加速牙周病的进展。本文主要就CDT和OMP毒力因子目前的结构功能及致病机制作一综述,以期对其深入研究有所帮助。 展开更多
关键词 伴放线放线杆菌 细胞致死膨胀毒素 外膜蛋白
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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析 被引量:1
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作者 牛惠 李艳玲 +5 位作者 周泷 李大鹏 张艳禾 李刚 谢芳 王春来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期371-374,共4页
为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达... 为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 细胞致死膨胀毒素 表达谱基因芯片
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细胞致死膨胀毒素研究进展
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作者 谭惠惠 刘栋辉 +2 位作者 张小荣 郭梦娇 吴艳涛 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期91-96,共6页
细胞致死膨胀毒素(CDT)是细菌毒素家族的一种蛋白毒素,是多种革兰氏阴性菌的重要毒力因子,如空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、伴放线杆菌等。该毒素的致病机理是通过破坏靶细胞DNA造成细胞损伤,最终导致细胞的分裂周期停滞甚至死亡。论文主要... 细胞致死膨胀毒素(CDT)是细菌毒素家族的一种蛋白毒素,是多种革兰氏阴性菌的重要毒力因子,如空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、伴放线杆菌等。该毒素的致病机理是通过破坏靶细胞DNA造成细胞损伤,最终导致细胞的分裂周期停滞甚至死亡。论文主要总结了近几年来细胞致死膨胀毒素的相关研究,对其结构、生物学功能、转运机制及应用前景等研究进展进行总结及讨论,旨在为该毒素的相关研究提供一定参考。 展开更多
关键词 细胞致死膨胀毒素 蛋白毒素 基因毒素 DNA损伤
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人和禽源螺杆菌的细胞致死性扩张毒素
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《中国家禽》 北大核心 2006年第12期57-57,共1页
螺杆菌能导致人类的腹泻,胃肠炎和肝病,诱发禽类肝炎和肠炎。比利时研究人员对10株禽源和3株人源螺杆菌进行了细胞致死性扩张毒素(cdtB)的检测,以及不同来源的毒素是否存在活性的差异。采用PCR技术检测。用超声波处理所有的菌株与... 螺杆菌能导致人类的腹泻,胃肠炎和肝病,诱发禽类肝炎和肠炎。比利时研究人员对10株禽源和3株人源螺杆菌进行了细胞致死性扩张毒素(cdtB)的检测,以及不同来源的毒素是否存在活性的差异。采用PCR技术检测。用超声波处理所有的菌株与上皮细胞Hep-2孵育后进行显微观察,用流式细胞计数仪对细胞进行DNA分析。结果显示,所有分离株都检测到cdtB,但只有来自人类的分离株CCUG33839的cdtB具有功能活性。与这个菌株的超声波处理物共孵育时,上皮细胞Hep-2数量显著增加,细胞核也成比例的扩张。巨细胞和多核型细胞也出现同样的结果。另外,应力纤维出现积聚。DNA分析的结果显示31.0%的细胞处于S/G2细胞周期。用于试验的菌株都具有cdtB基因,但只有人源螺杆菌的细胞致死性毒素在体外表现典型的生物学活性。 展开更多
关键词 上皮细胞 螺杆菌 致死 毒素 扩张 禽源 生物学活 HEP-2 超声波处理 DNA分析
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仔猪水肿病流行情况的病因分析
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作者 杨晓峰 《湖北畜牧兽医》 2009年第2期24-25,共2页
猪水肿病(Edema disease of Pigs)是仔猪一种常见的由产Vero细胞毒素(Verotoxin,VT)大肠杆菌(VTEC)引起的致死性传染病。该病发病率虽不很高,但病死率却很高,给仔猪的培育造成较大的损失。主要发生于断乳仔猪,体况健壮、生长... 猪水肿病(Edema disease of Pigs)是仔猪一种常见的由产Vero细胞毒素(Verotoxin,VT)大肠杆菌(VTEC)引起的致死性传染病。该病发病率虽不很高,但病死率却很高,给仔猪的培育造成较大的损失。主要发生于断乳仔猪,体况健壮、生长快的仔猪最为常见。 展开更多
关键词 仔猪水肿病 病因分析 流行情况 细胞毒素 大肠杆菌 断乳仔猪 传染病 致死
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