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突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:6
1
作者 刘堰 胡应和 +1 位作者 欧阳克清 蔡绍皙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期618-624,共7页
为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸... 为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4~ 展开更多
关键词 突变型人白细胞介素—2基因 巴斯德毕赤酵母 表达 定点突变
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白细胞介素-17基因多态性与山西东南地区汉族人群2型糖尿病的相关性 被引量:2
2
作者 李燕 王琦 +4 位作者 郑路 冯李慧 马丽 魏健 刘良姝 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期695-701,共7页
目的 研究山西省东南地区汉族人群白细胞介素-17(IL-17)基因单核苷酸多态性及其与2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法 收集健康对照组和T2DM组受试者基本信息及临床资料,提取全血DNA,采用聚合酶链反应-高温连接酶反应对IL-17基因4个位点(rs2... 目的 研究山西省东南地区汉族人群白细胞介素-17(IL-17)基因单核苷酸多态性及其与2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法 收集健康对照组和T2DM组受试者基本信息及临床资料,提取全血DNA,采用聚合酶链反应-高温连接酶反应对IL-17基因4个位点(rs2275913、rs3819024、rs4711998和rs8193036)进行多态性检测。结果 两组IL-17基因4个SNP位点基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义(P> 0.05),在校正年龄、BMI、WC和血脂异常等因素后,两组研究对象在不同遗传模型下的基因型及等位基因频率分布差异亦无统计学意义(P> 0.05)。进一步分析显示,T2DM组rs2275913位点AA基因型FPG和HOMA-IR显著低于AG和GG基因型,三组间差异有统计学意义(P <0.05);而三组间BMI、FINS、HbA1c水平差异无统计学意义(P> 0.05)。此外,T2DM组rs3819024位点AA基因型WC、HOMA-IR显著高于GG基因型,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 IL-17基因rs2275913、rs3819024、rs4711998、rs8193036多态性与山西省东南地区汉族人群T2DM可能无关,IL-17 rs2275913位点AA基因型、rs3819024位点GG基因型分别与山西东南地区汉族T2DM患者FPG和HOMA-IR、WC和HOMA-IR相关,可能是IL-17影响糖代谢的潜在基因型。 展开更多
关键词 2型糖尿病 白细胞介素-17 基因多态性
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Ser-125突变型人白细胞介素-2在家兔乳腺中的瞬时表达
3
作者 李云华 王公金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期312-315,共4页
将Ser-125突变型人白细胞介素-2(Ser-125 hIL-2)cDNA与山羊β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG-Ser-125 hIL-2乳腺定位表达载体.试验取6只家兔,将表达载体经乳腺导管注入妊娠后期家兔乳腺内,进行瞬时表达.分别于家兔分... 将Ser-125突变型人白细胞介素-2(Ser-125 hIL-2)cDNA与山羊β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG-Ser-125 hIL-2乳腺定位表达载体.试验取6只家兔,将表达载体经乳腺导管注入妊娠后期家兔乳腺内,进行瞬时表达.分别于家兔分娩后1~10 d采奶,用ELISA方法检测乳汁中Ser-125 hIL-2含量.结果显示:注射空白对照和pIL-2质粒的2只家兔均未表达;2只直接注射表达载体的家兔中1只有表达,含量为0.06~0.53 μg/L,1只未表达;2只注射用脂质体包裹的表达载体的家兔均获表达,含量为0.18~2.36 μg/L.本试验结果证实将乳腺作为评估和筛选乳腺定位表达载体的可行性. 展开更多
关键词 Ser-125突变型人白细胞介素-2 Β-乳球蛋白 乳腺 瞬时表达 家兔
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白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究 被引量:19
4
作者 曹雪涛 章卫平 +4 位作者 周正芳 郑玲莉 于益芝 陶群 叶天星 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第5期284-288,共5页
为了开展IL-2基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究,须首先获得IL-2基因转移后、能够高分泌IL-2的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含563bp的小鼠IL-2全长cDNA的真核表达载体BMGNeo... 为了开展IL-2基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究,须首先获得IL-2基因转移后、能够高分泌IL-2的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含563bp的小鼠IL-2全长cDNA的真核表达载体BMGNeo-IL-2,采用磷酸钙DNA共沉淀法将BMGNeo-IL-2转移入B16黑色素瘤细胞中,通过G418抗性筛选、有限稀释法及活性检测,获得一株高分泌IL-2(506U/ml)克隆,并经Southern印迹法证实IL-2基因已转入该克隆中。结果表明IL-2基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化,但体内致瘤原性显著下降,从而为制备新型瘤苗打下了基础。 展开更多
关键词 白细胞介素2 基因转移 肿瘤 克隆
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猪α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量:11
5
作者 闫若潜 吴志明 +3 位作者 张志凌 盛敏 刘光辉 赵明军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期248-255,共8页
为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleuk... 为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleukin-2,PoIL-2)成熟肽基因连接,构建成PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因,并克隆入pGEM-T Easy载体,将PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体进行原核表达。通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中的PoIFN-α在不同细胞系上对不同病毒增殖活性的抑制作用;分别采用MTT法和PoIL-2 ELISA试验方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中PoIL-2的生物学活性。结果表明成功构建并克隆PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中得到高效表达,表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白相对分子质量约36.7 ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在细胞上具有与单一rPoIFN-α蛋白相近的抑制病毒增殖活性,其中在PK-15细胞上抗VSV的活性单位为1.891×104I U.mL-1,在Marc-145细胞上抑制高致病性PRRSV增殖的活性单位为905 U.mL-1;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有与单一rPoIL-2蛋白对照相近的生物学活性,可明显促进CTLL-2细胞的增殖,并可与抗PoIL-2单抗发生特异性免疫反应。这表明rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有rPoIFN-α和rPoIL-2蛋白双重的生物学活性,为基因工程抗病毒制剂的开发以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征等病毒性疾病的预防和治疗等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 白细胞介素2 重叠延伸PCR 嵌合基因 融合表达 活性
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藏猪白细胞介素-2基因的克隆及序列分析 被引量:10
6
作者 高荣 李惠 +6 位作者 武梅 王丽焕 丁晓涛 李平 李波 余庆 刘世贵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第6期3-5,共3页
将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c ... 将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c DNA全长为 5 0 3个碱基 ,开放阅读框 (ORF)为 4 6 5个碱基 ,编码 15 4个氨基酸 ,分子量为 17.4 kd,等电点为 5 .38;疏水氨基酸 4 0 .3% ,亲水氨基酸 37.0 % ,碱性氨基酸 11% ,酸性氨基酸 11.7%。此 c DNA与报道猪的 IL - 2同源性为 10 0 % ,证实克隆到了藏猪白细胞介素 - 2基因 c DNA。 展开更多
关键词 藏猪 白细胞介素-2 基因克隆 序列分析 免疫系统
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鸡白细胞介素-2基因的克隆与酵母表达质粒的构建 被引量:4
7
作者 张辉华 毕英佐 +2 位作者 曹永长 马静云 周庆丰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期102-105,共4页
从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为43... 从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为432bp,与预期大小一致,为鸡IL 2基因的编码区全长.将IL 2 T克隆重组质粒进行双酶切(ClaI与XbaI),回收IL 2片断插入同样酶切的毕赤酵母表达质粒pPICZα C,构建重组IL 2 C表达质粒,为鸡IL 2在毕赤酵母中的表达奠定基础. 展开更多
关键词 IL-2 白细胞介素-2 酵母表达 克隆 表达质粒 重组质粒 基因 毕赤酵母 酶切 菌落PCR
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鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达 被引量:3
8
作者 周继勇 陈吉刚 +2 位作者 王金勇 张德勇 郑肖娟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期419-423,共5页
鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达... 鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%. 展开更多
关键词 白细胞介素-2 基因表达 Pichia-methanolica酵母 细胞因子
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影响农杆菌介导白细胞介素-2基因转化番茄的因素研究 被引量:4
9
作者 葛艳辉 崔继哲 +1 位作者 于丽杰 宋文华 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期470-474,共5页
利用农杆菌介导法将白细胞介素-2基因(il-2)导入番茄中,对影响其转化的因素进行了分析。结果表明:农杆菌菌种(EHA105和C58C1)、外植体类型(子叶和下胚轴)、带有不同筛选标记(Kanr、PPTr、Hygr)的载体质粒几个因素对芽诱导分化及转化均... 利用农杆菌介导法将白细胞介素-2基因(il-2)导入番茄中,对影响其转化的因素进行了分析。结果表明:农杆菌菌种(EHA105和C58C1)、外植体类型(子叶和下胚轴)、带有不同筛选标记(Kanr、PPTr、Hygr)的载体质粒几个因素对芽诱导分化及转化均有影响。实验共接种转化2018个子叶和下胚轴外植体,获得了47株抗性再生株,对其进行il-2的PCR扩增检测,有44株呈阳性。PCR-Southern杂交证实PCR结果可靠,显示il-2基因已导入到番茄中。 展开更多
关键词 白细胞介素-2基因(il-2) 农杆菌介导法 番茄 遗传转化
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白细胞介素12及白细胞介素2对大鼠肝癌的联合基因治疗研究 被引量:2
10
作者 杨家和 范瑞芳 +5 位作者 钱其军 尤天庚 薛惠斌 苏长青 曹惠芳 吴孟超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第4期233-236,共4页
目的:研究利用小鼠白细胞介素12(mIL-12)和人白细胞介素2(hIL-2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法:构建携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射,观察对肝癌细胞的... 目的:研究利用小鼠白细胞介素12(mIL-12)和人白细胞介素2(hIL-2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法:构建携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射,观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果:携带mIL-12/hIL-2基因的重组逆转录病毒在肿瘤内局部注射明显抑制了肝肿瘤的生长。肝癌接种后第1,3,5,7天治疗组大鼠35d生存率分别为100%,100%,30%,10%。IL-12+IL-2治疗组平均生存时间明显高于生理盐水对照组(P<0.01)、逆转录病毒空载体对照组(P<0.01)、IL-2治疗组(P<0.01)和IL-12治疗组(P<0.05)。治疗后肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多。结论:肝癌局部注射携带mIL-12和hIL-2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长,早期治疗优于晚期治疗。 展开更多
关键词 白细胞介素12 白细胞介素2 肝肿瘤 基因治疗 肝内注射 动物实验
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插入外源性白细胞介素2基因的肿瘤细胞的抗肿瘤抗转移作用 被引量:3
11
作者 王文阁 王波 +5 位作者 史历 李仁 谭玉英 王吾如 张风山 巴德年 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第1期25-28,49,共5页
我们应用逆转录病毒载体pLXSN将人IL-2基因插入大鼠和人的肿瘤细胞.探讨了携带外源性IL-2基因的肿瘤细胞的体内外生物学特性及其意义.转基因细胞在体外培养中的细胞形态、生长特性以及软琼脂集落形成能力未见明显改变,但对杀伤性免疫活... 我们应用逆转录病毒载体pLXSN将人IL-2基因插入大鼠和人的肿瘤细胞.探讨了携带外源性IL-2基因的肿瘤细胞的体内外生物学特性及其意义.转基因细胞在体外培养中的细胞形态、生长特性以及软琼脂集落形成能力未见明显改变,但对杀伤性免疫活性细胞的杀伤更为敏感,与淋巴细胞混合培养的上清中测得更高水平的IFN和TNF活性.大鼠肿瘤细胞WBT插入IL-2基因后,其体内成瘤性明显下降.腹腔接种WBT/IL-2细胞可使大鼠获得抗肿瘤免疫能力以抑制皮下野生型WBT细胞的生长.携带IL-2基因的人和大鼠肿瘤细胞在裸鼠体内可以成瘤,但生长缓慢.具有高转移能力的Anip973细胞插入IL-2基因后,在裸鼠体内的转移性丧失.结果提示IL-2基因插入肿瘤细胞进行肿瘤基因治疗的有效性、可行性和发展潜能. 展开更多
关键词 基因治疗 白细胞介素2 瘤苗 细胞毒性T细胞
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白细胞介素2作为乙型肝炎病毒基因疫苗佐剂的效应 被引量:4
12
作者 李文波 姚志强 +1 位作者 周永兴 冯志华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期55-56,共2页
关键词 乙型肝炎病毒 基因疫苗 佐剂 白细胞介素2
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牦牛白细胞介素2(IL2)基因cDNA的分子克隆和表达研究(英文) 被引量:3
13
作者 付满良 李惠 +4 位作者 武梅 王丽焕 吴凯源 宁健可 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2005年第4期507-512,共6页
目的克隆牦牛免疫基因并研究其免疫特性。方法以伴刀豆球蛋白A(Con A)激活的体外培养的牦牛血液淋巴细胞,提取激活淋巴细胞的总RNA,用RT-PCR方法,从中克隆出白细胞介素2 cDNA,连接到T载体上测序,并亚克隆到pGEX4T-1表达质粒,在大肠杆菌... 目的克隆牦牛免疫基因并研究其免疫特性。方法以伴刀豆球蛋白A(Con A)激活的体外培养的牦牛血液淋巴细胞,提取激活淋巴细胞的总RNA,用RT-PCR方法,从中克隆出白细胞介素2 cDNA,连接到T载体上测序,并亚克隆到pGEX4T-1表达质粒,在大肠杆菌进行了重组表达,纯化融合表达YIL2产物,MTT比色法测定其体外刺激牦牛血液淋巴母细胞增殖的免疫活性。结果YIL2 cDNA序列分析显示:在其编码区442位点的一个碱基发生突变(由C突变为T),从而导致终止密码子(TAA)出现,使YIL2蛋白表达提前终止,与其它牛IL2蛋白相比少了8个氨基酸。MTT比色法测定结果表明重组牦牛IL2蛋白体外能显著促进牦牛淋巴母细胞的增殖。结论本实验成功克隆了牦牛IL2基因,其原核表达产物具有显著的免疫活性,这为研制新型免疫增强剂来提高牦牛对各种疾病的抵抗力,增强牦牛疫苗的免疫保护率奠定了基础。 展开更多
关键词 牦牛 白细胞介素2基因 克隆 原核表达 生物活性
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鸭白细胞介素-2基因克隆、原核表达及生物学活性检测 被引量:2
14
作者 张欣 崔敏 +2 位作者 房红莹 贺东生 罗满林 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期83-86,共4页
根据GenBank发表的鸭白细胞介素-2(IL-2)基因序列设计并合成了特异性引物,以经ConA诱导的广州白鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度为360 bp的目的基因片段.将该基因克隆到pMD18-Tsimple vector上,经酶切、PCR... 根据GenBank发表的鸭白细胞介素-2(IL-2)基因序列设计并合成了特异性引物,以经ConA诱导的广州白鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度为360 bp的目的基因片段.将该基因克隆到pMD18-Tsimple vector上,经酶切、PCR鉴定及序列测定,结果表明获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆.构建的表达质粒pET-IL-2经BamHI、XhoⅠ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约33 000处出现新的蛋白条带,Western-blotting分析表明,融合蛋白能够被抗His单克隆抗体识别,体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性. 展开更多
关键词 白细胞介素-2 基因克隆 原核表达 生物学活性
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猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究 被引量:2
15
作者 杨璐一 肖永乐 +5 位作者 万小平 罗公明 王晔 陈义辉 孙文魁 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期167-173,共7页
目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染... 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。 展开更多
关键词 猪融合白细胞介素4 6基因 白细胞介素2基因 共表达 免疫 小鼠
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中国地方品种丝羽乌骨鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析 被引量:4
16
作者 陈吉刚 周继勇 郑肖娟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期21-23,共3页
鸡白细胞介素 2 (ChIL_2 )是近年来新发现的一类细胞因子。根据Sundick等发表的鸡IL_2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾脏淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT_PCR方法扩增和克隆了我国地方品种丝羽乌骨鸡IL_2cDNA。丝羽乌骨鸡I... 鸡白细胞介素 2 (ChIL_2 )是近年来新发现的一类细胞因子。根据Sundick等发表的鸡IL_2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾脏淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT_PCR方法扩增和克隆了我国地方品种丝羽乌骨鸡IL_2cDNA。丝羽乌骨鸡IL_2基因由 73 4nt组成 ,编码一由 1 43个氨基酸组成的前体蛋白。基因 5’端含有 1 7个核苷酸和3’端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3’UTR中含有 4个重复的“ATTTA”序列。编码蛋白氨基酸与Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8~ 3 2位 ,这一区域丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡相同 ,Obese和SC鸡相同。基因系统进化树分析表明丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,Obese和SC鸡具有很近的亲缘关系。中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 1 3 3位发生了氨基酸突变 ,我们推测这可能与该品种鸡具有很强的抗病能力有关。 展开更多
关键词 中国 地方品种 丝羽乌骨鸡 白细胞介素2 遗传进化 基因克隆 细胞因子 免疫佐剂
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人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量:3
17
作者 程小款 杜恺 +2 位作者 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 1995年第5期326-332,共7页
删除人白细胞介素-2受体α链cDNA中编码胞质内13个氨基酸及跨膜区19个氨基酸残基的DNA片段后,接上人工合成的终止寡核苷酸片段,改建后的cDNA与真核表达载体pRc/CMV重组成质粒pCMV/rsIL2R。用电打... 删除人白细胞介素-2受体α链cDNA中编码胞质内13个氨基酸及跨膜区19个氨基酸残基的DNA片段后,接上人工合成的终止寡核苷酸片段,改建后的cDNA与真核表达载体pRc/CMV重组成质粒pCMV/rsIL2R。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染CHO细胞,经G418筛出表达Neo基因的克隆20株,通过mRNA狭缝杂交及ELISA检测,有5株能稳定表达分泌型α链mRNA及蛋白,其中4株细胞培养上清中的IL2Rα链的含量达1400U/ml以上。 展开更多
关键词 白细胞介素2 受体 重组克隆 真核基因表达
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中国地方品种鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析(英文) 被引量:2
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作者 周继勇 陈吉刚 +1 位作者 王金勇 JIMMY K WANG 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期384-389,共6页
鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维... 鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维茵商品肉鸡IL 2cDNA .仙居鸡、丝羽乌骨鸡和艾维茵商品肉鸡IL 2基因的编码区均由 42 9nt组成 ,编码一个由 143个氨基酸组成的前体蛋白 .基因 5′端含有 17个核苷酸 ,3′端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3′ UTR中含有 5个重复的“ATTTA”序列 .编码蛋白氨基酸与来自GenBank的Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8~ 3 2位 .而这一区域仙居鸡和丝羽乌骨鸡的编码氨基酸序列与Kestrel来杭鸡相同 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡相同 .基因系统进化树分析表明 ,仙居鸡、丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡具有很近的亲缘关系 .中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 13 展开更多
关键词 白细胞介素2 基因 克隆 遗传进化 系统进化 品种
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牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 申宏旺 希尼尼根 +5 位作者 苏丽娅 关平原 李平安 乌日汗 李海念 于富丽 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第4期12-13,共2页
关键词 白细胞介素-2 序列分析 克隆 基因 生物学活性 T淋巴细胞 细胞因子 免疫细胞
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纯化基因重组白细胞介素-2的初步研究 被引量:1
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作者 阎颖 郝茜 +4 位作者 范国梁 赵秋雯 刘迎五 王建林 万冬林 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期325-327,共3页
采用羟基磷灰石 (HAP)作为填料 ,以pH 6 8的磷酸盐缓冲液为流动相 ,用制备型高效液相色谱来分离提纯基因重组白细胞介素 2 (IL 2 ) ,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳测定IL 2的纯度 ,测定其活性为1× 1 0 6 U/mg。该法对IL ... 采用羟基磷灰石 (HAP)作为填料 ,以pH 6 8的磷酸盐缓冲液为流动相 ,用制备型高效液相色谱来分离提纯基因重组白细胞介素 2 (IL 2 ) ,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳测定IL 2的纯度 ,测定其活性为1× 1 0 6 U/mg。该法对IL 2的纯化、含量测定及活性测定等效果良好。 展开更多
关键词 基因重组白细胞介素-2 分离提纯 HAP HPLC
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