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核糖核酸酶抑制因子对H_2O_2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系C6的影响 被引量:11
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作者 潘东宁 傅攀峰 +1 位作者 王红 崔秀云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期767-771,共5页
核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同... 核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同浓度的H2 O2 分别作用于转染有RIcDNA并且RI过表达的C6细胞和正常C6细胞 ,对比损伤前后 2者的细胞存活率、LDH漏出量、细胞内GSH和MDA含量差别 ,以及细胞内抗氧化酶类GPX、CAT和GST活性的差别 .结果表明 ,与正常C6细胞相比 ,RI过表达的C6细胞在H2 O2 作用下存活率高 ,LDH漏出量、MDA含量明显减少 ,而细胞内GSH较多 ;RI过表达的C6细胞在损伤前后均表现出更强的CAT和GST活性 .提示RI具有抗氧化功能 ,能够减轻H2 O2 所致的细胞过氧化损伤 . 展开更多
关键词 过氧化氢 抗氧化活性 核糖核酸酶抑制因子 H2O2损伤 大鼠 神经胶质细胞c6
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体外柴胡皂苷元d对C_6大鼠神经胶质瘤细胞前列腺素E_2生成的影响 被引量:5
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作者 吕晓川 白林 王晓蕾 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期824-826,共3页
目的 观察柴胡皂苷元d(saikogenind ,SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞体外前列腺素E2 (PGE2 )生成的影响。方法 用放射性免疫法测定细胞产生的PGE2 ,液体闪烁测量法测定14 C花生四烯酸 (AA)标记细胞释放14 C AA。结果 SGD在 1~ 2 0 μmo... 目的 观察柴胡皂苷元d(saikogenind ,SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞体外前列腺素E2 (PGE2 )生成的影响。方法 用放射性免疫法测定细胞产生的PGE2 ,液体闪烁测量法测定14 C花生四烯酸 (AA)标记细胞释放14 C AA。结果 SGD在 1~ 2 0 μmol·L-1范围内 ,抑制由钙离子载体A2 3187诱发C6大鼠神经胶质瘤细胞前列腺素E2 (prostaglandinE2 ,PGE2 )释放 ,其IC50 为 3μmol·L-1,但对花生四烯酸 (arachi donicacid ,AA)释放无影响。SGD不影响细胞微粒体组分将AA转化为PGE2 。结论 SGD抑制由钙离子载体A2 3187诱发体外C6大鼠神经胶质瘤细胞PGE2 产生 ,但不抑制AA释放和直接抑制环氧脂酶 (cyclooxygenase ,COX)活性。 展开更多
关键词 柴胡皂苷元d 前列腺素E2 环氧脂酶 花生四烯酸 c6大鼠神经胶质细胞
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丙戊酸钠慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞释放谷氨酸和谷氨酰胺的影响
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作者 高杨 雷林生 吴曙光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第12期1257-1259,1262,共4页
目的本实验通过研究丙戊酸钠(VPA)慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞释放谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)的影响,来探讨丙戊酸钠的抗癫痫机制以及停药反跳机制。方法用含50 mg/L VPA的DMEM培养基将C6细胞培养2周后制成VPA慢性作用模型,采... 目的本实验通过研究丙戊酸钠(VPA)慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞释放谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)的影响,来探讨丙戊酸钠的抗癫痫机制以及停药反跳机制。方法用含50 mg/L VPA的DMEM培养基将C6细胞培养2周后制成VPA慢性作用模型,采用高效液相色谱技术测定VPA慢性作用及停药后C6神经胶质瘤细胞Glu和Gln的释放量。结果VPA的慢性作用可促进C6细胞Glu的释放, VPA停药后Glu的释放水平迅速下降到明显低于正常对照组水平,至停药48h又开始明显上升至接近对照组水平;VPA的慢性作用使C6细胞Gln释放减少,停药后Gln释放逐渐增加,逐步向对照组水平恢复。结论VPA慢性作用可促进C6细胞Glu的释放、抑制Gln的释放,停药后Glu释放呈反跳性变化,而停药后Gln释放的变化较平稳,可能与停药反跳没有直接关系。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 慢性作用 停药后 c6神经胶质细胞 谷氨酸 谷氨酰胺 抗癫痫药
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DL型丁胱亚磺酰亚胺对大鼠C_6神经胶质瘤细胞放射增敏效应研究
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作者 徐慧琴 赵维中 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1174-1177,共4页
目的 研究有氧及乏氧状态下DL型丁胱亚磺酰亚胺(DL BSO)对大鼠C6神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。方法 以60 Coγ射线为放射源 ,分有氧和乏氧状态下单纯照射组、加药照射组。采用细胞克隆形成方法观察DL BSO对神经胶质瘤细胞的放射增... 目的 研究有氧及乏氧状态下DL型丁胱亚磺酰亚胺(DL BSO)对大鼠C6神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。方法 以60 Coγ射线为放射源 ,分有氧和乏氧状态下单纯照射组、加药照射组。采用细胞克隆形成方法观察DL BSO对神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。结果 有氧状态下 ,DL BSO的放射增敏作用和药物作用时间有关。 0 1mmol·L-1DL BSO用药 2、6、12h ,未能观察到放射增敏作用 ,放射增敏作用仅在用药后 2 4、4 8h出现。乏氧状态下 ,0 1mmol·L-1DL BSO用药后 ,各时间点 (2~ 4 8h)均可见放射增敏效应。有氧、乏氧状态下不同浓度DL BSO的放射增敏作用和药物浓度有关。结论 DL BSO对有氧及乏氧状态下的大鼠C6神经胶质瘤细胞均有放射增敏作用。离体状态下 ,DL BSO主要表现出乏氧增敏作用 ,并呈现一定的时间、浓度依赖关系。 展开更多
关键词 DL型丁胱亚磺酰亚胺 大鼠c6神经胶质细胞 放射增敏效应
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基因重组去整合素rAdinbitor对C6神经胶质瘤细胞FAK-Ras/MAPK通路的影响 被引量:1
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作者 赵霆 李金萍 +2 位作者 胡燕荣 洪艳 赵宝昌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期702-708,共7页
rAdinbitor为大连医科大学生物化学与分子生物学教研室从旅顺产白眉蝮蛇毒腺中采用克隆技术得到的去整合素.之前研究已证明rAdinbitor具有抑制C6神经胶质瘤细胞增殖、促进C6神经胶质瘤细胞凋亡的作用.rAdinbitor对C6细胞作用的分子机制... rAdinbitor为大连医科大学生物化学与分子生物学教研室从旅顺产白眉蝮蛇毒腺中采用克隆技术得到的去整合素.之前研究已证明rAdinbitor具有抑制C6神经胶质瘤细胞增殖、促进C6神经胶质瘤细胞凋亡的作用.rAdinbitor对C6细胞作用的分子机制需要进一步研究.在此研究中,用E.coliBL21/pET23b-adinbitor表达rAdinbitor,通过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析柱对rAdinbitor进行纯化,纯化蛋白经Western blotting鉴定.用纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导C6细胞.通过免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度的rAdinbitor对FN诱导的C6细胞中黏着斑激酶(FAK)、MEK1/2、Caspase-3的表达以及对FAK、ERK1/2活性的影响.研究表明:各实验组不同浓度的rAdinbitor均能明显降低FAK、MEK1/2的表达,对Caspase-3的表达起促进作用,并对ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用;除10mg/LrAdinbitor对FAK磷酸化无明显抑制作用外,其余浓度的rAdinbitor对FAK的磷酸化起了明显抑制作用.这说明rAdinbitor对FAK及其下游Ras-MAPK传导通路的抑制在其抑制C6增殖过程中起了重要作用,Caspase-3表达升高提示,rAdinbitor可能通过抑制ILK及其下游的PI-3K/Akt途径起到了促进细胞凋亡的作用. 展开更多
关键词 白眉蝮蛇 去整合素 rAdinbitor c6神经胶质细胞 纤连蛋白(FN)
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真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin的构建及其在神经胶质瘤细胞内的表达 被引量:9
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作者 张丽英 李青 +4 位作者 陈广生 林圣彩 叶菁 司少艳 张丰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期408-410,共3页
目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色... 目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:成功地构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究Axin对肿瘤的生物学作用以及Axin在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 AXIN EGFP 真核表达载体 神经胶质瘤细胞c6
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线粒体氯通道蛋白在过氧化氢诱导C6细胞损伤中的作用 被引量:3
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作者 孔晓霞 李扬 +3 位作者 张宏宇 袁兆新 康劲松 孙连坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期481-483,共3页
目的:利用过氧化氢(H2O2)复制神经胶质瘤C6细胞损伤模型,探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4的变化。方法:应用MTT法检测H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测培养液上清LDH释放率;RT-PCR检测CLIC4的mRNA表达;Western blotting方法检测CL... 目的:利用过氧化氢(H2O2)复制神经胶质瘤C6细胞损伤模型,探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4的变化。方法:应用MTT法检测H2O2作用的C6细胞生存率;紫外分光光度法检测培养液上清LDH释放率;RT-PCR检测CLIC4的mRNA表达;Western blotting方法检测CLIC4的蛋白水平。结果:500μmol/L H2O2作用C6细胞存活率与对照组相比未见明显差异;LDH释放率高于对照组;CLIC4蛋白水平明显强于对照组。而1000μmol/LH2O2作用的C6细胞存活率明显低于对照组;LDH释放率明显高于对照组;CLIC4蛋白水平强于对照组。结论:CLIC4可能参与HO诱导神经胶质瘤细胞损伤的机制。 展开更多
关键词 过氧化氢 神经胶质c6细胞 线粒体氯通道
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刃天青法检测mtDNA缺失C6ρ0细胞的活力
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作者 靳有才 张一鸣 +2 位作者 李忌 王洪伦 白波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1136-1141,共6页
目的建立以刃天青为氧化还原指示剂测定mtDNA被完全清除的大鼠胶质瘤C6细胞(C6ρ0)增殖及活力的方法,并对其有效性进行验证。方法取对数生长期的C6ρ0细胞,采用刃天青法比较不同细胞数量、刃天青浓度、孵育时间对荧光强度的影响,优化测... 目的建立以刃天青为氧化还原指示剂测定mtDNA被完全清除的大鼠胶质瘤C6细胞(C6ρ0)增殖及活力的方法,并对其有效性进行验证。方法取对数生长期的C6ρ0细胞,采用刃天青法比较不同细胞数量、刃天青浓度、孵育时间对荧光强度的影响,优化测定C6ρ0细胞活力的条件。比较MTT法和刃天青法测定C6ρ0和C6细胞活力的灵敏性,并以天然化合物熊果酸对C6ρ0和C6细胞活力的影响对该方法进行验证。结果 C6ρ0细胞数为0~30 000/孔,25μg/mL刃天青培养基避光孵育1~4 h,细胞数量与荧光强度呈良好线性关系,灵敏性高于MTT法。熊果酸0~50μmol/L对C6ρ0和C6细胞具有增殖抑制作用,且增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05),IC50分别为20.82、14.62μg/mL。结论刃天青法灵敏、简单、安全无毒、经济便宜、重复性好,特别适用于生长代谢缓慢的细胞系,可用于其细胞增殖测定、活力分析及化合物细胞毒的高通量筛选。 展开更多
关键词 刃天青 神经胶质c6细胞 c6ρ0细胞 细胞活力 熊果酸
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内源性大麻素2-AG促进HSP70基因的热应激表达 被引量:1
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作者 吴娟 屈明玥 +2 位作者 张伟 王登高 王颖莹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第15期1458-1461,共4页
目的探讨内源性大麻素对热应激反应是否存在调控作用,及其可能的受体调控机制。方法以不同浓度(10-7、10-6、10-5mol/L)内源性大麻素2-AG(2-Arachidonylglycerol)预处理大鼠胶质瘤C6细胞1h,热刺激(42℃水浴)1h,通过RT-PCR及Western blo... 目的探讨内源性大麻素对热应激反应是否存在调控作用,及其可能的受体调控机制。方法以不同浓度(10-7、10-6、10-5mol/L)内源性大麻素2-AG(2-Arachidonylglycerol)预处理大鼠胶质瘤C6细胞1h,热刺激(42℃水浴)1h,通过RT-PCR及Western blot检测热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的mRNA及蛋白表达水平;同时观察特异性受体拮抗剂AM251或AM630的拮抗效应,探讨信号通路机制。结果内源性大麻素2-AG可显著促进热刺激处理的C6细胞HSP70基因及蛋白的表达,该调控效应由CB1介导。结论一定浓度的内源性大麻素2-AG对热刺激处理的C6细胞内HSP70基因的表达有明显促进效应,表明2-AG对细胞热应激反应可能具有一定的调控能力;同时,在C6细胞内,该调控效应主要由CB1介导。 展开更多
关键词 内源性大麻素2-AG 神经胶质c6细胞 热应激反应 HSP70 大麻素受体cB1
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