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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
1
作者 韩京哲 黄萌萌 +11 位作者 许萌萌 王国栋 张玉龙 刘润杭 于航博 吴子文 柯二靖 凌丹 于晓雪 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期66-73,共8页
为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂... 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜蛋白gp90 原核表达 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒感染情况调查 被引量：7
2
作者 任玉鹏 张焕容 +3 位作者 王小楠 索化夷 汤承 岳华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期162-166,共5页
对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃... 对四川部分鸡场禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染情况进行调查,为鸡群REV净化和防控提供依据。采用文献报道的PCR方法,分别对来自四川新津、温江、眉山、大邑、崇州和德阳等地6个肉种鸡群共160只外表健康鸡或生长发育不良、具有腺胃炎症状的鸡只样本进行PCR检测,同时将扩增片段克隆测序以确定其正确性。结果表明,6个鸡群REV群体阳性率均为100%(6/6),其中外表健康鸡REV检出率为65.8%(79/120),患腺胃炎病鸡REV检出率为82.5%(33/40);同一只鸡不同组织器官样本的检测结果显示,REV在骨髓和法氏囊中的检出率最高,分别为30%(36/120)和28.3%(34/120),提示骨髓和法氏囊是REV检测的主要靶器官;患腺胃炎鸡的腺胃中REV检出率达25%(10/40),而外表健康鸡腺胃样本REV阳性率仅0.8%(1/120),表明REV是导致鸡腺胃炎的重要病原之一。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 靶器官 腺胃炎 PCR检测
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量：6
3
作者 庄金秋 毕研丽 +3 位作者 梅建国 王金良 苗立中 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期36-39,共4页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量：6
4
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性 被引量：2
5
作者 王一新 栾怀彪 +4 位作者 许书珍 李阳 常爽 崔治中 赵鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期855-859,共5页
为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示... 为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 全基因组 序列分析 U3区
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1
6
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 祁小乐 高玉龙 高立 邓小芸 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞... 为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 ENV基因 原核表达 纯化 多克隆抗体
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应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 被引量：2
7
作者 庄金秋 梅建国 +3 位作者 毕研丽 王金良 苗立中 沈志强 《中国动物检疫》 CAS 2012年第2期52-54,共3页
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法。经与间接免疫荧光法进行同步比较试... 为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,而且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 PCR 检测
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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白YxxL基序及其突变体病毒的拯救 被引量：1
8
作者 田晓彦 范中雷 +4 位作者 鲍衍清 秦爱建 邵红霞 钱琨 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2014年第17期20-23,共4页
禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白Env与病毒感染、复制、致病性密切相关,然其分子基础尚不清楚。本研究对NCBI中不同REV毒株Env序列分析发现,其胞浆区存在一个高保守且可能与病毒致病性有关的酪氨酸基序YxxL。通过定点突变以及分... 禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白Env与病毒感染、复制、致病性密切相关,然其分子基础尚不清楚。本研究对NCBI中不同REV毒株Env序列分析发现,其胞浆区存在一个高保守且可能与病毒致病性有关的酪氨酸基序YxxL。通过定点突变以及分子传染性克隆技术,构建了REV Env蛋白YxxL基序2个突变体(Y突变为F,L突变为A)。通过转染DF1细胞,并经间接免疫荧光以及测序鉴定,拯救并获得了2个REV突变体病毒,分别命名为FxxL、YxxA。Env蛋白中YxxL保守基序的发现以及相应突变体病毒的拯救为研究REV Env蛋白及其YxxL基序在REV致病中分子作用基础提供了材料。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜蛋白 YxxL 定点突变 病毒拯救
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禽网状内皮组织增生症病毒MD-2株感染性克隆的构建与突变分析 被引量：1
9
作者 黄小洁 孔冬妮 +4 位作者 刘丹 陈晓春 杨飞 侯力丹 李俊平 《中国家禽》 北大核心 2020年第1期38-43,共6页
为构建禽网状内皮组织增生症病毒(REV)MD-2株的感染性克隆,将MD-2株的前病毒基因组全长克隆至pMD18-T Simple载体中构建MD-2全长质粒,经转染CEF细胞后进行病毒拯救及鉴定,并对拯救病毒进行了生物学特性研究。结果表明,成功构建了MD-2全... 为构建禽网状内皮组织增生症病毒(REV)MD-2株的感染性克隆,将MD-2株的前病毒基因组全长克隆至pMD18-T Simple载体中构建MD-2全长质粒,经转染CEF细胞后进行病毒拯救及鉴定,并对拯救病毒进行了生物学特性研究。结果表明,成功构建了MD-2全长质粒,拯救病毒感染CEF细胞后用间接免疫荧光试验检测到病毒抗原;拯救病毒的生长特性与亲本病毒相比无明显差异。随后对env基因进行了多个位点的定点突变,并拯救出相应的突变株,结果显示env基因第1433位碱基突变后不能拯救出病毒,推断1433位的突变为致死性突变。MD-2株感染性克隆的构建和病毒拯救的研究为继续研究REV基因和蛋白功能提供了技术支持。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 感染性克隆 构建 突变
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禽网状内皮组织增生症病毒单抗制备及在外源病毒检测中的应用 被引量：1
10
作者 陈晓春 赵炜 +5 位作者 苏佳 王嘉 侯力丹 黄小洁 吴华伟 李俊平 《中国兽药杂志》 2022年第6期1-8,共8页
将禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白gp90(SU)的基因合成后连接至原核表达载体中进行表达,获得REV-SU蛋白,通过Ni柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得1株分泌特异性抗REV-SU蛋白的单克隆抗体杂交瘤细... 将禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白gp90(SU)的基因合成后连接至原核表达载体中进行表达,获得REV-SU蛋白,通过Ni柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得1株分泌特异性抗REV-SU蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞系(2A2株),该细胞株制备的腹水与不同REV毒株具有良好的反应性,荧光效价可达1∶51200,与不同禽白血病病毒毒株和其他常见禽的病原均没有交叉反应,特异性良好。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光法能检出至少5 TCID_(50)REV感染,与多克隆抗体作为检测一抗具有同等的效力,且检测背景更加纯净,适用于外源性REV检验。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 外源病毒检验 gp90 单克隆抗体 间接免疫荧光法
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禽网状内皮组织增生症病毒检测方法研究进展 被引量：2
11
作者 庄金秋 梅建国 沈志强 《家禽科学》 2013年第10期45-50,共6页
禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是危害养禽业的一种重要病毒性肿瘤病。本文概述了禽网状内皮组织增生症病毒(REV)实验室检测方法的研究进展。在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗... 禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是危害养禽业的一种重要病毒性肿瘤病。本文概述了禽网状内皮组织增生症病毒(REV)实验室检测方法的研究进展。在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等。在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的PCR、荧光定量PCR、LAMP技术及斑点分子杂交等。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 检测 研究进展
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禽网状内皮组织增生症病毒检测技术研究进展 被引量：1
12
作者 邓小芸 《北方牧业》 2022年第18期28-28,共1页
禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发... 禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发或继发感染其他疫病。作为逆转录病毒,REV基因组容易整合到马立克病病毒、禽痘病毒等的基因组中,还能通过鸡胚污染相关疫苗。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 继发感染 马立克病病毒 禽痘病毒 感染鸡 淋巴组织 网状细胞 免疫抑制
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不可忽视的禽网状内皮组织增生症病毒
13
作者 张月 兰邹然 +1 位作者 王贵升 孙圣福 《中国畜禽种业》 2012年第10期129-130,共2页
禽网状内皮组织增生症(RE)是由网状内皮组织增生症病毒引起的一种传染病,此病性质为肿瘤性,会引起病禽多种临床症状,贫血、消瘦、生长缓慢等。目前,对本病尚无有效治疗方法。因此,对REV的结构功能的研究,有效的检测鉴定技术的研发是目... 禽网状内皮组织增生症(RE)是由网状内皮组织增生症病毒引起的一种传染病,此病性质为肿瘤性,会引起病禽多种临床症状,贫血、消瘦、生长缓慢等。目前,对本病尚无有效治疗方法。因此,对REV的结构功能的研究,有效的检测鉴定技术的研发是目前禽网状内皮组织增生症防控工作的重点。 展开更多
关键词 禽 禽网状内皮组织增生症病毒 免疫抑 鉴定检测技术
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禽网状内皮组织增生症病毒感染雏鸡血液T细胞数量和细胞因子含量变化 被引量：2
14
作者 张国勍 边洋 +4 位作者 高海婷 刘超男 高雪丽 吕晓萍 郑世民 《动物医学进展》 北大核心 2021年第7期69-74,共6页
为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,... 为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,以及其免疫相关因子含量等动态变化的检测,系统地研究REV感染对SPF雏鸡血液细胞免疫功能的影响。结果显示,REV感染SPF雏鸡外周血液CD4+T淋巴细胞在整个试验期间均明显低于对照雏鸡(P<0.05),而CD8+T淋巴细胞数量除病毒感染后第7天明显增加(P<0.01)外,其余被检时间点均显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),CD4+与CD8+T淋巴细胞比值在病毒感染早期较对照雏鸡明显增加,而病毒感染后期显著低于对照雏鸡,与相应对照雏鸡比较,REV感染SPF雏鸡血液IL-2和IFN-γ含量明显降低(P<0.05),而IL-4和IL-10含量显著上升(P<0.05)。结果表明,REV感染所致的SPF雏鸡血液免疫功能抑制与其降低雏鸡外周血液免疫增强因子含量,增加免疫抑制因子含量及减少CD4+和CD8+T淋巴细胞数量密切相关。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 SPF雏鸡 外周血液 T淋巴细胞 细胞因子
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多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用 被引量：2
15
作者 缪佶 鲍衍清 +2 位作者 邵红霞 钱琨 秦爱建 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第1期1-8,共8页
本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）检测方法，并对REV在鸡胚成纤维细胞（chick embryo fibroblast，CEF）上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的... 本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）检测方法，并对REV在鸡胚成纤维细胞（chick embryo fibroblast，CEF）上的增殖动态规律进行研究。分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物，利用重组质粒作为模板，绘制3种不同基因的标准曲线。检测结果显示，本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法，所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系，且最低检出量为101copies。REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测，发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程，此后病毒大量复制，表现出明显的增长趋势。该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法，同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 鸡胚成纤维细胞 实时荧光PCR 复制
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禽网状内皮组织增生症病毒p30蛋白的表达及检测 被引量：2
16
作者 张石磊 于圣青 +1 位作者 陈鸿军 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期15-19,共5页
根据禽网状内皮组织增生症病毒SNV株的前病毒基因组cDNA序列设计并合成1对引物,以pPB101质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒p30基因片段。将PCR产物克隆入表达载体pCold-HF中,构建的原核表达质粒pCold-p30转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,p3... 根据禽网状内皮组织增生症病毒SNV株的前病毒基因组cDNA序列设计并合成1对引物,以pPB101质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒p30基因片段。将PCR产物克隆入表达载体pCold-HF中,构建的原核表达质粒pCold-p30转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,p30蛋白呈现可溶性表达。用表达产物免疫6周龄BALB/c小鼠,制备p30抗体,经Westernblot和间接免疫荧光法检测,结果发现,原核表达的SNV株p30蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 P30 原核表达
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禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测 被引量：1
17
作者 孔斌 陈雪锋 +1 位作者 唐德宏 胡敬东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期963-966,共4页
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处... 建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。 展开更多
关键词 肉鸡 禽网状内皮组织增生症病毒 白细胞介素18 荧光定量RT-PCR
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及检测 被引量：1
18
作者 牛星 韦平 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期296-300,306,共6页
根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)SNV株的前病毒基因组cDNA序列,设计并合成1对引物,以SNV株前病毒cDNA全基因组克隆为模板,通过PCR技术扩增出该病毒囊膜糖蛋白env基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6P-1载体中... 根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)SNV株的前病毒基因组cDNA序列,设计并合成1对引物,以SNV株前病毒cDNA全基因组克隆为模板,通过PCR技术扩增出该病毒囊膜糖蛋白env基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6P-1载体中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的下游,将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在1.0mmol/LIPTG(37℃)诱导下,env基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为72kD,并经Western-blot检测,发现在72kd目标条带处呈现一棕红色印迹。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 ENV基因 融合蛋白 表达 间接荧光
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鸡肿瘤病料中马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒共感染的研究 被引量：44
19
作者 张志 崔治中 +1 位作者 姜世金 周蛟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期274-278,共5页
采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可... 采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应 (PCR)和斑点杂交 (Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的 1 3株MDV野毒株中 ,有 4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应 ,又可以用PCR扩增出REV的LTR ;另有 4株培养物能扩增出REV的LTR ,但在IFA中却不与REV的单抗反应。结果表明我国MD肿瘤中存在着REV的共感染 ,且我国MDV某些野毒株的基因组中有可能已经整合进了REV的LTR序列。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 禽网状内皮组织增生症病病毒 共感染
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禽网状内皮组织增生症病毒山东SD2101株的分离鉴定及全基因组序列和致病性分析 被引量：4
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作者 桑淼 盖小君 +5 位作者 刘玲 尹明荣 张传强 李玉燕 郭龙宗 王一新 《中国动物检疫》 CAS 2022年第6期37-43,72,共8页
禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)是一种常见的禽肿瘤性病毒,可诱发感染鸡群免疫抑制,给我国养禽业带来巨大经济损失。本试验运用DF-1细胞接种方法,在山东省某父母代白羽肉种鸡场鸡群中分离到1株REV,将其命名... 禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)是一种常见的禽肿瘤性病毒,可诱发感染鸡群免疫抑制,给我国养禽业带来巨大经济损失。本试验运用DF-1细胞接种方法,在山东省某父母代白羽肉种鸡场鸡群中分离到1株REV,将其命名为SD2101株。为掌握SD2101株基因组遗传演化特征,设计合成6对引物,通过PCR扩增获得了SD2101株的前病毒全基因组序列,并与GenBank下载的参考毒株进行了序列比对和遗传进化分析。结果显示:SD2101株前病毒全基因组具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构,与2011年分离自江苏省的鸡源REV野毒株HA1101同源性最高;遗传进化分析发现,SD2101株与大部分国内分离株处于同一进化支上。为了解SD2101株的致病性,将分离毒株接种于1日龄SPF鸡,通过体质量、免疫器官指数和灭活疫苗免疫应答等指标进行评价。结果显示,SD2101株对1日龄SPF鸡的生长和免疫功能具有明显的抑制作用。综上,与参考毒株相比,SD2101株基因组序列变异程度较小,具有一定致病作用,提示在生产中应加强对REV的关注和监测。本研究为REV的流行病学研究提供了信息资料。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 分离鉴定 序列分析 致病性
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