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由mtDNA清除THP-1细胞构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化
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作者 王召宝 李媛 +1 位作者 宋绚丽 赵丽芳 《山东医药》 CAS 2024年第24期29-32,共4页
目的 观察由线粒体DNA(mtDNA)清除人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化。方法 取THP-1细胞,使用溴化乙锭(EB)清除细胞中mtDNA,构建新的人单核/巨噬细胞Rho0。取Rho... 目的 观察由线粒体DNA(mtDNA)清除人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化。方法 取THP-1细胞,使用溴化乙锭(EB)清除细胞中mtDNA,构建新的人单核/巨噬细胞Rho0。取Rho0细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Rho0-LPS组、Rho0-溶媒组);另取未经EB处理的THP-1细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Control-LPS组、Control-溶媒组);采用流式细胞术PI染色检测各组细胞周期,流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测算各组凋亡细胞数,Red-Zymosan染料吞噬实验评估各组细胞吞噬功能(平均荧光强度)。取Rho0细胞(Rho0组)和取未经EB处理的THP-1细胞(Control组),采用RT-qPCR法检测炎症因子(IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA)。结果 与Control-溶媒组比较,Rho0-溶媒组G0~G1期、S期、G2/M期比例降低及细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强,Control-LPS组细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强(P均<0.05);与Rho0-溶媒组比较,Rho0-LPS组G0~G1期比例降低及细胞凋亡数增加(P均<0.05)。与Control组比较,Rho0组IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10 mRNA表达升高(P均<0.05)。结论 清除mtDNA可导致Rho0细胞周期停滞,促进细胞凋亡,增强细胞吞噬功能及促炎功能。 展开更多
关键词 线粒体DNA 人单核/巨噬细胞 细胞周期 细胞凋亡 细胞吞噬功能 细胞促炎因子 细胞抑炎因子
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3对鸡前脂肪细胞分化的抑制作用
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作者 张新 金钊 +3 位作者 贾子秋 张珂 潘林 孙婴宁 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期36-42,共7页
【目的】解析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin-dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)在鸡前脂肪细胞分化中的作用,为阐明脂肪沉积的分子机制奠定理论基础。【方法】构建荧光表达载体pECFPCDKN3,转染至鸡永生化前脂肪细胞系(immo... 【目的】解析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin-dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)在鸡前脂肪细胞分化中的作用,为阐明脂肪沉积的分子机制奠定理论基础。【方法】构建荧光表达载体pECFPCDKN3,转染至鸡永生化前脂肪细胞系(immortalized chicken preadipocyte cell line,ICP1),观察CDKN3蛋白的亚细胞定位;采用油酸钠诱导ICP1分化,qRT-PCR检测分化过程中CDKN3 mRNA表达水平;将pCMVHA-CDKN3和pCMV-HA分别转染到ICP1中,转染24 h后进行诱导分化,通过油红O染色检测脂肪细胞分化情况,并利用qRT-PCR检测过表达CDKN3后脂肪分化相关基因的mRNA表达水平。【结果】转染了pECFP-CDKN3的细胞主要在细胞核中呈青色荧光信号,提示鸡CDKN3定位于细胞核;在诱导ICP1成脂分化的过程中,CDKN3 mRNA表达量逐渐升高;油红O染色结果显示:过表达CDKN3细胞内脂滴聚集减少,且脂肪分化相关基因C/EBPα、PPARγ、FABP4和FAS的表达水平均呈下降趋势,其中FAS显著下降(P<0.05),PPARγ极显著下降(P<0.01)。【结论】CDKN3是核蛋白,可抑制鸡前脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDKN3) 前脂肪细胞 脂肪分化 细胞定位
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层粘连蛋白和表皮生长因子对兔角膜内皮细胞周期的影响 被引量:15
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作者 李姝燕 吴静 +2 位作者 郝念 徐锦堂 赵松滨 《眼科新进展》 CAS 2004年第1期9-11,共3页
目的 观察层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用对兔角膜内皮细胞周期的影响。方法 体外培养角膜内皮细胞分为对照组、层粘连蛋白组、表皮生长因子 (EGF)组和联合应用组 ,倒置显微镜观察各组细胞形态及数目变化 ;计数 0、12、2 4、... 目的 观察层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用对兔角膜内皮细胞周期的影响。方法 体外培养角膜内皮细胞分为对照组、层粘连蛋白组、表皮生长因子 (EGF)组和联合应用组 ,倒置显微镜观察各组细胞形态及数目变化 ;计数 0、12、2 4、36h的各组细胞数目并绘制细胞生长曲线 ;流式细胞技术检测各组细胞周期。结果 倒置显微镜观察及细胞生长曲线显示 ,与对照组相比 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组细胞数目明显增多 ,其中联合应用组最为显著 ;细胞周期检测结果显示 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组G0~G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 ) ,G2~M期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;EGF组和联合应用组S期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;联合应用组与层粘连蛋白组相比 ,G0~G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 )。结论 层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用都可明显促进角膜内皮细胞分裂增生 ,且联合应用有协同作用。 展开更多
关键词 表皮生长因子 层粘连蛋白 角膜内皮细胞 细胞周期 细胞培养
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具核梭杆菌调控牙龈卟啉单胞菌感染对口腔鳞状细胞癌KB细胞周期和细胞因子分泌的研究 被引量:7
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作者 王晴萱 刘俊超 潘亚萍 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期211-215,共5页
目的:通过研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)和具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,F.nucleatum)感染对KB细胞的细胞周期和炎症因子分泌的调控,初步探讨牙周细菌感染对口腔鳞状细胞癌进展和炎症反应的影响。方... 目的:通过研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)和具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,F.nucleatum)感染对KB细胞的细胞周期和炎症因子分泌的调控,初步探讨牙周细菌感染对口腔鳞状细胞癌进展和炎症反应的影响。方法:建立P.gingivalis和F.nucleatum单独或联合感染KB细胞模型,透射电镜观察细菌感染细胞情况,流式细胞术检测细胞周期变化,酶联免疫法检测IL-6和IL-8蛋白分泌水平。结果:P.gingivalis联合F.nucleatum感染KB细胞8h抑制细胞周期进程,感染24h后加速细胞周期进程;P.gingivalis联合F.nucleatum感染促进KB细胞分泌IL-6和IL-8,并且有时间和F.nucleatum浓度依赖性。结论:牙周致病菌之间的联合作用更能促进口腔鳞状细胞癌的发展及免疫炎症反应。 展开更多
关键词 具核梭杆菌 牙龈卟啉单胞菌 细胞周期 细胞因子 KB细胞
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细胞周期调控因子在喉癌、喉咽癌发病中的作用研究进展 被引量:3
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作者 陈万军 王天铎 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第42期110-111,共2页
关键词 细胞周期 细胞周期调控因子 喉肿瘤 喉癌 喉咽癌
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细胞周期素E与转录因子在子宫内膜癌的表达及意义 被引量:1
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作者 吴海燕 王晓燕 +1 位作者 邓晓杨 曾俊 《成都医学院学报》 CAS 2016年第6期724-726,共3页
目的检测细胞周期素E(Cyclin E)与转录因子(Twist)在子宫内膜癌的表达,并探讨Cyclin E与Twist在子宫内膜癌发生发展中的关系。方法采用免疫组化法检测子宫内膜癌中Cyclin E和Twist的表达情况,并用半定量方法对镜下的阳性细胞百分比以及... 目的检测细胞周期素E(Cyclin E)与转录因子(Twist)在子宫内膜癌的表达,并探讨Cyclin E与Twist在子宫内膜癌发生发展中的关系。方法采用免疫组化法检测子宫内膜癌中Cyclin E和Twist的表达情况,并用半定量方法对镜下的阳性细胞百分比以及染色强度给予评分。结果 Cyclin E在子宫内膜癌中的阳性表达率(71.25%)明显高于正常子宫内膜组织(6.00%),差异有统计学意义(P<0.001);Twist在子宫内膜癌中的阳性表达率(77.50%)明显高于正常子宫内膜组织(10.00%),差异有统计学意义(P<0.001)。在子宫内膜癌中,Cyclin E和Twist的表达呈正相关(P<0.05)。结论 Cyclin E及Twist在子宫内膜癌中高表达,二者在子宫内膜癌的发生发展过程中存在一定联系。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 细胞周期素E 转录因子
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后期促进因子与细胞周期 被引量:1
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作者 石娇 于维军 于业辉 《动物医学进展》 CSCD 2005年第3期23-25,共3页
近年来,发现了细胞周期中许多关键的调控因子,cdc 基因、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及细胞周期蛋白(cyclin)等。其中有丝分裂后期促进因子(APC)构成泛素 蛋白水解酶复合体通路,参与周期蛋白和周期蛋白依赖激酶降解,促进细胞周期的运转。... 近年来,发现了细胞周期中许多关键的调控因子,cdc 基因、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及细胞周期蛋白(cyclin)等。其中有丝分裂后期促进因子(APC)构成泛素 蛋白水解酶复合体通路,参与周期蛋白和周期蛋白依赖激酶降解,促进细胞周期的运转。同时,APC的活性也受到 G1 期和 M期的细胞周期依赖蛋白激酶(CDK)的调节, cdc20 为APC的正调控因子,APC与细胞周期各因子间协调作用,促进细胞周期的运转。 展开更多
关键词 后期促进因子 细胞周期 泛素-蛋白 水解酶复合体通路
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上调胰岛素样生长因子结合蛋白6基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响 被引量:1
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作者 陈永良 程玉 +3 位作者 宋巍 周丽丽 严鹏 薛晶 《解剖学杂志》 CAS 2022年第4期330-333,350,共5页
目的:探究上调胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响。方法:体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,转染IGFBP-6过表达质粒,实时荧光定量PCR法验证转染效率;流式细胞术检测转染IGFBP-6后... 目的:探究上调胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响。方法:体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,转染IGFBP-6过表达质粒,实时荧光定量PCR法验证转染效率;流式细胞术检测转染IGFBP-6后的细胞周期的改变及凋亡的情况;免疫印迹检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果:IGFBP-6转染MDA-MB-231细胞后,IGFBP-6的mRNA水平明显上调;PCNA、细胞周期蛋白D1的表达水平明显降低;细胞G1/S期阻滞;凋亡细胞增多。结论:IGFBP-6可以显著抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白6 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 细胞周期 凋亡
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细胞周期调控因子在中耳胆脂瘤上皮中的表达 被引量:1
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作者 孙文忠 徐志文 +1 位作者 唐安洲 苏纪平 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2005年第2期95-97,共3页
目的根据细胞周期调控基因表达情况探讨中耳胆脂瘤上皮细胞增殖的分子机制。方法采用免疫组织化学方法检测胆脂瘤上皮细胞和胆脂瘤患者外耳道上皮细胞中周期蛋白依赖性激酶4(cyclindependentkinase4,CDK4)及其抑制因子p15、p16的表达,... 目的根据细胞周期调控基因表达情况探讨中耳胆脂瘤上皮细胞增殖的分子机制。方法采用免疫组织化学方法检测胆脂瘤上皮细胞和胆脂瘤患者外耳道上皮细胞中周期蛋白依赖性激酶4(cyclindependentkinase4,CDK4)及其抑制因子p15、p16的表达,并结合炎症及骨质破坏程度作统计学分析。结果CDK4、p16在胞核、胞浆以棕黄色或棕褐色颗粒表达,并以胞核为主,而p15仅以胞核棕黄色或棕褐色颗粒表达。与皮肤相比,CDK4、p15、p16在胆脂瘤上皮细胞的表达显著增强,上皮下重度炎症可增强CDK4的表达;不同的骨质破坏程度上述指标的表达无显著性差异。结论胆脂瘤上皮细胞增殖活性增强,同时抑制细胞增殖的机制也增强;局部炎症可增强胆脂瘤上皮细胞的增殖活性。 展开更多
关键词 表达 CDK4 胆脂瘤上皮细胞 中耳胆脂瘤 骨质破坏 增殖活性 炎症 细胞周期调控因子 免疫组织化学方法 胞浆
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碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响 被引量:2
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作者 卞徽宁 陈华德 +4 位作者 郑少逸 赖文 高辉 熊兵 刘族安 《广州医学院学报》 2006年第4期14-17,共4页
目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob last growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验。选用含1、... 目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob last growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验。选用含1、5、10、50、100、500ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P<0.05),且具有剂量依赖性。②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%。凋亡细胞百分比由7.2%±0.56%递减为2.3%±0.49%(P<0.05)。结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 细胞周期 细胞凋亡
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子研究进展 被引量:2
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作者 黄健 王国华 《华夏医学》 1999年第1期115-117,共3页
细胞周期与细胞癌变的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一。细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞... 细胞周期与细胞癌变的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一。细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞转化、癌变。参与细胞周期调控的因子... 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶 基因缺失 细胞周期阻断 抑制因子 多肿瘤抑制基因 细胞周期调控 基因突变 细胞 抑癌基因 激酶活性
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激活转录因子2对肺癌AG490细胞增殖及细胞周期的影响及机制
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作者 高山 李振华 +1 位作者 耿爽 赵苏 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第12期27-29,共3页
目的探讨激活转录因子2(ATF2)对肺癌AG490细胞增殖及细胞周期的影响及机制。方法采用PCR法合成ATF2片段,采用第三代慢病毒包装体系得到ATF2过表达慢病毒及空载质粒对照病毒。将体外培养的肺癌AG490细胞随机分为对照组和观察组,分别感染... 目的探讨激活转录因子2(ATF2)对肺癌AG490细胞增殖及细胞周期的影响及机制。方法采用PCR法合成ATF2片段,采用第三代慢病毒包装体系得到ATF2过表达慢病毒及空载质粒对照病毒。将体外培养的肺癌AG490细胞随机分为对照组和观察组,分别感染空载质粒对照病毒和ATF2过表达慢病毒,感染48 h时采用qRT-PCR法检测ATF2 mRNA相对表达量,采用流式细胞仪检测细胞周期;采用CCK-8试剂盒检测感染病毒第1、2、3、4天细胞增殖指数;感染48 h时采用Western blotting法检测ATF2、p53、p21蛋白相对表达量。结果感染病毒48 h时,对照组及观察组ATF2 mRNA相对表达量分别为0.42±0.05、1.00±0.12;ATF2蛋白相对表达量分别为0.23±0.04,0.76±0.13,两组比较P均<0.01。对照组及观察组感染病毒第4天细胞增殖指数比较P<0.01,其余时间点比较P均>0.05。感染病毒48 h时,对照组及观察组G0/G1期细胞比例分别为79.7%、66.6%,S期分别为12.6%、21.5%,G2期分别为5.4%、11.4%,sub G1期分别为2.3%、0.5%,两组G0/G1、S、G2细胞比例比较P均<0.05。感染病毒48 h时,对照组及观察组p53蛋白相对表达量分别为2.7±0.4、1.6±0.2,p21蛋白相对表达量分别为1.8±0.3、0.2±0.0;两组比较P均<0.01。结论 ATF2可促进肺癌AG490细胞增殖、细胞周期活化;抑制p53、p21蛋白表达可能是其作用机制。 展开更多
关键词 肺癌 细胞增殖 细胞周期 激活转录因子2
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miR-let7c对小鼠精原细胞株GC-1spg细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A表达的调控作用
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作者 王欢 江莉 +1 位作者 唐媛媛 周洁 《山东医药》 CAS 2018年第7期46-48,共3页
目的观察微小RNA let7c(miR-let7c)对小鼠精原细胞株GC-1spg中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)表达的调控作用。方法构建过表达miR-let7c慢病毒、沉默表达miR-let7c慢病毒及空载体对照慢病毒,并用其感染GC-1spg细胞,分别为miR... 目的观察微小RNA let7c(miR-let7c)对小鼠精原细胞株GC-1spg中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)表达的调控作用。方法构建过表达miR-let7c慢病毒、沉默表达miR-let7c慢病毒及空载体对照慢病毒,并用其感染GC-1spg细胞,分别为miR-let7c上调组、miR-let7c下调组和对照组。转染后72 h收集三组细胞,用荧光定量PCR法检测CDKN1A mRNA,用Western blotting法检测CDKN1A蛋白。结果 miR-let7c上调组、miRlet7c下调组、对照组CDKN1A mRNA相对表达量分别为0.005 6±0.000 9、0.039 1±0.006 7、0.021 9±0.001 8,CDKN1A蛋白相对表达量分别为0.034 8±0.002 6、0.833 5±0.053 2、0.257 4±0.070 9。与对照组比较,miR-let7c上调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量低于miR-let7c下调组及对照组(P均<0.01),miR-let7c下调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.01)。结论 miR-let7c可负向调控小鼠精原细胞株GC-1spg中CDKN1A mRNA和蛋白表达。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A 微小RNA miR-let7c 精原细胞 动物实验
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地参游离酚对CCl_(4)所致肝细胞损伤细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响 被引量:2
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作者 李媛丽 洪玥 +6 位作者 孔霄 林琳 张天阳 李望 刘青 高春燕 卢跃红 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第3期333-340,共8页
通过体外实验,研究地参游离酚对CCl_(4)所致肝细胞损伤细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响。采用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的分布,采用试剂盒测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)的含量和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(Caspa... 通过体外实验,研究地参游离酚对CCl_(4)所致肝细胞损伤细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响。采用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的分布,采用试剂盒测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)的含量和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活化程度,同时采用免疫组化检测环氧化酶-2(COX-2)、白介素6(IL-6)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达水平。结果表明,与模型组相比,地参游离酚能显著降低CCl_(4)引起的细胞凋亡,影响细胞周期的分布,能显著降低炎症因子TNF-α、IL-8的含量并阻滞Caspase-3的活化程度(P<0.05),并不同程度降低COX-2、IL-6和iNOS蛋白表达水平(P<0.05)。地参游离酚通过抑制细胞凋亡、影响细胞周期分布和抑制炎症反应保护CCl_(4)所致的肝细胞损伤。 展开更多
关键词 地参 游离酚 四氯化碳 细胞损伤 细胞周期 炎症因子
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人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究 被引量:2
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作者 蓝建平 来晓瑜 +7 位作者 朱园园 孙洁 李静远 余建 谭亚敏 施继敏 林茂芳 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2004年第6期475-480,495,共7页
目的 :研究人端粒结合因子 1(telomere repeatbinding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法 :应用分子克隆技术扩增 TRF1基因全长 (TRF1FL )和 N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列 ,并克隆入 p EGFP... 目的 :研究人端粒结合因子 1(telomere repeatbinding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达。方法 :应用分子克隆技术扩增 TRF1基因全长 (TRF1FL )和 N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列 ,并克隆入 p EGFP- C2真核表达载体 ,表达绿色荧光 (GFP)融合蛋白 ;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性 Hela细胞和端粒酶阴性 WI38- 2 RA细胞 ,Western Blot验证目的蛋白分子量 ,荧光显微镜观察 TRF1在间期细胞和染色体的定位 ;利用药物阻断 He La细胞于不同周期 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,半定量 Western Blot检测 TRF1在不同细胞周期中的表达。结果 :TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为 1.3kb和 0 .9kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为 80 k D和 6 0 k D。TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达 ,在染色体则表达于染色体未端 ,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达 ;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML )共定位 ,在端粒阳性细胞中则没有共定位。TRF1在 He La细胞中以 M期表达量最高 ,G1/ S表达最低 ,M期表达量是 G1/ S期的 3.9倍 (t=12 .92 ,P<0 .0 1)。结论 :TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式 ,在 He L a细胞中 展开更多
关键词 端粒 端粒结合因子 基因 TRF1 细胞周期 表达
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细胞周期调控基因及Bcl-2、c-Jun基因在人肝细胞脂肪变性过程中的表达变化 被引量:2
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作者 包成 毕玉晶 +1 位作者 杨瑞馥 智发朝 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第37期12-14,共3页
目的观察细胞周期调控基因及Bcl-2、c-Jun基因在人肝细胞L02脂肪变性过程中的表达变化。方法以油酸和软脂酸(2∶1)混合液处理L02细胞0、5、10、20 h,建立人肝细胞脂肪变性模型。用油红O染色检测L02细胞内脂质含量;用荧光定量PCR技术检测... 目的观察细胞周期调控基因及Bcl-2、c-Jun基因在人肝细胞L02脂肪变性过程中的表达变化。方法以油酸和软脂酸(2∶1)混合液处理L02细胞0、5、10、20 h,建立人肝细胞脂肪变性模型。用油红O染色检测L02细胞内脂质含量;用荧光定量PCR技术检测L02细胞脂肪变性过程中CDK2、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、c-Jun mRNA表达。结果随造模时间延长,L02细胞内橘红色脂滴聚集越来越多,至造模20 h,肝细胞染成橘红色。L02细胞内CDK2 mRNA相对表达量逐渐升高,造模5 h达最高(P均<0.05),随后逐渐下降;CDK4 mRNA相对表达量逐渐升高,造模10 h达最高(P均>0.05),随后逐渐下降,造模20 h最低(P均>0.05);不同时间点Cyclin D1 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P均>0.05);Bcl-2 mRNA相对表达量随造模时间延长而升高,造模10 h达最高(P<0.05),随后降低;造模5、10、20 h的c-Jun mRNA相对表达量均较造模0 h高(P均<0.05),但无变化规律。结论人肝细胞L02脂肪变性过程中癌症相关基因CDK2、CDK4、Bcl-2、c-Jun表达先升高后降低,Cyclin D1表达变化不明显。 展开更多
关键词 细胞脂肪变性 细胞周期 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖性激酶 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 B细胞白血病-淋巴瘤基因2 C-JUN基因
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CDKN3基因在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长、细胞周期的影响 被引量:2
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作者 李苗苗 王海啸 陶国全 《山西医科大学学报》 CAS 2016年第6期496-501,共6页
目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)基因在肝癌组织中的表达,以及被沉默后对肝癌细胞生长和细胞周期的影响。方法采用普通及定量RT-PCR、蛋白免疫印迹法检测36例手术切除的肝癌组织... 目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)基因在肝癌组织中的表达,以及被沉默后对肝癌细胞生长和细胞周期的影响。方法采用普通及定量RT-PCR、蛋白免疫印迹法检测36例手术切除的肝癌组织和匹配的癌旁组织以及人肝癌细胞株中CDKN3的表达;观察沉默CDKN3表达后肝癌细胞生长曲线、克隆形成能力和细胞周期的变化。结果与癌旁样本相比,CDKN3基因在63.9%(23/36)肝癌组织中的mRNA表达显著上调,差异具有统计学意义(P<0.000 1);RNA干扰技术沉默CDKN3表达后,MHCC-LM3和Huh-7细胞生长和克隆形成能力被明显抑制(P<0.05);应用流式细胞术发现沉默CDKN3的表达能够诱导肝癌细胞发生G0/G1期阻滞(P<0.05)。结论 CDKN3基因在肝癌中表达上调,其通过影响细胞周期分布从而促进肝癌细胞的增殖,在肝癌发生、发展过程中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 原发性肝癌 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3 RNA干扰 基因沉默 细胞周期
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siRNA对卵巢癌细胞周期及EGFR表达的影响 被引量:1
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作者 陈爱平 张红玲 +1 位作者 宋慧 杨蕊蕊 《生物医学工程与临床》 CAS 2009年第2期142-145,共4页
目的体外构建编码人类表皮生长因子受体(EGFR)的小干扰RNA(siRNA)的质粒表达载体,观察其对卵巢癌Skov-3细胞EGFR的特异性抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响。方法构建pSilencer-EGFRsiRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转... 目的体外构建编码人类表皮生长因子受体(EGFR)的小干扰RNA(siRNA)的质粒表达载体,观察其对卵巢癌Skov-3细胞EGFR的特异性抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响。方法构建pSilencer-EGFRsiRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株Skov-3,实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌Skov-3细胞)、非特异性转染组(转染非特异性质粒载体)及特异性转染组。用RT-PCR的方法检测mRNA水平的变化,用免疫荧光法检测EGFR蛋白水平的变化,流式细胞仪检测其对卵巢癌细胞周期及凋亡的影响。结果成功构建pSilencer-EGFRsiRNA真核基因表达载体。psiRNA-EGFR质粒明显下调Skov-3细胞中EGFR的表达,阻断细胞周期在G1期,促进细胞凋亡。结论重组质粒psiRNA-EGFR能有效地抑制Skov-3细胞内EGFR的表达、抑制细胞增殖,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布、降低S期细胞比例和促进细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 表皮生长因子受体 RNA干扰 细胞周期
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抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8表达对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌功能的影响观察 被引量:1
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作者 张艳 王晨菲 +1 位作者 王思瑶 罗荔 《山东医药》 CAS 2020年第18期35-39,共5页
目的观察抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)表达对MIN6胰岛β细胞胰岛素分泌功能及细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法将培养好的MIN6细胞分为3组,观察组转染siRNA-CDK8慢病毒液(可抑制细胞CDK8表达),空白组不给予任何干预,对... 目的观察抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)表达对MIN6胰岛β细胞胰岛素分泌功能及细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法将培养好的MIN6细胞分为3组,观察组转染siRNA-CDK8慢病毒液(可抑制细胞CDK8表达),空白组不给予任何干预,对照组转染siRNA-NC慢病毒液(阴性对照),培养48 h。CCK-8检测各组细胞增殖活性(OD值),流式细胞术观察各组细胞周期分布,ELISA法检测各组细胞上清液胰岛素,荧光定量PCR法检测各组细胞CDK8、胰岛素合成相关转录因子(PDX1、INS2和MAFA)、胰岛素转运相关因子GLUT2 mRNA,Western blotting检测各组细胞CDK8、细胞周期蛋白(Cyclin)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、增殖细胞核抗原(PCNA)。结果与对照组及空白组比较,观察组细胞OD值降低,G0/G1、S期细胞比例增加,细胞上清液胰岛素水平降低,CDK8、PDX1、INS、MAFA、GLUT2 mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与对照组及空白组比较,观察组CDK8、Cyclin D1、PCNA、PPARγ蛋白相对表达量降低(P均<0.01)。结论抑制CDK8表达的MIN6细胞,细胞增殖活性显著下降,胰岛素分泌减少,其机制可能与抑制Cyclin D1、PCNA及PPARγ蛋白表达相关。 展开更多
关键词 细胞周期素依赖蛋白激酶8 胰腺Β细胞 胰岛素 糖尿病 胰岛素合成相关转录因子 胰岛素转运相关因子 细胞周期蛋白 过氧化物酶体增殖剂激活受体γ 增殖细胞核抗原
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细胞周期调控蛋白在肾脏疾病中的表达及意义 被引量:6
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作者 林婷 庄永泽 《中国中西医结合肾病杂志》 2010年第8期743-746,共4页
关键词 细胞周期调控蛋白 肾脏疾病 信号传导途径 酪氨酸激酶受体 细胞增殖 蛋白表达水平 生长因子 蛋白分子
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