等温滴定量热法研究牛血清白蛋白与十二烷基二羟乙基甲基溴化铵的相互作用 被引量：5

1

作者 胡晓环 童威 +2 位作者 邵爽 雷群芳 方文军 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期525-529,共5页

用等温滴定热量计测定了牛血清白蛋白(BSA)与十二烷基二羟乙基甲基溴化铵(DDHAB)的相互作用焓,探讨了表面活性剂浓度、温度和盐浓度等对相互作用焓的影响.BSA与表面活性剂相互作用焓是静电作用、去水化作用、疏水作用和表面活性剂胶束... 用等温滴定热量计测定了牛血清白蛋白(BSA)与十二烷基二羟乙基甲基溴化铵(DDHAB)的相互作用焓,探讨了表面活性剂浓度、温度和盐浓度等对相互作用焓的影响.BSA与表面活性剂相互作用焓是静电作用、去水化作用、疏水作用和表面活性剂胶束化等协同作用的结果,在其他条件保持不变时,相互作用焓随表面活性剂浓度改变,在临界胶束浓度(CMC)前后区域分别出现吸热峰.加入NaCl可引起相互作用焓峰值及其位置的变化. 展开更多

关键词 等温滴定量热法 牛血清白蛋白 表面活性剂 相互作用

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等温滴定量热法在蛋白质-配体相互作用中的应用 被引量：16

2

作者 齐心洁 王玥 +2 位作者 王彦晟 方国康 黄迎春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期40-49,共10页

等温滴定量热法(ITC)近年来迅速发展并广泛应用于分子生物学及其相关领域的研究分子相互作用的生物物理技术,它是在恒定温度下唯一能够直接测量复合物形成过程中的热量变化的方法。它可以简单地通过测量两个溶液相互作用时吸收或放出的... 等温滴定量热法(ITC)近年来迅速发展并广泛应用于分子生物学及其相关领域的研究分子相互作用的生物物理技术,它是在恒定温度下唯一能够直接测量复合物形成过程中的热量变化的方法。它可以简单地通过测量两个溶液相互作用时吸收或放出的热量来提供分子相互作用的重要信息,如结合常数、结合位点数、自由能、焓和熵。综述了ITC的工作原理、技术特点,以及在蛋白质-配体相互作用方面的最新应用和未来的发展方向,表明ITC数据结果的有效性及其在该领域的应用价值。 展开更多

关键词 等温滴定量热法 热力学 相互作用 蛋白质 小分子

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光谱及等温滴定量热法探究盐酸阿霉素与DNA作用机理 被引量：3

3

作者 王欢 苟杏杏 +3 位作者 蒲小华 王姣 胡小兵 李宗孝 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期540-545,共6页

利用荧光光谱法,紫外可见光谱法,红外光谱法,圆二色谱法和等温滴定量热法等手段,对抗癌药物盐酸阿霉素(DOX)与DNA的作用过程进行研究,测得了它们的结合常数Ka、结合位点数n、反应焓变ΔH、熵变ΔS及ΔG,且在结合过程中,B型DNA的螺旋结... 利用荧光光谱法,紫外可见光谱法,红外光谱法,圆二色谱法和等温滴定量热法等手段,对抗癌药物盐酸阿霉素(DOX)与DNA的作用过程进行研究,测得了它们的结合常数Ka、结合位点数n、反应焓变ΔH、熵变ΔS及ΔG,且在结合过程中,B型DNA的螺旋结构在一定程度发生改变。荧光光谱的数据显示出显著的猝灭效应,表明DNA是一个DOX荧光的很好的猝灭剂。红外光谱表明阳离子DOX+通过静电吸引与DNA的磷酸基团相互作用,且DOX的碳氢链通过疏水缔合与DNA作用。ITC测定了DOX和DNA相互作用的焓变和熵变,表明DOX的烃链和DNA的碱基之间的疏水性相互作用提供了结合的驱动力。 展开更多

关键词 荧光光谱法 等温滴定量热法 猝灭剂 结合常数 结合位点数

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等温滴定量热仪的校准方法与程序实现 被引量：3

4

作者 葛秀杰 高雅 +1 位作者 李德兴 葛广路 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第2期1-9,共9页

等温滴定量热法(ITC)是一种原位表征溶液反应热力学参数的重要方法。根据ITC滴定过程的不同热效应以及主要误差来源建立了完整的ITC测量模型。以NanoITC(SV)型等温滴定量热仪为例,基于该测量模型分别采用BaCl2/18-crown-6、CaCl2/EDTA... 等温滴定量热法(ITC)是一种原位表征溶液反应热力学参数的重要方法。根据ITC滴定过程的不同热效应以及主要误差来源建立了完整的ITC测量模型。以NanoITC(SV)型等温滴定量热仪为例,基于该测量模型分别采用BaCl2/18-crown-6、CaCl2/EDTA、正丙醇稀释3组滴定实验对量热仪的量热因子(f)与反应池有效体积(Vcell)进行校准,综合考虑了滴定溶液浓度不确定度、量热仪热信号的随机误差项以及反应参数理论值的不确定度等不确定度分量,基于蒙特卡洛法可靠地计算了校准值的不确定度。3组不同的校准实验互相验证,其结果显示,被校准等温滴定量热仪的量热因子存在8.1%的偏差,反应池有效体积存在3.4%的偏差。支持材料提供了完整的实验数据以及Python程序源代码。 展开更多

关键词 等温滴定量热法 仪器校准 测量模型 蒙特卡洛法 Python程序

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汉麻籽多肽靶向抑制胰脂肪酶/胆固醇酯酶的分子作用机制 被引量：3

5

作者 尹浩 朱将雄 +3 位作者 赵海云 钟宇 王丹凤 邓云 《食品科学》 EI CAS 北大核心 2025年第2期38-49,共12页

采用酶活动力学、联合抑制、荧光光谱、等温滴定量热法和分子对接等技术系统探究两种多肽(APAM和RLPA)对胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)和胆固醇酯酶(cholesterol esterase,CE)活性调控效果及分子结合机制。结果表明,RLPA对PL和CE具有... 采用酶活动力学、联合抑制、荧光光谱、等温滴定量热法和分子对接等技术系统探究两种多肽(APAM和RLPA)对胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)和胆固醇酯酶(cholesterol esterase,CE)活性调控效果及分子结合机制。结果表明,RLPA对PL和CE具有更强的抑制活性,其半抑制浓度分别为(79.62±3.20)μmol/L和(301.27±14.40)μmol/L。抑制动力学分析表明APAM对两种酶的抑制机制为竞争性抑制,而RLPA则为混合性抑制。联合抑制表明APAM和RLPA在低浓度下均可与奥利司他协同抑制PL和CE,但在高浓度下协同作用减弱,甚至出现拮抗现象。荧光光谱结果表明两种多肽可以通过与PL和CE发生结合产生静态猝灭,改变了酶中脂肪族氨基酸的疏水环境。等温滴定量热法证明多肽与酶的结合过程是自发且放热,主要通过氢键和静电相互作用实现。分子对接模拟进一步分析表明氢键、盐桥和阳离子-π相互作用在多肽与酶的结合中起着至关重要的作用。这项研究丰富了对多肽与PL和CE的相互作用机制的认识,为开发基于汉麻籽蛋白的功能性食品提供了科学依据。 展开更多

关键词 脂质消化酶 抑制机制 荧光光谱 等温滴定量热法 分子模拟

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小分子与人血清白蛋白相互作用研究方法的进展 被引量：4

6

作者 杨雾 易忠胜 +1 位作者 杨露露 伍智蔚 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1352-1358,共7页

对1958年至2015年期间应用光谱法、亲和色谱法、毛细管电泳法、等温滴定量热法、分子对接和动力学模拟法等方法研究小分子与人血清白蛋白相互作用的进展作了评述,并对其发展方向作了展望。

关键词 人血清白蛋白 光谱法 等温滴定量热法 毛细管电泳法 亲和色谱法 分子对接和动力学模拟法

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富里酸与赤泥碱性矿物相互作用机制研究

7

作者 向慧勤 童杨 陈伟 《环境化学》 北大核心 2025年第7期2673-2685,共13页

赤泥的生态修复受到广泛关注,有机质在赤泥的成土过程中起着至关重要的作用.然而,赤泥中有机物和碱性矿物之间的相互作用尚不清楚.本工作采用分子光谱技术和等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)相结合的方法,研究了... 赤泥的生态修复受到广泛关注,有机质在赤泥的成土过程中起着至关重要的作用.然而,赤泥中有机物和碱性矿物之间的相互作用尚不清楚.本工作采用分子光谱技术和等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)相结合的方法,研究了富里酸(fulvic acid,FA)与赤泥中4种具有代表性的碱性矿物(方解石、石榴石、方钠石和钙霞石)之间的相互作用.结果表明,FA在方解石上的吸附过程主要为单层表面吸附,在石榴石表面的吸附为多层吸附,且均为表面反应控制.而方钠石和钙霞石的吸附过程则涉及到矿物的溶解.方钠石和钙霞石都与荧光FA具有很强的亲和力,相反,石榴石与荧光FA的结合较弱,而方解石仅与少量FA结合.ITC结果表明,不同碱性矿物在与FA的相互作用中具有不同的热力学性质.钙霞石与FA表现出以熵变为主的相对均匀的相互作用机制,而其他碱性矿物则表现出非均匀熵或焓驱动机制.这些发现有助于了解有机质-碱性矿物的相互作用及其对赤泥生态修复的影响. 展开更多

关键词 赤泥 富里酸 碱性矿物 相互作用 分子光谱学 等温滴定量热法

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光谱法研究γ-环糊精及其两种衍生物与罗库溴铵和维库溴铵的相互作用 被引量：2

8

作者 陈梦心 张文婷 +4 位作者 闻俊 赵鑫 范国荣 漆又毛 揭清 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期507-512,共6页

目的研究γ-环糊精(γ-CD)及其两种衍生物与罗库溴铵、维库溴铵的相互作用。方法采用等温滴定量热法研究γ-CD及其衍生物奥美克松钠Aom0498-16(HS-7)、舒更葡糖(Sugammadex)与罗库溴铵、维库溴铵的相互作用,测定其热力学常数及结合常数... 目的研究γ-环糊精(γ-CD)及其两种衍生物与罗库溴铵、维库溴铵的相互作用。方法采用等温滴定量热法研究γ-CD及其衍生物奥美克松钠Aom0498-16(HS-7)、舒更葡糖(Sugammadex)与罗库溴铵、维库溴铵的相互作用,测定其热力学常数及结合常数。采用紫外-可见分光光度法测定γ-CD与罗库溴铵、维库溴铵的包合比与结合常数,并采用核磁共振谱二维相关谱和氢谱表征γ-CD及其两种衍生物与罗库溴铵、维库溴铵的结合力大小。结果等温滴定量热法结果显示Sugammadex与HS-7均以1∶1结合罗库溴铵、维库溴铵,γ-CD以2∶1结合罗库溴铵;HS-7与罗库溴铵的结合常数k=(3.44±2.18)×107L/mol、与维库溴铵的结合常数k=(5.80±1.83)×106L/mol,Sugammadex与罗库溴铵的结合常数k=(1.04±0.34)×107L/mol、与维库溴铵的结合常数k=(2.53±1.07)×106L/mol,γ-CD与罗库溴铵的结合常数k=(2.84±3.41)×104L/mol。紫外-可见分光光度法结果表明γ-CD以2∶1结合罗库溴铵、维库溴铵,γ-CD与罗库溴铵的结合常数k=6.93×104L/mol,与维库溴铵的结合常数k=5.17×104L/mol。核磁共振法结果显示HS-7对罗库溴铵、维库溴铵的包合作用强于Sugammadex和γ-CD。结论 HS-7包合肌松药的能力大于Sugammadex及γ-CD。等温滴定量热法、紫外-可见分光光度法和核磁共振谱二维相关谱和氢谱法3种方法从不同的侧面表征了包合物的性质。 展开更多

关键词 γ-环糊精类 罗库溴铵 维库溴铵 磁共振波谱学 等温滴定量热法 紫外光谱法

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VAV2蛋白DH结构域与CDC42蛋白相互作用的亲和力和热力学参数研究

9

作者 何诗雨 串俊兰 杨正林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1492-1496,共5页

目的:利用等温滴定量热技术研究VAV2蛋白的DH结构域(VAV2-DH)与CDC42的相互作用。方法 :首先分别将VAV2-DH和CDC42蛋白的编码基因克隆至pGEX-6p-1和pET28a载体上,构建VAV2-DH和CDC42蛋白的重组表达载体。再将重组表达载体转入大肠杆菌... 目的:利用等温滴定量热技术研究VAV2蛋白的DH结构域(VAV2-DH)与CDC42的相互作用。方法 :首先分别将VAV2-DH和CDC42蛋白的编码基因克隆至pGEX-6p-1和pET28a载体上,构建VAV2-DH和CDC42蛋白的重组表达载体。再将重组表达载体转入大肠杆菌中诱导表达蛋白,并亲和层析、凝胶过滤层析纯化得到VAV2-DH和CDC42蛋白,最后利用鸟嘌呤核苷酸交换试验来验证VAV2-DH的鸟苷酸交换活性,并采用等温滴定量热技术检测这2种蛋白质相互作用的亲和力和热力学参数。结果:VAV2-DH和CDC42蛋白的平衡解离常数K_(D)=(11.44±2.12)μmol/L,其中摩尔结合焓DH=(-224.33±95.48) kJ/mol、-TDS=(195.97±95.95) kJ/mol、吉布斯自由能DG=(-28.30±0.49) kJ/mol。结论:VAV2-DH和CDC42蛋白属于中等强度的相互作用,是一个焓驱动的结合过程。 展开更多

关键词 VAV2 CDC42 鸟嘌呤核苷酸交换因子 蛋白相互作用 等温滴定量热法

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新型Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白UPF0118的Na^(+)结合鉴定

10

作者 李红洋 华贝杰 姜巨全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期62-70,共9页

UPF0118蛋白是一种新型Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运蛋白,属于AI-2E超家族,目前已被划分至Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白亚家族,但无直接证据表明该蛋白可与Na+产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na^(+)结合功能,利用PCR技术扩增upf0... UPF0118蛋白是一种新型Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运蛋白,属于AI-2E超家族,目前已被划分至Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白亚家族,但无直接证据表明该蛋白可与Na+产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na^(+)结合功能,利用PCR技术扩增upf0118基因编码序列,通过Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点构建至原核表达载体p ETDuet-1,转化至E. coli BL21*(DE3),对诱导后大量表达的蛋白进行Ni^(2+)亲和层析和凝胶过滤层析,利用等温滴定量热技术对纯化蛋白进行滴定。结果表明,在pH 5.5条件下,Na^(+)滴入导致蛋白溶液产生明显放热现象。在pH 5.5条件下该蛋白具有Na^(+)结合功能,证明该蛋白Na+结合功能为其功能单元与分子机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 UPF0118 Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白 等温滴定量热法 蛋白纯化

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阿托伐他汀与人血清白蛋白相互作用机制的研究 被引量：6

11

作者 董哲 李阳 +1 位作者 谢立娟 刘宗瑞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第10期1543-1546,1636,共5页

目的模拟人体生理条件(p H 7.4)下阿托伐他汀(atorvastatin)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用的过程。方法采用圆二色谱、荧光光谱、等温滴定量热法和分子对接模拟法,测定结合方式、结合位点数、热力学参数和分子结合距离等相关信息。结果... 目的模拟人体生理条件(p H 7.4)下阿托伐他汀(atorvastatin)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用的过程。方法采用圆二色谱、荧光光谱、等温滴定量热法和分子对接模拟法,测定结合方式、结合位点数、热力学参数和分子结合距离等相关信息。结果在25℃下,随着atorvastatin逐渐加入到HSA中,α-螺旋含量从58.34%逐渐减少到28.13%(Catorvastatin/CHSA=10.0);atorvastatin以静态淬灭的方式淬灭了HSA的内源性荧光;通过疏水-疏水和氢键作用结合了血清白蛋白且结合比为1∶1;分子对接结果表明,与HSA最有可能的结合位点为214位色氨酸残基附近。结论为阐述他汀类药物的药代动力学行为机制提供科学依据。 展开更多

关键词 阿托伐他汀 人血清白蛋白 等温滴定量热法 分子对接

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具有溶菌酶的部分生物活性的α-乳清蛋白(^(32)His→Leu,^(33)Thr→Glu,^(103)Tyr→Ala)突变体 被引量：1

12

作者 薛宇鸣 程霓 +2 位作者 吴春雷 李烨 张敏跃 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期542-550,共9页

在溶菌酶催化机理以及α 乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上 ,构建了含 3个突变点的α 乳清蛋白突变体 (H32L ,T33E ,Y10 3A) ,并将其克隆到具有T7启动子的表达质粒pET2 8a(+ )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3) /pLys中获得高效表达 .存在于包... 在溶菌酶催化机理以及α 乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上 ,构建了含 3个突变点的α 乳清蛋白突变体 (H32L ,T33E ,Y10 3A) ,并将其克隆到具有T7启动子的表达质粒pET2 8a(+ )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3) /pLys中获得高效表达 .存在于包涵体中的目标蛋白经变复性并通过DEAESepharoseStreamline和SephacrylS2 0 0层析柱获得纯化蛋白 .合成底物 p Nitrophenyl β D N’ ,N’’ ,N’’’ Triacetyl chitotriose [pNP (NAcGlc) 3]与突变体蛋白的反应时间曲线证明突变体蛋白获得了部分溶菌酶生物活性 ,为重组鸡蛋清溶菌酶 (HEWL)的 5 .2 6 % .利用等温滴定量热法测定突变体蛋白与五糖底物chitopentaose的平均热结合能为 71.34kJ/mol,重组HEWL为 10 5 .4 7kJ/mol.实验表明 ,通过有限的几个突变就可以使α 乳清蛋白获得溶菌酶的活性 。 展开更多

关键词 α乳清蛋白 溶菌酶 合成底物 p-Nitrophenyl-β-D-N′ N″ N′″-Triacetyl-chitotriose 等温滴定量热法 生物活性 突变体

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锌离子的血清蛋白质输运机制研究 被引量：1

13

作者 郭明 李慧东 +2 位作者 邵爽 鲁小旺 范文翔 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期894-897,共4页

采用等温滴定量热法研究血清白蛋白输运锌离子的相互作用机制,测定反应体系的结合参数与热力学参数,并讨论结合反应的分子作用机理。结果表明,血清白蛋白输运锌离子过程中,锌离子与血清白蛋白的结合反应符合langmuir模型,拥有强、弱两... 采用等温滴定量热法研究血清白蛋白输运锌离子的相互作用机制,测定反应体系的结合参数与热力学参数,并讨论结合反应的分子作用机理。结果表明,血清白蛋白输运锌离子过程中,锌离子与血清白蛋白的结合反应符合langmuir模型,拥有强、弱两类结合位点。强结合位点的结合常数K1=1.86×105L.mol-1,结合位点数N1=1.17;弱结合位点的结合常数K2=7.16×103L.mol-1,结合位点数N2=2.85。分析血清白蛋白输运锌离子的热力学参数表明,两类结合过程均为自发过程,两类结合过程的主要作用力为静电作用力,且均表现为以焓驱动为主的焓熵协同驱动过程。 展开更多

关键词 等温滴定量热法 牛血清白蛋白 锌离子 相互作用

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水稻RNA结合蛋白C3H12与RNA结合位点的鉴定 被引量：2

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作者 智东明 方涵 +2 位作者 陶虎 邓汉卿 王媛媛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1275-1283,共9页

CCCH型锌指蛋白质C3H12是进化上保守的RNA结合蛋白质,它含有5个串联的CCCH锌指结构域ZnF1-5,形成2个紧密的锌指簇ZnF1-3和ZnF4-5。早期的研究发现,C3H12可能通过与mRNA结合的方式在转录后水平调控基因的表达。然而,与C3H12结合的mRNA类... CCCH型锌指蛋白质C3H12是进化上保守的RNA结合蛋白质,它含有5个串联的CCCH锌指结构域ZnF1-5,形成2个紧密的锌指簇ZnF1-3和ZnF4-5。早期的研究发现,C3H12可能通过与mRNA结合的方式在转录后水平调控基因的表达。然而,与C3H12结合的mRNA类型和他们的结合模式,并未通过实验得到证明。本文表达纯化了一系列C3H12截短及全长蛋白质,并合成了一些潜在RNA底物ARE9、ARE19及对照Random21。通过等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)确定了C3H12与富含腺嘌呤尿嘧啶单元(AU-rich element,ARE)mRNA底物的结合,并揭示了互作核心区域和热力学性质。通过荧光光谱分析和微型热泳动(microscale thermophoresis,MST)技术对ITC的结果进一步佐证。结果表明:(1)C3H12与ARE底物的相互作用是焓驱动的能量有利的(ΔG<0)特异性结合,结合比为1:1。(2)C3H12与ARE19的亲和力较ARE9更高(约2倍)。(3)C3H12中ZnF1-3在与ARE类底物的结合活性中发挥主导作用。(4)C3H12结构中的141个氨基酸残基的接头不直接参与和ARE底物的相互作用。本研究揭示的CCCH型锌指蛋白质C3H12与ARE底物结合模式,将为进一步在分子结构水平阐明C3H12与ARE底物结合的机制奠定基础。 展开更多

关键词 CCCH型锌指蛋白质 RNA结合蛋白质 等温滴定量热法 荧光光谱分析 微型热泳动

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鱼皮明胶和多酚组装行为与相互作用 被引量：4

15

作者 王舒雅 赵靖昀 +4 位作者 代亚磊 高瑾 梁宏闪 李述刚 周彬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第14期1-8,共8页

研究不同结构多酚与鱼皮明胶(fish skin gelatin,GLA)间的相互作用及组装行为,期望对水产品加工、副产品的利用和新型食品配料的开发提供科学依据,同时为多酚-蛋白质复合物在食品领域的应用提供理论指导。选取单宁酸(tannic acid,TA)、... 研究不同结构多酚与鱼皮明胶(fish skin gelatin,GLA)间的相互作用及组装行为,期望对水产品加工、副产品的利用和新型食品配料的开发提供科学依据,同时为多酚-蛋白质复合物在食品领域的应用提供理论指导。选取单宁酸(tannic acid,TA)、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子酸3种含有不同数量邻三元酚结构的多酚为研究对象,以体系浊度和复合物粒径为考察指标,探讨多酚添加量、pH值对GLA和多酚体系的组装行为的影响。采用荧光光谱和等温滴定量热法探究多酚与GLA之间的相互作用机制。结果显示:TA、EGCG在一定浓度下均可与GLA发生组装形成多酚-GLA纳米复合物,且随着pH值的变化,体系透光率可实现可逆转变。荧光光谱结果分析发现3种多酚均可以和GLA形成多酚-GLA复合物导致GLA内源荧光的猝灭,猝灭机制为静态猝灭。等温滴定量热法表明TA和GLA结合的主要作用力为氢键和范德华力,而EGCG和GLA间的相互作用主要为静电相互作用。 展开更多

关键词 鱼皮明胶 多酚 相互作用 荧光光谱 等温滴定量热法

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快速展示糖苷水解酶活性架构单点突变导致结合力变化的电泳技术

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作者 吴秀芸 刘淑萍 +2 位作者 赵越 陈冠军 王禄山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第5期560-566,共7页

酶分子在长期进化过程中形成一系列氨基酸残基组成的活性架构,参与底物的识别、结合与催化过程,而活性架构中相应氨基酸残基是如何影响酶分子结合底物的能力,进而影响酶分子的催化效率,一直是酶分子理性改造研究的热点.利用亲和电泳技术... 酶分子在长期进化过程中形成一系列氨基酸残基组成的活性架构,参与底物的识别、结合与催化过程,而活性架构中相应氨基酸残基是如何影响酶分子结合底物的能力,进而影响酶分子的催化效率,一直是酶分子理性改造研究的热点.利用亲和电泳技术,可以快速展示内切纤维素酶Tr Cel12A和木聚糖酶Tl Xyn A活性架构中不同突变体的催化活性及其迁移率的变化,进而通过在不同底物浓度凝胶中蛋白质相对迁移率变化程度的定量回归分析,发现由氨基酸单点突变导致蛋白质迁移率的相对变化,可以定量表征酶分子突变前后结合底物能力的变化.亲和电泳测定的有效阻滞常数Kb值与等温滴定量热法和荧光光谱法测定的相关参数比较具有明显相关性.由于亲和电泳技术在测定酶分子与底物的结合能力时具有简便、快速、灵敏的特点,因而可作为常规生化实验室常规普筛技术来检测突变文库中系列突变体导致结合力的变化. 展开更多

关键词 亲和电泳 结合力 定量测定 等温滴定量热法 荧光光谱法

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