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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)
被引量：
15
1
作者
杨青
胡学军
+4 位作者
许小明
高晓蓉
安利佳
苏志国
J.C.JANSON
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期390-393,共4页
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇...
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 .
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关键词
大连蛇岛
蝮蛇
类凝血酶基因
毕赤酵母
克隆
表达
分离纯化
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职称材料
蛇毒类凝血酶基因在大肠埃希菌中诱导表达及影响因素
被引量：
1
2
作者
闫强
何桂梅
+2 位作者
陆一鸣
陈明勇
孙树汉
《动物医学进展》
CSCD
2006年第8期77-79,共3页
将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优...
将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优化。研究发现,不同的诱导时间、IPTG诱导浓度和诱导温度与融合蛋白表达量有很大关系。SDS-PAGE结果显示,当OD值为0.5,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为37℃时,诱导3 h后蛋白表达量最高,超出此范围可使表达量显著减少。在优化诱导条件后,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白量的66%。
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关键词
蛇毒
类凝血酶基因
原核表达
影响因素
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职称材料
题名
大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)
被引量：
15
1
作者
杨青
胡学军
许小明
高晓蓉
安利佳
苏志国
J.C.JANSON
机构
大连理工大学化工学院
中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室
Biosurface Science Center
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期390-393,共4页
基金
辽宁省科学技术基金项目 (993 0 5 0 0 1)
瑞典政府NUTEK基金资助 .~~
文摘
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 .
关键词
大连蛇岛
蝮蛇
类凝血酶基因
毕赤酵母
克隆
表达
分离纯化
Keywords
thrombin-like enzyme
cloning
expression
purification
characterization
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
TQ460.38 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
蛇毒类凝血酶基因在大肠埃希菌中诱导表达及影响因素
被引量：
1
2
作者
闫强
何桂梅
陆一鸣
陈明勇
孙树汉
机构
中国农业大学动物医学院
第二军医大学遗传学教研室
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第8期77-79,共3页
基金
国家自然科学基金(30400272)
上海市科委基础研究重点项目(04JC14002)资助
文摘
将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优化。研究发现,不同的诱导时间、IPTG诱导浓度和诱导温度与融合蛋白表达量有很大关系。SDS-PAGE结果显示,当OD值为0.5,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为37℃时,诱导3 h后蛋白表达量最高,超出此范围可使表达量显著减少。在优化诱导条件后,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白量的66%。
关键词
蛇毒
类凝血酶基因
原核表达
影响因素
Keywords
thrombin-like enzyme gene prokaryotic expression influence factor
分类号
S856.9 [农业科学—临床兽医学]
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)
杨青
胡学军
许小明
高晓蓉
安利佳
苏志国
J.C.JANSON
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002
15
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
蛇毒类凝血酶基因在大肠埃希菌中诱导表达及影响因素
闫强
何桂梅
陆一鸣
陈明勇
孙树汉
《动物医学进展》
CSCD
2006
1
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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