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shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌细胞端粒酶卡侯体蛋白1基因的沉默效应
被引量：
2
1
作者
胡玲
孙崇奎
+2 位作者
苟雅萍
李燕
肖丽英
《国际口腔医学杂志》
CAS
2013年第6期720-723,共4页
目的探讨shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌Cal27细胞系端粒酶新蛋白,即端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因的沉默效应,以期探索肿瘤基因治疗的新途径。方法根据TCAB1基因,构建慢病毒shTCAB1-A～D,测定病毒滴度;用重组慢病毒体外感染Cal27细胞,...
目的探讨shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌Cal27细胞系端粒酶新蛋白,即端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因的沉默效应,以期探索肿瘤基因治疗的新途径。方法根据TCAB1基因,构建慢病毒shTCAB1-A～D,测定病毒滴度;用重组慢病毒体外感染Cal27细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达推断感染效率;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TCAB1 mRNA水平;Western blot检测TCAB1蛋白质的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞体外增殖能力;Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力改变。结果经PCR与测序鉴定证实成功构建靶向TCAB1的慢病毒RNAi载体,病毒滴度为1.5×108～3×108U·mL-1。荧光显微镜观察显示,绝大部分细胞表达绿色荧光。与空白细胞对照组相比,4种不同的shTCAB1-A～D慢病毒感染组TCAB1 mRNA表达下调48.7%～62.0%;蛋白抑制率达45.6%～77.5%,shTCAB1-C组最明显。shTCAB1-C慢病毒能明显抑制Cal27细胞增殖能力,也能降低其侵袭能力,穿过人工基底膜的平均细胞数明显低于空白对照组及非特异性对照组,侵袭抑制率高达67.5%(P<0.05)。结论成功构建并包装了端粒酶新蛋白TCAB1靶向的RNAi慢病毒,该病毒可高效感染人口腔鳞状细胞癌细胞,产生特异性的基因沉默效应。
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关键词
端粒酶卡侯体蛋白1
RNA干扰
基因沉默
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职称材料
端粒酶卡侯体蛋白1干扰慢病毒对口腔鳞状细胞癌细胞裸鼠致瘤作用的研究
被引量：
2
2
作者
王琨
葛奕辰
+5 位作者
崔博淼
苟雅萍
孙崇奎
龙敏
肖丽英
李燕
《国际口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期32-36,共5页
目的 探测端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因沉默对裸鼠移植瘤生长及肿瘤细胞生物学行为的影响。方法 采用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定RNA干扰慢病毒sh TCAB1和sh阴性对照(NC)处理后经稳定筛选26代人口腔鳞状细胞癌(OSCC)的Cal27细...
目的 探测端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因沉默对裸鼠移植瘤生长及肿瘤细胞生物学行为的影响。方法 采用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定RNA干扰慢病毒sh TCAB1和sh阴性对照(NC)处理后经稳定筛选26代人口腔鳞状细胞癌(OSCC)的Cal27细胞系染色体末端端粒的信号强度。然后将RNA干扰的Cal27细胞接种于裸鼠颈部皮下左、右两侧,定期监测肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,称取瘤体重量。采用免疫组织化学检测移植瘤组织中TCAB1、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3、血管内皮生长因子(VEGF)和细胞周期蛋白D1的表达。结果 Q-FISH结果显示,sh TCAB1处理后的Cal27细胞较sh NC处理后及野生型Cal27细胞的端粒平均长度明显缩短。sh TCAB1处理组OSCC移植瘤生长速度明显较sh NC对照组减慢。移植瘤平均重量为0.06 g,对照组为0.26 g,抑瘤率达76.9%。免疫组织化学结果显示,sh TCAB1组移植瘤中TCAB1表达明显降低,同时,Bcl-2、VEGF和细胞周期蛋白D1的表达降低,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达升高。结论 sh TCAB1慢病毒能够明显抑制裸鼠人OSCC移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、延长肿瘤细胞分裂周期及抑制血管生成有关。
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关键词
端粒酶卡侯体蛋白1
口腔鳞状细胞癌
基因沉默
凋亡
血管生成
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职称材料
题名
shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌细胞端粒酶卡侯体蛋白1基因的沉默效应
被引量：
2
1
作者
胡玲
孙崇奎
苟雅萍
李燕
肖丽英
机构
口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院(四川大学)
出处
《国际口腔医学杂志》
CAS
2013年第6期720-723,共4页
基金
国家自然科学基金青年基金资助项目(30901689)
国家自然科学基金资助项目(81172579)
文摘
目的探讨shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌Cal27细胞系端粒酶新蛋白,即端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因的沉默效应,以期探索肿瘤基因治疗的新途径。方法根据TCAB1基因,构建慢病毒shTCAB1-A～D,测定病毒滴度;用重组慢病毒体外感染Cal27细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达推断感染效率;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TCAB1 mRNA水平;Western blot检测TCAB1蛋白质的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞体外增殖能力;Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力改变。结果经PCR与测序鉴定证实成功构建靶向TCAB1的慢病毒RNAi载体,病毒滴度为1.5×108～3×108U·mL-1。荧光显微镜观察显示,绝大部分细胞表达绿色荧光。与空白细胞对照组相比,4种不同的shTCAB1-A～D慢病毒感染组TCAB1 mRNA表达下调48.7%～62.0%;蛋白抑制率达45.6%～77.5%,shTCAB1-C组最明显。shTCAB1-C慢病毒能明显抑制Cal27细胞增殖能力,也能降低其侵袭能力,穿过人工基底膜的平均细胞数明显低于空白对照组及非特异性对照组,侵袭抑制率高达67.5%(P<0.05)。结论成功构建并包装了端粒酶新蛋白TCAB1靶向的RNAi慢病毒,该病毒可高效感染人口腔鳞状细胞癌细胞,产生特异性的基因沉默效应。
关键词
端粒酶卡侯体蛋白1
RNA干扰
基因沉默
Keywords
telomerase Cajal body protein
1
RNA interference
gene silencing
分类号
R739.8 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
端粒酶卡侯体蛋白1干扰慢病毒对口腔鳞状细胞癌细胞裸鼠致瘤作用的研究
被引量：
2
2
作者
王琨
葛奕辰
崔博淼
苟雅萍
孙崇奎
龙敏
肖丽英
李燕
机构
口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院(四川大学)
出处
《国际口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期32-36,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(81172579)
四川省科技厅科技支撑计划项目(2013SZ0039)~~
文摘
目的 探测端粒酶卡侯体蛋白1(TCAB1)基因沉默对裸鼠移植瘤生长及肿瘤细胞生物学行为的影响。方法 采用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定RNA干扰慢病毒sh TCAB1和sh阴性对照(NC)处理后经稳定筛选26代人口腔鳞状细胞癌(OSCC)的Cal27细胞系染色体末端端粒的信号强度。然后将RNA干扰的Cal27细胞接种于裸鼠颈部皮下左、右两侧,定期监测肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,称取瘤体重量。采用免疫组织化学检测移植瘤组织中TCAB1、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3、血管内皮生长因子(VEGF)和细胞周期蛋白D1的表达。结果 Q-FISH结果显示,sh TCAB1处理后的Cal27细胞较sh NC处理后及野生型Cal27细胞的端粒平均长度明显缩短。sh TCAB1处理组OSCC移植瘤生长速度明显较sh NC对照组减慢。移植瘤平均重量为0.06 g,对照组为0.26 g,抑瘤率达76.9%。免疫组织化学结果显示,sh TCAB1组移植瘤中TCAB1表达明显降低,同时,Bcl-2、VEGF和细胞周期蛋白D1的表达降低,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达升高。结论 sh TCAB1慢病毒能够明显抑制裸鼠人OSCC移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、延长肿瘤细胞分裂周期及抑制血管生成有关。
关键词
端粒酶卡侯体蛋白1
口腔鳞状细胞癌
基因沉默
凋亡
血管生成
Keywords
telomerase Cajal body protein
1
oral squamous cell carcinoma
gene silencing
apoptosis
angiogenesis
分类号
R739.8 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌细胞端粒酶卡侯体蛋白1基因的沉默效应
胡玲
孙崇奎
苟雅萍
李燕
肖丽英
《国际口腔医学杂志》
CAS
2013
2
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职称材料
2
端粒酶卡侯体蛋白1干扰慢病毒对口腔鳞状细胞癌细胞裸鼠致瘤作用的研究
王琨
葛奕辰
崔博淼
苟雅萍
孙崇奎
龙敏
肖丽英
李燕
《国际口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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