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粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白的原核表达及纯化 被引量：3
1
作者 强华 吴海珍 +1 位作者 羽晓瑜 朱苹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期168-170,共3页
目的原核表达纯化粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白,为粪肠球菌心内膜炎的致病机制研究及临床血清学诊断奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增efaA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET30a中,构建pET30a-efaA重组质粒。经BamhI、XhoI酶切及测... 目的原核表达纯化粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白,为粪肠球菌心内膜炎的致病机制研究及临床血清学诊断奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增efaA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET30a中,构建pET30a-efaA重组质粒。经BamhI、XhoI酶切及测序鉴定,将pET30a-efaA质粒转化入BL21(DE3)。以IPTG诱导BL21(DE3)表达efaA融合蛋白,亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE、WesternBlot分析鉴定。结果PCR体外扩增efaA基因产物约943bp,重组表达质粒pET30a-efaA在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和层析获得纯化重组蛋白。SDS-PAGE、Western免疫印迹显示蛋白表达带的分子量约为34kd。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并纯化。 展开更多
关键词 肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原 efaa 原核表达
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粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用 被引量：3
2
作者 强华 朱苹 +2 位作者 刘光英 吴海珍 林任玺 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期938-941,共4页
目的探讨粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用。方法微量滴定板法测定生物膜形成能力,将efaA+、efaA-粪肠球菌S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部生物膜的OD570... 目的探讨粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用。方法微量滴定板法测定生物膜形成能力,将efaA+、efaA-粪肠球菌S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部生物膜的OD570值;MTT法比较S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA所形成的生物膜的活菌含量OD492;共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察比较efaA+、efaA-肠球菌形成的生物膜的平均厚度、最大厚度。结果 efaA+转化株在各培养时间点微量滴定板法测定的生物膜形成能力OD570值、MTT法测定的OD492活菌含量、CLSM观察的生物膜的平均厚度、最大厚度均大于野生株及空质粒转化株,P<0.05;空质粒转化株与野生株比较无显著性差别,P>0.05。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。 展开更多
关键词 粪肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原efaa 共聚焦激光扫描显微镜(CLSM) 生物膜
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粪肠球菌心内膜抗原efaA基因转化株的构建及其对生物膜形成的影响 被引量：4
3
作者 强华 刘光英 +2 位作者 朱苹 陈豪 郑晓辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1133-1136,共4页
目的构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株,探讨efaA基因在肠球菌生物膜形成及感染性心内膜炎致病中的作用。方法 PCR扩增粪肠球菌efaA基因,构建pAT28-efaA重组子,经PCR、双酶切及测序鉴定,将重组子转化到efaA-野生株S14做为转化株(S... 目的构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株,探讨efaA基因在肠球菌生物膜形成及感染性心内膜炎致病中的作用。方法 PCR扩增粪肠球菌efaA基因,构建pAT28-efaA重组子,经PCR、双酶切及测序鉴定,将重组子转化到efaA-野生株S14做为转化株(S14-pAT28-efaA);同时将空质粒pAT28转化到野生株作为对照株(S14-pAT28);IPTG诱导efaA表达,SDS-PAGE、Western Blot分析鉴定。微量滴定板法测定生物膜形成能力。将S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部在595nm的OD值,比较efaA基因转化前后的生物膜形成能力。结果成功构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株;转化株的OD595值大于野生株及空质粒转化株,P<0.05,空质粒转化株的OD595值与野生株比较差异无统计学意义,P>0.05。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。 展开更多
关键词 粪肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原efaa 转化 生物膜
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一株鸡源粪肠球菌的分离鉴定 被引量：2
4
作者 陈松 马启超 +5 位作者 鲍佳茵 潘保革 许利军 刘华格 王学静 陈立功 《北方牧业》 2024年第5期19-19,共1页
近年来河北部分地区肉鸡关节囊肿病发病率有逐渐增多的趋势,患病肉鸡饲料利用率下降,淘汰率增高,给肉鸡养殖造成了较大的经济损失。肉鸡腿病的发病原因很多,其中细菌感染是主要原因之一。肉鸡关节囊肿中分离的细菌包括大肠杆菌、金黄色... 近年来河北部分地区肉鸡关节囊肿病发病率有逐渐增多的趋势,患病肉鸡饲料利用率下降,淘汰率增高,给肉鸡养殖造成了较大的经济损失。肉鸡腿病的发病原因很多,其中细菌感染是主要原因之一。肉鸡关节囊肿中分离的细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌,但尚无关于分离粪肠球菌的报道。通常认为,细菌所携带的毒力因子在疾病发生过程中起着至关重要的作用,已报道的粪肠球菌毒力因子主要包括溶血素(cyl)、表面蛋白(esp)、明胶酶E(gelE)、聚集物质(asal)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(ace)、透明质酸(Hyl)。笔者自保定某鸡场患关节囊肿肉鸡的关节液中分离鉴定到一株粪肠球菌,该结果可为肉鸡关节囊肿的防控提供基础。 展开更多
关键词 饲料利用率 毒力因子 心内膜炎 淘汰率 细菌感染 粪肠球菌 溶血素 黏附素
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东北黑熊源粪肠球菌EfaA基因的克隆表达及生物信息学分析 被引量：2
5
作者 秦晓东 楚熹橦 +2 位作者 鲁承 孙福亮 孙兴忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2248-2254,共7页
为检测熊源粪肠球菌心内膜炎抗原(EfaA)基因,用于快速检测东北黑熊粪肠球菌感染病例,本试验根据GenBank登录的粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756.1)合成了1对PCR引物,通过PCR法扩增合成长度为689bp的目的片段。将PCR产物克隆于pMD19-... 为检测熊源粪肠球菌心内膜炎抗原(EfaA)基因,用于快速检测东北黑熊粪肠球菌感染病例,本试验根据GenBank登录的粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756.1)合成了1对PCR引物,通过PCR法扩增合成长度为689bp的目的片段。将PCR产物克隆于pMD19-T载体,之后将其转入大肠杆菌DH5α感受态细胞筛选阳性克隆。提取扩增后的重组质粒pMD19-T-EfaA并进行PCR、酶切鉴定、序列测定及蛋白质结构预测。结果显示,本试验成功克隆出熊源粪肠球菌EfaA基因,与GenBank登录的ATCC 29212菌株同源性为100.0%。本试验成功构建了重组克隆载体pMD19-T-EfaA,并对测序结果进行了蛋白质结构的预测,为进一步建立黑熊粪肠球菌病的诊断方法提供了理论依据,同时也为黑熊疾病的防制奠定了基础。 展开更多
关键词 东北黑熊 粪肠球菌心内膜炎抗原(efaa) 基因克隆 生物信息学分析
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熊源粪肠球菌EfaA基因的原核表达 被引量：2
6
作者 楚熹橦 秦晓东 +1 位作者 鲁承 孙福亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期71-76,共6页
试验旨在构建EfaA基因的原核表达质粒,并对其进行表达。根据GenBank中粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756)设计合成1对引物,利用PCR法扩增、克隆EfaA基因,并进行生物信息学分析,将EfaA基因亚克隆于pGEX-4T-1原核表达载体,构建pGEX-4T-E... 试验旨在构建EfaA基因的原核表达质粒,并对其进行表达。根据GenBank中粪肠球菌EfaA基因序列(登录号:U03756)设计合成1对引物,利用PCR法扩增、克隆EfaA基因,并进行生物信息学分析,将EfaA基因亚克隆于pGEX-4T-1原核表达载体,构建pGEX-4T-EfaA原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,筛选最佳诱导时间并分析其表达蛋白的生物学特征。结果发现,试验成功获得大小为873bp的粪肠球菌EfaA基因。经IPTG诱导后,获得分子质量约为59ku的EfaA重组蛋白,以37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6h表达量最大。经Western blotting分析发现,具有较好的反应原性。本试验成功构建原核表达质粒pGEX-4T-EfaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达。 展开更多
关键词 黑熊 粪肠球菌 心内膜炎抗原 原核表达
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粪肠球菌基因hyl_1功能的实验研究 被引量：2
7
作者 孙小平 黄文祥 吴利先 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第14期1425-1428,共4页
目的建立动物感染模型,检测粪肠球菌类透明质酸酶基因hyl1缺失后毒力的变化。方法用粪肠球菌建立小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型,然后比较标准株、等位基因缺陷突变株hyl1mutant和hyl1mutant回复突变株毒力的变化。结果用粪肠球菌成功... 目的建立动物感染模型,检测粪肠球菌类透明质酸酶基因hyl1缺失后毒力的变化。方法用粪肠球菌建立小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型,然后比较标准株、等位基因缺陷突变株hyl1mutant和hyl1mutant回复突变株毒力的变化。结果用粪肠球菌成功建立小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型。在小鼠体内实验中,等位基因缺陷突变株hyl1mutant的毒力比标准株下降了1/4,hyl1mutant回复突变株的毒力与标准株相似;于感染后12h行外周血白细胞计数和腹腔液细胞因子TNF-α测定,hyl1mutant组明显低于标准株组,hyl1mutant回复突变组所测结果与标准株相似。在兔心内膜炎模型中,hyl1mutant组对心脏的致病性和病理改变也没有标准株组严重。结论粪肠球菌类透明质酸酶基因hyl1可能在粪肠球菌的致病性中起到重要作用,是编码肠球菌毒力因子的基因之一。 展开更多
关键词 粪肠球菌 hyl1 毒力 腹膜炎 心内膜炎
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粪肠球菌TLME3株AceA基因的克隆和序列分析 被引量：2
8
作者 聂鑫 高原 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期837-840,共4页
目的了解粪肠球菌胶原黏附素A(AceA)基因及其编码蛋白的遗传变异情况,为筛选动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原基因奠定基础。方法根据粪肠球菌B-343/TX2783株AceA基因序列设计引物,对粪肠球菌TLME3株总DNA进行PCR扩增,产物经胶回... 目的了解粪肠球菌胶原黏附素A(AceA)基因及其编码蛋白的遗传变异情况,为筛选动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原基因奠定基础。方法根据粪肠球菌B-343/TX2783株AceA基因序列设计引物,对粪肠球菌TLME3株总DNA进行PCR扩增,产物经胶回收试剂盒纯化回收,与pMD18-T连接,转化入E.coli DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆进行测序。使用Lasergene7.0、BLAST、MEGA 4.0等生物学软件,对克隆基因及其编码蛋白进行序列分析并生成系统进化发育树,计算基因核苷酸及编码氨基酸的变异率。结果成功克隆了粪肠球菌TLME3株AceA基因,阅读框为918bp。与BLASTn和BLASTp搜索出的58个核苷酸和84个氨基酸同源序列的同源性均为96%～100%,氨基酸变异率为1.63%。结论 TLME3AceA基因很保守,可以作为动物粪肠球菌性传染病诊断及保护性抗原候选基因。 展开更多
关键词 粪肠球菌 AceA 基因克隆 序列分析 系统进化发育树 诊断抗原 保护性抗原
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噬菌体裂解酶和抗菌肽协同对抗耐万古霉素粪肠球菌感染
9
《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期443-443,共1页
粪肠球菌是机体肠道内广泛存在的一种条件性致病菌,可引起人和动物的心内膜炎、尿路感染、败血症等疾病。粪肠球菌能够在恶劣的环境条件下生存,是引发医院感染的主要病原菌之一。耐药粪肠球菌在全球范围内的传播,特别是耐万古霉素粪肠球... 粪肠球菌是机体肠道内广泛存在的一种条件性致病菌,可引起人和动物的心内膜炎、尿路感染、败血症等疾病。粪肠球菌能够在恶劣的环境条件下生存,是引发医院感染的主要病原菌之一。耐药粪肠球菌在全球范围内的传播,特别是耐万古霉素粪肠球菌(VREF)的出现,导致治疗失败和死亡的风险增加,严重威胁公共卫生和人类健康。世界卫生组织(WTO)和美国疾病控制和预防中心(CDC)将VREF列为严重威胁等级病原菌。治疗VREF感染的可选抗生素非常有限,并且侵袭性VREF往往产生生物被膜,加大治疗难度而导致高死亡率。因此,研究和开发对抗侵袭性VREF感染的新策略刻不容缓。 展开更多
关键词 条件性致病菌 心内膜炎 耐万古霉素 粪肠球菌 尿路感染 公共卫生 噬菌体裂解酶 生物被膜
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反应迟钝 头痛 发热
10
作者 徐丹 周立新 +3 位作者 马国涛 高山 彭斌 崔丽英 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2013年第8期736-740,共5页
病历摘要患者女性,38岁。主因反应迟钝、头痛伴发热2月余,于2012年11月9日入我院。患者于入院前2个月(8月底)出现反应迟钝、精细动作缓慢,但生活可完全自理。约1周(9月6日)后出现阵发性头部胀痛但可耐受,以前额部显著且与体位变换无关,... 病历摘要患者女性,38岁。主因反应迟钝、头痛伴发热2月余,于2012年11月9日入我院。患者于入院前2个月(8月底)出现反应迟钝、精细动作缓慢,但生活可完全自理。约1周(9月6日)后出现阵发性头部胀痛但可耐受,以前额部显著且与体位变换无关,伴发热(体温38℃),无明显畏寒、寒战,无头晕、恶心、呕吐、视物不清、视物成双。 展开更多
关键词 心内膜炎 细菌性 肠球菌 粪 脑出血 病例报告
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