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水稻丝氨酸羟甲基转移酶基因OsSHMT5克隆与功能分析
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作者 陈杰 杨天宇 黄新元 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第2期209-220,共12页
水稻中已克隆到OsSHMT4(OsCADT1),该基因编码丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT),可调控硫酸盐/硒酸盐吸收和同化,其高度同源基因OsSHMT5的功能尚不清楚。本研究基于反向遗传学研究方法,对水稻OsSHMT5基因进行分子克隆,发现OsSHMT5与OsSHMT4(OsCA... 水稻中已克隆到OsSHMT4(OsCADT1),该基因编码丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT),可调控硫酸盐/硒酸盐吸收和同化,其高度同源基因OsSHMT5的功能尚不清楚。本研究基于反向遗传学研究方法,对水稻OsSHMT5基因进行分子克隆,发现OsSHMT5与OsSHMT4(OsCADT1)的同源性高达84%。亚细胞定位结果表明,OsSHMT5蛋白定位于细胞核。利用CRISPR/Cas9技术构建OsSHMT5基因敲除突变体,发现OsSHMT5基因敲除突变体的地上部或地下部中总硫/总硒及各形态硒含量与野生型相比无显著差异。基于转录组水平分析发现,OsSHMT5对水稻硫酸盐/硒酸盐吸收和同化相关基因的表达无显著调控作用。在水稻地下部,OsSHMT5可能具有四吡咯结合、血红素结合、氧化还原酶活性、电子转移活性和铁离子结合等分子功能;在地上部,OsSHMT5可能具有转录调节因子活性、分子功能调节因子、内肽酶调节活性、肽酶抑制剂活性、铜离子结合等分子功能。本研究结果为水稻中OsSHMT家族功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 羟甲基转移 OsSHMT5基因 硫元素 硒元素
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姜黄中流感病毒神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选
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作者 丁一迪 陈芝蓄 +6 位作者 朱雪艳 曾翰霖 王珍 涂正超 汪锦才 张婷婷 江正瑾 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 北大核心 2025年第2期138-150,共13页
目的:建立筛选中药提取物中具有良好抗流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性化合物的模型。方法:通过抗神经氨酸酶的活性测试方法发现148种中药提取物中的姜黄(Curcuma longa L.)表现出显著活性,结合高分辨活性轮廓分析(at-line na... 目的:建立筛选中药提取物中具有良好抗流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性化合物的模型。方法:通过抗神经氨酸酶的活性测试方法发现148种中药提取物中的姜黄(Curcuma longa L.)表现出显著活性,结合高分辨活性轮廓分析(at-line nanofractionation,ANF)平台从姜黄提取物中筛出活性成分,应用质谱解析明确活性成分结构,应用分子对接阐明作用基础。结果:姜黄提取物对神经氨酸酶的抑制率为92%,对奥司他韦敏感型神经氨酸酶(oseltamivir-sensitive neuraminidase,NAS)也有一定的抑制作用。从姜黄提取物筛出的8个活性成分中,姜黄素类化合物发挥主要作用。姜黄素类化合物作用方式与奥司他韦不同,苯环上的羟基和碳链上的羰基是发挥作用的重要基团。结论:ANF技术在抗流感病毒活性成分的筛选方面可发挥重要作用。本研究可为姜黄在抗流感病毒临床应用提供科学依据,也为抗流感病毒药物的发现提供新技术和新思路。 展开更多
关键词 姜黄 高分辨活性轮廓分析 神经抑制剂 分子对接
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云南金花茶苯丙氨酸解氨酶基因CfPAL的克隆及体外酶活鉴定
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作者 王何泽 母德锦 +2 位作者 陈思慧 田自能 唐军荣 《山东农业科学》 北大核心 2025年第5期54-63,共10页
为给云南金花茶(Camellia fascicularis)调控黄酮类化合物分子育种提供基因来源及依据,本研究对从前期转录组测序数据获得的苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆和生物信息学分析,并利用体外酶活测定进行功能鉴定。结果从云南金花茶中克隆获得Cf... 为给云南金花茶(Camellia fascicularis)调控黄酮类化合物分子育种提供基因来源及依据,本研究对从前期转录组测序数据获得的苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆和生物信息学分析,并利用体外酶活测定进行功能鉴定。结果从云南金花茶中克隆获得CfPAL基因,GenBank登录号为PP502845。生物信息学分析结果表明,CfPAL的cDNA全长为2145 bp,编码714个氨基酸,蛋白分子量为77.76 kDa;CfPAL基因的表达偏好A和T,最优密码子为AGG;无信号肽和跨膜结构域,是一个位于细胞质和内质网的亲水稳定型的酸性蛋白;其二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构呈现典型的“海马状”结构;CfPAL从属于裂解酶ILike超家族,具有PAL家族保守序列(GTITASGDLVPLSYIAG),与9条同源PAL蛋白序列相似性为90.21%;与茶(C.sinensis)和狭叶油茶(C.lanceoleosa)的亲缘进化关系最近,相似度分别为99.02%、98.19%;CfPAL蛋白与黄酮类化合物特异性合成途径的关键酶CHS存在关联性。体外酶促反应结果表明,CfPAL蛋白能催化苯丙氨酸生成反式肉桂酸,但不能将酪氨酸催化生成对香豆酸。CfPAL属于典型的苯丙氨酸解氨酶基因家族,在调控黄酮类化合物合成途径中起重要作用。 展开更多
关键词 云南金花茶 苯丙 基因克隆 序列分析 功能验证
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甲型流感病毒神经氨酸酶抗原蛋白表位与抗体的结构空间识别
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作者 朱拯 陈郑珊 +8 位作者 张冠英 房婷 樊璞 毕磊 崔越 李泽亚 苏纯懿 迟象阳 于长明 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2025年第4期957-969,共13页
目的 基于甲型流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白抗原抗体复合物结构数据,探究抗原蛋白表位与抗体的空间结构识别关系。方法 完整收集SAbDab数据库中NA蛋白抗原抗体复合物结构数据,对蛋白质结构进行处理分析,获取抗原表位和相... 目的 基于甲型流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白抗原抗体复合物结构数据,探究抗原蛋白表位与抗体的空间结构识别关系。方法 完整收集SAbDab数据库中NA蛋白抗原抗体复合物结构数据,对蛋白质结构进行处理分析,获取抗原表位和相应抗体配位氨基酸序列和空间分布信息,统计分析结合抗体序列、基因使用频率、氨基酸使用偏好性和互补决定区(CDR)氨基酸长度;分析抗体结合的热点区域,进一步对抗体配位空间结构相似性进行计算和层次聚类,深入探究抗原表位与抗体的空间识别关系,通过生物膜干涉(BLI)实验验证靶向不同抗原表位的抗体的识别特异性。结果 SAbDab数据库中甲型流感病毒NA蛋白的抗原抗体复合物结构数据以H3N2、H7N9、H1N1亚型为主,抗原表位的热点位置主要集中在催化活性位点区域,抗体物种来源以人源和鼠源为主,鼠源抗体VJ基因组合使用频率最高的是IGHV1-12*01/IGHJ2*01,人源抗体VJ基因组合使用频率最高的是IGHV1-69*01/IGHJ6*01。结合在催化活性位点区域内与结合在催化活性位点区域以外其他区域的抗体,在重链CDR氨基酸长度与氨基酸使用偏好性方面存在显著差异。抗原表位与抗体配位具有特定的识别关系,部分相似的抗体配位结构特异性地识别相同的表位,可在结构上观察到结合区域的重叠,BLI实验也验证了这类抗体对表位的竞争结合。结论 NA蛋白抗原表位位点分布以催化活性位点及周围环状区域为主,空间构象互补与静电相互作用在抗体与抗原的催化活性区域识别和结合过程中发挥重要作用。抗原与抗体存在不依赖于抗体唯一序列的空间识别关系,不同序列的抗体也可能形成识别同一抗原表位的局部空间结构。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 神经 抗原表位 抗体 抗体配位相似性
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2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析 被引量:20
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作者 苏彤 李淑华 +4 位作者 常文军 刘世建 鹿文英 韩一芳 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期618-621,共4页
目的:探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化及NA基因编码蛋白抗原性、酶活性位点、糖基化位点变异情况。方法:从NCBI基因库检索获得43株不同年代不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用Molecular Evolutionary Genetics ... 目的:探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化及NA基因编码蛋白抗原性、酶活性位点、糖基化位点变异情况。方法:从NCBI基因库检索获得43株不同年代不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行基因进化分析和氨基酸序列分析。结果:2009年新型甲型H1N1流感病毒与禽H5N1流感病毒NA基因的同源性达到85%,潜在抗原位点氨基酸分布相同;所有毒株的酶活性中心位点高度保守,但糖基化位点有变异。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA基因可能来源于禽H5N1流感病毒;神经氨酸酶抑制剂治疗有效。 展开更多
关键词 H1N1甲型流感病毒 神经 进化 变异
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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量:7
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作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页
血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF... 血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF鸡胚尿囊毒RNA,RT-PCR扩增完整的NA cDNA基因,将其克隆到载体pSY538中的禽痘病毒早晚期启动子 LP2EP2的下游,然后再将含有启动子的 NA基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+LacZ)中,构建了HA、NA双重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+NA+LacZ),将它与禽痘病毒疫苗株S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、PCR鉴定等,结果表明已获得一株能同时稳定表达HA和NA蛋白的重组禽痘病毒,为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经基因 重组禽痘病毒
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甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析 被引量:10
7
作者 田疆 周经姣 +9 位作者 陈艺韵 梁瑜 晏辉钧 周俊梅 刘岩 付春云 高洪丽 方丹云 狄飚 江丽芳 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期207-212,共6页
【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用R... 【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析。【结果】2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9%~78.8%),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979~2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1%~79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异。【结论】2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 神经基因 遗传进化
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山东省2017—2018年B型流感病毒药物敏感性检测及神经氨酸酶基因特征分析 被引量:8
8
作者 吴巨龙 孙林 +4 位作者 张圣洋 宋绍霞 刘倜 王显军 李忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期229-233,共5页
目的检测山东省2017-2018流感监测年度B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性,分析其神经氨酸酶(NA)基因特征。方法选取山东省2017—2018年分离的18株B型流感病毒(Yamagata系16株,Victoria系2株),通过生物学耐药实验检测病毒对奥... 目的检测山东省2017-2018流感监测年度B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性,分析其神经氨酸酶(NA)基因特征。方法选取山东省2017—2018年分离的18株B型流感病毒(Yamagata系16株,Victoria系2株),通过生物学耐药实验检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。提取病毒核酸后一步法RT-PCR扩增NA基因片段,双向测定核苷酸序列,对基因序列和氨基酸序列特征比对分析。结果在检测的18株B型流感病毒中,有1株Yamagata系病毒对奥司他韦和扎那米韦2种药物的敏感性均降低,此株病毒的NA基因发生H274Y位点突变。其余15株Yamagata系病毒和2株Victoria系病毒均为奥司他韦及扎那米韦的敏感株。结论随机选取的18株B型流感病毒中大多数病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,临床上可继续使用此类药物对流感患者进行治疗。应加强耐药性监测,警惕耐药株的出现。 展开更多
关键词 B型流感病毒 神经抑制剂 耐药性
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禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆 被引量:2
9
作者 邓国华 王秀荣 +5 位作者 张立春 刘振勇 乔传玲 田国彬 于康震 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期161-164,共4页
本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT_PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18_T载体上,并进行鉴定和序列测定。测... 本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT_PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18_T载体上,并进行鉴定和序列测定。测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致。根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基。与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列。 展开更多
关键词 禽流感病毒 神经 N3 na基因 克隆
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神经母细胞瘤中酪氨酸激酶受体和神经营养素的基因表达研究 被引量:8
10
作者 荣道建 张锦华 +3 位作者 李心元 李爱敏 李旭 张继红 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期244-247,共4页
目的:探讨神经母细胞瘤(NB)中酪氨酸激酶受体(TR Ks)和神经营养素(NTs)的基因表达及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测27例N B中TrkA、TrkB、TrkC及BDN F m R NA的表达。结果:TrkA的高表达率及总表达率在低分期... 目的:探讨神经母细胞瘤(NB)中酪氨酸激酶受体(TR Ks)和神经营养素(NTs)的基因表达及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测27例N B中TrkA、TrkB、TrkC及BDN F m R NA的表达。结果:TrkA的高表达率及总表达率在低分期组均明显大于高分期组(P<0.05),而其高表达水平与患者2年存活率之间具有明显的相关性(P<0.01)。TrkB的高表达率及总表达率在高分期组均明显大于低分期组(P<0.05),而BD NF的三种表达率在两组间比较则均无显著性差异(P>0.05),但这两者的共同表达率在高分期组则明显大于低分期组(P<0.05)。TrkC的表达通常伴有TrkA的表达,而这两者的共同表达率在低分期组则明显大于高分期组(P<0.05),但它们的表达之间并不存在着关联性趋势。结论:RT-PCR法检测酪氨酸激酶受体和神经营养素的基因表达对NB肿瘤的分期和预后评估具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 受体 神经营养素 逆转录聚合链反应
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华东地区家鸭中N2亚型低致病性禽流感病毒神经氨酸酶基因的重排 被引量:4
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作者 仇保丰 刘武杰 +3 位作者 唐应华 胡顺林 彭大新 刘秀梵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第1期3-6,共4页
为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年-2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析。44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%-99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同... 为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年-2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析。44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%-99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同源性为96.9%-99.9%,所有H3N2病毒的NA基因同源性为92.3%-99.9%,H5N2、H6N2和H11N2病毒的同种亚型毒株间的NA基因同源性变化幅度较大,相反,有些不同HA亚型毒株间的NA基因同源性反而很高。进一步分析NA基因推导的氨基酸序列也表现出相似的规律。华东地区家鸭中N2亚型的禽流感病毒正处于不断地进化状态中,不同N2亚型的禽流感病毒之间已存在NA基因的重排。 展开更多
关键词 家鸭 禽流感病毒 神经基因 基因重排
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H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的表达及纯化 被引量:3
12
作者 张改平 李清州 +5 位作者 郝惠芳 周玲 王丽 杨苏珍 罗俊 冯丽丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第5期107-110,共4页
参考GenBank上发表的H5亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计引物,PCR扩增NA基因,再将其克隆到原核表达载体pET-32a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物... 参考GenBank上发表的H5亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计引物,PCR扩增NA基因,再将其克隆到原核表达载体pET-32a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为61 kDa,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV神经氨酸酶抗体具有良好的灵敏性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 神经(na) 原核表达
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猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01分离株神经氨酸酶基因的克隆及真核表达 被引量:3
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作者 赵朴 李海燕 +3 位作者 杨焕良 陈化兰 于康震 卢中华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页
根据GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶 (NA)基因的特异性引物。从猪流感病毒A/Swine/InnerMongolia/5 4 7/0 1(H3N2 )株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增后将其克隆到pMD18_T载体上 ,进行序列测定和... 根据GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶 (NA)基因的特异性引物。从猪流感病毒A/Swine/InnerMongolia/5 4 7/0 1(H3N2 )株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增后将其克隆到pMD18_T载体上 ,进行序列测定和拼接。用HindⅢ酶切后 ,亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上 ,得到重组转移载体pMelBacNA ,然后与线性化杆状病毒DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染于sf9昆虫细胞。经 3轮噬斑纯化 ,提取其DNA经PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒株。SDS_PAGE结果显示 ,目的基因已获得表达 ,Westernblot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性 。 展开更多
关键词 猪流感病毒 神经 基因克隆 基因表达 流感
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马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析 被引量:2
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作者 杨建德 王文军 +7 位作者 薛飞 王晓钧 朱远茂 赵立平 吕晓玲 沈荣显 许景军 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期334-337,共4页
本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶 (NA)基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A/Equine/Qinghai/1/94 )NA基因 ,将片段连接到PGEM_T_easy载体并转化DH5α ,提... 本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶 (NA)基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A/Equine/Qinghai/1/94 )NA基因 ,将片段连接到PGEM_T_easy载体并转化DH5α ,提取阳性菌落的质粒经EcRo1酶切和PCR鉴定其大小均为 1.4Kb左右 ,对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现 ,我国马流感病毒青海株与A/Equine/Alaska/1/91、A/Equine/Tennessee/5 /86和A/Equine/Algiers/72等关系较近 ,核苷酸同源率为 98.2 %~ 97.4 % ;与我国马流感吉林株 (A/Equine/Jilin/1/89)关系较远 ,核苷酸同源率仅为72 .0 % ;而与H7N7亚型马流感病毒A/Equine/Prague/1/5 6核苷酸同源率仅为 38.0 %。 展开更多
关键词 马流感病毒 神经基因 克隆 同源性分析
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猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:3
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作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期162-167,共6页
克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒H1N1 血凝素 神经 克隆表达
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11株H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因遗传分析 被引量:2
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作者 黄欣梅 李银 +3 位作者 赵冬敏 刘宇卓 杨婧 韩凯凯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期150-155,共6页
[目的]本文旨在了解H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传特点和变异情况。[方法]选择2008—2013年从江苏、安徽和浙江省家禽中分离的11株H9N2亚型禽流感病毒,用RT-PCR方法对NA基因片段进行扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸... [目的]本文旨在了解H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传特点和变异情况。[方法]选择2008—2013年从江苏、安徽和浙江省家禽中分离的11株H9N2亚型禽流感病毒,用RT-PCR方法对NA基因片段进行扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性及遗传进化分析。[结果]11株毒株的NA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为86.2%~99.5%和86.9%~99.1%,均属于欧亚分支。其中9株鸡源毒株属于Y280-like亚系,在NA蛋白颈部63~65位点缺失了3个氨基酸;2株鸭源毒株属于G1-like亚系,在颈部39~40位点缺失了2个氨基酸。11株分离株除了69、146、200、234位点处潜在的N-糖基化位点比较保守以外,其余的糖基化位点都出现了变异情况。红细胞结合位点(HB)在431~433位点区域比较保守,但在366~373和399~404位点区域的氨基酸发生了明显的变异。抗原决定簇中部分氨基酸序列变异也较为活跃,推测与使用疫苗后的抗体选择有关。NA蛋白酶活性位点处的氨基酸非常保守,没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。[结论]江苏、安徽、浙江等省养殖鸡群中的H9N2亚型禽流感病毒仍以Y280-like分支较为常见,鸭群中出现G1-like分支应引起人们的注意。NA基因存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 神经基因 遗传分析
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河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特征分析 被引量:5
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作者 僧明华 杨凯朝 +2 位作者 王文慧 赵升 徐瑾 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第6期859-865,共7页
目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22... 目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22株H3N2型流感病毒株进行HA和NA基因测序,使用生物信息学软件分析其分子特征。结果:河南省H3N2亚型流感病毒分离株的HA基因和NA基因与当年度推荐疫苗株的核苷酸同源性分别为96.6%~96.8%、98.1%~98.6%。HA和NA进化树分析显示,22株分离株属于3C.2a1b分支,虽与当年推荐疫苗株同属于3C.2a分支,但差异较大。HA基因共发生32处氨基酸突变,涉及A、B、E共3个抗原决定簇的4个氨基酸位点变异和2个病毒特异性识别受体结合位点变异。NA基因共发生21处氨基酸突变,其中共同突变8处,未发现耐药位点突变。潜在N-糖基化位点预测结果显示,HA基因在142NWT、149NGT、174NYT位点存在缺失或增加,NA基因在329NDS位点存在缺失。结论:2019~2020年河南省H3N2亚型流感病毒株的HA基因和NA基因与当年推荐的疫苗株存在较大差异,出现了抗原漂移。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感 血凝素 神经 河南省
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红鳍笛鲷(Lutjnaus erythropterus)酪氨酸酶相关蛋白1基因克隆及表达分析 被引量:2
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作者 张艳苹 王中铎 +2 位作者 郭昱嵩 刘丽 刘楚吾 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期390-399,共10页
本文利用RACE技术克隆获得红鳍笛鲷(Lutjnaus erythropterus)酪氨酸酶相关蛋白1基因全长,并利用生物信息学方法对该基因的m RNA序列特征、氨基酸序列特征、分类及系统发生进行了分析。结果表明,在红鳍笛鲷中,酪氨酸酶相关蛋白1基因含有T... 本文利用RACE技术克隆获得红鳍笛鲷(Lutjnaus erythropterus)酪氨酸酶相关蛋白1基因全长,并利用生物信息学方法对该基因的m RNA序列特征、氨基酸序列特征、分类及系统发生进行了分析。结果表明,在红鳍笛鲷中,酪氨酸酶相关蛋白1基因含有TYRP1a和TYRP1b两个拷贝,其中TYRP1a序列全长3178bp,开放阅读框(ORF)长1566bp,5?端235bp,3?端1377bp;TYRP1b基因c DNA全长1871bp,ORF区长1656bp,5?端89bp,3?端126bp。序列分析发现,TYRP1a和TYRP1b基因与其它物种的同源基因保守性较高,尤其是酪氨酸酶基因家族典型的酶活性位点序列在脊椎动物中具有高度保守性。进化分析发现,TYRP1a和TYRP1b基因的种间同源性高于两个基因间的同源性。荧光定量PCR数据分析表明,TYRP1a和TYRP1b基因都在眼睛部位具有最高表达,TYRP1b在黑色皮肤也有较高表达。结果可为进一步阐述TYRP1基因在红鳍笛鲷身体和眼睛部位的色素合成机制提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 红鳍笛鲷 相关蛋白1基因 基因克隆 表达分析
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禾谷镰孢犬尿氨酸途径关键酶基因的鉴定与表达分析
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作者 高文静 李白 +4 位作者 王嘉琳 曹宏哲 张康 邢继红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期73-81,共9页
为了鉴定禾谷镰孢中KP关键酶基因及其功能,本研究采用生物信息学方法对禾谷镰孢的KP关键酶基因进行了系统分析。研究发现,禾谷镰孢含有KP关键酶IDO(吲哚-2,3-双加氧酶)、AFMID(芳基甲酰胺酶)、KAT(犬尿氨酸氨基转移酶)、KMO(犬尿氨酸单... 为了鉴定禾谷镰孢中KP关键酶基因及其功能,本研究采用生物信息学方法对禾谷镰孢的KP关键酶基因进行了系统分析。研究发现,禾谷镰孢含有KP关键酶IDO(吲哚-2,3-双加氧酶)、AFMID(芳基甲酰胺酶)、KAT(犬尿氨酸氨基转移酶)、KMO(犬尿氨酸单加氧酶)、KYN(犬尿氨酸酶)和HAO(羟基酸氧化酶)。通过分析禾谷镰孢的表达谱数据,发现KP关键酶基因FgIDO、FgAFMID、FgKAT、FgKMO、FgKYN和FgHAO在分生孢子发育、菌丝生长和侵染玉米茎秆的不同阶段表现出较高的表达水平,表明这些基因可能参与分生孢子发育、菌丝生长和侵染过程。整合研究结果和现有文献信息,绘制了禾谷镰孢KP及其关键酶催化反应的模式图,为阐明禾谷镰孢KP调控病菌生长发育和致病力的功能与机制奠定了基础。 展开更多
关键词 禾谷镰孢 犬尿途径 关键基因 表达分析
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2009年-2014年云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶基因进化分析 被引量:2
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作者 曾伟 刘庆亮 +10 位作者 孔强 张文东 胡媛媛 胡挺松 赵焕云 段博芳 邱薇 范泉水 张应国 宋建领 张富强 《动物医学进展》 北大核心 2015年第7期13-18,共6页
为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和... 为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和测序,并与已知毒株和参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果从1 500份样品中检出禽流感病毒H5N1亚型阳性样品60份;60阳性样品病毒HA基因测序获得21种NA序列,可划分为4个不同进化分支。NA基因与HA基因呈现不同进化关系;云南边境毒株NA aa275位点未发生变异,因此变异毒株对神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir(达菲)类抗病毒药物可能无抗性或耐药性;2009年-2014年期间云南边境H5N1亚型病毒NA间具有遗传差异,NA基因进化分支4已成为当地流行的优势毒株。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 神经 基因
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