谷胱甘肽过氧化物酶4在保山猪中的转录调控

1

作者 袁清婷 林万 +5 位作者 赵桂英 赵加鼎 龚绍荣 富国文 王配 霍金龙 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期32-41,共10页

【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)基因在保山猪中的序列特征、分子结构和表达调控模式。【方法】利用前期保山猪公猪睾丸转录组测序结果定量GPX4基因的表达水平,并对其蛋白质的一级结构、二级结构及三... 【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)基因在保山猪中的序列特征、分子结构和表达调控模式。【方法】利用前期保山猪公猪睾丸转录组测序结果定量GPX4基因的表达水平,并对其蛋白质的一级结构、二级结构及三级结构特征进行分析;构建多物种氨基酸序列进化树和蛋白互作网络图,分析各物种间的保守同源性和互作蛋白的功能;构建竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络分析图,并进行KEGG和GO功能注释。【结果】GPX4的编码序列长594 bp,编码197个氨基酸,位于猪的2号染色体上,含有7个外显子和6个内含子。疏水性分析结果发现该蛋白质N端和C端都疏水,其二级和三级结构中无规则卷曲占比为36.55%,高于其他结构域。系统进化分析表明:GPX4的氨基酸序列在哺乳动物中较为保守,尤其与偶蹄目的山羊和绵羊亲缘关系最近。蛋白互作网络发现了多个与GPX4互作的蛋白,如GSR、PRDX6、GRSF1、CHAC1、HSPA5,这些蛋白主要在甲状腺激素合成、铂类药物耐药性、肝细胞癌、铁死亡等相关通路中发挥作用。基因功能分析发现:GPX4基因主要参与精子发生、抗氧化、抗铁死亡等过程。ceRNA调控网络分析发现:保山猪GPX4基因受ssc-miR-214-3p靶向调控。GPX4的qPCR结果显示:GPX4在保山猪睾丸中的相对表达量最高,且其表达量随着保山猪年龄的增长而增加。【结论】研究结果为深入研究GPX4在保山猪精子发生过程中的转录调控作用奠定了基础。 展开更多

关键词 保山猪 谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4) 精子发生 转录调控

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苦瓜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶cDNA的克隆及其特征分析 被引量：14

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作者 李文君 刘进元 赵南明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期908-911,共4页

根据谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 (PHGPX)氨基酸序列中高度保守的区段设计引物 ,采用RACE PCR从苦瓜中克隆到一个全长 92 7bp的cDNA片段 .DNA序列的数据库分析比较表明 ,该cDNA编码 16 7个氨基酸 ,含有动植物PHGPX的特征结构 ,是一个新发... 根据谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 (PHGPX)氨基酸序列中高度保守的区段设计引物 ,采用RACE PCR从苦瓜中克隆到一个全长 92 7bp的cDNA片段 .DNA序列的数据库分析比较表明 ,该cDNA编码 16 7个氨基酸 ,含有动植物PHGPX的特征结构 ,是一个新发现的苦瓜PHGPX基因 (mocPHGPX) .RNA印迹结果显示 ,该基因在苦瓜幼苗的根中表达相对较弱 ,茎的信号较强 ,叶中最强 . 展开更多

关键词 苦瓜 CDNA 克隆 序列特征 谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 植物

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麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质 被引量：2

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作者 王晶晶 张新笑 +4 位作者 卞欢 耿志明 李鹏鹏 王道营 徐为民 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1120-1126,共7页

[目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨... [目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨酸突变体DGPx4表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→ Cys),并在大肠杆菌中通过添加His标签进行可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化得到融合蛋白DGPx4;采用总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒检测DGPx4活力以研究其酶学性质。[结果]克隆获得的DGPx4基因编码序列全长516 bp,编码172个氨基酸,编码蛋白分子量约20 kD,理论等电点(pI)为8.9。构建的突变体基因原核表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→Cys)可在大肠杆菌中成功诱导表达获得融合蛋白DGPx4,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析即获得高纯度的DG-Px4。以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)为底物时,DGPx4的最适反应温度为32 ℃,最适pH为8.0,对NaCl浓度较敏感;Cu^2+和Ni^2+对DGPx4活力有较高的促进作用,Mg^2+和Mn^2+对DGPx4活力有一定的抑制作用,Ca^2+和Zn^2+对DG-Px4活力则无明显的促进或抑制作用。[结论]从鸭肝细胞中克隆获得的DGPx4基因序列经定点突变后可在原核细胞中高效表达,且纯化后的高纯度融合蛋白DGPx4具有GPx4活力,能在抗脂质氧化过程中发挥作用。 展开更多

关键词 麻鸭 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(gpx4) 原核表达 纯化 酶学性质

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水稻磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在蛋白质水平上的组织和诱导表达特征(英文) 被引量：5

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作者 李甜 杨晓东 刘进元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第1期77-82,共6页

蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重... 蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重要作用.采用Westernblot技术,分析了水稻PHGPx(OsPHGPx)在水稻不同组织以及多种胁迫条件下的蛋白质表达特征.结果表明,OsPHGPx在成熟水稻植株内主要分布于叶组织中,以旗叶中含量最高,而在水稻幼苗中则在茎及叶组织中均检测到较强的杂交信号.OsPHGPx在幼苗中的表达受到H2O2和NaCl的强烈诱导,但植物激素对其表达的影响较弱.H2O2和NaCl的诱导效果呈现出时间及剂量的相关性,当用0.5mmol/LH2O2处理12h或用500mmol/LNaCl处理24h,此时OsPHGPx表达量达到最大值.对H2O2清除剂二甲基硫脲处理的水稻幼苗,外源H2O2的再处理并不能诱导OsPHGPx的表达,而NaCl的诱导效果并不受影响,说明H2O2可能并不介导NaCl诱导OsPHGPx的表达.这些结果为进一步研究OsPHGPx在水稻中生物学功能奠定了基础. 展开更多

关键词 水稻 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 蛋白质表达谱 氧化胁迫 盐胁迫

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萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因结构及其调控序列分析(英文) 被引量：6

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作者 杨晓东 刘进元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期649-656,共8页

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPH... 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPHGPx基因的表达可能受发育和环境胁迫信号的复杂调控.要深入了解该基因的表达调控机制首先必须阐明RsPHGPx基因的结构及其上游调控序列.DNA印迹表明萝卜RsPHGPx基因以单拷贝的形式存在于基因组中.以基因组DNA为模板,通过常规PCR与染色体步行相结合的方法克隆到了一段3.3kb长的RsPHGPx基因组序列.分析发现,该基因由7个外显子和6个内含子组成,所有内含子的剪切位点均符合真核生物GT-AG规则.另外还发现该基因的上游基因是生物素合成酶基因;位于RsPHGPx基因上游的调控序列只有不足300bp.这些结构特征与拟南芥AtGPX3基因极其相似.顺式作用元件的数据库搜索发现RsPHGPx基因的上游调控序列含有多个响应激素(如E-Box和W-Box)、胁迫(如转录因子MYB和MYC的结合位点)和光(如BoxⅡ和Ⅰ-Box)信号的元件.RNA印迹分析表明RsPHGPx基因的表达受到脱落酸(ABA)和连续光照(在黄化苗中)处理的负调控,受到冷胁迫(4℃)的正调控,这暗示了预测的顺式作用元件的调控作用.然而,除草剂paraquat对该基因表达的正调控作用,暗示了某些与氧化胁迫相关的未知元件的存在.这些结果进一步印证了RsPHGPx基因的表达受发育和环境胁迫信号复杂调控的推测.这是迄今为止首个关于植物PHGPx基因结构和上游调控序列的系统报道,为今后全面认识植物PHGPx基因的表达调控机制奠定了必要基础. 展开更多

关键词 萝卜 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 基因结构 上游调控序列 顺式作用元件

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磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在精子发育中的作用研究进展 被引量：2

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作者 蔡丝丝 刘金 +1 位作者 王林川 陈芳艳 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期116-119,146,共5页

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是广泛存在于哺乳动物细胞内唯一能够直接还原生物膜上脂类过氧化物的一类含硒酶。该酶在保护细胞膜完整、维持细胞的正常功能中发挥着重要作用;同时PHGPx还作为精子的结构物质,在精子的发育和成熟过程... 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是广泛存在于哺乳动物细胞内唯一能够直接还原生物膜上脂类过氧化物的一类含硒酶。该酶在保护细胞膜完整、维持细胞的正常功能中发挥着重要作用;同时PHGPx还作为精子的结构物质,在精子的发育和成熟过程中发挥着重要作用;精液中PHGPx活性是评价精液品质的重要参数之一。对PHGPx的基因结构、体内分布以及与精子发育与成熟相关的生物学特性和功能等研究进展进行了总结。 展开更多

关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHgpx) 生物学功能 精子发育与成熟

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山参磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶cDNA克隆及序列分析 被引量：1

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作者 冯凯 李胜 +3 位作者 麻锐 姜锐 孙立伟 陈伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期152-155,共4页

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)具有明显的抗氧化活性,避免细胞膜受到过氧化损伤。本研究利用RACE技术,克隆出山参phgpx基因全长c DNA。序列分析表明:该克隆片段全长490 bp,编码162个氨基酸,有3个真核生物PHGPx特有的保守亚结构域。... 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)具有明显的抗氧化活性,避免细胞膜受到过氧化损伤。本研究利用RACE技术,克隆出山参phgpx基因全长c DNA。序列分析表明:该克隆片段全长490 bp,编码162个氨基酸,有3个真核生物PHGPx特有的保守亚结构域。该片段编码的蛋白为跨膜亲水性稳定蛋白质,与柑橘、蓖麻等PHGPx氨基酸序列同源性分别为76%和75%。同时建立了9种植物的系统进化树。 展开更多

关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 基因克隆 山参

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N末端缺失萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及结构预测 被引量：2

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作者 王丰 刘进元 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期148-153,共6页

将N末端定位信号缺失萝卜PHGPx(RsPHGPx)的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化至大肠杆菌内进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了用于晶体学研究的RsPHGPx.其浓度约为10 g/L,纯度超过95%,具有PHGPx活性... 将N末端定位信号缺失萝卜PHGPx(RsPHGPx)的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化至大肠杆菌内进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了用于晶体学研究的RsPHGPx.其浓度约为10 g/L,纯度超过95%,具有PHGPx活性.三维结构同源建模显示RsPHGPx的结构为典型的硫氧还蛋白折叠形式. 展开更多

关键词 萝卜 谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 表达 纯化

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水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及晶体生长条件初筛 被引量：1

9

作者 王丰 刘进元 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1701-1706,共6页

将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子... 将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子量为19642.5553,与理论分子量基本一致.OsPHGPx在多个晶体生长条件下出现微晶.三维结构同源建模显示OsPHGPx的结构为硫氧还蛋白折叠形式. 展开更多

关键词 水稻 谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶 表达 纯化 晶体生长 三维结构建模

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烟粉虱MEAM1隐种磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因克隆与表达分析

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作者 纠敏 汪伦记 +4 位作者 任利娜 代威 李晶晶 赵君峰 张敏 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期141-149,共9页

【目的】本研究旨在从烟粉虱Bemisia tabaci中东-小亚细亚1隐种(Middle East-Asia Minor 1, MEAM1)中克隆磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase, PHGPX)基因,鉴定其在烟粉虱不同发育阶段及吡虫... 【目的】本研究旨在从烟粉虱Bemisia tabaci中东-小亚细亚1隐种(Middle East-Asia Minor 1, MEAM1)中克隆磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase, PHGPX)基因,鉴定其在烟粉虱不同发育阶段及吡虫啉处理不同时间后雌成虫体内的表达情况,明确其在烟粉虱应对外界环境压力中的功能。【方法】利用3′RACE克隆和测定烟粉虱MEAM1隐种内PHGPX基因的cDNA全长序列,并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;利用定量RT-PCR技术对该基因在烟粉虱MEAM1隐种不同发育阶段及吡虫啉处理不同时间后雌成虫体内的表达量进行分析。【结果】获得了烟粉虱MEAM1隐种两个磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因的全长cDNA序列,分别命名为BtB-PHGPX1(GenBank登录号:KY312116)和BtB-PHGPX2(GenBank登录号:KY312117)。序列分析表明,BtB-PHGPX1基因开放阅读框全长732 bp,编码243个氨基酸;BtB-PHGPX2基因开放阅读框全长567 bp,编码188个氨基酸。序列比对结果表明两基因的编码蛋白内均具有谷胱甘肽过氧化物酶保守的半胱氨酸、谷氨酰胺和色氨酸残基位点。BtB-PHGPX1在烟粉虱MEAM1隐种卵内表达量显著高于其在若虫、伪蛹、雌成虫和雄成虫内的表达量,BtB-PHGPX2在烟粉虱MEAM1隐种卵内的表达量显著低于其在若虫、伪蛹和雌成虫内的表达量(P<0.05)。BtB-PHGPX1和BtB-PHGPX2在雌成虫内的表达量均显著高于雄成虫内。吡虫啉处理雌成虫2 h时两基因的表达量均较对照显著提高(P<0.05),处理后5, 10和24 h时其表达量均较对照显著下降(P<0.01)。【结论】本研究克隆了烟粉虱MEAM1隐种两个PHGPX基因的序列全长,明确了其在不同发育阶段及吡虫啉处理不同时间后雌成虫体内的差异表达,推测PHGPX在烟粉虱抵御环境压力及杀虫剂胁迫时可能发挥着重要的防御作用。 展开更多

关键词 烟粉虱 MEAM1隐种 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 氧化应激 吡虫啉

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突变型p53通过下调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达和增加脂质活性氧产生促进人结肠癌和肺癌细胞的铁死亡 被引量：7

11

作者 雎转 张瑞 +1 位作者 杨安钢 尹会龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期522-527,共6页

目的探究突变型p53对肿瘤细胞铁死亡的影响。方法利用点突变构建突变型p53-R175H、p53-R273H的质粒,通过慢病毒包装、感染和药物筛选,建立稳定过表达突变型p53的肿瘤细胞系,并采用Western blot法对稳定过表达效果进行验证;通过碘化丙啶(... 目的探究突变型p53对肿瘤细胞铁死亡的影响。方法利用点突变构建突变型p53-R175H、p53-R273H的质粒,通过慢病毒包装、感染和药物筛选,建立稳定过表达突变型p53的肿瘤细胞系,并采用Western blot法对稳定过表达效果进行验证;通过碘化丙啶(PI)染色、脂质活性氧(ROS)的检测观察突变型p53对铁死亡的影响;通过Western blot法检测稳定过表达突变型p53细胞系中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白水平。结果成功建立稳定过表达p53-R175H、p53-R273H的HCT116和A549细胞系;与对照组相比,稳定过表达p53-R175H、p53-R273H细胞的铁死亡明显增加,ROS积聚明显增加,细胞GPX4表达水平明显下调。结论突变型p53通过下调GPX4表达、产生过量脂质ROS促进肿瘤细胞的铁死亡。 展开更多

关键词 突变型P53 铁死亡 脂质过氧化 谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4)

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蛇床子素通过Nrf2-Gpx4铁死亡途径对肺炎支原体肺炎大鼠肺损伤的改善作用 被引量：20

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作者 赵丽娜 葛国岚 +1 位作者 李靖 韩雪 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期48-54,共7页

目的探讨蛇床子素对肺炎支原体肺炎大鼠肺损伤的影响及其机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、蛇床子素低剂量组(20 mg/kg)、蛇床子素高剂量组(40 mg/kg)、蛇床子素+ML385组(蛇床子素40 mg/kg+Nrf2抑制剂ML38530 mg/kg),每组12只。... 目的探讨蛇床子素对肺炎支原体肺炎大鼠肺损伤的影响及其机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、蛇床子素低剂量组(20 mg/kg)、蛇床子素高剂量组(40 mg/kg)、蛇床子素+ML385组(蛇床子素40 mg/kg+Nrf2抑制剂ML38530 mg/kg),每组12只。除正常组外,其余大鼠采用经鼻反复感染肺炎支原体构建肺炎模型,给予相应药物干预后,ELISA法检测血清MP-IgM、IL-6、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理学变化,检测肺组织MDA、GSH、Fe^(2+)水平和SOD活性,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率,RT-qPCR和Western blot法检测肺组织Nrf2、SLC7A11、Gpx4 mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清MP-IgM、IL-6、TNF-α水平和肺组织炎症浸润评分、MDA、Fe^(2+)水平、细胞凋亡率均升高(P<0.05),肺组织GSH水平、SOD活性、Nrf2、SLC7A11、Gpx4 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组比较,蛇床子素各剂量组大鼠血清MP-IgM、IL-6、TNF-α水平和肺组织炎症浸润评分、MDA、Fe^(2+)水平、细胞凋亡率均降低(P<0.05),肺组织GSH水平、SOD活性、Nrf2、SLC7A11、Gpx4 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);ML385可减弱蛇床子素对肺炎支原体肺炎大鼠肺损伤的保护作用(P<0.05)。结论蛇床子素可改善肺炎支原体肺炎大鼠肺损伤,其作用机制可能与激活Nrf2-Gpx4信号通路,抑制铁死亡有关。 展开更多

关键词 蛇床子素 肺炎支原体肺炎 肺损伤 铁死亡 核因子E2相关因子2(Nrf2) 谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4)

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GPX4失活通过JNK通路缓解LPS诱导巨噬细胞炎症反应

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作者 朱家威 赵潇晗 +5 位作者 马翠 汤超华 司玮 赵青余 张军民 秦玉昌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4178-4186,共9页

【目的】研究硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidases 4,GPX4)失活如何参与调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及其潜在的分子机制。【方法】体外培养RAW264.7巨噬细胞,以DMSO为对照,使用0.... 【目的】研究硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidases 4,GPX4)失活如何参与调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及其潜在的分子机制。【方法】体外培养RAW264.7巨噬细胞,以DMSO为对照,使用0.1~5.0μmol/L GPX4抑制剂FIN56处理,通过CCK-8法检测细胞活力和Western blotting检测GPX4蛋白表达水平,确定抑制剂最适浓度。将RAW264.7巨噬细胞分为4组:对照组,添加DMSO培养24 h;FIN56(GPX4抑制剂)组,添加0.5μmol/L FIN56培养24 h;DMSO-LPS组,DMSO培养24 h后使用LPS(100 ng/mL)刺激3 h;FIN56-LPS组,FIN56培养24 h后使用LPS刺激3 h。各组细胞经培养后,利用荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,HDCFDA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,使用试剂盒法检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,分别使用ELISA和荧光定量PCR检测促炎细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平和基因表达量,使用Western blotting法检测Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路相关蛋白表达水平。【结果】与DMSO处理相比,0.5μmol/L FIN56处理巨噬细胞24 h对细胞活性无显著影响(P>0.05),且显著降低GPX4蛋白表达水平(P<0.05),故选用0.5μmol/L FIN56用于后续实验。与对照组相比,FIN56和LPS均显著增加了ROS积累(P<0.05),而与DMSO-LPS组相比,FIN56-LPS组ROS水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,LPS可显著增加小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达量和IL-6含量,以及c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)和c-Jun磷酸化水平(P<0.05),而FIN56可显著下调LPS诱导的IL-6的mRNA表达量和含量及JNK和c-Jun磷酸化水平(P<0.05),但对p38蛋白(p38 MAPK,p38)、细胞外调节蛋白激酶(phosphorylate extracellular regulated protein kinases1/2,Erk1/2)蛋白表达水平无显著影响(P>0.05)。【结论】GPX4失活可有效阻断JNK和c-Jun磷酸化,从而特异性抑制LPS诱导的巨噬细胞的炎症反应。该结果可为以GPX4为靶点研发抗炎治疗策略提供理论依据。 展开更多

关键词 谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4) RAW264.7 JNK信号通路 炎症反应

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过表达KLF9增加GPX4和活性氧(ROS)水平抑制悬浮培养的SKOV3人卵巢癌细胞凋亡 被引量：2

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作者 彭映然 刘娟 +2 位作者 田小飞 张瑞 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期337-343,共7页

目的探究Kruppel样因子9/谷胱甘肽过氧化物酶4(KLF9/GPX4)信号轴对悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡的调控功能和机制。方法通过慢病毒感染在SKOV3细胞过表达和敲低KLF9表达水平,通过实时定量PCR和Western blot法进行验证。采用双荧光素酶报告... 目的探究Kruppel样因子9/谷胱甘肽过氧化物酶4(KLF9/GPX4)信号轴对悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡的调控功能和机制。方法通过慢病毒感染在SKOV3细胞过表达和敲低KLF9表达水平,通过实时定量PCR和Western blot法进行验证。采用双荧光素酶报告基因实验验证KLF9对GPX4的转录调控作用,采用流式细胞术检测SKOV3细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡比率。结果KLF9对GPX4的启动子区域有转录抑制作用。过表达KLF9的SKOV3细胞GPX4表达量增加,ROS水平上升。在悬浮培养条件下,SKOV3细胞ROS水平增加,过表达KLF9抑制SKOV3细胞凋亡,敲低KLF9则促进SKOV3细胞凋亡,与此同时正常的贴壁培养并没有观察到这一现象。结论过表达KLF9增加卵巢癌细胞GPX4和ROS水平,抑制悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 Kruppel样因子9(KLF9) 谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4) 活性氧(ROS) 细胞凋亡 SKOV3卵巢癌细胞

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铁死亡的分子机制及其对膀胱癌的影响 被引量：1

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作者 李瑞杰 宁艺萍 +1 位作者 袁亚成 杨旭凯 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期286-295,共10页

膀胱癌(bladder cancer,BC)是泌尿系统三大常见恶性肿瘤之一,具有发病率高、易转移、治疗效果不佳、预后较差的特点,严重威胁着全人类的健康。肿瘤细胞表现出强烈的需铁现象,而铁超载会诱导细胞发生铁死亡,即一种由脂质过氧化和细胞膜... 膀胱癌(bladder cancer,BC)是泌尿系统三大常见恶性肿瘤之一,具有发病率高、易转移、治疗效果不佳、预后较差的特点,严重威胁着全人类的健康。肿瘤细胞表现出强烈的需铁现象,而铁超载会诱导细胞发生铁死亡,即一种由脂质过氧化和细胞膜损伤引起的铁依赖性细胞死亡。因此,铁死亡具有很强的抗肿瘤潜力。铁死亡的分子机制与细胞磷脂代谢异常、铁代谢异常、抗氧化和非抗氧化系统Xc-/谷胱甘肽(glutathione,GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的失调有关。铁死亡相关分子在BC的发生和发展、转移、耐药及免疫反应等方面发挥着重要的作用,有望成为治疗BC的靶点。 展开更多

关键词 膀胱癌 铁死亡 脂质过氧化 磷脂代谢 铁代谢 Xc-/谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4 铁死亡相关分子

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大柴胡汤对家兔实验性动脉粥样硬化的形成及PHGPX的影响 被引量：18

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作者 王凤荣 杨关林 刘彤 《中华中医药学刊》 CAS 2007年第3期454-455,共2页

探讨大柴胡汤对高胆固醇饲喂的家兔动脉粥样硬化(AS)形成及其磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPX)的影响。实验结束后测定血脂、PHGPX、铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、脂质过氧化物(LPO),并观察主动脉的病理变化。结果发现大柴胡汤组血... 探讨大柴胡汤对高胆固醇饲喂的家兔动脉粥样硬化(AS)形成及其磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPX)的影响。实验结束后测定血脂、PHGPX、铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、脂质过氧化物(LPO),并观察主动脉的病理变化。结果发现大柴胡汤组血脂水平、PHGPX、Cu-Zn-SOD、LPO以及动脉粥样硬化斑块厚度,与AS组比较有非常显著性差异(P<0.01)。由此可见大柴胡汤具有抗AS作用,其机制可能与降低血脂、抗脂质过氧化有关。 展开更多

关键词 大柴胡汤 动脉粥样硬化 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHgpx)

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用免疫亲和层析法纯化萝卜PHGPx天然蛋白(英文) 被引量：7

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作者 杨晓东 刘进元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期794-799,共6页

萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)是一个定位于线粒体的蛋白质.为了阐明该蛋白质线粒体定位信号的准确切割位点,采用了免疫亲和层析方法纯化天然的RsPHGPx.用重组RsPHGPx 蛋白免疫兔子获得了抗RsPHGPx 的多克隆抗血清,以重组RsPH ... 萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)是一个定位于线粒体的蛋白质.为了阐明该蛋白质线粒体定位信号的准确切割位点,采用了免疫亲和层析方法纯化天然的RsPHGPx.用重组RsPHGPx 蛋白免疫兔子获得了抗RsPHGPx 的多克隆抗血清,以重组RsPH G Px 蛋白为配体,采用亲和层析技术对抗血清进行了纯化,得到了单特异性的抗RsPHGPx 的抗体.将纯化好的抗体偶联到一个N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)预先激活的琼脂糖柱子上,装配成一个以单特异性的抗RsPHGPx 抗体为配体的免疫亲和层析柱.经过对纯化条件的摸索和优化,形成了一个简单、特异的一步法纯化方案.按照该方案,从萝卜幼苗线粒体总蛋白质提取物中纯化到一个分子质量与预期值相一致的特异蛋白质.免疫印迹分析表明,该蛋白质被抗RsPH G Px 的抗血清特异识别.酶活性分析表明,该蛋白质具有显著的PH G Px 活性.这些结果表明,纯化到的特异蛋白质是萝卜的RsPH G Px天然蛋白.这是首个关于定位于植物细胞器的PH G Px 蛋白纯化的报道.这一结果为准确测定RsPH G Px 信号肽的切割位点奠定了基础,并将有助于对植物PH G Px 的亚细胞定位机制及其生理功能的深入研究. 展开更多

关键词 免疫亲和层析 天然蛋白质 多克隆抗体 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 萝卜

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PHGPx在体外共培养山羊睾丸生精细胞中的定位研究 被引量：1

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作者 施力光 荀文娟 +4 位作者 岳文斌 张春香 周汉林 侯冠 杨茹洁 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第4期19-21,共3页

为探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在雄性动物生殖机能中的作用及其在体外培养山羊睾丸生精细胞的定位,在已成功构建的山羊睾丸支持细胞-生精细胞共培养的基础上,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学技术定位PHGPx的表达。结果显示,PHGP... 为探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在雄性动物生殖机能中的作用及其在体外培养山羊睾丸生精细胞的定位,在已成功构建的山羊睾丸支持细胞-生精细胞共培养的基础上,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学技术定位PHGPx的表达。结果显示,PHGPx在支持细胞、精原细胞中不表达,在圆形精子细胞细胞质检测到阳性表达产物。表明PHGPx在精子发生后期圆形精子的变态发育中起特定的调节作用,但作用机制有待深入研究。 展开更多

关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 生精细胞体外共培养 山羊睾丸 细胞免疫化学

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NtPHGPx基因过表达和敲除对烟草苗期耐盐性的影响 被引量：2

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作者 郭鹏诚 杨晓宁 +5 位作者 毛辉 王学波 申展 刘旦 杨爱国 王元英 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2021年第2期8-14,27,共8页

为研究NtPHGPx基因对烟草耐盐性的影响,通过转基因技术获得NtPHGPx基因过表达和CRISPR/Cas9敲除材料,利用150 mmol/L NaCl对转基因材料处理14 d,研究盐处理下转基因材料根长、GPx酶活性、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量的变化... 为研究NtPHGPx基因对烟草耐盐性的影响,通过转基因技术获得NtPHGPx基因过表达和CRISPR/Cas9敲除材料,利用150 mmol/L NaCl对转基因材料处理14 d,研究盐处理下转基因材料根长、GPx酶活性、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量的变化。结果表明,NtPHGPx基因表达在盐胁迫3 h后即受到诱导;盐处理显著抑制了野生型烟草根部的生长,提高了丙二醛和过氧化氢的积累;盐胁迫下过表达株系的根长比野生型更长,MDA和H_(2)O_(2)含量较低,而基因敲除材料根的生长则进一步受到抑制,GPx酶活性明显降低,地上部MDA和H_(2)O_(2)的积累显著高于野生型。综上所述,过表达NtPHGPx基因提高了烟草的耐盐性,而敲除NtPHGPx基因则减弱了烟草的耐盐性,推测NtPHGPx基因可能通过影响烟草体内活性氧物质的清除活性参与植株对盐害的胁迫响应。 展开更多

关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 耐盐性 基因功能 烟草

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兔红细胞PHGPx活性研究及中药干预

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作者 吴文胜 刘彤 +1 位作者 王凤荣 杨关林 《中医药学刊》 CAS 2004年第6期1074-1075,共2页

目的 :探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)在动脉粥样硬化发生中的作用 ,以及中药补阳还五汤对PHGPx水平的影响。方法 :检测动脉粥样硬化兔模型红细胞PHGPx水平 ,同时分组应用补阳还五汤干预治疗 ,观察PHGPx水平的改变及与血脂的关... 目的 :探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)在动脉粥样硬化发生中的作用 ,以及中药补阳还五汤对PHGPx水平的影响。方法 :检测动脉粥样硬化兔模型红细胞PHGPx水平 ,同时分组应用补阳还五汤干预治疗 ,观察PHGPx水平的改变及与血脂的关系。结果 :实验组兔平均PHGPx活性明显低于对照组 (P <0 .0 1) ,而中药组PHGPx活性水平高于实验组 (P <0 .0 5 )。结论 :PHGPx酶活性降低可能是动脉壁氧化损伤的机制之一 ,补阳还五汤对提高PHGPx水平 ,降血脂有作用。 展开更多

关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 补阳还五汤 动脉粥样硬化 兔红细胞PHgpx 酶活性 中药干预

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