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细胞因子诱导人脐血间充质干细胞分化过程中细胞巢蛋白、神经丝亚单位和端粒酶逆转录酶mRNA的表达 被引量:11
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作者 邢莹 秦洁 +6 位作者 曹孟德 韩雪飞 鄢文海 陈宗德 刘计荣 许燕 龚光明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第2期250-253,共4页
目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MN... 目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MNCs),PBS洗涤2次后重悬于含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12 中,接种于T 75培养瓶内(细胞密度为1×106ml-1),一组加入细胞因子EGF和bFGF,终浓度各为10μg/L,另一 组不加细胞因子,剩余细胞用液氮冻存。培养24h倾去全部液体以除去未贴壁细胞,以后每3d全量换液1次,倒 置显微镜下观察细胞形态。分别收集培养1d、4d、7d、14d贴壁细胞和冻存细胞,采用RT -PCR方法检测nestin、 NF M、hTERTmRNA的表达。结果:未培养的脐血MNCs(内含MSCs)nestin、NF M、hTERTmRNA均表达阳性。培 养后nestin、hTERTmRNA表达下降,至第7d已不能检出;而NF MmRNA的表达随培养时间延长而增强。与对照 组相比,细胞因子组NF MmRNA表达较高,nestin、hTERTmRNA表达的下降趋势延迟。结论:细胞因子EGF和 bFGF在联合诱导脐血MSCs分化为神经细胞的过程中,能下调hTERTmRNA的表达。 展开更多
关键词 EGF bFGF 脐血 间充质干细胞 端粒酶逆转录酶 巢蛋白 神经丝亚单位M
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实时RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶mRNA用于乳腺癌鉴别诊断及与c-Myc基因的相关性 被引量:3
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作者 唐峰 陈忠清 +5 位作者 包芸 朱腾芳 王虹 朱虹光 许祖德 胡锡琪 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期727-731,共5页
目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定... 目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定量RT-PCR技术(Real-ti me RT-PCR)定量检测hTERT和c-Myc基因的转录水平。结果以NhTERT=10为临界值,所有正常组织和良性病变NhTERT值均小于临界值,而hTERT基因转录升高的导管原位癌及浸润性导管癌其NhTERT值均大于此临界值。显示hTERT和c-Myc基因转录水平呈正相关(γ=0.7395,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR技术检测hTERT基因表达具有高敏感性和特异性,能为常规病理学诊断提供客观的参考指标,从而提高乳腺不典型导管增生与导管原位癌鉴别诊断的准确性。原癌基因c-Myc转录水平上调可能与乳腺癌hTERT基因转录激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒酶 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 端粒酶逆转录酶 C-MYC原癌基因
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端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白质在正常肺组织和正常人外周血淋巴细胞表达的研究 被引量:1
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作者 王孝养 张珍祥 +4 位作者 徐永健 熊维宁 方慧娟 丘小芬 李西融 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期112-115,共4页
用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10~ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数... 用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10~ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数肺泡上皮细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达。正常人外周血淋巴细胞中 TERT原位杂交阳性表达细胞数为 ( 17.2 6± 8.5 7) % ,免疫组织化学阳性细胞表达数为 ( 2 8.10± 16.78) %。提示 :1正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数肺泡上皮细胞和外周血淋巴细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达 ;2正常肺组织中上述细胞TERT m RNA和蛋白质的表达在生理状况下对于保证支气管上皮和肺泡上皮细胞再生 ,维持上皮组织的完整性可能起着重要的作用 ,同时有利于肺泡巨噬细胞发挥其肺内“卫士”功能 ;3淋巴细胞 展开更多
关键词 端粒酶 肺癌 核酸原位杂交 免疫染色 逆转录酶 mrna
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AML患者端粒酶逆转录酶mRNA的表达与端粒酶活性的检测 被引量:4
4
作者 李一荣 吴健民 胡丽华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期868-872,共5页
目的:建立一种实时荧光RT-PCR方法,定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平,观察其与AML发生及复发的关系,探讨hTERT mRNA的表达水平与端粒酶活性的相关关系。方法:采用实时荧光RT-PCR... 目的:建立一种实时荧光RT-PCR方法,定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平,观察其与AML发生及复发的关系,探讨hTERT mRNA的表达水平与端粒酶活性的相关关系。方法:采用实时荧光RT-PCR与Lightcycler荧光PCR仪定量检测hTERT mRNA的表达水平,采用PCR-ELISA检测端粒酶活性。结果:①AML首治患者、复发患者、完全缓解期患者以及健康体检者NhTERT分别为299.2±292.8、550.1±441.3、14.0±9.2和12.3±6.7,与健康体检者和完全缓解期患者比较,AML首治患者、复发患者hTERT mRNA表达水平显著升高,而且AML复发患者hTERT mRNA的表达水平显著高于首治患者;②AML首治患者、AML复发患者、AML完全缓解期患者以及健康体检者端粒酶的活性分别为32.8%±24.3%4、8.6%±31.4%、7.4%±5.1%和7.6%±3.6%,AML首治患者、复发患者端粒酶活性显著升高,而且AML复发患者端粒酶活性显著高于首治患者;③hTERT mRNA表达水平与端粒酶的活性呈现良好的相关性,相关系数为0.78。结论:hTERT mRNA表达水平与端粒酶活性的上调是AML发生与复发的一个重要因素,且hTERT mRNA表达水平与端粒酶活性呈良好的正相关。 展开更多
关键词 急性髓细胞性白血病 实时 端粒酶 逆转录酶 聚合酶链反应
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端粒酶活性及端粒酶逆转录酶mRNA的表达对眼眶肿瘤的诊治 被引量:1
5
作者 岳岩 魏锐利 +1 位作者 蔡季平 李由 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第5期412-415,共4页
目的研究眼眶肿瘤组织中端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达在眼眶肿瘤发生和发展中的作用。方法对83例眼眶恶性肿瘤组织及癌旁组织、165例眼眶良性肿瘤组织和6例正常眼眶组织利用端粒重复序列扩增技术(TRAP)检测端粒酶的活... 目的研究眼眶肿瘤组织中端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达在眼眶肿瘤发生和发展中的作用。方法对83例眼眶恶性肿瘤组织及癌旁组织、165例眼眶良性肿瘤组织和6例正常眼眶组织利用端粒重复序列扩增技术(TRAP)检测端粒酶的活性,利用RT-PCR法对端粒酶逆转录酶mRNA的表达情况进行研究。分析端粒酶活性的表达与hTERTmRNA表达之间的相关性。结果254例(337份)标本中,眼眶恶性肿瘤组织、癌旁组织、良性肿瘤组织的端粒酶活性及hTERTmRNA阳性率分别为95.2%(79/83)、97.6%(81/83);3.6%(3/83)、4.8%(4/83);3%(5/165)、3.63%(6/165);6份正常眼眶组织未检测到端粒酶活性及hTERTmRNA的表达。眼眶恶性肿瘤组织与其他眼眶组织相比,端粒酶活性及hTERTmRNA阳性率差异均有统计学意义(P<0.01),端粒酶活性表达与hTERTmRNA表达趋势呈一致性。结论眼眶病变组织端粒酶活性及hTERTmRNA表达水平的检测对眼眶肿瘤早期诊断具有应用价值。 展开更多
关键词 眼眶肿瘤 端粒酶 端粒酶逆转录酶
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高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的变化 被引量:6
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作者 孟小莉 林茂芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期161-164,共4页
为了探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine ,HHT)抑制HL 6 0细胞端粒酶活性的机制及意义 ,采用半定量RT PCR和PCR ELISA法检测HHT作用后的HL 6 0细胞人端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达和端粒酶活性的变化 ,用TUNEL法检测HL 6 0细胞的凋... 为了探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine ,HHT)抑制HL 6 0细胞端粒酶活性的机制及意义 ,采用半定量RT PCR和PCR ELISA法检测HHT作用后的HL 6 0细胞人端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达和端粒酶活性的变化 ,用TUNEL法检测HL 6 0细胞的凋亡率。结果发现 :与空白对照相比 ,0 .0 0 5 - 0 .0 3μg/mlHHT作用HL 6 0细胞 12小时 ,hTERTmRNA表达无明显变化 ,随HHT浓度增加至 0 .0 4 - 0 .0 5 μg/ml,hTERTmRNA表达明显下降至检测不出。与 0小时相比 ,0 .0 2 μg/mlHHT作用 6 - 18小时后 ,HL 6 0细胞hTERTmRNA表达无明显变化 ,2 4小时后hTERTmRNA表达明显减少 ,至 30小时未能检出hTERTmRNA表达。HL 6 0细胞端粒酶活性的抑制与hTERTmRNA的表达下降趋势基本一致。随HL 6 0细胞hTERTmRNA的表达下降和端粒酶活性的抑制 ,其凋亡率明显增加。结论 :HHT能抑制HL 6 0细胞hTERTmRNA的转录 。 展开更多
关键词 高三尖杉酯碱 HL-60细胞 端粒酶逆转录酶 细胞凋亡 抗癌药 急性非淋巴细胞白血病
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口腔颌面部肉瘤组织中端粒酶逆转录酶mRNA和C-myc蛋白的表达
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作者 王海斌 王瑞永 +1 位作者 李峰 李新明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第2期327-328,共2页
目的:探讨口腔颌面部肉瘤(OMFS)组织中hTERT mRNA和C-myc蛋白的表达。方法:应用原位杂交和免疫组织化学SP法检测37例OMFS、14例良性间叶组织肿瘤及3例口腔正常肌肉或脂肪组织中hTERT mRNA和C-myc蛋白的表达。结果:OMFS组织中hTERTmRNA和... 目的:探讨口腔颌面部肉瘤(OMFS)组织中hTERT mRNA和C-myc蛋白的表达。方法:应用原位杂交和免疫组织化学SP法检测37例OMFS、14例良性间叶组织肿瘤及3例口腔正常肌肉或脂肪组织中hTERT mRNA和C-myc蛋白的表达。结果:OMFS组织中hTERTmRNA和C-myc的阳性表达率均高于良性肿瘤和正常组织,低度恶性OMFS组织中2者的阳性表达率低于高度恶性组织(P<0.05)。OMFS中hTERT mRNA和C-myc的表达呈正相关关系(r=0.417,P<0.05)。结论:C-myc的过表达使hTERT基因得以激活,可能与OMFS的恶性演进有关。 展开更多
关键词 口腔颌面部肿瘤 肉瘤 端粒酶逆转录酶 C-MYC
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低剂量辐射联合人端粒酶逆转录酶C27过表达治疗非小细胞肺癌的实验研究 被引量:1
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作者 周洪帅 林桂淼 +6 位作者 王晓梅 罗琳 杨柳 卞东圆 李沙沙 蒋圣哲 陈强 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1218-1226,共9页
目的:探讨低剂量辐射(LDR)与人端粒酶逆转录酶C末端多肽27(hTERTC27)过表达联合治疗对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,同时观察LDR与常规放疗(CONV-RT)结合的体内抑瘤效应。方法:将pEgr-hTERTC27质粒转染人非小细胞肺癌A549及小鼠LLC肺癌... 目的:探讨低剂量辐射(LDR)与人端粒酶逆转录酶C末端多肽27(hTERTC27)过表达联合治疗对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,同时观察LDR与常规放疗(CONV-RT)结合的体内抑瘤效应。方法:将pEgr-hTERTC27质粒转染人非小细胞肺癌A549及小鼠LLC肺癌(LLC)细胞,用G418筛选建立稳定表达C27的A549-C27细胞和LLC-C27细胞。细胞实验分为6组,分别是CONV-RT(A549-Con)、低剂量照射(A549-Low)、C27(A549-C27)、常规剂量联合C27(A549-C27-Con)、低剂量照射联合C27(A549-C27-Low)和对照(A549-Mock)组,其中Low组的辐照剂量仅为Con组的36%。MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。通过皮下种植建立LLC肺癌移植瘤小鼠模型,动物实验分组同细胞实验;记录各组小鼠肿瘤生长情况,并检测各组肿瘤体积和质量,H-E染色观察各组移植瘤组织邻近肌肉浸润情况。结果:与A549-Mock比较,A549-Con和A549-Low组细胞增殖活性均显著降低(均P <0.01);而且A549-C27-Con和A549-C27-Low组细胞增殖活性显著低于A549-C27组(均P <0.01)。与A549-Mock组比较,A549-Con组和A549-Low组细胞凋亡率均显著升高(均P <0.01);A549-C27、A549-C27-Con和A549-C27-Low组细胞凋亡率无显著差异(P> 0.05)。与未经照射治疗的荷瘤小鼠相比较,CONV-RT及LDR+CONV-RT均可使荷瘤小鼠肿瘤质量显著降低(均P <0.01)。此外,LDR+CONV-RT+C27组肿瘤质量显著减小,局部浸润减少(均P <0.01)。结论:LDR与CONV-RT相结合能够在降低辐射总剂量的同时达到与CONV-RT单独使用相似的非小细胞肺癌肿瘤抑制效果。而且,LDR与C27多肽有协同抗肿瘤作用,两者同时使用能够使移植瘤局部浸润减少。 展开更多
关键词 低剂量辐射 端粒酶逆转录酶C末端多肽27 基因治疗 非小细胞肺癌
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影像组学结合深度学习预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子状态
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作者 徐欣怡 张旺 +2 位作者 张力强 王琳玲 文明 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第11期1097-1104,共8页
目的 探讨基于MRI的影像组学和深度学习建立融合模型预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子(TERTp)突变状态。资料与方法 回顾性分析2019年1月—2021年6月重庆医科大学附属第一医院癌症基因组图谱和癌症影像... 目的 探讨基于MRI的影像组学和深度学习建立融合模型预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的端粒酶逆转录酶启动子(TERTp)突变状态。资料与方法 回顾性分析2019年1月—2021年6月重庆医科大学附属第一医院癌症基因组图谱和癌症影像档案的175例异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤患者(训练组122例,测试组53例),评估其TERTp突变状态。在T1c和T2f图像上勾画水肿区和肿瘤区,使用SE-Net模型构建深度学习模型,提取不同区域(水肿区、肿瘤区和整体病变)的组学特征,并通过最小绝对收缩和选择算法筛选11个特征建立组学模型。最后,将影像组学模型、深度学习模型和包含伦勃朗视觉感受图像特征的临床模型结合为融合模型,使用校准曲线和决策曲线评估模型。结果 最终建立6个预测模型,临床模型训练组和测试组曲线下面积(AUC)分别为0.815(95%CI 0.738~0.892)和0.645(95%CI 0.494~0.796);深度学习模型训练组和测试组AUC分别为0.860(95%CI 0.798~0.922)和0.735(95%CI 0.614~0.856);融合组学模型比单独水肿或肿瘤区组学模型预测性能更优,训练组和测试组AUC分别为0.906(95%CI 0.856-0.955)和0.867(95%CI 0.769~0.964);融合模型预测性能最佳,训练组和测试组AUC分别为0.964(95%CI 0.929~1.000)和0.905(95%CI 0.818~0.991)。结论 影像组学结合深度学习的临床融合模型在预测异柠檬酸脱氢酶野生型弥漫性星形细胞瘤的TERTp突变状态方面表现良好。 展开更多
关键词 星形细胞瘤 磁共振成像 影像组学 深度学习 端粒酶逆转录酶启动子 异柠檬酸脱氢酶
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消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 李春杰 魏品康 《中华中医药学刊》 CAS 2009年第1期52-54,共3页
目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量... 目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量组、消痰散结方中剂量组、消痰散结方高剂量组、5-Fu组,每组8只,运用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR方法检测hTERT蛋白及mRNA的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中、高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③消痰散结方中、高剂量组hTERTmRNA含量与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方通过下调hTERT蛋白及mRNA的表达而抑制端粒酶的活性,使癌细胞端粒长度逐渐缩短,丧失无限增殖能力,起到抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用。 展开更多
关键词 消痰散结方 胃癌 端粒酶 端粒酶逆转录酶 原位移植
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急性白血病细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及意义 被引量:2
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作者 孟小莉 林茂芳 金洁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期30-33,共4页
为研究原代急性白血病 (AL)骨髓单个核细胞 (MNCs)端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达及其意义 ,采用半定量RT PCR方法检测骨髓MNCshTERTmRNA表达 ,用TRAP PCR ELISA法检测骨髓MNCs端粒酶活性。结果发现 :30例初发AL患者骨髓MNCshTERTmRNA... 为研究原代急性白血病 (AL)骨髓单个核细胞 (MNCs)端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达及其意义 ,采用半定量RT PCR方法检测骨髓MNCshTERTmRNA表达 ,用TRAP PCR ELISA法检测骨髓MNCs端粒酶活性。结果发现 :30例初发AL患者骨髓MNCshTERTmRNA表达量 (0 .71± 0 .34)明显高于 12例AL获CR的患者 (0 .4 3± 0 .2 5 )及 6例正常志愿者 (0 .2 2± 0 .2 1)。 30例初发AL患者骨髓MNCs端粒酶活性 (0 .2 35± 0 .395 )明显高于 12例AL获CR的患者 (0 .0 12± 0 .0 15 )。初发AL患者骨髓MNCshTERTmRNA表达量与端粒酶活性呈正相关 (r=0 .4 2 1,P <0 .0 1)。初发AL患者骨髓液常规涂片中原始细胞百分率与骨髓MNCs的hTERTmRNA表达量和端粒酶活性均呈正相关 (r =0 .4 5 7,P<0 .0 5和r =0 .4 11,P <0 .0 5 )。结论 :初发AL患者骨髓MNCs的hTERTmRNA表达与端粒酶活性相关。推测hTERTmRNA表达可能代表白血病细胞的一种高增殖状态。 展开更多
关键词 急性白血病细胞 端粒酶逆转录酶 端粒酶
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c-myc调节人端粒酶逆转录酶(htert)启动子活性的体外研究 被引量:10
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作者 林勇 谢渭芬 +4 位作者 陈伟忠 张新 张兴荣 张忠兵 沈建伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期34-36,共3页
目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有... 目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有htert 80 0bp启动子的质粒TERTLuc(80 0 )在肿瘤细胞HepG2 中活性显著增强。外源性转录因子c myc可显著上调htert启动子的表达 ,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 :c myc可直接激活htert启动子的表达 ,是调节端粒酶活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 C-MYC 端粒酶逆转录酶 HTERT 启动子 基因调控 脂质体 肝癌细胞
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外源性人端粒酶逆转录酶基因转染对正常人毛乳头细胞的影响 被引量:4
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作者 刘官智 伍津津 +3 位作者 朱堂友 鲁元刚 杨亚东 杨桂红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期189-191,共3页
目的研究外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对体外培养正常人毛乳头细胞的影响。方法采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养... 目的研究外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对体外培养正常人毛乳头细胞的影响。方法采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养。检测转染细胞内hTERT基因的整合和表达情况,初步分析转染细胞的生物学特性。结果转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,传代次数增加,已连续传至35代。检测证实转染细胞内hTERT基因在DNA、mRNA和蛋白质水平均有表达,且此转染细胞具有体外培养正常毛乳头细胞的生物学特性。结论外源性hTERT基因转染可以延长体外培养正常人毛乳头细胞的寿命且可保持其正常的生物学特性。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 端粒酶 端粒酶逆转录酶 转染
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RNAi靶向人端粒酶逆转录酶对人肝癌细胞的生长抑制作用 被引量:6
14
作者 李华 王欣璐 +4 位作者 杨扬 张剑 汪根树 姜楠 陈规划 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1323-1326,共4页
目的利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响。方法构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG... 目的利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响。方法构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG2人肝癌细胞,以TRAP法检测端粒酶活性变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测肿瘤细胞生长抑制情况。结果成功制备出hTERTsiRNA逆转录病毒表达载体;重组病毒感染HepG2细胞24、48、72h后端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P<0.05);感染后24h细胞凋亡率29.05%;MTT实验结果显示肿瘤生长受到抑制,并存在一定量效和时效关系。结论hTERTsiRNA能特异性使hTERT基因表达抑制,端粒酶活性下降,肝癌细胞增殖受到抑制。 展开更多
关键词 RNA干扰 端粒酶逆转录酶 基因治疗 细胞凋亡
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人端粒酶逆转录酶慢病毒载体的构建及人肝细胞的初步筛选 被引量:6
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作者 梁旭竞 陈小佳 +4 位作者 金玲 李丽玲 汤绍辉 陈友鹏 杨冬华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期826-829,共4页
目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞。方法:以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1-hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-h... 目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞。方法:以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1-hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-hTERT和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT。将重组载体pLenti6/V5-DEST-hTERT与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞,获得重组慢病毒颗粒。将其感染人肝细胞L02,通过杀稻瘟筛选获得阳性克隆。结果:测序发现入门载体pDONR221包含的目的基因hTERT 1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-hTERT成功构建。重组慢病毒滴度为1×108TU/L,获得20株稳定抗性的单克隆细胞。结论:成功构建人端粒酶逆转录酶的慢病毒表达载体,获得稳定抗性的单克隆肝细胞,为进一步建立永生化肝细胞系奠定了基础。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 慢病毒载体 肝细胞
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人端粒酶逆转录酶与bcl-2在成釉细胞瘤中的表达 被引量:5
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作者 王洁 钟鸣 +3 位作者 姜晓宏 王兆元 张波 侯琳 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期441-443,共3页
目的 研究成釉细胞瘤 (AB)中人端粒酶逆转录酶 (hTERT)和bcl_2的表达。方法 采用原位杂交或免疫组化方法对AB(分原发、复发和恶变组 )中hTERTmRNA和bcl_2进行检测 ,并与正常口腔黏膜作对照。结果 hTERTmRNA阳性表达率在AB中为 94 4 ... 目的 研究成釉细胞瘤 (AB)中人端粒酶逆转录酶 (hTERT)和bcl_2的表达。方法 采用原位杂交或免疫组化方法对AB(分原发、复发和恶变组 )中hTERTmRNA和bcl_2进行检测 ,并与正常口腔黏膜作对照。结果 hTERTmRNA阳性表达率在AB中为 94 4 % ,正常口腔黏膜中为 14 3% (P <0 0 0 1) ;bcl_2蛋白阳性率在AB中为88 0 % ,正常口腔黏膜中为 4 4 4 % (P <0 0 0 1)。从表达趋势看伴随着AB的复发与恶变 ,hTERTmRNA与bcl_2表达均增强 (P <0 0 5 )。结论 端粒酶和bcl_2可作为评价AB预后的有效指标。端粒酶的活化和bcl_2表达的增强在AB的发生、发展中起着重要作用。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 BCL-2 成釉细胞瘤 表达 免疫组化 原位杂交
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槟榔碱对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响 被引量:6
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作者 高义军 凌天牖 +2 位作者 尹晓敏 李霞 黄琰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期360-364,共5页
目的:观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞(KC)端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨hTERT在口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变过程中的作用机制。方法:体外培养正常口腔黏膜的上皮细胞,将实验细胞分为0.03、0.06、0.09g/L槟榔... 目的:观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞(KC)端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨hTERT在口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变过程中的作用机制。方法:体外培养正常口腔黏膜的上皮细胞,将实验细胞分为0.03、0.06、0.09g/L槟榔碱组、空白对照组。采用Western印迹法和RT-PCR方法观察槟榔碱对KChTERTmRNA及蛋白表达的影响。结果:槟榔碱能呈剂量依赖性增加KChTERTmRNA及蛋白表达,0.03、0.06、0.09g/L槟榔碱组hTERTmRNA及蛋白表达均高于空白对照组(P<0.05)。结论:槟榔碱对KChTERTmRNA与蛋白表达有明显诱导作用,且在一定范围内呈剂量依赖关系,槟榔碱诱导KChTERT过度表达可能在OSF癌变过程中起重要作用。 展开更多
关键词 槟榔碱 角质形成细胞 端粒酶逆转录酶
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DNA去甲基化对肝细胞人端粒酶逆转录酶上调的研究 被引量:8
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作者 李正友 张长松 +7 位作者 郭献灵 程越 卜欣欣 李蓉 贾凤岐 李云龙 吴孟超 卫立辛 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期61-64,共4页
目的:观察肝细胞系L02及肝癌细胞系SMMC-7721中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与DNA甲基化修饰之间的相关性,观察5-杂氮胞苷(5'-aza-dC)去甲基化对肝细胞系hTERT表达和端粒酶活性的影响。方... 目的:观察肝细胞系L02及肝癌细胞系SMMC-7721中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与DNA甲基化修饰之间的相关性,观察5-杂氮胞苷(5'-aza-dC)去甲基化对肝细胞系hTERT表达和端粒酶活性的影响。方法:应用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)分析肝细胞系L02和肝癌细胞SMMC-7721中hTERT的甲基化状态,采用RT-PCR和TRAP-ELISA法检测5'-aza-dC干预对培养细胞hTERT mRNA表达及端粒酶活性的影响。结果:肝细胞系L02中hTERT有甲基化修饰,5'-aza-dC去甲基化处理上调hTERT mRNA表达并呈现端粒酶活性升高;肝癌细胞系SMMC-7721中hTERT则没有甲基化修饰,5'-aza-dC去甲基化处理对其hTERT表达和端粒酶活性无影响。结论:肝细胞中DNA甲基化可能参与抑制肝细胞hTERT的表达,hTERT去甲基化可能是肝癌发生发展的重要机制之一。 展开更多
关键词 肝癌 DNA甲基化 端粒酶逆转录酶 5-杂氯胞苷
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胃癌及癌前病变中核因子-kappa B和端粒酶逆转录酶的表达与意义 被引量:16
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作者 王维 罗和生 余保平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第4期289-292,共4页
目的 :探讨胃癌及癌前病变中核因子 kappaB(NF κB)和端粒酶逆转录酶 (hTERT)的表达及相互关系。方法 :以 4 1例原发性胃癌和 38例相应非癌组织及 10例正常对照为研究对象 ,采用免疫组化和原位杂交法检测NF κB亚单位 p6 5蛋白、hTERT... 目的 :探讨胃癌及癌前病变中核因子 kappaB(NF κB)和端粒酶逆转录酶 (hTERT)的表达及相互关系。方法 :以 4 1例原发性胃癌和 38例相应非癌组织及 10例正常对照为研究对象 ,采用免疫组化和原位杂交法检测NF κB亚单位 p6 5蛋白、hTERT蛋白和hTERTmRNA。 结果 :①正常胃粘膜、肠型化生、异型增生、胃癌中 ,p6 5的阳性率分别为 0、34 18%、5 3 33%、6 0 98% ;hTERTmRNA为 10 0 0 %、39 13%、6 6 6 7%、85 37% ;hTERT蛋白为 0、30 4 3%、6 0 0 0 %、78 0 5 %。三者在异型增生、胃癌中与正常组相比差异分别有显著性 ,而且肠化与胃癌组比较也分别具有显著性 (P <0 0 5 )。②胃癌中 ,p6 5和hTERT蛋白的表达在低、未分化、进展期、有淋巴结转移和浸润至浆膜层的肿瘤中显著增高 (P <0 0 1~ 0 0 5 )。而hTERTmRNA的表达仅与肿瘤分期相关。③肠化、异型增生和胃癌三组中 ,p6 5和hTERTmRNA ,及hTERT蛋白和mRNA间分别具有中到强正相关 (rs=0 6 0 9~ 0 75 2 ,P <0 0 1)。结论 :NF κBp6 5蛋白和hTERT的过表达是胃癌发生中的早期事件 ,其表达水平随着胃癌恶性程度的增加而增加 ;p6 5在转录水平上激活hTERT可能是胃癌发生发展的重要阶段。 展开更多
关键词 核因子-KAPPAB 胃癌 癌前病变 端粒酶逆转录酶 P65蛋白
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p53基因对HL-60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶基因表达的影响 被引量:4
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作者 李乃农 陈元仲 +1 位作者 梁敏 吕联煌 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期527-530,共4页
为了研究野生型 p53基因转染的HL 60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因表达的变化 ,采用脂质体法将野生型 p53基因转染HL 60细胞 ,用TUNEL检测细胞凋亡 ,用端粒重复扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测端粒酶活性... 为了研究野生型 p53基因转染的HL 60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因表达的变化 ,采用脂质体法将野生型 p53基因转染HL 60细胞 ,用TUNEL检测细胞凋亡 ,用端粒重复扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测端粒酶活性变化 ,以及用RT PCR方法检测hTERTmRNA表达的变化。结果显示 :转染野生型p53基因的HL 60细胞在 32 .5℃培养 2 4小时和 72小时后 ,凋亡率分别为 8.3 %和 2 1 .0 % ,hTERTmRNA和端粒酶活性分别下降至对照组的 68.4%和 55 .8%及 2 7.3 %和 8.9%。结论 :p53基因能下调HL 60细胞hTERTmRNA和端粒酶活性 。 展开更多
关键词 白血病 P53基因 HL-60细胞 端粒酶活性 端粒酶 逆转录酶 基因表达
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