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检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用 被引量:21
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作者 崔尚金 蔡阳 陈欣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期347-351,共5页
建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-2 ORF2上490 bp片段P3P4,克隆到pMD 18-T载体获得目标模板.构建含692 bp的c-P3P4 DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释... 建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-2 ORF2上490 bp片段P3P4,克隆到pMD 18-T载体获得目标模板.构建含692 bp的c-P3P4 DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,以产物的荧光强度(IOD)绘制标准曲线,结果当反应体系中起始模板的量为1.0×107 cop/μL,循环次数小于或等于30时,原始模板数以指数增长.由此确定目标模板和竞争模板的最适工作浓度并用该方法检测感染细胞内的PCV-2基因组的拷贝数和临床样品中的PCV-2 DNA含量,结果发现临床样品中的PCV-2 DNA含量达到一定程度(肺中1.0145×108 copies/mL,血中0.8×107 copies/mL,淋巴中9.698×108 copies/mL),猪表现临床症状,而病毒在感染细胞内的复制在80 h基因的拷贝数达到最高,这为今后的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 检测技术 猪圆环病毒 DNA 竞争定量 PCR方法
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宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立 被引量:4
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作者 王恒波 郭晋隆 +3 位作者 陈平华 阙友雄 陈如凯 许莉萍 《热带作物学报》 CSCD 2009年第10期1511-1516,共6页
利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体... 利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板。通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程。本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考。 展开更多
关键词 甘蔗 宿根矮化病菌 非同源模板 竞争定量PCR 检测
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鸭坦布苏病毒竞争定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 袁朋 王斌 +4 位作者 许传田 杨少华 黄庆华 张秀美 张琳 《山东农业科学》 2015年第3期113-117,共5页
在现行PCR检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)方法的基础上,设计制备DTMUV竞争模板并以其为定量内标物建立竞争定量PCR(QC-PCR)体系。该体系特异性强、灵敏性高,竞争模板和目标模板可在400个分子/μL的水平上共扩增。临床应用结果表明,建立的体系... 在现行PCR检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)方法的基础上,设计制备DTMUV竞争模板并以其为定量内标物建立竞争定量PCR(QC-PCR)体系。该体系特异性强、灵敏性高,竞争模板和目标模板可在400个分子/μL的水平上共扩增。临床应用结果表明,建立的体系能够满足简单快速确定病毒含量的要求。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 竞争定量PCR 定量检测
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猪TNF-α竞争定量RT-PCR标准曲线的建立 被引量:1
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作者 司兴奎 张济培 +1 位作者 陈建红 顾万军 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期730-733,共4页
根据GenBank中猪TNF-α的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增402 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建成含TNF-α部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增402 bp片断共用同一对引物,但缺失137 bp的竞争重组子.通过重组... 根据GenBank中猪TNF-α的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增402 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建成含TNF-α部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增402 bp片断共用同一对引物,但缺失137 bp的竞争重组子.通过重组质粒与竞争重组子竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立猪TNF-α的标准竞争曲线和直线回归方程. 展开更多
关键词 TNF-Α 竞争定量RT-PCR
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猪IL-12p40竞争定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 司兴奎 张济培 +1 位作者 陈建红 顾万军 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期91-94,共4页
根据GenBank中猪IL-12p40的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增377 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含IL-12p40部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增377 bp片段共用同一对引物但扩增255 bp片段的竞争重组... 根据GenBank中猪IL-12p40的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增377 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含IL-12p40部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增377 bp片段共用同一对引物但扩增255 bp片段的竞争重组子.通过重组质粒与竞争重组子竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立了猪IL-12p40的标准竞争曲线和直线回归方程. 展开更多
关键词 IL-12P40 竞争定量RT-PCR
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赤拟谷盗HSP70基因克隆和竞争定量PCR检测
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作者 苏丽娟 董晓慧 尹新明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期218-223,共6页
为研究赤拟谷盗Tribolium castaneum受到热胁迫后高度保守的热激蛋白70(heat shock protein70,HSP70)基因的表达变化,本研究扩增了681bp的赤拟谷盗hsp70片段,编码227个氨基酸残基,GenBank登录号为HM345948。同源性分析表明:赤拟谷盗hsp7... 为研究赤拟谷盗Tribolium castaneum受到热胁迫后高度保守的热激蛋白70(heat shock protein70,HSP70)基因的表达变化,本研究扩增了681bp的赤拟谷盗hsp70片段,编码227个氨基酸残基,GenBank登录号为HM345948。同源性分析表明:赤拟谷盗hsp70核苷酸序列与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata的hsp70(GenBank登录号:AF322911.1)同源性最高,为97%;其推测的蛋白序列与马铃薯甲虫、甘蓝夜蛾Mamestra brassicae、黑腹果蝇Drosophila melanogaster和美洲斑潜蝇Liriomyza sativae的HSP70蛋白均有94%以上的同源性。利用RT-PCR技术得到与赤拟谷盗hsp70进行竞争定量的内部竞争物,以等量的目标cDNA和一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,构建了hsp70的竞争定量PCR检测体系,该体系标准曲线的线性方程为Y=1.032X-1.618(r2=0.975)。这些结果为赤拟谷盗的hsp70定量检测提供了方便,并为热控技术防治害虫提供了基础资料。 展开更多
关键词 赤拟谷盗 热激蛋白70 竞争定量PCR 内部竞争 同源性分析
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猪IFN-γ竞争定量RT-PCR标准曲线的建立
7
作者 司兴奎 张济培 +1 位作者 陈建红 顾万军 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第6期43-46,共4页
根据GenBank中猪IFN-γ的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增380bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-TEasy载体中,构建成含IFN-γ部分基因片段的重组质粒。利用反向PCR技术构建和扩增380 bp片段共用同一对引物但缺失163 bp的竞争重组子。通过... 根据GenBank中猪IFN-γ的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增380bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-TEasy载体中,构建成含IFN-γ部分基因片段的重组质粒。利用反向PCR技术构建和扩增380 bp片段共用同一对引物但缺失163 bp的竞争重组子。通过重组质粒与竞争重组子,建立猪IFN-γ的标准竞争曲线和直线回归方程,为进一步检测IFN-γ的mRNA的转录水平变化奠定基础。 展开更多
关键词 IFN-Γ 竞争定量RT-PCR
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竞争定量RT-PCR检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响
8
作者 李红梅 李艳飞 《畜牧兽医科技信息》 2012年第3期33-34,共2页
建立了奶牛肝PCmRNA丰度的竞争定量RT-PCR检测方法,优化的PCR反应条件(25μL)为:60℃退火、30个循环数、1:1的PC cDNA与PC DNA竞争模板浓度比。同时应用该方法检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响,结果表明:低能量日粮饲喂... 建立了奶牛肝PCmRNA丰度的竞争定量RT-PCR检测方法,优化的PCR反应条件(25μL)为:60℃退火、30个循环数、1:1的PC cDNA与PC DNA竞争模板浓度比。同时应用该方法检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响,结果表明:低能量日粮饲喂干奶期奶牛,肝脏PC mRNA丰度升高,而干奶期高能饲喂奶牛,肝脏PC mRNA丰度降低。说明干奶期低能饲喂奶牛,可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。 展开更多
关键词 能量摄入 围产期奶牛 竞争定量RT-PCR 肝PCmRNA丰度
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35S启动子定量PCR非同源竞争模板的构建 被引量:1
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作者 徐景升 阙友雄 +1 位作者 李峰 陈如凯 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期12-15,共4页
利用35S启动子特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,经低严谨度PCR扩增并回收克隆适宜DNA片段,构建了35S启动子的非同源竞争对照。测序结果表明,该片段与35S启动子相应序列即靶序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。... 利用35S启动子特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,经低严谨度PCR扩增并回收克隆适宜DNA片段,构建了35S启动子的非同源竞争对照。测序结果表明,该片段与35S启动子相应序列即靶序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。利用该非同源竞争对照,建立了转基因玉米35S启动子的QC-PCR技术体系,并进行了校正。 展开更多
关键词 竞争定量PCR 非同源对照模板 转基因检测
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竞争性定量PCR检测恶性血液病造血干细胞移植术后克隆性TCRVγI-Jγ基因重排
10
作者 徐兵 周淑芸 孙竞 《实用医学杂志》 CAS 2003年第8期840-842,共3页
目的 :为提高恶性血液病患者微小残留病 (MRD)检测的临床意义。方法 :构建竞争性定量聚合酶链反应 (PCR)检测技术并定量分析 3 1例恶性血液病患者 (包括 12例急性淋巴细胞白血病 ,10例急性非淋巴细胞白血病 ,6例非霍奇金淋巴瘤和 3例慢... 目的 :为提高恶性血液病患者微小残留病 (MRD)检测的临床意义。方法 :构建竞争性定量聚合酶链反应 (PCR)检测技术并定量分析 3 1例恶性血液病患者 (包括 12例急性淋巴细胞白血病 ,10例急性非淋巴细胞白血病 ,6例非霍奇金淋巴瘤和 3例慢性粒细胞白血病 )造血干细胞移植术后TCRVγI Jγ基因重排。结果 :建立定量PCR方法的灵敏度为 10 -5水平 ;3 1例恶性血液病造血干细胞移植术后 1个月MRD的水平为 (3 16± 2 74)× 10 -5,移植后 1个月MRD水平显著低于移植前 [(4 2 1± 3 2 7)× 10 -5] (P <0 0 2 5 ) ;2 2例自体造血干细胞移植术后MRD为(3 47± 2 91)× 10 -5水平 ,显著高于 9例异基因造血干细胞移植术后 [(2 63± 2 2 1)× 10 -5] (P <0 0 5 ) ;MRD >40 0×10 -5的 13例病人中 2年内复发率为 5 3 8% (7/13 ) ,而MRD <40 0× 10 -5的 18例病人中仅有 2例 (11 1% )出现复发。MRD >40 0× 10 -5患者 2年内的复发率显著高于MRD <40 0× 10 -5患者 (P <0 0 1)。结论 :所构建竞争性定量PCR技术简便、快速、灵敏 ;定量检测恶性血液病造血干细胞移植术后MRD水平有利于预后预测。 展开更多
关键词 恶性血液病 造血干细胞移植 微小残留病 竞争定量聚合酶链反应 基因重排
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采用定量竞争PCR技术定量分析猪DNA
11
作者 Wolf 高军肖 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第1期53-53,共1页
当今的许多肉产品都可能由几种动物的肉按照不同比例组成。为保证消费者不受欺骗 ,有必要对复合食物产品的成分同时进行定性和定量监测。多聚链式聚合反应 (PCR)等以 DNA为基础的技术被广泛应用于种类鉴定 ,但利用当前的技术不能测出某... 当今的许多肉产品都可能由几种动物的肉按照不同比例组成。为保证消费者不受欺骗 ,有必要对复合食物产品的成分同时进行定性和定量监测。多聚链式聚合反应 (PCR)等以 DNA为基础的技术被广泛应用于种类鉴定 ,但利用当前的技术不能测出某种特定成分的比例。本研究报道了一种用于猪 DNA检测和定量分析的定量竞争多聚链式聚合反应技术 (QC-PCR的开发和评定 ,该技术采用一种以生长激素基因 sus scrofa为基础的新型猪特异性 PCR系统。构建一个与猪的目标序列在长度上仅差 3 0 bp的 DNA竞争物 ,与目标序列一起用于 PCR。用来自牛、羊、肉鸡和火鸡的 DNA对这个新引物的特异性进行了评价。通过含有猪 DNA和相应数量牛 DNA的混合物的共同扩增使竞争物的浓度调到猪 DNA含量的2 %或 2 0 %。 展开更多
关键词 生长激素基础 定量竞争PCR技术 定量分析 猪DNA
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定量PCR的非同源对照模板的构建 被引量:2
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作者 陈燃 金詟 毛裕民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期247-250,共4页
建立了HCVRNA和hTERTmRNA的竞争定量PCR系统。对照模板的构建方法是 :利用计算机辅助优选设计连接引物 ,低严紧型扩增大肠杆菌DNA ,回收并克隆预期的DNA片段。该片段与靶序列除两端引物序列完全相同外 ,无同源性 ,因此可作为非同源对照... 建立了HCVRNA和hTERTmRNA的竞争定量PCR系统。对照模板的构建方法是 :利用计算机辅助优选设计连接引物 ,低严紧型扩增大肠杆菌DNA ,回收并克隆预期的DNA片段。该片段与靶序列除两端引物序列完全相同外 ,无同源性 ,因此可作为非同源对照模板。这种构建非同源对照模板的方法 ,简便易行 。 展开更多
关键词 竞争定量PCR 对照模板 异源双链 大肠杆菌
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用定量竞争PCR检测和定量IBDV cDNA与RNA
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1998年第21期6-6,共1页
最近,美国研究人员研制了一种定量竞争PCR。用这种方法可以测定传染性囊病病毒(IBDV)的互补DNA(cDNA)和RNA水平,并且可以用竞争PCR(QC-PCR)扩增达到定量的水平。将竞争者一个野生型IBDV cDNA的缺失突变型做连续10倍稀释,将病毒RNA逆转... 最近,美国研究人员研制了一种定量竞争PCR。用这种方法可以测定传染性囊病病毒(IBDV)的互补DNA(cDNA)和RNA水平,并且可以用竞争PCR(QC-PCR)扩增达到定量的水平。将竞争者一个野生型IBDV cDNA的缺失突变型做连续10倍稀释,将病毒RNA逆转录后用IBDV cDNA进行协同扩增。用琼脂糖凝胶电泳、染色和光密度扫描后。 展开更多
关键词 定量竞争PCR CDNA 传染性囊病病毒 互补DNA 计算机辅助 图像分析 数字化图像 凝胶电泳 缺失突变 光密度扫描
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猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
14
作者 王霞泰 汤世坤 +1 位作者 周双海 刘凤华 《北京农学院学报》 2008年第4期37-40,共4页
根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后... 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。 展开更多
关键词 IL-18 竞争定量PCR
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定量RT-PCR及其在植物学研究中的应用 被引量:15
15
作者 胡丹丹 顾金刚 +1 位作者 姜瑞波 董金皋 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期520-525,共6页
定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-... 定量RT-PCR(Quantitative reverse transcriptase-PCR)是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种特异性检测基因表达的技术。主要包括相对定量RT-PCR(Relative quantitative RT-PCR)、竞争性定量RT-PCR(Competitive quan-titative RT-PCR)、比较定量RT-PCR(Comparative quantitative RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real time quantitative RT-PCR)四种。目前定量RT-PCR在植物学研究中的应用越来越广泛,如植物营养学研究、植物发育学研究、植物抗逆机理研究、转基因植物的检测、病原菌的检测、植物与微生物互作机理研究、植物抗病性检测等方面。本文综述了定量RT-PCR的原理及在植物学中的应用。 展开更多
关键词 相对定量RT—PCR 竞争定量RT-PCR 比较定量RT-PCR 实时定量RT-PCR 植物学
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转基因大豆非同源对照模板QC-PCR检测方法的建立
16
作者 徐景升 阙友雄 +2 位作者 李峰 陈华墙 陈如凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期156-159,共4页
建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因... 建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因相应序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。 展开更多
关键词 竞争定量PCR 非同源对照 CP4EPSPS 转基因检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响 被引量:9
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作者 磨美兰 杨汉春 +4 位作者 郭鑫 吕艳丽 周双海 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期568-573,共6页
采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM... 采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM的SLA-DR mRNA转录水平在3、7和14 d下调,低于对照组;感染后3 d,Ii链、SLA-DM和CD40的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);CD80和CD86mRNA转录水平也在感染后3 d明显下调(P<0.05)。用流式细胞术检测PAM表面的SLA-DR抗原的结果表明,在感染后3 d短暂上升,7 d之后一直低于对照组。由此说明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 抗原加工和递呈相关分子 共刺激分子 定量竞争PCR
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寡头垄断企业的策略抉择及其社会效益分析 被引量:2
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作者 郜庆 史梦宇 《统计与决策》 CSSCI 北大核心 2019年第18期177-180,共4页
寡头垄断企业通常有“定量”和“定价”两种竞争策略选择。文章通过对cournot均衡、Bertrand均衡、stacklberg均衡、价格领先均衡、cartel均衡五种模型进行数理推导,得出一般性结论,再用具体例子代入模型运算并进行比较,结果表明:基于... 寡头垄断企业通常有“定量”和“定价”两种竞争策略选择。文章通过对cournot均衡、Bertrand均衡、stacklberg均衡、价格领先均衡、cartel均衡五种模型进行数理推导,得出一般性结论,再用具体例子代入模型运算并进行比较,结果表明:基于追寻利润最大化假设之上的理性寡头垄断企业会选择“定量竞争”,但寡头垄断企业选择“定价竞争”还能实现更大的社会效益。可以通过立法和税收等手段迫使寡头垄断企业将“定量竞争”策略转变为“定价竞争”,从而实现社会效益最大化。 展开更多
关键词 寡头垄断 策略抉择 定量竞争 定价竞争 社会效益
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