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类泛素修饰蛋白bISG15抗血清在体外修饰系统中的应用(英文) 被引量:1
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作者 刘畅 史颖姣 +2 位作者 宣成昊 耿运琪 乔文涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-34,共5页
ISG15由干扰素刺激基因15编码,是最早被发现的类泛素修饰分子.病毒感染以及干扰素刺激可以强烈诱导其表达.与泛素类似,ISG15可以共价连接到其他蛋白分子上进行修饰,但ISG15及其连接修饰的功能作用还有很多尚未知.最近的研究表明,ISG15... ISG15由干扰素刺激基因15编码,是最早被发现的类泛素修饰分子.病毒感染以及干扰素刺激可以强烈诱导其表达.与泛素类似,ISG15可以共价连接到其他蛋白分子上进行修饰,但ISG15及其连接修饰的功能作用还有很多尚未知.最近的研究表明,ISG15及其修饰作用在先天免疫中起着重要的作用.将牛类ISG15基因克隆进入pET28a( +)原核表达载体,并且表达了可溶的融合有His-tag标签的bISG15融合蛋白.使用Ni-NTA葡聚糖进行纯化浓缩.纯化蛋白免疫Balb/c小鼠并获得抗血清.Western印迹实验显示,抗血清可以特异地识别在真核细胞中表达的bISG15 .浓缩的bISG15以及制备的抗血清用于建立bISG15的体外修饰系统.实验证明,使用该系统bISG15可以连接到细胞蛋白上进行修饰. 展开更多
关键词 类泛素修饰分子 bISG15 体外修饰系统
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类泛素修饰蛋白质ISG15及其修饰酶系的功能 被引量:3
2
作者 万新星 ZHANG Dian-Zheng 陈汉春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期295-300,共6页
受干扰素诱导表达的干扰素刺激基因15编码蛋白质(ISG15)是第1个被鉴定的类泛素修饰蛋白质.目前已在病毒感染细胞和肿瘤细胞中发现了多种ISG15的作用靶蛋白,提示ISG15可能在免疫调节和肿瘤发生等方面发挥重要作用.本文介绍ISG15的结构与... 受干扰素诱导表达的干扰素刺激基因15编码蛋白质(ISG15)是第1个被鉴定的类泛素修饰蛋白质.目前已在病毒感染细胞和肿瘤细胞中发现了多种ISG15的作用靶蛋白,提示ISG15可能在免疫调节和肿瘤发生等方面发挥重要作用.本文介绍ISG15的结构与生化特点,探讨ISG15在相关酶系作用下修饰目标蛋白质的机制,总结ISG15及其修饰酶系的抗病毒和抗肿瘤作用及其相关机制. 展开更多
关键词 类泛素修饰蛋白质干扰素刺激基因15 泛素 修饰酶系 抗病毒活性 抗肿瘤
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壮观霉素B1抑制过氧化物增殖激活受体共激活子类泛素修饰促高糖内皮细胞自愈
3
作者 李艳霞 张春艳 +5 位作者 马晓芳 边希云 肖晓琳 郑全 张琳 刘晓智 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期410-413,共4页
目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的小泛素相关修饰蛋白(SUMO)在糖尿病患者血管内皮修复能力下降过程中的作用,并寻找新的治疗方法。方法选取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)第3~6代细胞随机分对照组、高糖组及壮... 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的小泛素相关修饰蛋白(SUMO)在糖尿病患者血管内皮修复能力下降过程中的作用,并寻找新的治疗方法。方法选取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)第3~6代细胞随机分对照组、高糖组及壮观霉素B1治疗组(治疗组)3组(n=4),分别于1.0 g/L葡萄糖、4.5 g/L葡萄糖、4.5 g/L葡萄糖+20μmol/L壮观霉素B1培养液中作用48 h,用Western blot检测SUMO2/3、PGC-1α蛋白表达,RT-PCR方法检测核呼吸因子-2α(NRF-2α)和核受体雌激素受体相关受体α(ERRα)mRNA表达,细胞划痕实验检测HUVEC损伤修复功能,模拟血管形成实验检测HUVEC血管形成能力。结果高糖组和治疗组共价态SUMO2/3蛋白表达水平明显高于对照组,NRF-2α和ERRαmRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05,P<0.01);治疗组共价态SUMO2/3蛋白表达水平明显低于高糖组,NRF-2α和ERRαmRNA表达水平明显高于高糖组(P<0.05)。高糖组游离态SUMO2/3水平低于对照组和治疗组(P<0.05)。3组PGC-1α蛋白表达水平比较,无统计学差异(P>0.05)。细胞划痕实验显示,高糖组和治疗组细胞迁移距离明显低于对照组[(19.47±4.04)μm vs(57.35±5.59)μm,P=0.017;(31.98±6.05)μm vs(57.35±5.59)μm,P=0.032],治疗组细胞迁移距离明显高于高糖组(P=0.037)。细胞模拟血管形成实验显示,治疗组能够改善网状交联情况,形成少量类血管结构。结论壮观霉素B1能够通过抑制PGC-1α蛋白的SUMO化修饰增加血管内皮细胞在高糖环境下的自愈能力。 展开更多
关键词 PPARΓ 泛素相关修饰蛋白质 糖尿病 核呼吸因子
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弓形虫类泛素蛋白的研究进展及其潜在应用
4
作者 许鑫鑫 李泰峰 +3 位作者 黄丰立 德珍 赵宁宁 张晓 《山东畜牧兽医》 2025年第3期98-101,共4页
弓形虫是一种能够入侵几乎所有温血动物有核细胞的机会性病原体,其复杂的生命周期和精准的基因表达调控机制涉及多种蛋白质翻译后修饰,其中类泛素化修饰尤为重要。本文综述了弓形虫类泛素蛋白的研究进展,包括SUMO、URM1、NEDD8、UFM1和A... 弓形虫是一种能够入侵几乎所有温血动物有核细胞的机会性病原体,其复杂的生命周期和精准的基因表达调控机制涉及多种蛋白质翻译后修饰,其中类泛素化修饰尤为重要。本文综述了弓形虫类泛素蛋白的研究进展,包括SUMO、URM1、NEDD8、UFM1和ATG8等关键类泛素蛋白在弓形虫感染、应激响应、生长发育、抗氧化应激等方面的作用,以及在弓形虫疫苗研发中的潜在应用。本文旨在丰富对弓形虫类泛素蛋白的认识,为弓形虫病的防治提供新的策略和方法,并为相关研究人员提供新的思路和参考依据。 展开更多
关键词 弓形虫 泛素蛋白 泛素修饰
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内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响 被引量:2
5
作者 刘卉芳 张惠洁 +4 位作者 刘晓燕 胡其娴 马晓文 胡小磊 陈凤玲 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期252-256,共5页
目的探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响。方法制备糖尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子(GRP78、XBP1)... 目的探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响。方法制备糖尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子(GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达。分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达。结果糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P<0.001)。经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P<0.05)。结论糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高。体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufm1的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程。 展开更多
关键词 内质网应激 巨噬细胞 泛素折叠修饰蛋白
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葛根素通过调节类泛素化修饰平衡改善心肌功能的研究 被引量:5
6
作者 边希云 肖晓琳 +5 位作者 薛娜 于田 马晓芳 李艳霞 刘晓智 杜新平 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2021年第4期417-421,共5页
目的从小泛素样修饰蛋白(SUMO)介导SUMO化修饰平衡角度解读葛根素对心力衰竭(HF)的心功能保护作用及机制。方法通过主动脉缩窄术造成压力超负荷诱导HF,成功构建小鼠HF模型后,小鼠随机分为对照组、模型组、模型+葛根素组、葛根素组,每组6... 目的从小泛素样修饰蛋白(SUMO)介导SUMO化修饰平衡角度解读葛根素对心力衰竭(HF)的心功能保护作用及机制。方法通过主动脉缩窄术造成压力超负荷诱导HF,成功构建小鼠HF模型后,小鼠随机分为对照组、模型组、模型+葛根素组、葛根素组,每组6只;HL-1细胞构建HF模型,分为对照1组、模型1组、模型+葛根素1组、对照2组、模型2组、模型+葛根素2组,其中前3组转染Vector质粒,后3组转染HA-SENP1质粒。超声心动检测心室功能;苏木精-伊红染色检测心肌组织形态;蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、活化型Caspase-3、Bcl2、Bax和SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)蛋白水平;JC-1试剂检测线粒体膜电位;TUNEL检测HL-1细胞凋亡情况。结果与对照组比较,模型组小鼠线粒体内活性氧及H_(2)O_(2)均增加,线粒体膜电位下降(P<0.05),与模型组比较,模型+葛根素组可改善HF小鼠心脏功能,活性氧和H_(2)O_(2)降低,线粒体膜电位增加,活化型Caspase-3/Caspase-3比值下降、Bcl2/Bax比值增加、SENP1蛋白下降(P<0.05)。与模型1组相比,模型+葛根素1组活性氧及H_(2)O_(2)减少,线粒体膜电位升高(P<0.05)。与模型+葛根素1组比较,模型+葛根素2组细胞内H_(2)O_(2)和活性氧增加,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论葛根素通过抑制SENP1过表达,减弱HF小鼠心肌细胞的氧化应激,减轻线粒体损伤,抑制心室重构,最终改善心脏功能。 展开更多
关键词 葛根素 泛素相关修饰蛋白质 心力衰竭 膜电位 线粒体 心室重构
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基于LightGBM的蛋白质类泛素化修饰位点预测
7
作者 陈焕超 魏志森 +2 位作者 於东军 杨敬民 杨静宇 《南京理工大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期156-163,共8页
蛋白质类泛素化修饰位点的准确识别对基础研究和药物开发都具有重要意义。该文提出了一种基于蛋白质序列特征的类泛素化修饰位点预测模型。该模型结合氨基酸的物理化学属性统计特征和氨基酸序列二元语法模式特征,训练一种轻量型梯度提升... 蛋白质类泛素化修饰位点的准确识别对基础研究和药物开发都具有重要意义。该文提出了一种基于蛋白质序列特征的类泛素化修饰位点预测模型。该模型结合氨基酸的物理化学属性统计特征和氨基酸序列二元语法模式特征,训练一种轻量型梯度提升机(Light gradient boosting machine,LightGBM)分类器预测某个蛋白质序列的类泛素化修饰位点。该文对比了不同特征的鉴别性,以及不同分类模型的预测性能。在基准数据集上的试验结果证明了该文所提方法的有效性,相比于现有方法在性能上取得了明显的提升,马修斯相关系数为91.64%。 展开更多
关键词 蛋白质翻译后修饰 蛋白质泛素修饰位点 基于序列的预测 轻量型梯度提升机 二元语法模式
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类泛素蛋白ISG 15及其在先天免疫中的作用 被引量:10
8
作者 刘畅 乔文涛 +1 位作者 王琛 耿运琪 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1023-1029,共7页
病毒感染和干扰素刺激高等动物细胞,均可以强烈地诱导表达干扰素刺激基因15编码的蛋白ISG15,它是最早发现的类泛素修饰蛋白.虽然针对泛素及其修饰功能已进行了广泛而深入地研究,但对于ISG15共价修饰以及它的生物学功能了解甚少,有待进... 病毒感染和干扰素刺激高等动物细胞,均可以强烈地诱导表达干扰素刺激基因15编码的蛋白ISG15,它是最早发现的类泛素修饰蛋白.虽然针对泛素及其修饰功能已进行了广泛而深入地研究,但对于ISG15共价修饰以及它的生物学功能了解甚少,有待进一步探讨.该领域的研究近几年有所突破,发现了有关ISG15修饰的酶系统,ISG15及其修饰系统在先天免疫以及干扰素信号调节中的重要作用.简要介绍ISG15的发现历史、生化性质、基因调控特点以及ISG15修饰系统中所涉及的酶,总结目前研究ISG15及其修饰与调节先天性免疫相关过程的一些最新进展. 展开更多
关键词 ISG15 类泛素修饰 先天免疫 干扰素调节
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类泛素化修饰Neddylation在心血管疾病中的研究进展
9
作者 崔静 许佳佳 魏博 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第4期506-512,共7页
迄今为止,心血管疾病被认为是威胁全世界人类健康的最常见疾病之一,不仅病死率高,而且对患者的生活质量和生存有很大影响。心血管疾病的发生和发展涉及许多环境和行为因素,而且有研究[1-2]证实许多表观遗传变异参与心血管疾病的病理生... 迄今为止,心血管疾病被认为是威胁全世界人类健康的最常见疾病之一,不仅病死率高,而且对患者的生活质量和生存有很大影响。心血管疾病的发生和发展涉及许多环境和行为因素,而且有研究[1-2]证实许多表观遗传变异参与心血管疾病的病理生理过程。翻译后修饰是细胞内蛋白活性及表达的重要调控机制之一,是一种普遍存在于特定氨基酸残基上的化学修饰。 展开更多
关键词 泛素修饰 NEDDYLATION 心血管疾病 NEDD8
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小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶SENPs与癌症 被引量:2
10
作者 方晋仁 尹小慧 +1 位作者 吴雅娟(综述) 杨南扬(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第12期1310-1314,共5页
类泛素化修饰也称SUMO化修饰,是将小类泛素样修饰蛋白SUMO分子共价连接到靶蛋白上的蛋白质翻译后修饰过程。它参与转录调控、细胞周期调控、信号转导、细胞增殖和凋亡等诸多生命活动过程。在细胞内,也存在将SUMO从靶蛋白上切除下来的逆... 类泛素化修饰也称SUMO化修饰,是将小类泛素样修饰蛋白SUMO分子共价连接到靶蛋白上的蛋白质翻译后修饰过程。它参与转录调控、细胞周期调控、信号转导、细胞增殖和凋亡等诸多生命活动过程。在细胞内,也存在将SUMO从靶蛋白上切除下来的逆过程,即去SUMO化;该过程是由SUMO特异性蛋白酶一SENPs通过其异肽酶活性切断靶蛋白与SU-MO分子的异肽连接来完成。正常细胞内蛋白质的SUMO与去SUMO水平维持动态平衡;一旦这种平衡被打破,就能引起疾病甚至癌症的发生。目前已发现多种癌组织中SENPs的表达异常,文章主要就SENPs家族的表达异常对癌症发生发展的影响作一综述。 展开更多
关键词 泛素修饰 泛素修饰蛋白特异性蛋白酶 癌症
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活性氧调控蛋白质修饰影响肿瘤细胞行为机制的研究进展 被引量:8
11
作者 易静 杨洁 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1122-1127,共6页
由超氧离子、过氧化氢和羟自由基组成的活性氧(ROS)是细胞代谢的副产品。活性氧水平对细胞生死有着复杂的影响,由此对肿瘤、糖尿病、神经退行性病变等氧化应激相关疾病的发生和进程带来复杂的影响,其中机制则尚不清楚。本研究组近十多... 由超氧离子、过氧化氢和羟自由基组成的活性氧(ROS)是细胞代谢的副产品。活性氧水平对细胞生死有着复杂的影响,由此对肿瘤、糖尿病、神经退行性病变等氧化应激相关疾病的发生和进程带来复杂的影响,其中机制则尚不清楚。本研究组近十多年来致力于阐明活性氧水平的高低如何影响细胞的生物学活动和生死命运,即活性氧在细胞增殖、分化和凋亡中的信号调控作用,特别聚焦于活性氧调控的蛋白质翻译后修饰如氧化修饰、类泛素修饰(SUMO)化修饰等在细胞信号转导中的作用及其与肿瘤发生发展和治疗的关系。本研究组主要的发现有:①肿瘤细胞对三氧化二砷、顺铂和柔红霉素等促凋亡药物的易感性与细胞固有活性氧水平正相关,用大黄素等化合物或强制表达Nox质粒等手段提高活性氧水平,造成重度氧化应激,可以增强白血病和实体瘤细胞对药物促凋亡的易感性,其作用机制涉及升高的活性氧抑制肿瘤细胞中原有的RhoA、HIF-1、NF-κB等抗凋亡促存活信号通路,并激活Caspase-9等促凋亡因子;②肿瘤细胞中的轻度氧化应激通过诱导SENP3影响蛋白质SUMO化修饰和基因表达格局,促进肿瘤发生发展。SENP3是SUMO蛋白酶,我们首次证明该分子是氧化还原感应蛋白,自身在活性氧诱导下快速累积,调控一系列核蛋白底物(如p300、PML和p53等)的SUMO化,介导肿瘤细胞适应氧化应激环境并强化其增殖、存活和血管生成等表型。该方向下的研究共发表国际杂志论文26篇,获得国家自然科学基金项目12项。研究成果获2011年教育部自然科学二等奖。 展开更多
关键词 活性氧 氧化应激 氧化修饰 类泛素修饰 肿瘤
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SUMO及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤发生中的作用 被引量:2
12
作者 齐玲 王玮瑶 +8 位作者 郑中华 张以忠 赵丽微 钟秀宏 赵东海 杨淑艳 杨宁江 任旷 于洪泉 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-10,共4页
目的:观察小泛素化相关修饰蛋白质类(SUMO)及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤组织中的表达,阐明SUMO化与恶性胶质瘤发生的关系。方法:人脑正常组织和恶性胶质瘤组织样品分别作为正常对照组和恶性胶质瘤组,采用蛋白免疫印迹法检测SUMO1、SUMO... 目的:观察小泛素化相关修饰蛋白质类(SUMO)及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤组织中的表达,阐明SUMO化与恶性胶质瘤发生的关系。方法:人脑正常组织和恶性胶质瘤组织样品分别作为正常对照组和恶性胶质瘤组,采用蛋白免疫印迹法检测SUMO1、SUMO2、SUMO活化酶(Aos1和Uba2)、SUMO结合酶(UBC9)和SUMO连接酶(PIAS1、PIAS2、PIAS3和Pc2)蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,恶性胶质瘤组织中SUMO1、SUMO2、Aos1、UBC9和PIAS3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Uba2、PIAS1和PIAS2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:SUMO及SUMO化修饰蛋白可能对恶性胶质瘤的发生起重要的促进作用。 展开更多
关键词 泛素化相关修饰蛋白质 恶性胶质瘤 基因表达
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蛋白质翻译后修饰及其生物学功能研究进展 被引量:6
13
作者 孙琪 张辉 +3 位作者 马语曼 张鑫 唐子人 王雯 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期989-991,共3页
后基因组时代的到来意味着生命科学研究重心转向功能基因组学及功能蛋白质组学等新领域。蛋白质翻译后修饰是蛋白质组学的重要组成部分。蛋白质经翻译后修饰改变自身的空间构象、活性、稳定性及其与其他分子相互作用等方面的性能,从而... 后基因组时代的到来意味着生命科学研究重心转向功能基因组学及功能蛋白质组学等新领域。蛋白质翻译后修饰是蛋白质组学的重要组成部分。蛋白质经翻译后修饰改变自身的空间构象、活性、稳定性及其与其他分子相互作用等方面的性能,从而参与调节机体多样化的生命活动。多数蛋白质存在翻译后修饰,目前已知的蛋白质共价修饰方式多达200余种,主要包括磷酸化、亚硝基化、硝基化、泛素化和小泛素相关修饰物化(SUMO)等。 展开更多
关键词 蛋白质组学 蛋白质加工 转译后 泛素相关修饰蛋白质 半胱氨酸
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SUMO化修饰在核受体功能调控中的作用 被引量:1
14
作者 赵怡超 卜军 何奔 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期287-290,共4页
小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin related modifier,SUMO)修饰作用是蛋白质翻译后修饰的重要方式。SUMO化修饰与泛素化作用极为相似,并且在某些靶蛋白上可以与泛素竞争结合位点,从而起到稳定靶蛋白的作用,并参与调节靶蛋白的细胞定... 小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin related modifier,SUMO)修饰作用是蛋白质翻译后修饰的重要方式。SUMO化修饰与泛素化作用极为相似,并且在某些靶蛋白上可以与泛素竞争结合位点,从而起到稳定靶蛋白的作用,并参与调节靶蛋白的细胞定位、膜离子通道功能、DNA损伤修复以及转录活性等。核受体是一类在生物体内广泛分布的、配体依赖的转录因子超家族,参与机体生长发育、细胞分化,以及体内许多生理、病理过程中的基因表达调控。最近研究发现,核受体的SU-MO修饰可通过影响核受体的稳定性、转录活性、亚细胞定位等多重途径影响核受体的功能,并影响机体炎症反应及相关疾病的发生发展。本文对核受体的SUMO修饰在核受体功能调控中的作用,以及与机体相关疾病之间的关系做一简要综述。 展开更多
关键词 核受体 泛素相关修饰蛋白 泛素修饰
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蛋白质SUMO化修饰的蛋白质组学研究述评
15
作者 熊强强 屠俊 +3 位作者 李郡如 程金科 左建宏 陈亚兰 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期89-94,共6页
小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)化修饰在真核细胞中广泛存在,参与了多种信号转导和代谢途径。规模化鉴定SUMO化修饰蛋白质有助于从整体角度揭示SUMO化修饰的功能和作用机制。目前,有关SUMO化修饰位点的... 小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)化修饰在真核细胞中广泛存在,参与了多种信号转导和代谢途径。规模化鉴定SUMO化修饰蛋白质有助于从整体角度揭示SUMO化修饰的功能和作用机制。目前,有关SUMO化修饰位点的鉴定难度较大,如何规模化研究蛋白质的SUMO化修饰尚未有定论。基于此,该文系统分析了哺乳动物细胞中开展SUMO化修饰蛋白质组学的研究工作,并在总结其研究方法和成果的基础上,对SUMO的突变模式和富集方式进行详细分析,进而归纳出针对细胞和组织样品进行SUMO化修饰位点系统化鉴定的理想方法。 展开更多
关键词 小分子泛素相关修饰 泛素修饰 蛋白质组学 质谱
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鲤疱疹病毒2型orf153基因编码蛋白的可溶性表达及多克隆抗体的制备
16
作者 王娜 张舟 +2 位作者 张旻 景宏丽 吴绍强 《水产学杂志》 2024年第6期53-58,96,共7页
为制备鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)ORF153蛋白多克隆抗体,经分析优化合成orf153基因片段,并将其克隆至pSUMO-Mut载体中,构建pSUMO-Mut-orf153原核表达质粒,然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中,经IPTG低温诱导,获得可溶性的重组蛋白ORF... 为制备鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)ORF153蛋白多克隆抗体,经分析优化合成orf153基因片段,并将其克隆至pSUMO-Mut载体中,构建pSUMO-Mut-orf153原核表达质粒,然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中,经IPTG低温诱导,获得可溶性的重组蛋白ORF153。SDS-PAGE电泳和Western blot实验结果表明,表达的可溶性重组蛋白与His单抗产生特异性反应,反应原性良好。将鉴定正确的重组蛋白亲和纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗CyHV-2 ORF153蛋白的多克隆抗体。采用ORF153蛋白和感染CyHV-2的阳性组织液为抗原的间接ELISA方法,分别检测纯化后抗体的效价不低于1∶256000和1∶32000,多克隆抗体能特异性识别重组蛋白和感染CyHV-2的组织上清。本实验可为ORF153蛋白功能研究及CyHV-2血清学诊断方法建立奠定基础。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒2型 ORF153蛋白 可溶性表达 泛素蛋白修饰分子(small ubiquitin-like modifier SUMO)标签 多克隆抗体
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SUMO-2/3与孕激素受体的共价结合及其对该受体转录活性的调节 被引量:2
17
作者 韩白玉 李法曾 +8 位作者 程龙 徐小洁 蒋凯 付洁 韩永健 吕朝晖 窦京涛 张浩 叶棋浓 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1493-1497,共5页
目的研究B型孕激素受体(progesterone receptor B type;PRB)是否能被SUMO-2、SUMO-3类泛素化修饰,并探讨这种修饰对孕激素受体转录活性的影响。方法以人的MCF-7 cDNA为模板进行PCR反应,扩增出SUMO-2、SUMO-3的cDNA,构建真核表达载体pcDN... 目的研究B型孕激素受体(progesterone receptor B type;PRB)是否能被SUMO-2、SUMO-3类泛素化修饰,并探讨这种修饰对孕激素受体转录活性的影响。方法以人的MCF-7 cDNA为模板进行PCR反应,扩增出SUMO-2、SUMO-3的cDNA,构建真核表达载体pcDNA3FLAG-SUMO2与pcDNA3FLAG-SUMO3;将质粒pXJ40-myc-PRB分别与pcDNA3-FLAG、pcDNA3FLAG-SUMO2、pcDNA3FLAG-SUMO3共转染人胚肾细胞293T,运用免疫共沉淀及western印迹的方法检测其是否发生类泛素化修饰;运用测定荧光素酶报告基因的方法检测类泛素化修饰对孕激素受体转录活性的影响。结果构建成功表达载体pcDNA3FLAG-SUMO2与pcDNA3FLAG-SUMO3;免疫共沉淀实验证实sumo2/3均可以与PRB共价结合;SUMO-2、SUMO-3能以孕激素依赖的方式增强PRB的转录活性。结论 SUMO-2、SUMO-3分子能够对孕激素受体PRB进行类泛素化修饰,并调节其分子功能。 展开更多
关键词 SUMO-2 SUMO-3 PRB 转录活性 泛素修饰
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人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化 被引量:7
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作者 王会岩 田海山 +6 位作者 赵宏鑫 张耀方 万晓姗 邵明龙 杨苹 肖业臣 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期81-85,共5页
目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接... 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 pET-20b 泛素相关修饰蛋白质
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家族性高血钾型高血压Cullin3致病突变体neddylation异常的分子机制研究 被引量:1
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作者 牛伟 周波 +3 位作者 吴萍 陈舜杰 蒋更如 张翀 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1420-1424,共5页
目的·探讨Cullin3(CUL3)致病突变体Cullin3Δ9(缺失9号外显子,CUL3Δ9)是否由于与COP9信号体(CSN)结合减弱而导致其类泛素化修饰异常。方法·使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞株,采用脂质体转染技术,将CSN5 si... 目的·探讨Cullin3(CUL3)致病突变体Cullin3Δ9(缺失9号外显子,CUL3Δ9)是否由于与COP9信号体(CSN)结合减弱而导致其类泛素化修饰异常。方法·使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞株,采用脂质体转染技术,将CSN5 siRNA与FLAG-CUL3质粒或FLAG-CUL3Δ9质粒共转染HEK293细胞,Western blotting观察CUL3和CUL3Δ9类泛素化修饰程度的变化;转染FLAG-CUL3或FLAG-CUL3Δ9质粒后,以金属蛋白酶抑制剂1,10-菲咯啉进行预孵育,Western blotting观察CUL3和CUL3Δ9类泛素化修饰程度的变化;在转染FLAG-CUL3质粒和FLAG-CUL3Δ9质粒后,以FLAG抗体与Dynabeads Protein G磁珠行免疫共沉淀,Western blotting观察CUL3或CUL3Δ9与CSN5的结合状态。结果·转染CSN5 siRNA后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3Δ9的类泛素化修饰程度无明显变化;以1,10-菲罗啉预孵育后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3Δ9的类泛素化修饰程度无明显变化;免疫共沉淀结果显示CUL3与CSN5结合,而CUL3Δ9与CSN5结合减弱。结论·CUL3Δ9与CSN结合减弱导致类泛素化修饰异常。 展开更多
关键词 泛素修饰 Cullin3 COP9信号体 家族性高血钾型高血压
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SUMO化缺失对脓毒症小鼠树突状细胞功能的影响及其在脓毒症中的作用 被引量:1
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作者 王谷宜 杨飞 +3 位作者 高甜甜 吴迪凌 黄佳 李金秀 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期314-321,共8页
目的:探讨类小泛素化修饰(small ubiquitin-like modifier,SUMO)缺失对脓毒症小鼠树突状细胞(dendritic cells,DC)功能的影响及其在脓毒症中的作用。方法:建立DC特异性的泛素结合酶9(ubiquitin-conjugating enzyme 9,UBC9)缺陷(UBC9^Δ... 目的:探讨类小泛素化修饰(small ubiquitin-like modifier,SUMO)缺失对脓毒症小鼠树突状细胞(dendritic cells,DC)功能的影响及其在脓毒症中的作用。方法:建立DC特异性的泛素结合酶9(ubiquitin-conjugating enzyme 9,UBC9)缺陷(UBC9^ΔDC)小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠的阑尾结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症模型。计算并比较小鼠的7 d病死率;检测CLP术后24 h血液、肝和脾的细菌负荷;采用ELISA法检测CLP术后48 h小鼠血浆和骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)培养上清液中IL-1β,IL-6,IL-18和TNF-α水平以及小鼠脾单个核细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的水平;采用流式细胞术分析CLP术后48 h脾DC表面分子MHC Ⅱ,CD54和CD80的表达和脾单个核细胞中Th1,Th2细胞亚群的比例。结果:CLP术后,与WT脓毒症小鼠相比,UBC9^ΔDC脓毒症小鼠7 d病死率增加(P<0.05),血液(P<0.01)、肝(P<0.01)和脾(P<0.05)的细菌负荷增加;血浆和BMDC培养上清液中IL-1β和IL-18水平显著升高(均P<0.01);DC的数量、表面分子表达差异无统计学意义(均P>0.05);脾Th2细胞数量显著增加(P<0.05),Th1/Th2比值下调但差异无统计学意义(P>0.05),IL-4及IFN-γ水平均有升高且IFN-γ/IL-4比值显著下调(均P<0.05)。结论:SUMO化缺失可能通过DC调控炎症因子释放,异常活化T细胞,从而导致脓毒症小鼠死亡。 展开更多
关键词 脓毒症 树突状细胞 泛素修饰 泛素结合酶9
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