钙敏感受体及紧密连接蛋白-14的表达对肾草酸钙结石形成的影响 被引量：7

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作者 孙稳 王勤章 +2 位作者 丁国富 钱彪 彭心宇 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1143-1147,共5页

目的肾结石中草酸钙型结石最为常见。文中通过构建大鼠肾草酸钙结石模型,初步探讨钙敏感受体-紧密连接蛋白-14(calcium-sensing receptor-Claudin-14,Ca SR-Claudin-14)调节通路在肾草酸钙结石形成中的作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分... 目的肾结石中草酸钙型结石最为常见。文中通过构建大鼠肾草酸钙结石模型,初步探讨钙敏感受体-紧密连接蛋白-14(calcium-sensing receptor-Claudin-14,Ca SR-Claudin-14)调节通路在肾草酸钙结石形成中的作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组和结石组,每组15只。采用1%乙二醇自由饮水+2%氯化铵(2 m L)灌胃诱导大鼠肾草酸钙结石模型形成;HE染色鉴定模型;全自动生化分析仪检测各组尿生化指标;免疫组化学检测Ca SR蛋白表达;RT-PCR检测Claudin-14mRNA表达;Western blot检测Ca SR和Claudin-14蛋白表达。结果光镜下结石组有大量结石结晶形成,结石组24 h尿钙排泄量高于对照组[(9.66±1.10)mmol vs(3.26±0.60)mmol,P<0.01]、结石组24 h尿量显著高于对照组[(21.27±1.08)m L vs(13.2±0.55)m L,P<0.01],2组尿p H差异无统计学意义(P>0.05);结石组Claudin-14 mRNA相对表达量显著高于对照组[(0.150±0.004)vs(0.047±0.008),P<0.01]、结石组Claudin-14蛋白含量高于对照组[(1.526±0.089)vs 0,P<0.01];结石组Ca SR蛋白含量高于对照组[(6.697±0.051)vs(5.016±0.053),P<0.05]。结论 Ca SR可通过上调Claudin-14表达增加肾小管尿钙排泄从而参与肾草酸钙结石形成。 展开更多

关键词 钙敏感受体 紧密连接蛋白-14 肾结石 大鼠 Claudin-14

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钙离子通道蛋白CatSper在吸烟小鼠模型中的表达 被引量：2

2

作者 姚丽娟 郑圣霞 +3 位作者 吴双正 孙晓科 周桂香 周明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期357-360,共4页

目的:建立吸烟小鼠模型,检测小鼠精子特异性钙离子通道蛋白CatSper在RNA和蛋白水平表达的变化,分析与精子活力之间的关系,为吸烟导致雄性生殖损害的分子机制研究提供可靠的实验数据。方法:建立吸烟小鼠模型,运用非连续密度梯度离心分离... 目的:建立吸烟小鼠模型,检测小鼠精子特异性钙离子通道蛋白CatSper在RNA和蛋白水平表达的变化,分析与精子活力之间的关系,为吸烟导致雄性生殖损害的分子机制研究提供可靠的实验数据。方法:建立吸烟小鼠模型,运用非连续密度梯度离心分离精子并进行活力检测,RT-PCR检测小鼠精子mRNA表达的变化,免疫组织细胞化学技术观察小鼠CatSper蛋白的表达,免疫印迹进一步对CatSper蛋白表达的变化趋势进行统计学分析。结果:正常对照组,轻、中和重度吸烟组(a+b)级精子百分率[(87.6±16.2)%vs(72.9±13.0)%vs(68.1±16.0)%vs(44.6±15.0)%,P<0.05]、CatSper mRNA相对表达量(0.915±0.202 vs 0.712±0.121 vs 0.522±0.126 vs 0.258±0.177,P<0.05)、免疫印迹相对表达量(0.882±0.208 vs0.693±0.202 vs 0.471±0.251 vs 0.263±0.198,P<0.05)均依次降低,免疫组化结果显示吸烟使CatSper蛋白在睾丸组织中表达降低;相关性分析结果表明(a+b)级精子百分率与CatSper mRNA和蛋白呈正相关。结论:吸烟明显抑制小鼠钙离子通道蛋白CatSper的表达,精子活力与CatSper的表达呈正相关,提示CatSper表达降低可能是吸烟导致雄性精子活力损伤的分子机制之一。 展开更多

关键词 吸烟 钙离子通道蛋白CatSper 精子活力

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多囊蛋白2离子通道功能及在常染色体显性多囊肾发病中的作用机制

3

作者 汪凯 黄渊 +2 位作者 周策凡 唐景峰 陈兴珍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第1期47-58,共12页

多囊蛋白2 (polycystin-2,PC2,或称TRPP2,PKD2)是一种瞬时受体电位通道(transient receptor potential channel,TRP),在维持细胞正常的Ca~(2+)信号传导中起着关键作用,也是最常见的单基因常染色体显性遗传多囊肾病(transient receptor p... 多囊蛋白2 (polycystin-2,PC2,或称TRPP2,PKD2)是一种瞬时受体电位通道(transient receptor potential channel,TRP),在维持细胞正常的Ca~(2+)信号传导中起着关键作用,也是最常见的单基因常染色体显性遗传多囊肾病(transient receptor potential channel,ADPKD)的潜在病因之一。PC2可自身组装为同源四聚体离子通道或与其他蛋白质形成异源受体-离子通道复合物,参与调节机械感觉、细胞极性、细胞增殖和凋亡等多种生理功能,导致囊性细胞从正常的吸收、静止状态转变为病理性分泌、增殖状态。本文阐述了PC2蛋白相关结构域以及通道特性在维持细胞内Ca~(2+)信号传导中的关键作用,并总结了PC2在细胞膜、纤毛、内质网以及线粒体等特定亚细胞定位形成多囊蛋白复合物,参与多种细胞分化、增殖、存活和凋亡相关信号通路,为确定特异性的有效的ADPKD干预治疗途径和靶点药物提供新的思考方向。 展开更多

关键词 多囊蛋白2 离子通道 钙离子 常染色体显性遗传多囊肾病

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缺血再灌注致心律失常大鼠模型钙调蛋白介导的L型离子通道电流的变化 被引量：5

4

作者 李喆 《海南医学院学报》 CAS 2013年第12期1627-1630,共4页

目的:探讨缺血再灌注致心律失常大鼠钙调蛋白(CaM)的变化及其对L型离子通道电流的影响。方法:选取健康SD大鼠48只,以单盲法随机分为4组(n=12);空白组不做任何处理,模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型,干预组... 目的:探讨缺血再灌注致心律失常大鼠钙调蛋白(CaM)的变化及其对L型离子通道电流的影响。方法:选取健康SD大鼠48只,以单盲法随机分为4组(n=12);空白组不做任何处理,模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型,干预组在制备缺血再灌注致心律失常模型前肌注钙调蛋白抑制剂W-7(100μmol/kg),假手术组仅进行开胸手术和动脉套线,无结扎。模型制备成功后,取大鼠心脏组织,以免疫印迹法检测L型钙离子通道主要亚型CaV1.2功能决定性亚单位α1C和CaM的表达水平;同时分离大鼠心肌细胞,以膜片钳技术进行L型离子通道电流(ICa,L)测定。结果:模型组大鼠心肌组织的α1C、CaM的表达水平,以及ICa,L均高于空白组和假手术组,差异具有统计学意义(P<0.05);较模型组相比,干预组CaM的表达水平和ICa,L均有降低,差异具有统计学意义(P<0.05);I-V曲线有所上移,α1C的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ICa,L过激所致Ca2+内流和细胞超载为缺血再灌注后心肌损伤和心律失常的重要因素之一,CaM在该病理过程中能够发挥不依赖于L型离子通道表达水平的调节作用,可作为其临床治疗的新靶点。 展开更多

关键词 缺血再灌注 心律失常 钙调蛋白 L型钙离子通道 钙电流

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细胞膜电压门控钙离子通道蛋白质结构、系统发育分析及应用 被引量：2

5

作者 李文楚 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期506-513,共8页

细胞膜上的钙离子通道(VGCCs)由α1/α2-δ/β/γ亚基组成,在昆虫方面分L、非L型和T型。介绍了各亚基的组成及其功能,采用软件Mega 4绘制进化树研究GenBank已克隆的各种亚基的遗传性,了解物种VGCCs的分子进化关系,并根据进化树推断出一... 细胞膜上的钙离子通道(VGCCs)由α1/α2-δ/β/γ亚基组成,在昆虫方面分L、非L型和T型。介绍了各亚基的组成及其功能,采用软件Mega 4绘制进化树研究GenBank已克隆的各种亚基的遗传性,了解物种VGCCs的分子进化关系,并根据进化树推断出一些α1亚基序列原作者未标记的钙离子通道蛋白类型。从理论上提出研究家蚕和越北腹露蝗VGCCs的重要性,简要论述了钙离子通道蛋白及其阻滞剂在医药和农业上的应用前景。 展开更多

关键词 昆虫 细胞膜 电压门控钙离子通道 蛋白质结构 系统发育

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胃腺癌组织中紧密连接蛋白7和紧密连接蛋白18及E钙黏素的表达及其意义 被引量：5

6

作者 杨士贤 吴铁镛 刘晓刚 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期267-270,共4页

目的探讨胃腺癌组织中紧密连接蛋白7(claudin-7)、紧密连接蛋白18(claudin-18)及E钙黏素(E-cadherin)的表达及其意义,为肿瘤生物学研究提供参考。方法选择我院2005年收治的胃腺癌患者81例,收集其手术切除后存档的腺癌蜡块组织为观察组... 目的探讨胃腺癌组织中紧密连接蛋白7(claudin-7)、紧密连接蛋白18(claudin-18)及E钙黏素(E-cadherin)的表达及其意义,为肿瘤生物学研究提供参考。方法选择我院2005年收治的胃腺癌患者81例,收集其手术切除后存档的腺癌蜡块组织为观察组。选择同期在我院进行胃镜检查正常者70例,收集其胃体正常黏膜组织为对照组。应用免疫组织化学法检测两组claudin-7、claudin-18和E-cadherin的表达,分析三者阳性表达率与胃腺癌患者临床特征的关系及三者之间的相关性。随访并计算观察组患者5年生存率。结果对照组和观察组claudin-7(89.33%vs.25.93%)、claudin-18(64.29%vs.33.33%)和E-cadherin(57.14%vs.22.22%)阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。claudin-7、claudin-18和E-cadherin阳性表达率在不同肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及不同增殖细胞核抗原表达的胃腺癌患者中比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。线性相关分析显示,胃腺癌组织中claudin-7与claudin-18(r=0.43)、claudin-18与E-cadherin(r=0.45)、claudin-7与E-cadherin(r=0.40)均呈正相关(P<0.05)。观察组患者5年生存率claudin-7阳性表达者(14/21,66.67%)与阴性表达者(3/60,5.00%)比较、claudin-18阳性表达者(16/27,59.26%)与阴性表达者(1/54,1.85%)比较、E-cadherin阳性表达者(14/18,77.78%)与阴性表达者(3/63,4.69%)比较,差异均有统计学意义(χ2值分别为24.5880、14.7868和13.2048,P均<0.05)。结论 claudin-7、claudin-18和E-cadherin在胃腺癌组织中呈低表达,与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移及增殖细胞核抗原表达相关;三者具有协同作用,联合检测三者的表达有助于判断患者预后,即claudin-7、claudin-18和E-cadherin同时低表达的患者预后较差。 展开更多

关键词 胃肿瘤 腺癌 连接蛋白类 紧密连接蛋白7 紧密连接蛋白18 E钙黏着糖蛋白类 免疫组织化学 预后

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Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用 被引量：1

7

作者 袁秀杰 钱辉 +4 位作者 刘金旭 张沙沙 石洁 赵钟钟 张朝 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第26期12428-12429,共2页

[目的]研究Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用。[方法]利用免疫共沉淀实验确定Snapin蛋白与Cav1.3在体外表达系统和心房组织存在相互作用。[结果]在过表达Snapin和Cav1.3的HEK293细胞及内源性表达二者的心房肌组织中,Snapi... [目的]研究Snapin蛋白与心肌L型钙离子通道Cav1.3的相互作用。[方法]利用免疫共沉淀实验确定Snapin蛋白与Cav1.3在体外表达系统和心房组织存在相互作用。[结果]在过表达Snapin和Cav1.3的HEK293细胞及内源性表达二者的心房肌组织中,Snapin蛋白与Cav1.3钙离子通道存在相互作用。 展开更多

关键词 Snapin蛋白 Cav1.3钙离子通道 HEK293细胞 心房

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TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究 被引量：6

8

作者 郝峰 白雪松 +6 位作者 鞠晓红 方芳 藏雨轩 朱杭飞 向国艳 张雲乔 袁忠海 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1633-1639,共7页

目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效... 目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。 展开更多

关键词 跨膜蛋白16A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞

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地尔硫卓通过下调钙激活氯离子通道抑制肝癌细胞增殖和运动 被引量：2

9

作者 郭睿 黄小钟 +1 位作者 金雪媛 杨军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期818-823,共6页

目的观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制。方法采用不同浓度地尔硫卓(0、25、50、100、200、400μmol/L)干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间(12、24、48 h)后,用MTT法测定地... 目的观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制。方法采用不同浓度地尔硫卓(0、25、50、100、200、400μmol/L)干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间(12、24、48 h)后,用MTT法测定地尔硫卓对肝癌细胞增殖的影响,体外细胞划痕实验检测处理后肝癌细胞运动侵袭能力;通过RT-PCR和免疫细胞化学检测地尔硫卓对肝癌细胞中TMEM16A mRNA和蛋白表达水平的影响。结果地尔硫卓能够有效抑制肝癌MHCC97H、7402细胞的增殖和运动侵袭能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点(P<0.05)。其中,100μmol/L浓度的地尔硫卓作用24 h对MHCC97H肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),而50μmol/L浓度的地尔硫卓作用48 h对7402肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。结论地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞侵袭,这种作用可能与其通过调节钙离子通道TMEM16A的mRNA和蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用有关。 展开更多

关键词 肝细胞癌 侵袭转移 钙激活氯离子通道蛋白 TMEM16A 地尔硫卓

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钙离子通道蛋白激活特殊信号令水稻耐寒

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《农业科技与信息》 2021年第11期26-26,共1页

中国农科院作物科学研究所万建民院士团队系统阐释了钙通道蛋白OsCNGC9调控水稻对低温响应和耐受的分子机制。该研究建立了一条从低温信号感知到钙离子通道激活的低温信号转导途径,填补了植物低温信号转导途径中缺失的重要一环,为利用Os... 中国农科院作物科学研究所万建民院士团队系统阐释了钙通道蛋白OsCNGC9调控水稻对低温响应和耐受的分子机制。该研究建立了一条从低温信号感知到钙离子通道激活的低温信号转导途径,填补了植物低温信号转导途径中缺失的重要一环,为利用OsCNGC9进行水稻抗逆遗传改良提供了理论依据。相关研究成果在线发表于《分子植物(Molecular Plant)》。 展开更多

关键词 作物科学 钙离子通道 信号感知 遗传改良 特殊信号 离子通道蛋白 分子机制 研究成果

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钙库调控钙离子通道在瑞芬太尼诱发切口痛觉过敏中的作用 被引量：6

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作者 周珍辉 茆梦 朱伟 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期403-408,共6页

目的探讨钙库调控钙离子通道(SOCC)在瑞芬太尼诱发的切口痛觉过敏中的作用。方法雄性SD大鼠36只,2~3个月龄,体重360~380 g,采用随机数字表法分为四组:对照组(C组,n=8)、切口痛组(I组,n=9)、切口痛+瑞芬太尼组(IR组,n=9)、切口痛+瑞芬太... 目的探讨钙库调控钙离子通道(SOCC)在瑞芬太尼诱发的切口痛觉过敏中的作用。方法雄性SD大鼠36只,2~3个月龄,体重360~380 g,采用随机数字表法分为四组:对照组(C组,n=8)、切口痛组(I组,n=9)、切口痛+瑞芬太尼组(IR组,n=9)、切口痛+瑞芬太尼+SOCC抑制剂(YM-58483)组(Y组,n=10)。IR组和Y组尾静脉泵注瑞芬太尼1μg·kg^(-1)·min^(-1),持续60 min;C组和I组尾静脉泵注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1),持续60 min。I组、IR组和Y组于给药后10 min于右后足底做一切口,于给药前24 h(T 0)、给药后2 h(T_(1))、6 h(T_(2))、24 h(T_(3))、48 h(T_(4))测定大鼠热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足阈值(MWT)。Y组于每次行为学测试前2 h鞘内注射10μl浓度为1000μmol/L的SOCC抑制剂YM-58483,其余各组注射等容量溶剂PEG300。取L 4-6节段脊髓,采用免疫荧光组织化学法检测脊髓背角SOCC主要蛋白基质相互作用分子1(STIM1)和Orai1阳性细胞计数,采用Western blot法检测脊髓背角STIM1和Orai1以及磷酸化的钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱα(p-CaMKⅡα,CaMKⅡα的激活状态)蛋白含量。结果与C组比较,T_(1)—T_(4)时IR组TWL明显缩短、MWT明显降低(P<0.05),I组、IR组和Y组脊髓背角STIM1和Orai1阳性信号细胞数、STIM1和Orai1蛋白含量、脊髓p-CaMKⅡα蛋白含量明显增加(P<0.05)。与I组比较,IR组和Y组脊髓背角STIM1和Orai1阳性信号细胞数、STIM1和Orai1蛋白含量、IR组脊髓p-CaMKⅡα蛋白含量明显增加(P<0.05)。与IR组比较,Y组T_(1)—T_(4)时TWL明显延长(P<0.05),T_(2)—T_(4)时MWT明显升高(P<0.05),Y组脊髓p-CaMKⅡα蛋白含量明显减少(P<0.05)。结论SOCC蛋白含量增加参与了瑞芬太尼诱发切口痛觉过敏的形成,鞘内注射SOCC抑制剂YM-58483明显减少了p-CaMKⅡα蛋白含量,改善了大鼠由瑞芬太尼诱发的切口痛觉过敏,提示脊髓中SOCC通路通过磷酸化CaMKⅡα参与了瑞芬太尼诱发切口痛觉过敏的形成。 展开更多

关键词 瑞芬太尼 痛觉过敏 钙库调控钙离子通道 钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱα

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长牡蛎电压门控钙离子通道β亚基的无标签亲和层析纯化 被引量：1

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作者 刘凤华 王淏 +1 位作者 贾乔雅 毕允晨 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期87-96,共10页

亲和层析是一种广泛使用的蛋白质分离纯化技术,常用的亲和标签包括谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签、多组氨酸(polyhistidine)标签等。然而,外源亲和标签可能会影响蛋白质的结构与功能,通常需要酶切去除,造成实... 亲和层析是一种广泛使用的蛋白质分离纯化技术,常用的亲和标签包括谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签、多组氨酸(polyhistidine)标签等。然而,外源亲和标签可能会影响蛋白质的结构与功能,通常需要酶切去除,造成实验流程加长、产率降低。某些蛋白质具有与亲和标签相似的氨基酸序列特征,利用这种序列特征尝试无标签纯化可有效避免上述问题。本研究选取C端天然富含组氨酸残基的长牡蛎电压门控钙离子通道(VGCC)β亚基进行无标签亲和层析纯化,结果显示,氨基三乙酸镍(Ni-NTA)能够特异性地结合无标签的β亚基,且结合能力与多组氨酸标签相当。对β亚基C端组氨酸残基分组突变后发现,随着组氨酸残基突变的增多,各突变型β亚基与Ni-NTA的结合能力逐步下降。免疫印迹实验结果表明,β亚基C端(HG)7序列在针对多组氨酸标签的抗体识别中发挥关键作用。VGCCβ亚基的这种天然序列特征也可应用于该膜蛋白复合体提取过程关键步骤的监测。综上,本研究对氨基酸序列中具有亲和标签特征的蛋白质进行了无标签亲和层析纯化,为具有相似特征蛋白质的分离纯化提供了参考。 展开更多

关键词 电压门控钙离子通道 Β亚基 蛋白纯化 亲和层析 多组氨酸

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基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建

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作者 丁旭 肖云萍 +4 位作者 郭佳琦 解宇浩 张嘉琪 聂文营 郝峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期519-526,共8页

目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋... 目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。 展开更多

关键词 Piezo 1 FRT细胞 钙激活氯离子通道蛋白1 YFP-H148Q/I152L 荧光淬灭动力学实验 Z′因子

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跨膜蛋白16A:钙激活氯通道的最新进展 被引量：4

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作者 陈娅斐 李婷 +6 位作者 安海龙 于慧 张素花 韩英荣 张玉红 郭鹏 展永 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1175-1181,共7页

钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)介导了众多生理过程,包括跨上皮离子与液体分泌、心肌和神经兴奋、感觉传导、平滑肌收缩和受精过程等,但目前对于其分子基础等重要问题尚未研究清楚.综述了最新报道的CaCC... 钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)介导了众多生理过程,包括跨上皮离子与液体分泌、心肌和神经兴奋、感觉传导、平滑肌收缩和受精过程等,但目前对于其分子基础等重要问题尚未研究清楚.综述了最新报道的CaCCs分子基础跨膜蛋白16A(TMEM16A)的发现过程、基因结构和功能、离子通道电生理特性、相关病理与药理功能的一些热点问题,并展望了该研究领域的发展趋势. 展开更多

关键词 钙激活氯离子通道 分子基础 跨膜蛋白质16A 电生理 药理学

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钙激活氯通道蛋白ANO1在小鼠主动脉平滑肌细胞的表达及其功能鉴定 被引量：3

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作者 张雲乔 王胜 +6 位作者 刘艳杰 崔爽 曲适 王鑫鑫 龙啸 方芳 郝峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期87-88,92,I0007,共4页

探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO... 探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在主动脉平滑肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。原代培养成功获得主动脉平滑肌细胞;RT-PCR结果分析表明,主动脉平滑肌细胞在mRNA水平有ANO1表达;免疫印迹显示主动脉平滑肌细胞蛋白水平有ANO1表达;荧光淬灭动力学实验证实表达在主动脉平滑肌细胞的ANO1具有阴离子转运功能,即钙激活氯通道典型特性。小鼠主动脉平滑肌细胞表达的ANO1是钙激活氯通道的分子基础。 展开更多

关键词 ANO1蛋白 钙激活氯离子通道 小鼠 主动脉平滑肌细胞

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低强度脉冲超声对大鼠牙本质损伤修复过程中钙离子转运相关蛋白表达的影响 被引量：2

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作者 左静 甄佳秀 +2 位作者 杨正艳 李月恒 罗俊 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期33-38,共6页

目的:研究低强度脉冲超声(LIPUS)辐照SD大鼠牙本质损伤模型后对成牙本质细胞及牙髓细胞上钙离子转运相关蛋白的影响。方法:40只SD大鼠[(360±13)g]右侧上颌第一磨牙备洞建立牙本质损伤模型,随机对其中20只大鼠备洞牙及剩余20只大鼠... 目的:研究低强度脉冲超声(LIPUS)辐照SD大鼠牙本质损伤模型后对成牙本质细胞及牙髓细胞上钙离子转运相关蛋白的影响。方法:40只SD大鼠[(360±13)g]右侧上颌第一磨牙备洞建立牙本质损伤模型,随机对其中20只大鼠备洞牙及剩余20只大鼠左侧上颌第一磨牙予以超声辐照(强度30 mw/cm^2,频率1.5 MHz,频宽200μm,重复率1 kHz),形成备洞组、备洞+LIPUS组、LIPUS组及空白对照组(n=10),超声辐照每日1次,持续20 min,分别在辐照1、3、7、14 d后处死实验动物,应用HE染色观察牙本质-牙髓复合体组织结构及细胞形态变化,免疫组化染色及图像分析检测钙离子转运相关蛋白(Cav 1.2、NCX1)的表达差异。结果:组织形态学分析发现牙本质损伤后LIPUS可协同炎症反应促进第三期牙本质的形成,而LIPUS辐照正常牙未见明显病理改变出现。免疫组化分析发现备洞+LIPUS组在1 d及3 d时较备洞组各蛋白表达明显升高(P<0.05);LIPUS组1 d时Cav1.2表达较空白对照组高(P<0.05),其余时间点两者无差异。结论:LIPUS可能在牙本质损伤早期积极调控钙离子转运相关蛋白,加快第三期牙本质修复进程,其作用机制可能与炎症反应及机械效应相关。 展开更多

关键词 低强度脉冲超声 L型钙离子通道蛋白Cav1.2 钠钙交换体NCX1 牙本质牙髓复合体

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青少年特发性脊柱侧凸患者椎旁肌中钙调蛋白的表达及临床意义 被引量：5

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作者 芮碧宇 邱勇 +1 位作者 夏才伟 朱锋 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2007年第9期684-688,共5页

目的:探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者椎旁肌钙调蛋白的表达及其对肌浆网钙离子通道的影响。方法:AIS患者共30例,Cobb角40°～100°,其中Cobb角≥50°者15例(A组),Cobb角<50°者15例(B组);对照组(C组)5例患者均... 目的:探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者椎旁肌钙调蛋白的表达及其对肌浆网钙离子通道的影响。方法:AIS患者共30例,Cobb角40°～100°,其中Cobb角≥50°者15例(A组),Cobb角<50°者15例(B组);对照组(C组)5例患者均为非脊柱侧凸病例。于手术中取A、B组患者顶椎区两侧椎旁肌、取C组患者非病变部位两侧椎旁肌作为标本进行分子生物学分析,采用RT-PCR方法检测所有标本钙调蛋白和肌浆网钙离子通道的mRNA表达量。结果:A、B组患者椎旁肌钙调蛋白mRNA的表达比C组高(P<0.05),并且A组患者凸侧椎旁肌钙调蛋白mRNA显著高于凹侧(P<0.05),而B组患者其凹凸侧钙调蛋白mRNA没有显著性差异(P>0.05);C组椎旁肌肌浆网钙离子通道mRNA的表达比A组患者高(P<0.05),A组患者凸侧椎旁肌肌浆网钙离子通道mRNA显著低于凹侧(P<0.05),而B组患者其凹凸侧肌浆网钙离子通道mRNA没有显著性差异。结论:钙调蛋白mRNA在AIS患者椎旁肌中的表达较无脊柱侧凸者高,而且其表达随着侧凸程度的加重而增高;AIS患者椎旁肌肌浆网钙离子通道表达有异常,钙调蛋白的过度表达可能导致了钙离子通道的损伤。 展开更多

关键词 特发性脊柱侧凸 椎旁肌 钙调蛋白 肌浆网钙离子通道

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S100钙结合蛋白A16在胃癌转移中的作用和机制

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作者 沈娟 李敏 +1 位作者 林悦歌 苏东明 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1285-1291,共7页

目的:研究S100钙结合蛋白A16(S100 calcium binding protein A16,S100A16)对胃癌细胞迁移的影响及其分子机制。方法:慢病毒感染构建稳定过表达S100A16的胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞的迁移能力;SGC... 目的:研究S100钙结合蛋白A16(S100 calcium binding protein A16,S100A16)对胃癌细胞迁移的影响及其分子机制。方法:慢病毒感染构建稳定过表达S100A16的胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞的迁移能力;SGC-7901细胞通过脂质体转染S100A16 siRNA,Western blot检测E-钙黏蛋白和波形蛋白;免疫共沉淀检测S100A16和闭合小环蛋白2(zonula occludens 2,ZO-2)的结合情况;免疫荧光观察S100A16和ZO-2在胃癌细胞中的定位。结果:S100A16在胃癌细胞中表达高于胃上皮细胞;稳定过表达S100A16的胃癌细胞SGC-7901和MGC-803构建成功;过表达S100A16促进胃癌细胞SGC-7901和MGC-803迁移;转染S100A16 siRNA抑制SGC-7901细胞中S100A16表达,E-钙黏蛋白表达升高,波形蛋白下调;S100A16和ZO-2存在相互作用,并在空间上存在共定位。结论:S100A16过表达促进胃癌细胞迁移,其作用机制可能是通过和ZO-2相互作用而实现。 展开更多

关键词 胃癌 S100钙结合蛋白A16 紧密连接蛋白ZO-2 迁移

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血小板与钙离子信号的研究进展 被引量：5

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作者 郭寒 杨威 +7 位作者 夏成 张洪友 高三思 刘润琪 黄宝银 何平 徐闯 张冰冰 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期84-87,共4页

激动剂诱导细胞内钙离子浓度升高是血小板活化止血和血栓形成的必要条件,它是通过细胞内钙离子释放和质膜内钙离子进入而发生的。Ca2+库释放是一种行之有效的过程,首先磷脂酶(PL)C产生肌醇-1,4,5-三磷酸肌醇(IP3),进而通过IP3通道受体... 激动剂诱导细胞内钙离子浓度升高是血小板活化止血和血栓形成的必要条件,它是通过细胞内钙离子释放和质膜内钙离子进入而发生的。Ca2+库释放是一种行之有效的过程,首先磷脂酶(PL)C产生肌醇-1,4,5-三磷酸肌醇(IP3),进而通过IP3通道受体释放细胞内储存的Ca2+,从而完成Ca2+释放。在血小板活化过程中钙离子浓度明显升高有助于活化的各个步骤。钙离子作为细胞的第二信使,参与大多数的生物活动过程,尤其在细胞内钙池引发的钙离子的进入(store-operated Ca2+entry,SOCE)在血小板激活过程中发挥着重要的作用。血小板在血管内激活极易引起血栓,因此研究血小板活化机理可能会对某些疾病的治疗起到关键作用。 展开更多

关键词 血小板 钙库操作性钙离子通道 钙离子释放激活的钙通道蛋白 基质交感分子

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可溶性耐药相关钙结合蛋白 被引量：2

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作者 张蓓蓓 吴毓 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期942-946,共5页

可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21·6kD的胞浆蛋白,具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点,广泛存在于多种组织中,在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用,影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面,s... 可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21·6kD的胞浆蛋白,具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点,广泛存在于多种组织中,在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用,影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面,sorcin在肿瘤耐药细胞中大量表达,它可以与细胞中钙离子结合,引起细胞内游离钙离子浓度下降,然后导致钙离子所介导的磷酸酶活性降低,使得具有排药功能的P-gp糖蛋白磷酸化水平下降,最终导致耐药.一旦明确引发和维持细胞耐药的作用机制,就可为克服肿瘤耐药提供新的靶点.同时随着RyR活性抑制作用研究的深入,有望通过sorcin转基因技术治疗心力衰竭.本文主要对sorcin的结构特点和生物学特性进行综述,并初步分析其耐药机制. 展开更多

关键词 可溶性耐药相关钙结合蛋白 钙离子通道 多药耐药

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