目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选...目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。展开更多
目的:主要研究乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染肝细胞后,细胞周期激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)调控宿主限制性因子SAMHD1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1)磷酸化的分子...目的:主要研究乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染肝细胞后,细胞周期激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)调控宿主限制性因子SAMHD1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1)磷酸化的分子机制。方法:利用si RNA干扰技术,特异性处理肝癌细胞Huh7.0的对照组、干扰CDK1组和干扰CDK2组,分别用Southern blot检测这3组中乙肝病毒复制的变化,Western blot检测这3组中SAMHD1磷酸化水平的变化,流式细胞仪检测这3组中细胞周期的变化;进一步通过免疫共沉淀技术鉴定肝癌细胞中CDK2激酶和SAMHD1的相互作用。结果:在肝癌细胞Huh7.0中,与对照组相比,干扰CDK1组和干扰CDK2组的细胞周期明显有差异,分别停滞在G_2期(P=0.001)或G1期(P=0.001)。Western blot结果表明,干扰CDK2后,宿主限制性因子SAMHD1磷酸化水平下降48%,Southern blot结果表明病毒复制水平降低57%(P=0.003),而干扰CDK1后病毒复制水平没有明显变化(P=0.325)进一步通过免疫共沉淀发现在肝癌细胞Huh7.0中,CDK2激酶可与SAMHD1发生相互作用,并且相互作用发生在细胞核内。结论:HBV感染肝细胞后,募集CDK2调控宿主限制性因子SAMHD1的磷酸化,拮抗其抗病毒作用。展开更多
文摘目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。
