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MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征及关键蛋白
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作者 盖鑫冉 徐佳爱 +3 位作者 车虹昱 王祥 杨春华 齐东来 《眼科新进展》 北大核心 2025年第3期190-195,共6页
目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WER... 目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WERI-Rb-1细胞系从中国科学院上海细胞库获得,作为成熟RB对照组(WERI-Rb-1组);未经处理的人正常视网膜组织作为对照组。将细胞按照每孔1×10~4个细胞接种于24孔板,在显微镜下观察细胞形态并采集图像;在接种后第4、8、12天进行细胞计数。使用免疫荧光染色检测各组细胞增殖标记物Ki67和视锥细胞标记物L/M opsin的表达;采用qRT-PCR检测各组细胞中MYCN、CCNB1、CDK1、SYK和RXRγ的表达情况;通过蛋白质组学分析各组细胞间蛋白表达谱差异并筛选关键调控基因;采用慢病毒敲低OTX2表达后检测各组细胞的生长增殖能力。结果 生长曲线显示,在体外培养第12天,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞数量分别为(59.17±4.01)×10~4个、(85.14±4.54)×10~4个、(100.73±1.99)×10~4个(均为P<0.05)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组Ki67和L/M opsin阳性细胞率均增加(均为P<0.001)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的MYCN mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.001),CCNB1和CDK1 mRNA相对表达量亦均升高(均为P<0.01)。与对照组相比,T-MYCN Y1组细胞的SYK mRNA相对表达量无明显变化(P>0.05),RXRγ mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的SYK、RXRγ mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.05)。GO富集分析显示这些差异蛋白富集到蛋白质复合体组装和线粒体等通路;KEGG富集分析显示这些差异蛋白富集到碳代谢、代谢途径和脂肪酸降解等通路。蛋白质组学和Western blot分析结果均显示,OTX2在WERI-Rb-1组细胞中表达水平最高,其次为T-MYCN Y2组细胞,T-MYCN Y1组细胞最低。qRT-PCR结果显示,在T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞中,与空载对照组相比,OTX2敲低组的OTX2 mRNA相对表达量均下降(均为P<0.05);细胞生长曲线显示,在三组细胞中敲低OTX2后,细胞的生长增殖能力均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论 MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中,细胞逐渐呈现出与WERI-Rb-1细胞类似的视网膜母细胞瘤特征;OTX2在MYCN扩增或高表达RB的生长增殖中发挥重要作用,靶向OTX2可能成为治疗RB新的研究方向。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 MYCN WERI-Rb-1 蛋白质组学 OTX2
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微小RNA与磷酸化胞外信号调节激酶在视网膜母细胞瘤中的表达及其相关性分析 被引量:4
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作者 兰兰 惠延年 曾光伟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第6期523-526,共4页
目的探讨miRNA和磷酸化胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinase,P-ERK)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中表达的变化及其相关性。方法手术切除获取Rb组织标本经组织病理学检查分为低分化、中分化... 目的探讨miRNA和磷酸化胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinase,P-ERK)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中表达的变化及其相关性。方法手术切除获取Rb组织标本经组织病理学检查分为低分化、中分化和高分化Rb组织,肿瘤外的正常视网膜组织作为对照组;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常视网膜组织和不同分化程度Rb组织中miRNA表达水平,Western blot检测正常视网膜组织和不同分化程度Rb组织中P-ERK蛋白表达情况。结果 Rb组织中miRNA基因表达(低分化0.214±0.140、中分化0.246±0.200、高分化0.256±0.180)、P-ERK蛋白表达(低分化0.367±0.270、中分化0.562±0.190、高分化0.609±0.110)明显高于癌旁正常视网膜组织(miRNA:0.200±0.190、P-ERK蛋白:0.211±0.260),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。miRNA、P-ERK蛋白表达与Rb组织分化程度有相关性;miRNA和P-ERK蛋白表达呈正相关。结论 miRNA和P-ERK蛋白在Rb组织中表达均高于正常视网膜组织,并且二者表达呈正相关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 磷酸化胞外信号调节激酶 微小RNA RT—PCR
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人子宫内膜上皮视网膜母细胞瘤抑癌蛋白磷酸化状态及其与细胞周期蛋白G1的相关性
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作者 程钊 汤晓蓉 +2 位作者 郄明蓉 张金虎 岳利民 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第14期1290-1292,1295,共4页
目的探讨非磷酸化视网膜母细胞瘤抑癌蛋白(RB)和磷酸化RB(p-RB)在正常人子宫内膜上皮的周期性表达及其与细胞周期蛋白G1(CyclinG1)的相关性。方法采用免疫组织化学技术分别检测正常子宫内膜增殖期(9例)和分泌期(9例)组织切片RB和p-RB(se... 目的探讨非磷酸化视网膜母细胞瘤抑癌蛋白(RB)和磷酸化RB(p-RB)在正常人子宫内膜上皮的周期性表达及其与细胞周期蛋白G1(CyclinG1)的相关性。方法采用免疫组织化学技术分别检测正常子宫内膜增殖期(9例)和分泌期(9例)组织切片RB和p-RB(ser-795)及CyclinG1的表达,并分析RB的磷酸化状态及其与CyclinG1的相关性。结果免疫组化结果显示,在9例增殖期子宫内膜上皮,仅2例非磷酸化RB呈弱阳性表达,其余7例为阴性表达,在9例分泌期子宫内膜上皮非磷酸化RB均为阳性表达。在9例增殖期子宫内膜上皮P-RB均呈阳性表达,在9例分泌期子宫内膜上皮仅3例P-RB呈弱阳性表达,其余6例为阴性表达;CyclinG1表达的时空特点与非磷酸化RB表达相似,在9例增殖期子宫内膜上皮仅2例呈弱阳性表达,其余7例为阴性表达,在9例分泌期子宫内膜上皮均呈阳性表达。正常子宫内膜上皮细胞增殖期、分泌期非磷酸化RB、p-RB与CyclinG1的表达间差异均有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关性分析结果表明非磷酸化RB与CyclinG1的表达正相关(rs=0.945,P<0.05),磷酸化p-RB(ser-795)的表达与CyclinG1负相关(rs=-0.791,P<0.05)。结论RB的磷酸化状态可能参与cyclinG1介导的孕激素对子宫内膜上皮的负调控作用。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白质类 视网膜母细胞抑癌蛋白 磷酸化 子宫内膜
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紫杉醇诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡及对磷酸化Bcl-2的影响 被引量:1
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作者 闵红波 黄勤 +2 位作者 王建文 孙继虎 步世忠 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第6期510-512,516,共4页
目的 :研究紫杉醇 (Tax)抑制视网膜母细胞瘤 (Rb)细胞生长并诱导其凋亡及磷酸化Bcl 2在其中的作用。方法 :应用3 H 胸腺嘧啶掺入分析法观察Tax对细胞生长的抑制作用 ,以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡 ,用Westernblot分析Tax对磷酸化Bcl ... 目的 :研究紫杉醇 (Tax)抑制视网膜母细胞瘤 (Rb)细胞生长并诱导其凋亡及磷酸化Bcl 2在其中的作用。方法 :应用3 H 胸腺嘧啶掺入分析法观察Tax对细胞生长的抑制作用 ,以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡 ,用Westernblot分析Tax对磷酸化Bcl 2的影响 ,用cDNA细胞转染法观察突变型Bcl 2阻断Tax的作用。结果 :Tax可明显地抑制Y79细胞的生长 ,1μmol/LTax处理 2 4小时 ,3 H 胸腺嘧啶掺入率下降达 5 5 .4 3% ,Tax可诱导Y79细胞凋亡。在此过程中 ,Bcl 2被磷酸化。当Y79细胞被转染突变型Bcl 2后 ,Tax对Y79细胞的作用被阻断。结论 :Tax可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡 ,磷酸化Bcl 2参与其过程。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 紫杉醇 Y79 磷酸化Bcl-2 细胞凋亡
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66例晚期黑色素瘤患者组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白表达水平分析及其临床意义评价 被引量:6
5
作者 邓园欣 孔燕 +2 位作者 毛丽丽 斯璐 郭军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期882-887,共6页
目的:分析晚期黑色素瘤组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(phosphorylated retinoblastoma,p-Rb)的表达情况,并探讨其与临床病理特征及预后之间的相关性。方法:收集2011至2014年在北京大学肿瘤医院肾癌黑色素瘤科住院治疗并符合纳入和排... 目的:分析晚期黑色素瘤组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(phosphorylated retinoblastoma,p-Rb)的表达情况,并探讨其与临床病理特征及预后之间的相关性。方法:收集2011至2014年在北京大学肿瘤医院肾癌黑色素瘤科住院治疗并符合纳入和排除标准的66例晚期黑色素瘤患者的临床资料及其石蜡包埋组织切片,采用免疫组化方法检测患者原发灶肿瘤组织中p-Rb的表达情况,结合患者临床病理特征、总生存期等临床数据进行相关性分析。结果:晚期黑色素瘤组织中p-Rb的阳性表达率为57.6%(38/66)。非肢端的皮肤型、肢端型及黏膜型的p-Rb阳性率分别为73.7%(14/19)、63.0%(17/27)和35.0%(7/20),差异有统计学意义(P=0.039)。p-Rb在不同基因突变亚组中的阳性率亦不同,BRAF突变组为83.3%(5/6),C-KIT突变组为100.0%(2/2),N-RAS突变组为100.0%(9/9),PDGFRA突变组为50.0%(1/2),2个基因突变组为50.0%(1/2),基因野生型为44.4%(20/45),差异有统计学意义(P=0.004)。p-Rb表达水平与年龄、性别、分期、溃疡、血清LDH水平无相关性(P>0.05)。p-Rb阳性患者的中位总生存期(OS)较阴性患者略短(30.0 vs 39.2个月),但差异无统计学意义(P=0.555)。结论:超过半数的晚期黑色素瘤组织中有p-Rb的阳性表达,非肢端的皮肤型中p-Rb阳性率高于肢端型、黏膜型,且携带c-KIT和N-RAS突变的患者黑色素瘤组织中p-Rb阳性率较高。 展开更多
关键词 恶性黑色素 视网膜细胞蛋白 磷酸化 预后
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细胞周期素D1、视网膜母细胞瘤样蛋白2及微小染色体维持蛋白7在肝细胞癌中的表达及对预后的意义 被引量:14
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作者 刘娟 殷飞 姚树坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期304-309,共6页
目的:研究细胞周期素D1(cyclin D1)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(RBL2/p130)及微小染色体维持蛋白7(MCM7)在肝细胞癌(以下简称肝癌)中的表达及对预后诊断的意义。方法:用免疫组织化学法检测44例肝癌组织、26例癌旁硬化肝组织及18例正常肝组... 目的:研究细胞周期素D1(cyclin D1)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(RBL2/p130)及微小染色体维持蛋白7(MCM7)在肝细胞癌(以下简称肝癌)中的表达及对预后诊断的意义。方法:用免疫组织化学法检测44例肝癌组织、26例癌旁硬化肝组织及18例正常肝组织中cyclin D1、RBL2/p130及MCM7的表达情况,并分析其与肝癌患者临床参数间的关系。结果:肝癌组织中cyclin D1和MCM7的阳性表达率分别是68.2%和72.7%,显著高于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01);RBL2/p130的阳性表达率为34.1%,显著低于正常肝组织及癌旁硬化肝组织(P<0.01),MCM7与cyclin D1的表达呈正相关(r=0.349,P<0.05),与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.421,P<0.01);cyclin D1与RBL2/p130的表达呈负相关(r=-0.435,P<0.01)。Cyclin D1及MCM7的表达与肿瘤包膜的完整性、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关,RBL2/p130的表达与有无门脉癌栓、肿瘤分化程度及肝癌临床分期有关(P<0.05)。MCM7还与肿瘤大小及甲胎蛋白(AFP)值的大小有关。多因素分析显示肿瘤大小、MCM7及cyclin D1与肝癌预后相关(P<0.05)。MCM7及cyclin D1阳性表达的患者、RBL2/p130阴性表达的患者预后差(P<0.05)。结论:Cyclin D1、RBL2/p130和MCM7的异常表达在肝癌形成过程中发挥了重要作用。监测其在肝癌中的表达情况将有助于判断肝癌患者的预后。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白D1 视网膜母细胞蛋白 微小染色体维持蛋白 肝肿
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原代视网膜母细胞瘤耐药基因及耐药蛋白表达的研究 被引量:2
7
作者 刘万丽 吴中耀 +1 位作者 杨华胜 颜建华 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第12期908-911,共4页
目的研究视网膜母细胞瘤(Rb)瘤细胞多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因以及相应耐药蛋白P-gp和MRP的表达水平。方法共35例Rb患儿,行眼球摘除术时取新鲜的肿瘤细胞,用RT-PCR的方法检测Rb瘤细胞是否有耐药基因MDR1和MRP基因... 目的研究视网膜母细胞瘤(Rb)瘤细胞多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因以及相应耐药蛋白P-gp和MRP的表达水平。方法共35例Rb患儿,行眼球摘除术时取新鲜的肿瘤细胞,用RT-PCR的方法检测Rb瘤细胞是否有耐药基因MDR1和MRP基因的表达,用免疫组织化学的方法检测相应耐药蛋白P-gp和MRP的表达。结果34例Rb瘤细胞进行了耐药基因的检测,MDR1基因平均表达水平为0.41±0.38,MRP基因平均表达水平为0.73±0.92;35例Rb进行了耐药蛋白的检测,P-gp有15例阳性(42.9%),MRP有23例阳性(65.7%);34例Rb两种基因和蛋白两种方法的检验结果呈一致性;两种耐药基因及两种耐药蛋白的表达相互间有一定的联系。结论原代Rb瘤细胞中一部分个体有不同程度的耐药基因MDR1和MRP基因及其产物耐药蛋白P-gp和MRP的表达,提示Rb可能存在原发耐药性。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 多药耐药基因 多药耐药相关蛋白基因 P粘蛋白 多药耐药相关蛋白
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儿童急性白血病细胞视网膜母细胞瘤蛋白的表达及临床意义 被引量:1
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作者 袁向亮 赵惠君 +4 位作者 蒋黎敏 徐翀 袁晓军 汤静燕 沈立松 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期913-918,共6页
本研究检测视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,pRb)在不同类型儿童急性白血病细胞中的表达,并探讨其表达水平与细胞周期、危险度、微小残留病(minimal residual disease,MRD)监测、预后等临床诊断治疗监测指标的关系。对89例... 本研究检测视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,pRb)在不同类型儿童急性白血病细胞中的表达,并探讨其表达水平与细胞周期、危险度、微小残留病(minimal residual disease,MRD)监测、预后等临床诊断治疗监测指标的关系。对89例初发小儿急性白血病患者(包括25例AML,10例T-ALL,54例B-ALL)及7例正常对照骨髓标本,采用流式细胞术(FCM)分别检测治疗前后视网膜母细胞瘤蛋白的表达情况,并对部分病例进行细胞周期分析。结果表明:①流式细胞术检测pRb的表达准确直观;②在各种类型的急性白血病中pRb的高水平表达具有普遍性,同一患儿白血病细胞pRb的表达明显高于非白血病细胞,在不同类型的急性白血病中pRb均有缺失表达;③pRb的表达水平与白血病细胞的细胞循环周期可能存在一定的相关性,pRb表达阳性的B-ALL中处于G1期的白血病细胞数显著高于pRb表达阴性的病例(92%vs77%);④B-ALL中,MRD阳性组pRb的表达量明显低于阴性组,且差值有统计学意义(P<0.05),并且治疗前后非白血病细胞的pRb表达水平是稳定的;⑤pRb的表达量与B-ALL早期治疗预后之间存在一定相关性,B-ALL预后不良组pRb的表达量低于预后良好组(P<0·05)。结论:pRb在儿童急性白血病细胞中存在高水平表达或缺失等异常形式的表达差异,pRb的表达与白血病细胞的细胞周期、MRD监测、早期治疗反应的预后评价等存在相关性,对于B-ALL的治疗监测及预后评估具有指导意义。 展开更多
关键词 急性白血病 儿童急性白血病 视网膜母细胞蛋白 MRD监测
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转铁蛋白与细胞穿膜肽共修饰脂质体抑制视网膜母细胞瘤的作用研究 被引量:4
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作者 李素华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第5期435-438,共4页
目的采用薄膜分散法制备转铁蛋白(transferrin,TF)与细胞穿膜肽(transcriptional activator protein,TAT)共修饰载多西紫杉醇(docetaxel,DOC)脂质体(TF/TAT-LP-DOC),探讨其对视网膜母细胞瘤(HXO-RB44)的靶向治疗作用。方法采用薄膜分散... 目的采用薄膜分散法制备转铁蛋白(transferrin,TF)与细胞穿膜肽(transcriptional activator protein,TAT)共修饰载多西紫杉醇(docetaxel,DOC)脂质体(TF/TAT-LP-DOC),探讨其对视网膜母细胞瘤(HXO-RB44)的靶向治疗作用。方法采用薄膜分散法制备TF/TAT-LP-DOC,并对其进行表征。通过MTT实验考察脂质体对HXO-RB44细胞的毒性,流式细胞仪检测HXORB44细胞对不同脂质体的摄取效率。构建HXO-RB44细胞肿瘤球模型,研究TF/TAT-LP-DOC对实体肿瘤的生长抑制作用。结果所制备的TF/TATLP-DOC粒径为(115.8±8.5)nm,Zeta电位为(23.58±3.65)m V,DOC的包封率为85.8%。MTT检测结果显示,LP-DOC、TFLP-DOC、TATLP-DOC和TF/TATLP-DOC组HXO-RB44细胞存活率分别为66.5%、43.6%、39.4%和18.9%,差异有统计学意义(P<0.01)。与LP-DOC、TFLP-DOC和TATLP-DOC组比较,TF/TATLP-DOC组的肿瘤细胞存活率显著低于其他脂质体组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TF/TATLP-DOC组细胞存活率随时间的延长而降低,差异有统计学意义(P<0.01)。HXO-RB44细胞对TF/TATLP的摄取效率分别是TFLP、TATLP和LP的2.65倍、2.32倍和3.86倍,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TFLP和TATLP的细胞摄取效率高于LP,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。相同脂质体在4 h的摄取效率高于2 h,差异有统计学意义(P<0.01)。给药7 d后,生理盐水组肿瘤球持续生长,体积增大1.44倍,LPDOC组肿瘤球体积增大到原体积的1.14倍,TF/TAT-LP-DOC组、TATLP-DOC组和TFLP-DOC组肿瘤球体积减小到原体积的35%、62%和58%,与LP-DOC、TFLP-DOC和TATLP-DOC组比较,TF/TATLP-DO组肿瘤球体积显著小于其他脂质体组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。肿瘤球体积随着时间的延长而减小,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TF/TATLP-DOC制备工艺简单,与HXO-RB44细胞具有良好的亲和性,是一种潜在高效的肿瘤靶向给药系统。 展开更多
关键词 转铁蛋白 细胞穿膜肽 脂质体 视网膜母细胞
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周期素依赖性激酶4、视网膜母细胞瘤蛋白在银屑病皮损中的表达
10
作者 陆前进 卢放根 +4 位作者 文海泉 颜兰香 张其亮 张桂英 余桂英 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期237-238,共2页
周期素依赖性激酶4、视网膜母细胞瘤蛋白在银屑病皮损中的表达陆前进①卢放根②文海泉①颜兰香①张其亮①张桂英①余桂英①周期素依赖性激酶4(cyclin-dependentkinaseCDK4)是细胞周期因子依赖性激酶家族... 周期素依赖性激酶4、视网膜母细胞瘤蛋白在银屑病皮损中的表达陆前进①卢放根②文海泉①颜兰香①张其亮①张桂英①余桂英①周期素依赖性激酶4(cyclin-dependentkinaseCDK4)是细胞周期因子依赖性激酶家族(CDKs)中的一员,RB蛋白是视... 展开更多
关键词 银屑病 视网膜母细胞 蛋白表达 周期素 激酶
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异黏蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其与高危因素关系的研究
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作者 畅颖 高飞 +2 位作者 李彬 张志豹 顼晓琳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期845-850,共6页
背景异黏蛋白(MTDH)基因是近年来发现的一个原癌基因,在恶性实体肿瘤中呈高表达,与恶性肿瘤的浸润、侵袭及转移等生物学行为密切相关。目前,国内外鲜见关于MTDH与视网膜母细胞瘤(RB)的相关研究报道。目的研究不同侵袭潜能人RB细... 背景异黏蛋白(MTDH)基因是近年来发现的一个原癌基因,在恶性实体肿瘤中呈高表达,与恶性肿瘤的浸润、侵袭及转移等生物学行为密切相关。目前,国内外鲜见关于MTDH与视网膜母细胞瘤(RB)的相关研究报道。目的研究不同侵袭潜能人RB细胞系及RB组织(石蜡切片)中MTDH的表达,探讨其与肿瘤临床分期、病程、细胞分化、组织病理学高危因素之间的关系。方法应用荧光实时定量PCR(rea]一timePCR)技术检测RB细胞系Y79、WERI—RBI、SO—RB50中MTDHmRNA的表达水平;采用免疫组织化学Elivision法检测MTDH在54例RB组织中的表达情况,并结合临床组织病理学资料进行统计学分析。结果MTDHmRNA在Y79、SO—RB50、WERI.RBl细胞系中的相对表达量分别为6.11±0.17、6.21±0.21及3.97±O.17,3种细胞系中的MTDHmRNA表达差异有统计学意义(F=142.643,P〈0.05),具有潜在侵袭性的Y79细胞系、SO—RB50细胞系中的表达量明显高于WERI—RBl细胞系,差异均有统计学意义(均P=0.000)。MTDH在RB组织中主要表达于细胞膜及细胞质,其中35例(占64.81%)标本为MTDH呈强阳性表达,其中临床分期为E期者MTDH表达积分明显高于D期者,有组织病理学高危因素者MTDH表达积分明显高于无高危因素者,侵犯筛板后视神经者MTDH表达积分明显高于未侵犯者,差异均有统计学意义(P=0.035、0.002、0.017)。不同年龄(P=0.579)、不同患者性别(P=0.513)、不同眼别(P=0.305)、不同病程(P=0.860)、不同细胞分化类型(P=0.537)、不同脉络膜受累范围(P=0.238)及眼前节是否受累(P=0.579)之间RB组织中MTDH表达积分的差异均无统计学意义。结论MTDH在RB组织中呈高表达,MTDH基因的激活可能与RB的侵袭转移机制有关,MTDH基因的检测有可能成为判断RB患者预后的重要指标之一。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 异黏蛋白 组织病理学 高危因素 侵袭 转移 免疫组织化学 实时聚合酶链反应
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视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述
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作者 谢小雷 江佩欣 +3 位作者 张敬鸿 莫骏健 吴可凡 曾康逸 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期114-119,共6页
视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1... 视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。 展开更多
关键词 视网膜母细胞结合锌指蛋白1 PRDM2基因 代谢 肥胖 信号通路
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人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表达与定位 被引量:1
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作者 陆斌 宋先璐 +2 位作者 宋方丽 赵善超 姜勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期422-425,共4页
目的构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma 1,RB-1)基因真核表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础。方法采用PCR方法扩增RB-1基因编码区的全长序列,并加上FLAG标签,利用分子克隆... 目的构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma 1,RB-1)基因真核表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础。方法采用PCR方法扩增RB-1基因编码区的全长序列,并加上FLAG标签,利用分子克隆技术将其重组于CMV载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转染PC-3细胞,用Western Blot检测其表达,用免疫荧光检测其在细胞中的定位。结果克隆的RB-1真核表达载体完全正确,Western Blot检测到RB-1有表达,免疫荧光检测其主要定位于细胞核内。结论成功地构建了RB-1真核表达载体,其能够在PC-3中高效表达,并主要定位于细胞核内。 展开更多
关键词 视网膜母细胞蛋白 真核表达载体 定位 前列腺肿
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核糖体蛋白L41对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量:2
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作者 耿雯 秦丰 +2 位作者 任佳绪 徐晓鹤 王爱媛 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第3期214-217,共4页
目的研究核糖体蛋白L41(ribosomal protein L41,RPL41)对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将人视网膜母细胞瘤Y79细胞接种于含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中传代培养。根据药物处理浓度分为对照组(RPL4... 目的研究核糖体蛋白L41(ribosomal protein L41,RPL41)对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将人视网膜母细胞瘤Y79细胞接种于含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中传代培养。根据药物处理浓度分为对照组(RPL41浓度为0μmol·L^(-1))、40μmol·L^(-1)RPL41处理组、80μmol·L^(-1)RPL41处理组、120μmol·L^(-1)RPL41处理组。Cell Titer-Glo荧光细胞活性检测系统检测各组细胞活性;流式细胞仪检测100μmol·L^(-1)RPL41处理后细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞凋亡形态;Western blot检测各组细胞中活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的含量。结果与对照组相比,40μmol·L^(-1)RPL41处理组细胞活性为(97.9±1.5)%,无明显变化,差异无统计学意义(P=0.055);80μmol·L^(-1)RPL41处理组细胞活性为(87.6±1.8)%,120μmol·L^(-1)RPL41处理组为(63.9±2.0)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RPL41对Y79细胞增殖有明显的抑制作用。100μmol·L^(-1)RPL41能够促进Y79细胞凋亡,凋亡率为(17.33±2.47)%。100μmol·L^(-1)RPL41处理组凋亡细胞与正常细胞相比,细胞颜色较亮,细胞体积较小。40μmol·L^(-1)RPL41处理组ATF4蛋白含量为0.76±0.04,80μmol·L^(-1)RPL41处理组为0.29±0.04,120μmol·L^(-1)RPL41处理组为0.29±0.05,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。RPL41能够降低Y79细胞中ATF4的蛋白含量。结论RPL41能抑制人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与ATF4有关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 核糖体蛋白L41 细胞增殖 细胞凋亡 活化转录因子4
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DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖 被引量:1
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作者 高亚莉 罗小玲 +3 位作者 孟婷 朱敏娟 田渼雯 陆晓和 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1239-1245,共7页
目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT... 目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加(P<0.05)。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低(P<0.05)。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱(P<0.05)。结论在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 DNMT1蛋白 MEG3基因 DNA甲基化
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黄芪多糖对视网膜母细胞瘤细胞侵袭能力的影响 被引量:11
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作者 李超 钱新华 +2 位作者 千新来 李航 冯思佳 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第6期530-532,共3页
目的探讨黄芪多糖(astragalus polydsaccharide,APS)对视网膜母细胞瘤RB44细胞侵袭能力的影响及机制。方法以200 mg·L-1APS诱导48 h的RB44细胞为实验组(预实验结果),以不加药的RB44细胞为对照组。通过Transwell迁移和侵袭实验观察... 目的探讨黄芪多糖(astragalus polydsaccharide,APS)对视网膜母细胞瘤RB44细胞侵袭能力的影响及机制。方法以200 mg·L-1APS诱导48 h的RB44细胞为实验组(预实验结果),以不加药的RB44细胞为对照组。通过Transwell迁移和侵袭实验观察APS对RB44细胞迁移和侵袭能力的影响,通过Western blotting方法检测APS处理前后RB44细胞中侵袭相关基因蛋白表达的变化。结果 Transwell迁移和侵袭实验结果显示:与对照组每高倍视野(54.667±4.041)个和(26.000±2.646)个细胞相比,APS组RB44细胞穿过Transwell小室基膜的细胞数量显著减少,分别为每高倍视野(26.667±4.041)个和(8.667±2.082)个细胞(均为P<0.01)。Western blotting结果显示:与对照组(0.128±0.019)相比,APS组RB44细胞中E-cadherin的表达(0.117±0.019)差异无统计学意义(P=0.486),而MMP-9和MMP-2的表达(0.134±0.008、0.085±0.006)与对照组(0.269±0.187、0.223±0.013)相比均显著降低,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论 APS可显著抑制视网膜母细胞瘤RB44细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-9和MMP-2的表达有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 视网膜母细胞 细胞侵袭 基质金属蛋白 钙黏附蛋白
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Livin、PTEN及MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及相关性研究 被引量:8
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作者 孙燕 张煦 +2 位作者 王登廷 祝杰 郑吉琦 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第2期135-139,共5页
目的研究Livin、PTEN及基质金属蛋白酶-9(matrix metauoproteinase-9,MMP-9)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达和临床意义,并探讨三者之间的相关性。方法对56例RB组织标本进行Livin、PTEN及MMP-9蛋白表达的免疫组织化学染色... 目的研究Livin、PTEN及基质金属蛋白酶-9(matrix metauoproteinase-9,MMP-9)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达和临床意义,并探讨三者之间的相关性。方法对56例RB组织标本进行Livin、PTEN及MMP-9蛋白表达的免疫组织化学染色,以正常视网膜组织标本10例作为正常对照,采用免疫组织化学法检测56例RB组织中及10氉例正常视网膜组织中的Livin、PTEN及MMP-9的阳性表达情况,探讨3种因子在正常视网膜及RB中的表达及相关性。结果Livin蛋白在RB中阳性表达,阳性表达率为57.1%,但其在正常视网膜组织中不表达(P<0.05);PTEN蛋白在正常视网膜表达,阳性率达100.0%,而在RB组织中表达率仅为55.4%,差异有统计学意义(P<0.05);RB组织中MMP-9阳性表达率高达50.0%,在正常视网膜组织中不表达,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN、Livin及MMP-9的蛋白表达与RB分期、病理学分型及伴视神经浸润有关(均为P<0.05),与性别及年龄无关(均为P>0.05)。PTEN和Livin的表达呈显著负相关(r=-0.370,P<0.05),与MMP-9的表达也呈显著负相关(r=-0.310,P<0.05);而Livin和MMP-9在RB中的表达呈显著正相关(r=0.450,P<0.01)。PTEN表达与MMP-9、Livin共表达存在负相关(r=-0.542,P<0.01)。结论 Livin、PTEN及MMP-9可作为判断RB恶性程度和预后的指标,在RB的早期诊断中有重要作用。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 LIVIN PTEN 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学
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视网膜母细胞瘤肿瘤标志物筛选研究 被引量:2
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作者 刘智屏 李博 +3 位作者 陈俐丽 张朝霞 陈言钊 唐芳政 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2017年第18期2213-2217,共5页
背景视网膜母细胞瘤(RB)多发于婴幼儿,就诊时多处于中晚期,治疗较困难,易复发转移。目的筛选出对RB有临床意义的肿瘤标志物。方法选取2014年8月—2016年8月在深圳市人民医院化疗且临床资料完整的RB患儿20例为RB组,同期选取本院体检健康... 背景视网膜母细胞瘤(RB)多发于婴幼儿,就诊时多处于中晚期,治疗较困难,易复发转移。目的筛选出对RB有临床意义的肿瘤标志物。方法选取2014年8月—2016年8月在深圳市人民医院化疗且临床资料完整的RB患儿20例为RB组,同期选取本院体检健康的儿童20例为对照组。检测对照组体检时,RB组化疗前、化疗3个疗程后、化疗6个疗程后甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖蛋白抗原(CA)125、CA153、CA199、CA724水平。结果对照组与RB组化疗前、化疗3个疗程后、化疗6个疗程后AFP、CEA、CA125、CA724水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组与RB组化疗6个疗程后NSE水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);RB组化疗前、化疗3个疗程后NSE水平高于对照组(P<0.05);RB组化疗前、化疗3个疗程后、化疗6个疗程后CA153、CA199水平高于对照组(P<0.05)。RB组化疗前、化疗3个疗程后、化疗6个疗程后AFP、CEA、CA125、CA153、CA199、CA724水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);RB组化疗6个疗程后NSE水平低于化疗前、化疗3个疗程后(P<0.05)。结论血清NSE、CA153、CA199水平对RB诊疗有重要意义,可以作为RB的肿瘤标志物;其中NSE水平下降相对较早,更有利于早期诊断RB的复发。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 标记 生物学 甲胎蛋白 癌胚抗原 神经元特异性烯醇酶 蛋白抗原
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MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义 被引量:11
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作者 龙华 姜发纲 《眼科新进展》 CAS 2006年第12期908-910,共3页
目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2... 目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2和MMP-9的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-9的差异。结果在41例Rb组织切片中均有MMP-2和MMP-9的表达。有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-9表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01)。结论Rb细胞内有MMP-2和MMP-9的表达。MMP-2和MMP-9的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学
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Cdt1和Mcm6在视网膜母细胞瘤中的表达和意义 被引量:2
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作者 吴星 宋志刚 +1 位作者 尹东芳 李朝辉 《海南医学院学报》 CAS 2015年第6期862-864,共3页
目的:探讨Cdc10依赖性转录因子1(Cdt1)和微小染色体维持蛋白6(Mcm6)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法:应用免疫组织化学方法对26例Rb常规石蜡标本中Cdt1和Mcm6的表达进行检测,分析二者与肿瘤分化... 目的:探讨Cdc10依赖性转录因子1(Cdt1)和微小染色体维持蛋白6(Mcm6)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法:应用免疫组织化学方法对26例Rb常规石蜡标本中Cdt1和Mcm6的表达进行检测,分析二者与肿瘤分化程度及视神经浸润的关系。结果:Cdt1和Mcm6在所有Rb中呈阳性表达,在瘤旁正常视网膜中不表达;二者在未分化组中的表达高于分化组,差异有统计学意义(P<0.01);在视神经浸润组中Cdt1的表达低于未浸润组差异有统计学意义(P<0.05);Mcm6的表达与视神经浸润不相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Cdt1和Mcm6与Rb的分化程度有关,Cdt1与视神经浸润有关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞 Cdc10依赖性转录因子1 微小染色体维持蛋白6
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