人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸联合顺铂对HL-60细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1

1

作者 孙玲 巩宏涛 +3 位作者 任小晶 王峰 乐晓萍 张钦宪 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第3期494-497,共4页

目的:研究人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸(ASODN)联合顺铂(CDDP)对HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用20μmol/L ASODN和正义寡核苷酸(SODN)封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,作用48h后加用2.5μmol/L,5μmol/L CDDP,继续作... 目的:研究人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸(ASODN)联合顺铂(CDDP)对HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用20μmol/L ASODN和正义寡核苷酸(SODN)封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,作用48h后加用2.5μmol/L,5μmol/L CDDP,继续作用于HL-60细胞48h;台盼蓝拒染法检测各组细胞的增殖抑制情况,姬姆萨染色后倒置显微镜观察凋亡细胞形态;分别采用流式细胞仪、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:hTERT ASODN联合CDDP组HL-60细胞的增殖明显抑制,与hTERT SODN联合CDDP组、单用CDDP组比较差异有统计学意义(P<0.05);hTERT ASODN联合5μmol/L CDDP与hTERT ASODN联合2.5μmol/L CDDP比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP与单用CDDP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。姬姆萨染色后,hTERT ASODN联合CDDP组可见大量凋亡小体,而单用CDDP组仅见少量凋亡小体。流式结果与TUNEL结果一致:hTERT ASODN联合CDDP组对HL-60细胞具有明显诱导凋亡作用,同其余各组比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP组与单用CDDP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:hTERT ASODN联合低浓度CDDP能明显抑制HL-60细胞的增殖,并提高细胞凋亡率。 展开更多

关键词 HL-60细胞 人端粒酶逆转录酶基因 反义寡核苷酸 顺铂 凋亡

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人类端粒酶逆转录酶基因反义核苷酸对白血病细胞端粒酶活性的影响 被引量：1

2

作者 何冬梅 张洹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期523-526,共4页

为了探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对原代培养的急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病 (CML)细胞端粒酶活性的影响 ,采用间接免疫荧光标记方法 ,通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT... 为了探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对原代培养的急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病 (CML)细胞端粒酶活性的影响 ,采用间接免疫荧光标记方法 ,通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT蛋白表达含量的变化 ,采用端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定 (PCR ELISA)法检测白血病细胞端粒酶活性的改变。结果显示 :hTERTASODN作用于AML和CML细胞2 4 ,48和 72小时后 ,hTERT蛋白表达水平不断降低 ;同时 ,AML和CML细胞端粒酶活性均逐渐受到抑制。结论 :hTERT基因ASODN可以通过特异性地抑制AML和CML细胞hTERT蛋白的表达 。 展开更多

关键词 人类端粒酶逆转录酶基因 反义核苷酸 白血病细胞 端粒酶活性

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靶向端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

3

作者 姚晨 姚华 +3 位作者 吴求亮 谭龙益 范骏 石展鹰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期2422-2425,共4页

目的观察并探讨靶向端粒酶逆转录酶基因(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法根据细胞形态学、DNAladder琼脂糖凝胶电泳分析、MTT法流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期和细胞... 目的观察并探讨靶向端粒酶逆转录酶基因(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法根据细胞形态学、DNAladder琼脂糖凝胶电泳分析、MTT法流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果反义寡核苷酸组Tca8113细胞增殖受抑、细胞周期阻滞,对照组Tca8113细胞未受抑。流式细胞仪和DNAladder检测结果显示:反义寡核苷酸转染Tca8113细胞早期凋亡率增加,并随寡核苷酸浓度和培养时间的增加而增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。对照组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论靶向端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸能抑制人舌鳞癌细胞增殖和促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 端粒酶逆转录酶 反义寡核苷酸 流式细胞仪 鳞癌细胞 舌 细胞增殖 细胞凋亡

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端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白质在正常肺组织和正常人外周血淋巴细胞表达的研究 被引量：1

4

作者 王孝养 张珍祥 +4 位作者 徐永健 熊维宁 方慧娟 丘小芬 李西融 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期112-115,共4页

用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10～ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数... 用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了 6例豚鼠正常肺组织、10～ 18例癌旁正常肺组织和 14例正常人外周血端粒酶逆转录酶 ( TERT)亚基的 m RNA和相应蛋白质表达。结果显示 ,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞 ,肺泡巨噬细胞和少数肺泡上皮细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达。正常人外周血淋巴细胞中 TERT原位杂交阳性表达细胞数为 ( 17.2 6± 8.5 7) % ,免疫组织化学阳性细胞表达数为 ( 2 8.10± 16.78) %。提示 :1正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数肺泡上皮细胞和外周血淋巴细胞有 TERT m RNA和蛋白质表达 ;2正常肺组织中上述细胞TERT m RNA和蛋白质的表达在生理状况下对于保证支气管上皮和肺泡上皮细胞再生 ,维持上皮组织的完整性可能起着重要的作用 ,同时有利于肺泡巨噬细胞发挥其肺内“卫士”功能 ;3淋巴细胞 展开更多

关键词 端粒酶 肺癌 核酸原位杂交 免疫染色 逆转录酶 mRNA

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哮喘肺组织和外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶表达上调及其意义

5

作者 王孝养 莫碧文 +3 位作者 丘小芬 李西融 张珍祥 熊维宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期45-49,共5页

目的:研究支气管哮喘(哮喘)肺组织和哮喘病人外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和蛋白质的表达,并探讨其在哮喘发病机制中的作用及其临床意义。方法:用核酸原位杂交和免疫组织化学方法检测了6只豚鼠哮喘模型组织、6只正常对照组... 目的:研究支气管哮喘(哮喘)肺组织和哮喘病人外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和蛋白质的表达,并探讨其在哮喘发病机制中的作用及其临床意义。方法:用核酸原位杂交和免疫组织化学方法检测了6只豚鼠哮喘模型组织、6只正常对照组肺组织、16例哮喘发作期和 14例正常人外周血淋巴细胞 TERT mRNA和蛋白质的表达。结果:哮喘豚鼠肺组织中气道上皮细胞和淋巴小结,以及哮喘病人外周血淋巴细胞TERT mRNA和蛋白质表达强度显著高于正常对照组,哮喘病人外周血淋巴细胞 TERT mRNA和蛋白质表达的阳性指数与哮喘病人 FEV1/预计值、MVV/预计值比值呈显著负相关,与血清IgE水平呈显著正相关。结论:(1)TERT在哮喘豚鼠气道上皮、肺淋巴小结和人体外周血淋巴细胞中表达上调;(2)检测人体外周血液中淋巴细胞对TERT表达强度有望可以作为衡量哮喘病情的指标。 展开更多

关键词 支气管哮喘 端粒酶 端粒酶逆转录酶 核酸 原位杂交 免疫染色

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hTERT基因反义核酸对Raji细胞端粒酶活性的影响 被引量：1

6

作者 李文瑜 张洹 何冬梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期196-199,共4页

目的 :观察人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸 (ASODN)对Raji细胞端粒酶活性的影响。方法 :端粒酶聚合酶链反应 -酶联免疫测定法检测Raji细胞的端粒酶活性 ;采用逆转录 -聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水... 目的 :观察人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸 (ASODN)对Raji细胞端粒酶活性的影响。方法 :端粒酶聚合酶链反应 -酶联免疫测定法检测Raji细胞的端粒酶活性 ;采用逆转录 -聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平 ;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。结果 :hTERTASODN作用于Raji细胞后 ,hTERTmRNA表达水平明显降低 ,ASODN与Raji细胞共同孵育 4 8h ,hTERT蛋白表达阳性率降为 5 0 15 %± 3 4 9% ,72hhTERT蛋白表达阳性率降为 33 35 %± 2 75 %。而hTERT正义核酸作用 2 4、4 8、72h对hTERT蛋白表达阳性率 (6 5 % )无显著影响 (P >0 0 5 )。hTERT基因ASODN作用于Raji细胞 4 8h ,其端粒酶活性明显降低 ,作用 72h ,端粒酶活性明显受到抑制 ,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :hTERT基因反义寡核苷酸特异性地抑制Raji细胞的端粒酶活性。 展开更多

关键词 基因 端粒酶逆转录酶 寡核苷酸类 反义 RAJI细胞 端粒酶

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反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

7

作者 叶静 吴云林 +4 位作者 乔敏敏 章永平 郭立霞 陈字 谢弘 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第5期385-389,共5页

目的 阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法 运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察... 目的 阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法 运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力。结果 三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论 端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。 展开更多

关键词 胃癌 端粒酶活性 反义核酸 细胞生长 抑制作用

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c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用 被引量：9

8

作者 孙玲 王峰 +7 位作者 孙慧 乐晓萍 刘林湘 刘延方 王芳 王一浩 马鸿雁 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期605-609,共5页

为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞... 为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性。结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用。 展开更多

关键词 HL-60细胞 c—myc基因 反义核酸 细胞凋亡 端粒酶活性

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端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞损伤修复能力的影响 被引量：7

9

作者 张晓伟 陈彦灵 童坦君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期401-405,共5页

利用反义核酸技术将端粒酶RNA的全长cDNA反向导入乳腺癌MCF 7细胞基因组中 .通过单细胞凝胶电泳实验发现 ,其DNA受H2 O2 损伤后的修复能力下降 .但端粒酶活性抑制为何引起其DNA损伤修复能力下降的原因尚待进一步研究 .

关键词 端粒酶 反义核酸技术 MCF-7 损伤修复 乳腺癌细胞

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端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响 被引量：10

10

作者 张晓伟 童坦君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期395-400,共6页

为了进一步探讨端粒酶在肿瘤发生中的作用 ,实验应用反义核酸技术研究端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞MCF 7恶性表型的影响 采用的方法包括 :基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,病毒感染MCF 7后 ,检测细胞的生长曲线、细胞... 为了进一步探讨端粒酶在肿瘤发生中的作用 ,实验应用反义核酸技术研究端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞MCF 7恶性表型的影响 采用的方法包括 :基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,病毒感染MCF 7后 ,检测细胞的生长曲线、细胞周期及集落形成能力 结果表明 ,与对照组细胞相比 ,反义病毒感染后的MCF 7细胞恶性表型明显降低 提示端粒酶RNA的反义cDNA的导入 。 展开更多

关键词 端粒酶 反义核酸技术 MCF-7 恶性表型 乳腺癌细胞

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反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用 被引量：2

11

作者 姚珂 闵家新 +1 位作者 张国强 余祖滨 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期196-198,共3页

目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活... 目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果　转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论　反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 。 展开更多

关键词 肺肿瘤 反义 端粒酶 肽核酸

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端粒酶RNA的反义cDNA对乳腺癌细胞凋亡的影响(英文) 被引量：3

12

作者 张晓伟 陈彦灵 童坦君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期447-452,共6页

为了进一步探讨端粒酶RNA(hTR)的反义cDNA对乳腺癌MCF 7细胞凋亡可诱导性的影响 ,构建了能将外源基因整合至细胞基因组的整合型腺病毒载体vAd AAV ,并将hTR全长cDNA反向连接至此载体上 ,获得反义重组腺病毒vAdT AAV .vAd AAV和vAdT AAV... 为了进一步探讨端粒酶RNA(hTR)的反义cDNA对乳腺癌MCF 7细胞凋亡可诱导性的影响 ,构建了能将外源基因整合至细胞基因组的整合型腺病毒载体vAd AAV ,并将hTR全长cDNA反向连接至此载体上 ,获得反义重组腺病毒vAdT AAV .vAd AAV和vAdT AAV分别感染MCF 7细胞后 ,获得两个细胞株MCF 7 vAd AAV和MCF 7 vAdT AAV ,其中MCF 7 vAdT AAV细胞基因组内整合有hTR反义cDNA并能稳定表达 .利用生存曲线、细胞形态学观察、DNA片段分析和流式细胞分析来测定NaBu和无血清DMEM诱导后细胞凋亡的反应性 .通过生存曲线 ,发现NaBu诱导的MCF 7 vAdT AAV细胞比对照组MCF 7和MCF 7 vAd AAV细胞更早出现凋亡 .电镜下 ,NaBu或去血清诱导的MCF 7 vAdT AAV细胞更早出现凋亡形态学指标 .流式细胞分析和DNA片段凝胶电泳实验均显示MCF 7 vAdT AAV细胞对凋亡的抵抗力下降 .研究结果表明 ,端粒酶RNA的反义cDNA使乳腺癌MCF 展开更多

关键词 端粒酶RNA 反义核酸技术 乳腺癌 癌细胞凋亡

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端粒酶反义hTR和反义hTERT合用对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响 被引量：3

13

作者 陈忠东 雷厉秀 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1490-1494,共5页

目的探讨端粒酶反义hTR和反义hTERT联合作用于宫颈癌HeLa细胞,对HeLa细胞凋亡的影响。方法实验分空白对照组、脂质体对照组、正义hTR组、正义hTERT组、反义hTR组、反义hTERT组及反义hTR+反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、... 目的探讨端粒酶反义hTR和反义hTERT联合作用于宫颈癌HeLa细胞,对HeLa细胞凋亡的影响。方法实验分空白对照组、脂质体对照组、正义hTR组、正义hTERT组、反义hTR组、反义hTERT组及反义hTR+反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、逆转录聚合酶链反应技术-端粒重复序列扩增(TRAP)酶联免疫法(ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测宫颈癌HeLa细胞转染反义hTR和反义hTERT后细胞的端粒酶活性、形态学、凋亡和周期的改变。结果宫颈癌HeLa细胞转染端粒酶反义核酸后,出现明显的细胞凋亡形态学改变,端粒酶活性抑制率、凋亡率增高及细胞周期阻滞,与空白对照组、脂质体对照组及正义核酸组比较,统计学上差异有显著性(P<0.01)。HeLa细胞转染0.2μmol·L-1反义hTR+反义hTERT72h后,端粒酶活性抑制率、细胞凋亡率分别为80.5%、28.6%,与反义hTR组和反义hTERT组比较(端粒酶活性抑制率、细胞凋亡率分别为hTR:62.7%、13.2%;hTERT:66.5%、13.7%),差异有显著性(P<0.01,q值分别为0.919、1.075)。反义hTR+反义hTERT组比反义hTR组和反义hTERT组细胞凋亡的形态学改变更明显,反义hTR+反义hTERT组G0/G1期细胞比例增加(G1期细胞比例为57.8%,空白对照组G1期细胞比例为50.7%)。结论端粒酶反义核酸能通过抑制端粒酶活性诱导细胞凋亡,端粒酶反义hTERT和反义hTR有协同效应。 展开更多

关键词 宫颈癌 端粒酶 反义核酸 凋亡

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人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响 被引量：6

14

作者 肖扬 张洹 《第一军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期144-147,共4页

目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;An... 目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;Annexin V+PI双染后流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果经ASODN作用后,K562细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用K562细胞24 h,再加入顺铂作用72 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带,而正义寡核苷酸(SODN)与顺铂联合作用组及单用顺铂组均未见到明显的DNA梯形条带。ASODN作用K562细胞24 h,再加入5 μmol/L 顺铂作用48、72 h的凋亡细胞百分率(18.3%和31.6%)分别与SODN联合顺铂作用组(9.6%和10.5%)、单用顺铂组(7.1%和9.4%)比较,差异有显著性(P<0.01)。结论以hTR模板区为靶点,ASODN能抑制端粒酶活性并促进顺铂诱导K562细胞的凋亡。 展开更多

关键词 人端粒酶 反义寡核苷酸 顺铂 细胞凋亡 敏感性 核糖核蛋白逆转录酶 肿瘤基因治疗

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端粒酶反义寡核苷酸对食管癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

15

作者 樊祥奎 严瑞华 +1 位作者 李毅 林乐胜 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第1期88-89,91,共3页

关键词 食管癌 端粒酶 反义核酸

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反义寡核苷酸靶向hTERT对K562细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响

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作者 应晓杨 方美云 王一 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期48-53,共6页

本研究探讨靶向封闭端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的反义硫代寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASPSODN)对K562细胞目的基因抑制作用及对端粒酶活性和细胞凋亡的影响。选用3种浓度ASPSODN,分别为0.2μmol/L、0.6... 本研究探讨靶向封闭端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的反义硫代寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASPSODN)对K562细胞目的基因抑制作用及对端粒酶活性和细胞凋亡的影响。选用3种浓度ASPSODN,分别为0.2μmol/L、0.6μmol/L、1.0μmol/L,同时设空白组、脂质体组和三种相同浓度正义硫代寡核苷酸(SPSODN)作为对照,转染到人红白血病细胞株K562,于24、48小时收集细胞进行检测。用RT-PCR检测靶基因hTERT mRNA的表达,TRAP-ELISA检测细胞端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明:①K562细胞被转染24小时后,hTERT mRNA的表达在脂质体组为0.80±0.24,在0.2μmol/LASPSODN组为0.69±0.12,在SPSODN组为0.72±0.25,它们与空白对照组(0.85±0.28)无统计学差异(p>0.05),而0.6μmol/LASPSODN组的hTERT mRNA的表达(0.42±0.16)比脂质体组明显下调(p<0.05),而相同浓度的SPSODN组则下调不明显(0.69±0.26),1.0μmol/LASPSODN和SPSODN对hTERT表达都表现出一定的抑制。采用台盼蓝拒染法染色显示,经脂质体转染的1.0μmol/LODN无论正义或反义时,细胞死亡明显增多。②24小时端粒酶相对活性空白对照组为88.9%,脂质体作用组为77.7%,两者无显著性差异;0.2、0.6、1.0μmol/LASPSODN作用后端粒酶相对活性分别为60.6%、52%、58%,与空白对照组相比均有显著性差异(p<0.05),其中0.6μmol/LASPSODN组间与脂质体组有显著性差异(p=0.037);而0.2、0.6、1.0μmol/L作用后SPSODN组端粒酶相对活性分别为76.1%、72.2%、65.7%,0.2和0.6μmol/LSPSODN组与空白组、脂质体组间均无统计学差异。48小时ASPSODN各作用组则端粒酶活性有所恢复,0.2、0.6、1.0μmol/LASPSODN作用后端粒酶相对活性分别为84.1%、82.3%、79.6%;而48小时0.2、0.6、1.0μmol/L各SPSODN组端粒酶相对活性分别为74.8%、74.5%、67.9%,0.2和0.6μmol/LSPSODN组间端粒酶活性无明显抑制。③培养48小时后0.6μmol/LASPSODN组和SPSODN组细胞凋亡率分别为4.34%和1.83%,脂质体作用组为1.84%,空白对照组为1.07%,ASPSODN和SPSODN组两者间有统计学差异(p<0.05),ASPSODN组与脂质体作用组及空白对照组间有显著性差异(p<0.01)。结论:ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调K562细胞株端粒酶活性,最佳作用浓度为0.6μmol/L,但抑制时间较短,24小时明显抑制,48小时则有所恢复。高浓度(1.0μmol/L)寡核苷酸表现出一定的细胞毒性;48小时0.6μmol/LASPSODN能明显诱导细胞凋亡,而SPSODN组则无此作用,两者间有显著性差异(p<0.05)。 展开更多

关键词 端粒酶 端粒酶逆转录酶 反义寡核苷酸 K562细胞株 细胞凋亡

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反义表皮生长因子受体cDNA转染对胶质母细胞瘤端粒酶活性的影响

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作者 田新霞 张云岗 +1 位作者 杜娟 郑杰 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期314-319,共6页

目的:探讨反义表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor, EGFR)cDNA转染对胶质母细胞瘤细胞株U87MG端粒酶活性和端粒长度的影响及其机制。方法:用反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤细胞株U87MG后,筛选出低表达EGFR的细胞株;用telome... 目的:探讨反义表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor, EGFR)cDNA转染对胶质母细胞瘤细胞株U87MG端粒酶活性和端粒长度的影响及其机制。方法:用反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤细胞株U87MG后,筛选出低表达EGFR的细胞株;用telomericrepeatamplificationprotocolassay(TRAP分析)检测肿瘤细胞的端粒酶活性;用Southern印迹杂交方法检测端粒长度;用半定量RT PCR方法检测端粒酶逆转录酶(humantelomerasere versetranscriptase, hTERT)、端粒酶相关蛋白1(humantelomerase associatedprotein1, hTEP1)和c myc基因的表达。结果:反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤U87MG后,其EGFR蛋白表达量明显降低;肿瘤细胞生长缓慢,对EGF的生长刺激作用,反应明显减弱;肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低,端粒长度显著缩短;hTERT的mRNA表达量略微降低,而hTEP1和c myc的mRNA表达量未见明显改变。结论:反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤可以有效阻断EGFR信号传导通路,降低肿瘤细胞的端粒酶活性,使端粒长度缩短,这可能是抑制肿瘤细胞生长的新机制;反义EGFRcDNA转染降低hTERTmRNA的表达,可能是其降低端粒酶活性的机制之一。 展开更多

关键词 反义表皮生长因子受体 CDNA转染 胶质母细胞瘤 端粒酶活性 Southern印迹 MRNA表达量 receptor protocol 抑制肿瘤细胞生长 端粒酶逆转录酶 端粒酶相关蛋白 protein hTERT 端粒长度 factor TRAP分析 EGFR蛋白 信号传导通路

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清毒片和hTERT反义核酸对HL-60细胞增殖及凋亡的协同作用 被引量：4

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作者 李宏良 曾荣香 +4 位作者 陈鹏 丘和明 余寿益 黄小青 陈学彰 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期395-398,共4页

目的:探讨清毒片联合端粒酶逆转录酶反义核酸(hTERT ASODN)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养HL-60细胞,分别加入清毒片、hTERT ASODN、清毒片加hTERT ASODN,取培养24、48、72h的细胞,采用四唑盐比色(MTT)法检测细胞增殖、Ann... 目的:探讨清毒片联合端粒酶逆转录酶反义核酸(hTERT ASODN)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养HL-60细胞,分别加入清毒片、hTERT ASODN、清毒片加hTERT ASODN,取培养24、48、72h的细胞,采用四唑盐比色(MTT)法检测细胞增殖、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。以加入阿糖胞苷组为阳性对照,未处理的细胞为空白对照。结果:清毒片、hTERT ASODN(0.5μmol/L)、阿糖胞苷(10μmol/L)均能抑制HL-60细胞增殖、诱导细胞凋亡,其作用随着培养时间的延长增强;HL-60细胞增殖抑制率及诱导凋亡率从高到低依次为:阿糖胞苷组>清毒片加hTERT ASODN组>hTERT ASODN组>清毒片组;清毒片加hTERT ASODN对HL-60细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用明显高于单独使用清毒片或hTERT ASODN(P<0.05)。结论:清毒片与hTERT ASODN联合对于抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡具有协同效应。 展开更多

关键词 清毒片 端粒酶逆转录酶反义核酸 HL-60细胞

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hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Jurkat细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 李文瑜 张洹 何冬梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1596-1600,共5页

目的 :用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的反义寡核苷酸 (ASODN)抑制Jurkat细胞端粒酶活性后 ,观察化疗药物 (顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙 )对Jurkat细胞凋亡的影响。方法 :采用台盼蓝拒染法观察hTERTASODN与化疗药物 (顺铂、... 目的 :用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的反义寡核苷酸 (ASODN)抑制Jurkat细胞端粒酶活性后 ,观察化疗药物 (顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙 )对Jurkat细胞凋亡的影响。方法 :采用台盼蓝拒染法观察hTERTASODN与化疗药物 (顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙 )联合作用对Jurkat细胞系生长的影响 ;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况 ;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 :hTERTASODN作用于Jurkat细胞 2 4h再加入柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙 ,对细胞生长的抑制分别与单用柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙及hTERT正义寡核苷酸 (senseoligodeoxynucleotide,SODN)联合柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙组相比 ,无显著差异 (P >0 0 5 )。hTERTASODN作用于Jurkat细胞 2 4h再加入顺铂 ,分别与SODN联合顺铂作用组、单用顺铂作用组相比 ,对细胞抑制明显增强 (P <0 0 5 )。hTERTASODN作用于Jurkat细胞 2 4h再加入顺铂作用 4 8h ,细胞出现典型的凋亡形态学改变 ,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带 ,而SODN与顺铂联合作用组及单独应用顺铂均未见到DNA梯形条带。hTERTASODN与 2 5 μmol/L顺铂联合作用于Jurkat细胞 4 8h的凋亡细胞百分率 (2 5 18± 展开更多

关键词 基因 端粒酶逆转录酶 寡核苷酸类 反义 端粒酶 顺铂 JURKAT细胞 细胞凋亡

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端粒酶抑制剂研究进展 被引量：6

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作者 周欣 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第1期86-88,共3页

关键词 端粒酶抑制剂 研究进展 肿瘤 反义核酸 核酶

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