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利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除H9c2细胞Tudor-SN基因对细胞周期的阻滞及增殖的抑制 被引量：2
1
作者 甘世虎 崔晓腾 +6 位作者 马锦征 房丽娇 刘明霞 任媛媛 曹晓娜 杨洁 苏超 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期754-759,共6页
基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因... 基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,实现对大鼠心肌H9c2细胞Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)基因的敲除,并观察其对H9c2细胞周期及增殖的影响。选择PX462质粒为载体,利用软件设计能特异性识别H9c2细胞Tudor-SN基因第2个外显子的上下游sgRNA(single-guided RNA),构建1对重组质粒。随后,将这对质粒共同转入H9c2细胞中,再挑选阳性单克隆细胞进行培养。Western印迹鉴定其敲除效果,并用敲除成功的细胞株通过流式细胞术及CCK-8(cell counting kit 8)实验进行细胞周期和增殖的检测。Western印迹结果显示,在阳性细胞中,Tudor-SN蛋白不表达,成功实现了对Tudor-SN基因的敲除。流式结果显示,Tudor-SN基因敲除(KO)细胞发生了G1期阻滞。G1期细胞占比由H9c2野生型(WT)细胞的54.28%±0.21%升高到KO细胞的61.96%±0.40%(*P<0.05)。CCK-8实验结果显示,KO细胞的增殖速率减慢。生长第6天的A值由WT细胞的2.82±0.03降低到KO细胞1.85±0.19(*P<0.05)。本实验成功构建了H9c2细胞Tudor-SN基因敲除细胞株,并检测到Tudor-SN基因敲除对细胞周期的阻滞及增殖的抑制,为研究Tudor-SN基因对心肌细胞功能的调控提供了便利的工具及研究的基础。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9基因编辑技术 基因敲除 H9C2细胞 Tudor-SN基因 细胞周期阻滞与增殖
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附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡及细胞周期的影响 被引量：8
2
作者 丁芸霞 邹玺 +2 位作者 吴坚 葛竑璐 胡守友 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2013年第5期915-919,共5页
目的:观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖以及凋亡的影响。方法:运用MTT法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果:①附... 目的:观察附子生物碱对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖以及凋亡的影响。方法:运用MTT法,测定经附子生物碱处理后体外培养SGC-7901细胞的增殖活性。分别采用Annexin-V/PI双染法、流式细胞仪检测附子生物碱对细胞凋亡周期的影响。结果:①附子生物碱分别作用人胃癌细胞株SGC-7901 24 h、48 h、72 h后的IC50为0.231 8±0.002 2、0.160 1±0.022 7、0.103 1±0.023 1 mg·mL-1,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)。②当附子生物碱浓度达到0.8 mg·mL-1时出现明显的凋亡,凋亡率为(59.38±5.05)%。③流式细胞仪检测发现,与空白对照组相比,给药组处于S期细胞的比例显著增多,并且G0/G1期前出现凋亡亚二倍体峰。结论:附子生物碱体外对人胃癌细胞SGC-7901具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,还可使SGC-7901细胞阻滞于S期。 展开更多
关键词 附子生物碱 人胃癌细胞株SGC-7901 细胞增殖细胞凋亡细胞周期
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玉米低聚肽促HL-7702人肝细胞增殖作用 被引量：4
3
作者 刘艳 林峰 +3 位作者 金振涛 陈亮 易维学 蔡木易 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期43-46,共4页
采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期及细胞存活率,对玉米低聚肽的促HL-7702人肝细胞增殖作用进行了研究。结果显示:玉米低聚肽在1～10 g/L内,可促进肝细胞生长,其促进作用与肽浓度呈正相关;给予肝细胞玉米低聚肽24 h后,细... 采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期及细胞存活率,对玉米低聚肽的促HL-7702人肝细胞增殖作用进行了研究。结果显示:玉米低聚肽在1～10 g/L内,可促进肝细胞生长,其促进作用与肽浓度呈正相关;给予肝细胞玉米低聚肽24 h后,细胞周期中S期及G2/M期细胞的比例上升;并且在此浓度范围内,玉米低聚肽对肝细胞存活率及形态影响较小。研究表明,玉米低聚肽有促进HL-7702人肝细胞增殖及DNA合成的作用,可显著提高肝细胞活力,提示其在保肝护肝中可能具有一定作用。 展开更多
关键词 玉米低聚肽 HL-7702人肝细胞 增殖 细胞周期
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二氢青蒿素通过PTEN/PI3K/Akt通路抑制胃癌细胞的增殖 被引量：15
4
作者 钟轩 王爱军 +3 位作者 王红钰 冯俊伟 郑宝军 施华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期190-194,共5页
目的:探讨二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)通过PTEN/PI3K/Akt通路对人胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响及其分子机制。方法:不同浓度(6.25、12.5、25、50、100μmol/L)DHA作用SGC7901细胞24、48、72h后,细胞计数法检测SGC7901细胞... 目的:探讨二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)通过PTEN/PI3K/Akt通路对人胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响及其分子机制。方法:不同浓度(6.25、12.5、25、50、100μmol/L)DHA作用SGC7901细胞24、48、72h后,细胞计数法检测SGC7901细胞增殖的情况。不同浓度DHA作用SGC7901细胞24 h后,流式细胞术测定细胞周期的分布;RT-PCR和Western blotting分别测定cyclin D1、P27的mRNA和蛋白的表达水平;Western blotting测定PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平。分别以PTEN特异性小干扰RNA(PTEN-siRNA)及无关序列对照siRNA(non-specific siRNA,NS-siRNA)转染细胞,加入100μmol/L DHA,作用SGC7901细胞24 h后,Western blotting测定cyclin D1、P27、PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平。结果:DHA剂量和时间依赖性抑制SGC7901细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G1期(P<0.05)。RT-PCR和Western blotting分析结果显示,100μmol/L DHA作用SGC7901细胞24 h后,cyclin D1 mRNA和蛋白表达显著下降,P27 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05)。PTEN的蛋白表达显著增加,PI3K和p-Akt的表达水平逐渐下降(P<0.05)。敲低PTEN表达后,DHA对PI3K和p-Akt的表达水平的影响明显减弱,与此同时,cyclin D1表达水平升高,P27表达有所下降(P<0.05)。结论:DHA通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路的活化,影响细胞增殖相关基因cyclin D1和P27的表达,进而使细胞阻滞于G0/G1期,抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖。 展开更多
关键词 二氢青蒿素 胃癌增殖Akt通路细胞周期
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辐射诱导转录子RIGb cDNA对HeLa细胞增殖的抑制作用 被引量：1
5
作者 孙志增 徐勤枝 +1 位作者 隋建丽 周平坤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期384-389,共6页
核酸序列同源性分析和RT -PCR确定辐射诱导转录子RIGb是染色质重构基因CHD6表达的一个剪接转录子.Northern杂交结果表明,0 . 5Gyγ射线诱导RIGbmRNA表达增加,但4Gy大剂量照射对其表达无明显的影响.正常成人组织Northern杂交结果显示,RIG... 核酸序列同源性分析和RT -PCR确定辐射诱导转录子RIGb是染色质重构基因CHD6表达的一个剪接转录子.Northern杂交结果表明,0 . 5Gyγ射线诱导RIGbmRNA表达增加,但4Gy大剂量照射对其表达无明显的影响.正常成人组织Northern杂交结果显示,RIGb基因在心脏、肝脏和睾丸中有高表达.细胞生长曲线分析结果表明,转染和稳定表达RIGb的人宫颈癌细胞(HeLa)的增殖生长受到明显抑制,细胞周期分析发现G1/S期阻滞. 展开更多
关键词 辐射诱导基因 基因表达 细胞周期 细胞增殖
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XB130基因对肝细胞癌细胞增殖的影响及其机制 被引量：2
6
作者 许文芳 费迎明 +3 位作者 周建康 陈将南 周亚娣 吕秋琼 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期117-122,共6页
背景与目的:XB130蛋白在肿瘤细胞增殖和侵袭中有重要作用,但在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的研究却极少,其作用至今仍不清楚。该研究拟探讨XB130基因对HCC细胞增殖能力的影响及其可能的下游机制。方法:采用蛋白[质]印迹法... 背景与目的:XB130蛋白在肿瘤细胞增殖和侵袭中有重要作用,但在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的研究却极少,其作用至今仍不清楚。该研究拟探讨XB130基因对HCC细胞增殖能力的影响及其可能的下游机制。方法:采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测HCC细胞系Huh7、HepG2、SNU449及正常肝脏细胞系HL7702内XB130蛋白的表达。将XB130-siRNA转染Huh7细胞后,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测Huh7细胞活性,流式细胞术检测Huh7细胞周期,Western blot检测p-AKT、p-GSK3β、cyclin D1及p-Rb的蛋白表达水平,反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测E2F/DP-1的靶基因cyclin E1、c-Myc及PCNA的mRNA表达水平。结果:XB130蛋白在Huh7、Hep G2、SNU449和HL7702细胞中的相对表达量分别为0.66±0.10、0.78±0.11、0.83±0.08和0.32±0.06,各HCC细胞与HL7702细胞的差异均有统计学意义(P均<0.01)。XB130-siRNA转染可成功抑制Huh7细胞中XB130蛋白的表达。沉默XB130后,Huh7细胞活性在72 h后明显减弱(P<0.001),48 h后G0/G1期细胞比例升高,S和G2/M期细胞比例降低(P均<0.01),p-AKT、p-GSK3β、cyclin D1及p-Rb的蛋白表达下降(P均<0.01),cyclin E1、c-Myc及PCNA的mRNA表达下降(P?均<0.001)。结论:XB130通过对细胞周期蛋白及下游转录因子的调控,影响HCC细胞增殖。 展开更多
关键词 肝细胞癌 XB130 SIRNA转染 细胞增殖:细胞周期
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Hes1对急性髓系白血病患者骨髓CD34^＋CD38^-细胞的作用及其机制研究
7
作者 田晨 贾勇圣 +1 位作者 胡冬至 张翼鷟 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期1422-1425,共4页
目的:研究Hes1对急性髓系白血病(AML)患者骨髓CD34+CD38-细胞的作用及其机制。方法:收集初治AML患者及正常供者骨髓样本后,通过密度梯度离心法获取单个核细胞,流式细胞术检测CD34+CD38-细胞比例及其细胞周期。通过免疫磁珠法分选CD34+CD... 目的:研究Hes1对急性髓系白血病(AML)患者骨髓CD34+CD38-细胞的作用及其机制。方法:收集初治AML患者及正常供者骨髓样本后,通过密度梯度离心法获取单个核细胞,流式细胞术检测CD34+CD38-细胞比例及其细胞周期。通过免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞后,体外集落形成实验(CFC)检测其增殖能力,并通过Realtime PCR检测其Hes1的表达量。构建Hes1过表达逆转录病毒载体,感染正常供者骨髓CD34+细胞后,流式细胞术分析其细胞周期的改变,CFC检测其增殖的改变。结果:AML患者骨髓CD34+CD38-细胞比例明显低于正常对照,流式细胞术结果显示患者来源CD34+CD38-细胞大多数进入静止期,CFC结果显示患者CD34+CD38-细胞体外扩增能力下降。Realtime PCR结果发现患者CD34+CD38-细胞中Hes1表达上调。提高正常供者CD34+细胞中Hes1的表达后,细胞增殖减少,进入静止期。结论:在AML中CD34+CD38-细胞比例下降,进入静止期,与Hes1的表达上调有关。 展开更多
关键词 AML白血病 CD34+CD38-细胞 HES1 细胞周期增殖
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AT1-R siRNA对雌激素诱导的Ishikawa细胞生物学行为的影响 被引量：1
8
作者 苏卿 杨清 潘卓 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期1773-1777,共5页
目的:通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默血管紧张素受体1(angiotensin receptor 1,AT1R)的表达来研究其对雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖和细胞周期及凋亡的影响。方法:免疫荧光检测AT1R在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,转染AT1-R siRNA,We... 目的:通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默血管紧张素受体1(angiotensin receptor 1,AT1R)的表达来研究其对雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖和细胞周期及凋亡的影响。方法:免疫荧光检测AT1R在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,转染AT1-R siRNA,Western blot检测转染前后Ishikawa细胞中AT1R蛋白的表达。MTT检测雌激素诱导Ishikawa细胞的增殖及雌激素诱导的雌激素受体抑制剂作用下转染前后Ishikawa细胞的增殖,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulatedkinases 1/2,ERK1/2)表达。结果:免疫荧光检测AT1R表达于Ishikawa细胞,转染AT1-R siRNA 72 h后AT1R蛋白表达降低最显著,降低82.40%(P<0.05),为此检测转染72h后细胞增殖周期及凋亡,MTT结果显示,雌激素能诱导Ishikawa细胞增殖,封闭雌激素受体后雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖受到抑制,封闭雌激素受体后雌激素诱导的转染组细胞增殖较未转染组受到明显抑制;流式细胞周期结果显示,雌激素受体封闭后雌激素诱导的转染组细胞较未转染组S期减少,凋亡增多(P<0.05),其ERK1/2表达较未转染组明显降低(P<0.05)。结论:AT1R可促进雌激素诱导的Ishikawa细胞增殖,其机制可能与ERK1/2表达下降有关。 展开更多
关键词 Ishikawa细胞siRNA细胞增殖细胞周期AT1-R
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