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细胞凋亡抑制家族蛋白在阿尔茨海默病动物模型中的表达及其初步作用机制研究 被引量:3
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作者 路亚岚 周澧 +2 位作者 韩云林 王克维 秦川 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第8期898-906,共9页
随着全球老龄化日益严重,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)作为神经退行性疾病的最常见类型,以进行性认知障碍为主要临床表现,以老年斑、神经纤维缠结和神经元及突触的凋亡缺失为主要病理特征.细胞凋亡抑制家族蛋白(inhibitor of ... 随着全球老龄化日益严重,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)作为神经退行性疾病的最常见类型,以进行性认知障碍为主要临床表现,以老年斑、神经纤维缠结和神经元及突触的凋亡缺失为主要病理特征.细胞凋亡抑制家族蛋白(inhibitor of apoptosis family protein,IAP)是一类内源性细胞凋亡抑制蛋白,它们在AD病理进程中的功能尚未十分明确.本研究从AD患者数据库、动物模型和诱导的脑片模型分析IAPs蛋白表达,并通过EMSA和免疫印迹实验初步探索了NFκB信号通路的活化.结果表明:存活蛋白(Survivin)在AD患者、小鼠模型以及Aβ、冈田酸和LPS诱导脑片中共同上调,同时NFκB通路被显著激活,两者变化趋势相似,可能通过NFκB-Survivin轴抵抗神经元凋亡. Survivin蛋白在AD中的进一步深入研究将成为AD治疗和预防的重要靶标. 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 细胞凋亡抑制家族蛋白 APP/PS1小鼠模型 脑片 NFκB通路
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衣康酸通过抑制神经损伤诱导蛋白1介导的质膜破裂减轻脓毒症急性肺损伤巨噬细胞泛凋亡
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作者 陈梦瑞 谭小华 +3 位作者 钟文静 沙涵茜 梁丽莹 刘绍坤 《中南大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第6期970-985,共16页
目的:脓毒症急性肺损伤(sepsis-associated acute lung injury,S-ALI)是加强监护病房(intensive care unit,ICU)患者的重要致死原因之一,其发病机制尚未完全阐明,仍缺乏有效的治疗措施。巨噬细胞溶解性细胞死亡是SALI炎症级联反应的关... 目的:脓毒症急性肺损伤(sepsis-associated acute lung injury,S-ALI)是加强监护病房(intensive care unit,ICU)患者的重要致死原因之一,其发病机制尚未完全阐明,仍缺乏有效的治疗措施。巨噬细胞溶解性细胞死亡是SALI炎症级联反应的关键病理机制。其中,泛凋亡(PANoptosis)是以泛凋亡小体组装及激活为特征的新型溶解性细胞死亡方式,而神经损伤诱导蛋白1(ninjurin 1,NINJ1)作为一种新型膜成孔蛋白,在泛凋亡质膜破裂(plasma membrane rupture,PMR)中发挥关键作用。衣康酸在机体抗炎反应中发挥重要作用,但衣康酸在S-ALI巨噬细胞泛凋亡中的作用仍未阐明。本研究通过探讨衣康酸对S-ALI巨噬细胞泛凋亡的影响,旨在为治疗S-ALI提供新思路。方法:采用6~8周龄、体重18~20 g雄性无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级C57BL/6J小鼠为实验对象,经腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立经典S-ALI小鼠模型;采用蛋白质印迹法观察S-ALI模型小鼠肺组织泛凋亡小体相关蛋白质的表达变化,蛋白质印迹法、实时逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)及糖代谢组学检测S-ALI模型小鼠肺组织内衣康酸代谢途径相关酶表达及衣康酸含量的变化。采用原代腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)开展细胞水平实验;采用衣康酸衍生物4-辛基衣康酸酯(4-octyl itaconate,4-OI)预处理小鼠原代PMs,加入肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)诱导巨噬细胞泛凋亡。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)评估4-OI对巨噬细胞的毒性作用;蛋白质印迹法检测泛凋亡巨噬细胞衣康酸代谢途径相关酶的表达和4-OI对泛凋亡巨噬细胞泛凋亡小体相关蛋白质表达的影响,检测S-ALI模型小鼠肺组织内及泛凋亡巨噬细胞NINJ1蛋白的表达;活细胞染料FM4-64荧光染色检测4-OI处理对泛凋亡巨噬细胞PMR的改变,免疫荧光染色检测4-OI对泛凋亡巨噬细胞NINJ1蛋白表达及膜定位的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测4-OI对培养液上清及外周血血清中LDH释放的影响;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测S-ALI小鼠肺组织内NINJ1多聚体形成和4-OI对泛凋亡巨噬细胞NINJ1多聚体蛋白质表达的影响。结果:S-ALI模型小鼠肺组织中泛凋亡小体[NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、Gasdermin D(GSDMD)、Z-DNA结合蛋白1(Z-DNA binding protein 1,ZBP1)、胱天蛋白酶(caspase)-1和caspase-3]相关蛋白质表达显著上调,混合系蛋白激酶样结构域蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)S345磷酸化水平升高(均P<0.05),糖代谢组学显示衣康酸含量代偿性升高;泛凋亡巨噬细胞衣康酸合成酶顺乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,ACOD1)m RNA和免疫应答基因1(immunoresponsive gene 1,IRG1)蛋白质表达均显著上调(均P<0.01)。4-OI可显著抑制泛凋亡巨噬细胞泛凋亡小体相关蛋白质的表达,逆转泛凋亡巨噬细胞培养液上清LDH的释放,恢复质膜完整性。同时,4-OI可显著抑制泛凋亡巨噬细胞成孔膜蛋白NINJ1的表达及其在细胞膜上寡聚。结论:衣康酸可能通过抑制成孔蛋白NINJ1介导的PMR减轻巨噬细胞泛凋亡,本研究结果有望为S-ALI临床治疗提供新思路。 展开更多
关键词 脓毒症急性肺损伤 巨噬细胞 衣康酸 质膜破裂 神经损伤诱导蛋白1
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Klotho蛋白通过调控线粒体凋亡途径减轻缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤
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作者 郭英惠 代红燕 +3 位作者 姚雪萍 孟轩羽 左晓婷 孙湛 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第11期2137-2143,共7页
目的:探讨Klotho蛋白对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤大鼠心肌细胞的保护作用及机制研究。方法:以大鼠心肌细胞H9c2为研究对象,分为对照组、H/R组、低浓度Klotho+H/R组、高浓度Klotho+H/R组,经1μmol/L或10μmol/L Klotho... 目的:探讨Klotho蛋白对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤大鼠心肌细胞的保护作用及机制研究。方法:以大鼠心肌细胞H9c2为研究对象,分为对照组、H/R组、低浓度Klotho+H/R组、高浓度Klotho+H/R组,经1μmol/L或10μmol/L Klotho预处理心肌细胞后,进行H/R以诱导细胞损伤。流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率,DCFH-DA探针法检测各组心肌细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,试剂盒检测各组心肌细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量,JC-1法检测各组心肌细胞线粒体膜电位变化,测定各组心肌细胞中caspase-3和caspase-9活性,Western blot法检测各组心肌细胞中细胞色素C(cytochrome C, Cyt-C)、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,H/R组心肌细胞凋亡率增加(P<0.05),ROS水平和MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.05),caspase-3和caspase-9活性升高(P<0.05),线粒体Cyt-C和Bcl-2蛋白相对表达量下调(P<0.05),细胞质Cyt-C和Bax蛋白相对表达量上调(P<0.05);与H/R组比较,低、高浓度Klotho+H/R组大鼠心肌细胞凋亡减少(P<0.05),ROS水平和MDA含量降低而SOD活性升高(P<0.05),线粒体膜电位升高(P<0.05),caspase-3和caspase-9活性降低(P<0.05),线粒体Cyt-C和Bcl-2蛋白相对表达量上调(P<0.05),且细胞质Cyt-C和Bax蛋白相对表达量下调(P<0.05)。此外,高浓度Klotho对H/R诱导的心肌细胞中各项损伤指标改善更为显著(P<0.05)。结论:Klotho蛋白能够减轻H/R诱导的大鼠心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制线粒体介导的凋亡有关。 展开更多
关键词 心肌细胞 缺氧/复氧 KLOTHO蛋白 线粒体 细胞
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银杏内酯B通过PI3K/AKT信号通路抑制MH7A人成纤维样滑膜细胞增殖及其促细胞凋亡
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作者 刘璘琛 徐晓龑 +6 位作者 孙春萌 俞济荣 施青 孙君君 逄丹丹 卫斐然 刘兴 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第2期216-224,共9页
探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对MH7A人成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖抑制作用及其潜在机制。采用20μg/L肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)刺激MH7A构建关节炎细胞模型。经不同浓度GB作... 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对MH7A人成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖抑制作用及其潜在机制。采用20μg/L肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)刺激MH7A构建关节炎细胞模型。经不同浓度GB作用于MH7A细胞后,CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞侵袭力;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹分别检测基因转录和蛋白表达量。与对照组相比,GB对细胞活力的抑制作用呈现出一定的浓度和时间依赖性;GB显著抑制细胞侵袭力、增加细胞凋亡率和G_(0)/G_(1)期比例;GB显著上调细胞Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和p21 mRNA和下降Bcl-2、髓系白血病1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB;又称AKT)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K)、Cyclin D1和细胞周期调节蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA转录水平;同时,GB显著上调Bax、p21和Cleaved-caspase 3蛋白和下调Bcl-2、Mcl-1、p-AKT、p-PI3K、Cyclin D1和CDK4蛋白表达量,且伴有p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和Bcl-2/Bax比值的降低。综上,GB通过抑制PI3K/AKT信号通路,阻滞MH7A细胞G_(1)期向S期转化、抑制细胞活力和侵袭力,并诱导MH7A人成纤维样滑膜细胞凋亡。 展开更多
关键词 银杏内酯B 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 类风湿性关节炎 MH7A细胞
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宰后成熟期间细胞凋亡酶-3抑制剂对滩羊肉保水性及嫩度的影响 被引量:1
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作者 马萌 马佳荣 +2 位作者 高爽 梁燕群 罗瑞明 《食品科学》 北大核心 2025年第5期96-105,共10页
为了探究宰后成熟期间细胞凋亡酶-3(Caspase-3)对滩羊肉保水性和嫩度的影响,取滩羊后腿肌肉分别注射Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO(DEVD处理组)和0.8%生理盐水(对照组),于4℃成熟0、6、12、24、48、96、192 h,并分析Caspase-3和Casp... 为了探究宰后成熟期间细胞凋亡酶-3(Caspase-3)对滩羊肉保水性和嫩度的影响,取滩羊后腿肌肉分别注射Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO(DEVD处理组)和0.8%生理盐水(对照组),于4℃成熟0、6、12、24、48、96、192 h,并分析Caspase-3和Caspase-9活性、水分分布、肌原纤维蛋白降解、微观结构变化及保水性和嫩度相关指标的变化情况。结果表明:随着滩羊肉成熟,与对照组相比,DEVD组的Caspase-3和Caspase-9活性受到抑制,肌原纤维小片化指数(myofibril fragmentation index,MFI)上升趋势显著低于对照组(P<0.05);宰后pH值呈现先下降后上升的趋势,但DEVD组极限pH值低于对照组,192 h时pH值高于对照组(P<0.05);宰后24~192 h,DEVD处理组蒸煮损失、离心损失、T_(23)横向弛豫时间以及剪切力均明显著高于对照组;此外,在宰后前期DEVD组滩羊肉腿肌微观结构完整性较对照组好。综上所述,宰后前期(0~24 h),DEVD通过抑制Caspase-3活性,保护肌原纤维完整性,减缓细胞凋亡进程,致使滩羊肉保水性和嫩度变差;宰后后期(48~192 h),pH值的回升减弱DEVD作用,Caspase-3迅速活化,加速肌原纤维降解,使滩羊肉嫩度得到改善。同时,MFI上升加剧肌肉结构的崩塌,造成滩羊肉保水性变差。整体上,DEVD处理对滩羊肉品质有阶段性影响。 展开更多
关键词 嫩度 保水性 滩羊肉 细胞酶-3抑制
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分泌型磷蛋白1、髓样分化因子88在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用
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作者 刘静宇 戴晨璐 +8 位作者 季敏 苏丽萍 梁敏 程明 刘轩铭 张琳琳 郜玉洁 陈少帅 蒲红伟 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第22期3510-3519,共10页
目的探究分泌型磷蛋白1(SPP1)和髓样分化因子88(MYD88)在二乙酰吗啡(DAM)致心肌凋亡中的作用。方法建立DAM成瘾SD大鼠动物模型,将12只SD大鼠随机分为NS组、DAM组,通过组织病理学检测方法,观察并比较两组大鼠心肌组织的形态学变化特征;通... 目的探究分泌型磷蛋白1(SPP1)和髓样分化因子88(MYD88)在二乙酰吗啡(DAM)致心肌凋亡中的作用。方法建立DAM成瘾SD大鼠动物模型,将12只SD大鼠随机分为NS组、DAM组,通过组织病理学检测方法,观察并比较两组大鼠心肌组织的形态学变化特征;通过TUNEL染色法观察各组心肌凋亡细胞数量;采用免疫组化检测SPP1和MYD88表达变化;RT-qPCR和Western blot检测SPP1、MYD88、Bcl2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl2)、胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达变化,同时Western blot检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)和Cleaved Caspase-9蛋白表达变化;敲低原代SD大鼠乳鼠心肌细胞(NRCMs)SPP1表达,分组为CON组、DA组和shSPP1#3+DA组。采用CCK-8法检测NRCMs细胞活力;流式细胞术检测NRCMs细胞凋亡率。结果成瘾SD大鼠心肌组织HE染色和TUNEL染色显示:与NS组相比,DAM组肌原纤维丝局部出现断裂;凋亡细胞数量明显增加(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果显示:SPP1、MYD88、Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA和蛋白表达均升高,同时Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平增加,相反的是,Bcl2的mRNA和蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);DAM干预NRCMs后,与CON组相比,DA组的细胞活力明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),RT-q PCR和Western blot结果显示:DA组中SPP1、MYD88、Bax、Caspase-3和Caspase-9的m RNA和蛋白表达均升高(P<0.05),同时Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平增加,Bcl2的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),然而shSPP1#3+DA组与DA组相反(P<0.05)。结论SPP1、MYD88在DAM诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用,降低SPP1的表达可降低DAM干预后心肌细胞的凋亡水平。 展开更多
关键词 心肌细胞 二乙酰吗啡 分泌型磷蛋白1 髓样分化因子88
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建鲤真核重组组织蛋白酶B与冷藏鱼片活性氧水平、细胞凋亡的关系及对品质形成的影响
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作者 钱邓帆 梁张婕 +8 位作者 程筝 李龙飞 汤婕 蒋宇维 郭淇羽 王梓颖 吕明哲 李冉 李树红 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第6期152-158,共7页
组织蛋白酶B(cathepsins B,CTS B)是鱼类死后肌肉中最活跃的溶酶体半胱氨酸蛋白酶之一。同时鱼死后活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累可诱导鱼肌肉细胞的凋亡。为探究鱼肉片冷藏期间CTS B与ROS水平、肌肉细胞凋亡之间的潜在关系... 组织蛋白酶B(cathepsins B,CTS B)是鱼类死后肌肉中最活跃的溶酶体半胱氨酸蛋白酶之一。同时鱼死后活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累可诱导鱼肌肉细胞的凋亡。为探究鱼肉片冷藏期间CTS B与ROS水平、肌肉细胞凋亡之间的潜在关系以及可能对鱼肉片品质形成的影响,该文将真核表达的建鲤CTS B注射于建鲤鱼肉片,4℃冷藏5 d,结果表明冷藏前3 d内,随CTS B活性上升,注射实验组和对照组ROS相对含量、蛋白羰基值、肌肉细胞凋亡率均提高,实验组显著高于对照组,而剪切力与持水力均呈下降趋势,实验组显著低于对照组。冷藏的最后2 d内,2组的细胞凋亡率差异不显著,鱼片品质劣变可能主要与CTS B活性持续显著升高有关。上述结果提示宰后冷藏鱼肉发生肌细胞凋亡,且冷藏初期CTS B活性与ROS氧化可能互相促进、协同发挥作用,加速了鱼肉蛋白氧化和细胞的凋亡。这可能是CTS B除直接的酶解作用外,导致鱼肉片冷藏期间软化、品质劣变的另一潜在原因。 展开更多
关键词 重组组织蛋白酶B 冷藏建鲤鱼肉片 活性氧 细胞 鱼肉品质
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杯苋甾酮对膝骨关节炎软骨细胞炎症和凋亡的抑制作用及机制
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作者 刘德仁 施蕾 +4 位作者 刘江宇 廖太阳 王培民 吴鹏 茆军 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第9期1775-1783,共9页
目的:探讨杯苋甾酮(CYA)对膝骨关节炎(KOA)软骨细胞炎症和凋亡的抑制作用及潜在机制。方法:前交叉韧带横断(ACLT)构建大鼠KOA模型。大鼠随机分为正常对照组、ACLT组、ACLT+CYA(10 mg/kg)组、ACLT+CYA+SR9009[脑和肌肉芳香烃受体核转录... 目的:探讨杯苋甾酮(CYA)对膝骨关节炎(KOA)软骨细胞炎症和凋亡的抑制作用及潜在机制。方法:前交叉韧带横断(ACLT)构建大鼠KOA模型。大鼠随机分为正常对照组、ACLT组、ACLT+CYA(10 mg/kg)组、ACLT+CYA+SR9009[脑和肌肉芳香烃受体核转录因子样蛋白1(BMAL1)抑制剂]组、ACLT+CYA+LY294002[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂]组,每组各6只。HE染色和番红固绿染色观察软骨病理学改变并进行国际骨关节炎研究协会(OARSI)分级;免疫组化法测定软骨中BMAL1、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化核因子κB(p-NF-κB)蛋白水平。用白细胞介素1β(IL-1β)诱导大鼠软骨细胞体外KOA模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA法测定细胞上清中促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;West⁃ern blot检测细胞中BMAL1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB和p-NF-κB蛋白水平。结果:体内实验中,与正常对照组比较,ACLT组出现明显软骨破损、裂隙,提示成功建立KOA模型;与ACLT组比较,ACLT+CYA组、ACLT+CYA+SR9009组和ACLT+CYA+LY294002组软骨破损、裂隙均减轻,OARSI分级降低(P<0.05),BMAL1表达水平升高(P<0.05),p-PI3K、p-AKT和p-NF-κB蛋白水平降低(P<0.05)。体外实验中,与IL-1β组比较,IL-1β+CYA组、IL-1β+CYA+SR9009组和IL-1β+CYA+LY294002组的IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.01),BMAL1表达水平升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-NF-κB/NF-κB比值降低(P<0.05)。结论:CYA可能通过激活BMAL1,进而抑制PI3K/AKT/NF-κB蛋白磷酸化来减轻KOA软骨细胞的炎症和凋亡。 展开更多
关键词 杯苋甾酮 膝骨关节炎 BMAL1蛋白 PI3K/AKT/NF-κB信号通路 炎症 细胞
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益气养阴通络方含药血清通过调控叉头盒蛋白K2和自噬抑制凋亡
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作者 宇汝翠 李金虎 +2 位作者 吴瑞影 陈亭亭 汪星星 《世界中医药》 北大核心 2025年第13期2256-2265,共10页
目的:探讨益气养阴通络方通过调控叉头盒蛋白K2(FOXK2)及相关自噬途径对糖尿病肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用。方法:制备益气养阴通络方的大鼠含药血清,选用20%浓度的大鼠含药血清作为实验用血清。将对数生长期的人肾上皮细胞(HK-2)分... 目的:探讨益气养阴通络方通过调控叉头盒蛋白K2(FOXK2)及相关自噬途径对糖尿病肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用。方法:制备益气养阴通络方的大鼠含药血清,选用20%浓度的大鼠含药血清作为实验用血清。将对数生长期的人肾上皮细胞(HK-2)分为对照组、模型组、含药血清组、FOXK2敲减对照组(sh-NC组)、FOXK2敲减组(sh-FOXK2组)、含药血清+FOXK2敲减组(含药血清+sh-FOXK2组),高糖条件下诱导糖尿病模型,含药血清组、含药血清+FOXK2敲减组别加入20%益气养阴通络方含药血清,sh-FOXK2组、含药血清+sh-FOXK2组细胞转染敲减FOXK2质粒。TUNEL检测凋亡细胞阳性率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫免疫印迹法(WB)检测细胞中FOXK2、凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p62表达,免疫荧光法检测细胞中LC3、p62表达,定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中FOXK2 mRNA表达。结果:与对照组比较,模型组凋亡细胞阳性率、细胞凋亡率高(P<0.05);与模型组比较,含药血清组凋亡细胞阳性率、细胞凋亡率低(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞中FOXK2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax、mTOR、p62蛋白相对表达量高,Bcl-2、LC3蛋白相对表达量低(P<0.05);LC3的荧光强度弱,p62的荧光强度强(P<0.05)。与模型组比较,含药血清组细胞中FOXK2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax、mTOR、p62蛋白相对表达量低,Bcl-2、LC3蛋白相对表达量高(P<0.05);LC3的荧光强度强,p62的荧光强度弱(P<0.05)。与对照组比较,模型组、sh-NC组细胞、细胞核、细胞质中FOXK2蛋白及细胞中FOXK2 mRNA相对表达量高(P<0.05);与模型组,sh-FOXK2组细胞、细胞核、细胞质中FOXK2蛋白及细胞中FOXK2 mRNA相对表达量低(P<0.05)。与对照组比较,模型组、sh-NC组凋亡细胞阳性率、细胞凋亡率高(P<0.05);与模型组比较,sh-FOXK2组凋亡细胞阳性率、细胞凋亡率低(P<0.05)。与对照组比较,模型组和sh-NC组细胞FOXK2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax、mTOR、p62蛋白相对表达量高(P<0.05),而Bcl-2及LC3蛋白相对表达量低(P<0.05),LC3荧光强度弱(P<0.05),p62荧光强度强(P<0.05),与模型组比较,sh-FOXK2组细胞Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax、mTOR、p62蛋白相对表达量低(P<0.05),Bcl-2、LC3蛋白相对表达量高(P<0.05),LC3荧光强度强(P<0.05),p62荧光强度弱(P<0.05);含药血清组、含药血清+sh-FOXK2组的凋亡细胞阳性率及凋亡率低,其中含药血清组含药血清+sh-FOXK2组最低(P<0.05);含药血清组和含药血清+sh-FOXK2组细胞中FOXK2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax、mTOR、p62蛋白相对表达量低,而Bcl-2、LC3蛋白相对表达量高(P<0.05);LC3荧光强度强,p62荧光强度弱(P<0.05),其中含药血清+sh-FOXK2组与模型组的差异最为显著(P<0.05)。结论:益气养阴通络方通过抑制FOXK2的表达,促进自噬,抑制糖尿病肾小管上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 益气养阴通络方 糖尿病 肾小管上皮细胞 叉头盒蛋白K2 细胞 细胞自噬 自噬相关蛋白 相关蛋白
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铁死亡抑制剂对大鼠视网膜光化学损伤感光细胞凋亡和Notch通路的影响 被引量:1
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作者 李雯雯 王瀚生 +1 位作者 宗师淼 余小平 《眼科新进展》 北大核心 2025年第6期429-434,共6页
目的探究铁死亡抑制剂Ferrostatin-1对视网膜光化学损伤(RPD)大鼠视网膜感光细胞凋亡和跨膜受体蛋白(Notch)通路的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为Control组(正常饲养大鼠,腹腔注射等体积生理盐水)、RPD组(RPD模型大鼠,腹腔注射等体积... 目的探究铁死亡抑制剂Ferrostatin-1对视网膜光化学损伤(RPD)大鼠视网膜感光细胞凋亡和跨膜受体蛋白(Notch)通路的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为Control组(正常饲养大鼠,腹腔注射等体积生理盐水)、RPD组(RPD模型大鼠,腹腔注射等体积生理盐水)、Ferrostatin-1组(RPD模型大鼠,腹腔注射5 mg·kg^(-1)的Ferrostatin-1)以及Ferrostatin-1+JFC组[RPD模型大鼠,腹腔注射5 mg·kg^(-1)的Ferrostatin-1和0.5 mg·kg^(-1)的Jagged1/FC嵌合蛋白(JFC,Notch通路激活剂)],每组15只。HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理形态;TUNEL染色观察各组大鼠视网膜感光细胞凋亡情况;使用相应试剂盒检测各组大鼠视网膜组织中的亚铁离子(Fe^(2+))、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)以及活性氧(ROS)表达水平;Western blot检测各组大鼠视网膜组织中转铁蛋白受体1(TfR1)、二价金属转运蛋白1(DMT1)、核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、Notch以及Split多毛增强子1(Hes1)蛋白的表达水平。结果Control组、RPD组、Ferrostatin-1组以及Ferrostatin-1+JFC组大鼠视网膜外核层厚度分别为(35.24±1.76)μm、(16.83±1.14)μm、(27.56±1.39)μm以及(21.48±1.23)μm,视网膜感光细胞凋亡率分别为(1.32±0.07)%、(18.57±1.63)%、(9.61±1.04)%以及(15.43±1.38)%。与Ferrostatin-1组相比,Ferrostatin-1+JFC组大鼠视网膜组织损伤程度加重,视网膜外核层厚度变薄,感光细胞凋亡率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RPD组大鼠Fe^(2+)、MDA、LDH、ROS表达水平,以及TfR1、DMT1、cleaved Caspase-3、Notch、Hes1蛋白相对表达水平均高于Control组,而GSH表达水平、Nrf2、SLC7A11以及GPX4蛋白相对表达水平均低于Control组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ferrostatin-1组大鼠Fe^(2+)、MDA、LDH、ROS表达水平,以及TfR1、DMT1、cleaved Caspase-3、Notch、Hes1蛋白相对表达水平均低于RPD组,而GSH表达水平、Nrf2、SLC7A11以及GPX4蛋白相对表达水平均高于RPD组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ferrostatin-1+JFC组大鼠Fe^(2+)、MDA、LDH、ROS表达水平,以及TfR1、DMT1、cleaved Caspase-3、Notch以及Hes1蛋白相对表达水平均高于Ferrostatin-1组,而GSH表达水平、Nrf2、SLC7A11以及GPX4蛋白相对表达水平均低于Ferrostatin-1组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论Ferrostatin-1可能通过抑制Notch通路降低RPD大鼠视网膜氧化应激和感光细胞凋亡,进而减轻视网膜组织损伤。 展开更多
关键词 铁死抑制 视网膜光化学损伤 感光细胞 NOTCH通路
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miR-199a-5p对胶质瘤U251细胞小窝蛋白1表达及细胞迁移和凋亡的影响 被引量:1
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作者 刘东慧 次云哲 +1 位作者 王春艳 麻雯熠 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期663-671,共9页
目的:探讨胶质母细胞瘤U251细胞过表达微小RNA (miR)-199a-5p后对细胞迁移和凋亡的影响,并阐明miR-199a-5p与小窝蛋白1 (CAV-1)的靶向调控关系。方法:体外培养胶质母细胞瘤U251细胞和少突胶质细胞瘤Hs683细胞,采用Western blotting法检... 目的:探讨胶质母细胞瘤U251细胞过表达微小RNA (miR)-199a-5p后对细胞迁移和凋亡的影响,并阐明miR-199a-5p与小窝蛋白1 (CAV-1)的靶向调控关系。方法:体外培养胶质母细胞瘤U251细胞和少突胶质细胞瘤Hs683细胞,采用Western blotting法检测2种细胞中CAV-1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-199a-5p表达水平。U251细胞分为空白组(不进行转染)、mimics NC组(转染空载质粒)和miR-199a-5p mimics组(转染miR-199a-5p模拟物),Hs683细胞分为空白组(不进行转染)、 inhibitor NC组(转染空载质粒)和miR-199a-5p inhibitor组(转染miR-199a-5p抑制物),采用RT-qPCR法检测各组细胞转染效率,Western blotting法检测各组细胞中CAV-1蛋白表达水平。TargetScan数据库预测miR-199a-5p与CAV-1在3'非翻译区(3'UTR)的结合位点,将psiCHECKTM-2-CAV-1-WT和psiCHECKTM-2-CAV-1-Mut分别与miR-199a-5p mimics和mimics NC共转染至U251细胞中,即psiCHECKTM-2-CAV-1-WT+mimics NC组、psiCHECKTM-2-CAV-1-WT+miR-199a-5p mimics组、 psiCHECKTM-2-CAV-1-Mut+mimics NC组和psiCHECKTM-2-CAV1-Mut+miR-199a-5p mimics组,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-5p与CAV-1的靶向关系,细胞划痕实验检测各组U251细胞划痕愈合率,流式细胞术检测各组U251细胞凋亡率。结果:Western blotting法和RT-qPCR法检测,与Hs683细胞比较,U251细胞中CAV-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与U251细胞比较,Hs683细胞中miR-199a-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与空白组和mimics NC组比较,miR-199a-5p mimics组U251细胞中miR-199a-5p表达水平明显升高(P<0.01),CAV-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与空白组比较,inhibitor NC组和miR-199a-5p inhibitor组Hs683细胞中miR-199a-5p表达水平均明显降低(P<0.01)。各组Hs683细胞中CAV-1蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证,成功构建psiCHECKTM-2-CAV-1-野生型(WT)和psiCHECKTM-2-CAV-1-突变型(Mut)表达载体;与psiCHECKTM-2-CAV-1-WT-mimicsNC组比较,psiCHECKTM-2-CAV-1-WT-miR-199a-5pmimics组U251细胞WT CAV-1相对荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。细胞划痕实验,转染12、24和48 h时,与空白组比较,miR-199a-5p mimics组U251细胞划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01);转染48和72 h时,与mimics NC组比较,miR-199a-5p mimics组U251细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与空白组和mimics NC组比较,miR-199a-5p mimics组U251细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:通过向胶质母细胞瘤U251细胞转染miR-199a-5p成熟模拟物,可降低CAV-1蛋白表达水平,并抑制胶质瘤细胞的迁移,促进其凋亡,抑制肿瘤发生发展。miR-199a-5p与CAV-1之间的靶向关系可能为胶质瘤发生发展的潜在机制,并可能成为胶质瘤潜在的诊断和治疗靶点。 展开更多
关键词 脑胶质瘤细胞 微小RNA-199a-5p 小窝蛋白1 细胞迁移 细胞
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SIRT1通过Wnt/β-catenin通路抑制D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老和凋亡
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作者 陈瑞雪 庞淑瑾 +4 位作者 陈鑫 郭依宁 方红城 吕洪雪 王陵军 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期463-471,共9页
目的:探讨沉默信息调节蛋白1(silent information regulator 1,SIRT1)通过调控Wnt/β-catenin通路对小鼠心肌细胞衰老模型衰老程度及凋亡的影响。方法:采用40μmol/L D-半乳糖(D-galactose,D-Gal)诱导HL-1细胞建立体外衰老模型,SIRT1过... 目的:探讨沉默信息调节蛋白1(silent information regulator 1,SIRT1)通过调控Wnt/β-catenin通路对小鼠心肌细胞衰老模型衰老程度及凋亡的影响。方法:采用40μmol/L D-半乳糖(D-galactose,D-Gal)诱导HL-1细胞建立体外衰老模型,SIRT1过表达慢病毒转染HL-1细胞,Western blot验证转染效率。Western blot检测SIRT1、P53、P21、cleaved caspase-3、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、β-catenin、Wnt3a和c-Myc的蛋白表达水平;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色检测细胞衰老水平;MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:D-Gal处理小鼠心肌细胞HL-1后衰老相关蛋白P53和P21表达水平增加,SIRT1蛋白表达水平降低,SA-β-Gal染色显示阳性区域增加(P<0.05)。促凋亡蛋白cleaved caspase-3和Bax水平升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.05);细胞活力显著降低(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且与D-Gal处理时间呈正相关。过表达SIRT1,经D-Gal处理48 h,HL-1细胞衰老和凋亡水平显著降低(P<0.05)。D-Gal处理HL-1细胞后,β-catenin、c-Myc和Wnt3a蛋白表达水平显著升高,过表达SIRT1后,上述蛋白表达水平显著降低。加入Wnt/β-catenin通路激动剂氯化锂后,与过表达SIRT1并给予D-Gal处理组相比,β-catenin、c-Myc和Wnt3a蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:SIRT1通过Wnt/β-catenin通路抑制心肌细胞凋亡并减轻心肌细胞衰老。 展开更多
关键词 沉默信息调节蛋白1 心肌细胞 细胞 细胞衰老 WNT/Β-CATENIN信号通路
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藻蓝蛋白调控Wip1/p53通路诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的作用
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作者 贾云晰 霍达 +5 位作者 姚超 李敏 刘富灵 苑红 薛慧婷 扈瑞平 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第5期741-752,共12页
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期难以发现且现有治疗方法副作用大、易产生耐药性。本文旨在探讨藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)对人肝癌细胞系HepG2凋亡的影响及潜在的作用机制。研究利用0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10μg/mL P... 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期难以发现且现有治疗方法副作用大、易产生耐药性。本文旨在探讨藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)对人肝癌细胞系HepG2凋亡的影响及潜在的作用机制。研究利用0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10μg/mL PC分别处理HepG2细胞12 h,10μg/mL PC和2.5μmol/L Wip1抑制剂(Wip1i)GSK 2830371单独以及联合处理HepG2细胞12 h和24 h,以CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞增殖水平;采用Annexin V-FITC/Propidium Iodide双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡水平;应用TMT蛋白质定量技术分析蛋白质组学的差异表达情况;Western印迹检测细胞Wip1、p53和磷酸化-p53(Ser15)蛋白质表达水平。CCK-8结果显示,PC在一定浓度范围内能够有效抑制HepG2细胞增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度为19.37μg/mL。流式细胞术结果显示,PC能够显著诱导细胞凋亡,凋亡率为30.40%。定量蛋白质组学分析显示,PC能够诱导p53通路活化。CCK-8结果显示,Wip1i能够增强PC对HepG2细胞的杀伤作用。利用Western印迹分析发现,PC抑制Wip1表达,诱导p53蛋白磷酸化,促进p53总蛋白质表达。同时,Wip1i能够进一步促进PC活化p53通路,增加p53和pP53(S15)的表达。综上所述,PC可能通过抑制p53负调节因子Wip1的活性,进而通过Wip1/p53通路诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞 藻蓝蛋白 p53 蛋白质组学
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绞股蓝乙醇提取物通过抑制细胞凋亡改善小鼠帕金森样行为
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作者 赵婷婷 何岚峤 +3 位作者 严森 樊鹏雨 张翀 曾玲晖 《浙江大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期49-57,共9页
目的:探究绞股蓝乙醇提取物(本文简称GP)对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病小鼠的保护作用及潜在机制。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、GP小剂量组和GP大剂量组,每组16只。通过在小鼠黑质网状部区域定... 目的:探究绞股蓝乙醇提取物(本文简称GP)对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病小鼠的保护作用及潜在机制。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、GP小剂量组和GP大剂量组,每组16只。通过在小鼠黑质网状部区域定位注射6-羟基多巴胺的方式建立帕金森病小鼠模型。造模两周后,阳性对照组、GP小剂量组和GP大剂量组分别给予左旋多巴(10 mg/kg,腹腔注射)、GP(100 mg·kg^(-1)·d^(-1),口服)和GP(200 mg·kg^(-1)·d^(-1),口服)三周。通过旷场实验和CatWalk步态分析实验评估GP对帕金森病小鼠运动功能障碍的影响;通过抓力仪检测小鼠的肌肉力量;通过免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数变化;通过酶联免疫吸附试验检测脑内多巴胺和血清素水平;通过蛋白质印迹法分析GP对磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化p38、磷酸化c-Jun氨基端激酶(JNK)等丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白和B细胞淋巴瘤蛋白(Bcl)-2、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、cleaved-胱天蛋白酶(caspase)-3等线粒体凋亡相关蛋白的影响。结果:行为学实验结果显示,与模型对照组比较,GP各剂量组移动距离、正常步序比、四肢步周长度增加,前肢抓力增大(均P<0.05)。进一步检测发现,与模型对照组比较,GP组TH阳性细胞比例增加,脑组织中多巴胺和血清素含量增加,磷酸化ERK1/2表达增加,磷酸化p38和磷酸化JNK1/2表达减少,Bax/Bcl-2和cleaved-caspase-3/caspase-3下降(均P<0.05)。结论:GP可通过调节磷酸化MAPK家族和线粒体凋亡相关蛋白的表达提高中脑组织内多巴胺和血清素水平,促进黑质网状部区域多巴胺能神经元存活,改善帕金森病小鼠的运动障碍。 展开更多
关键词 帕金森病 绞股蓝 行为学实验 多巴胺能神经元 丝裂原活化蛋白激酶家族蛋白 线粒体相关蛋白 小鼠
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堆型艾美耳球虫裂殖子外分泌蛋白对细胞凋亡的抑制作用 被引量:1
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作者 葛玉杰 王黎霞 +6 位作者 王诗琪 石梦云 陈玲玲 王梦琦 于慧 张建军 安健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期81-85,共5页
为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h M... 为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 裂殖子 MDBK细胞 抑制 外分泌蛋白
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沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡 被引量:1
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作者 江克兵 徐璐晴 沈涤非 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期202-206,共5页
目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为... 目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2组[转染YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型组(siRNA+AngⅡ)和实验组(siYTHDF2+AngⅡ)。用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系。结果AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.50±0.08 vs 1.00±0.07,P<0.05)。与空白组比较,模型组心肌细胞表面积增大,细胞凋亡率升高,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组心肌细胞表面积减小,细胞凋亡率降低,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论沉默YTHDF2可以缓解AngⅡ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡,YTHDF2通过与Bcl-2相结合抑制其表达水平。 展开更多
关键词 细胞 心脏 细胞 血管紧张素Ⅱ 病理性心肌肥厚 新生大鼠原代心肌细胞 YTH结构域家族蛋白2
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Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制
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作者 卢敏君 李文昕 +2 位作者 林莉 刘月琴 朱小兰 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期479-485,共7页
目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四... 目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。 展开更多
关键词 早发性卵巢功能不全 Y-box结合蛋白1 沉默信息调节因子1 颗粒细胞 细胞增殖和
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DpdtaA对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期、凋亡、副凋亡的影响
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作者 张正艳 李长正 +2 位作者 李静 王艳 路承彪 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期332-336,共5页
目的:探讨DpdtaA对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法:SH-SY5Y细胞用终浓度分别为0.156、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000μmol/L DpdtaA处理24 h,采用MTT法检测细胞增殖,计算增殖抑制率。SH-SY5Y细胞... 目的:探讨DpdtaA对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法:SH-SY5Y细胞用终浓度分别为0.156、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000μmol/L DpdtaA处理24 h,采用MTT法检测细胞增殖,计算增殖抑制率。SH-SY5Y细胞分为对照组(给予二甲基亚砜)和DpdtaA组(0.5μmol/L DpdtaA),处理24 h后采用PI染色法检测细胞周期,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,在倒置显微镜和透射电镜下观察细胞形态和超微结构,采用荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平。另取细胞,分4组,采用Western blot检测DpdtaA与ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)单独及联合作用后细胞凋亡相关蛋白ALG-2相互作用蛋白X(Alix)的表达。结果:DpdtaA可呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,半数抑制浓度为(0.54±0.13)μmol/L。与对照组比较,DpdtaA组细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增多(P<0.05);DpdtaA组细胞核周围有大量空泡,线粒体肿胀,ROS水平升高,提示可能发生副凋亡。DpdtaA处理后Alix蛋白表达水平下降;NAC预处理后,Alix蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:DpdtaA能够抑制SH-SY5Y细胞增殖,引起周期阻滞,诱导细胞凋亡和副凋亡,部分机制可能与上调ROS及抑制Alix蛋白表达有关。 展开更多
关键词 DpdtaA 神经母细胞 SH-SY5Y细胞 增殖 氧化应激 相关基因2相互作用蛋白X
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卵母细胞玻璃化冷冻保存中凋亡的机制及缓解策略
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作者 陈丹丹 齐雅天 李俊杰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2729-2735,共7页
作为一种在超低温环境下长期保存卵母细胞的技术,卵母细胞玻璃化冷冻保存在优良种质资源保存方面具有重要意义。然而,玻璃化冷冻保存技术面临的核心挑战在于细胞凋亡信号的激活致使凋亡细胞比例升高,影响细胞功能、活力和发育潜能。细... 作为一种在超低温环境下长期保存卵母细胞的技术,卵母细胞玻璃化冷冻保存在优良种质资源保存方面具有重要意义。然而,玻璃化冷冻保存技术面临的核心挑战在于细胞凋亡信号的激活致使凋亡细胞比例升高,影响细胞功能、活力和发育潜能。细胞凋亡是指一种程序化的细胞死亡过程,通常被称为“细胞自杀”,这一机制在生物体内发挥着关键作用,有助于维持细胞的平衡和组织的稳态。然而,异常的细胞凋亡会导致细胞死亡等不利影响。因此,有效抑制或减缓细胞凋亡过程,成为提高冷冻卵母细胞存活率和发育潜能的关键所在。应用凋亡抑制剂和抗氧化剂可以减少玻璃化卵母细胞凋亡,提高其存活率和发育能力,从而改善解冻后的细胞质量。作者简述了玻璃化冷冻保存技术对卵母细胞的影响,以及冷冻引起的细胞内源性和外源性凋亡机制,并分析了相关凋亡抑制剂与抗氧化剂的应用,未来可深入探究新型抑制剂与抗氧化剂在玻璃化冷冻技术中的作用机理,以及探究细胞凋亡与坏死性凋亡等细胞死亡途径之间的交互影响,为卵母细胞玻璃化冷冻保存技术提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 冷冻保存技术 卵母细胞 细胞 抑制 抗氧化剂
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circHIPK2调节miR-7-5p/TCF4轴对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞凋亡的影响
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作者 谷君 任卫东 +4 位作者 李会贤 邓文娟 胡利梅 刘慧颖 蔡裕 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第3期257-261,267,共6页
目的研究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶2(circHIPK2)调节miR-7-5p/转录因子4(TCF4)轴对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管内皮细胞凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为对照组、模型组、阴性对照共转染组、敲低circHIPK2组... 目的研究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶2(circHIPK2)调节miR-7-5p/转录因子4(TCF4)轴对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管内皮细胞凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为对照组、模型组、阴性对照共转染组、敲低circHIPK2组、过表达miR-7-5p组、敲低circHIPK2+敲低miR-7-5p组。除对照组外,其余各组给予10 nmol/L AngⅡ,构建高血压损伤模型,转染后测定circHIPK2、miR-7-5p和TCF4 mRNA表达水平;检测细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位、活性氧(ROS)表达、抗氧化酶活性、促炎性细胞因子水平、凋亡相关蛋白和TCF4蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组细胞circHIPK2和TCF4 mRNA表达水平、凋亡率、ROS相对表达、IL-6水平、IL-1β水平、IL-18水平、Bax和TCF4蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-7-5p mRNA表达水平、线粒体膜电位、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶活性、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);敲低circHIPK2、过表达miR-7-5p均可逆转上述AngⅡ诱导的血管内皮细胞病理变化。敲低miR-7-5p可降低敲低circHIPK2对模型组细胞病理变化的改善作用。结论敲低circHIPK2可通过上调miR-7-5p表达而减弱TCF4表达,进而降低AngⅡ诱导的血管内皮细胞炎症和氧化应激水平,最终抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 环状RNA同源域相互作用蛋白激酶2 miR-7-5p/TCF4轴 血管紧张素Ⅱ 血管内皮细胞
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