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碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞损伤及血管生成反应的影响
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作者 吴承鼎 申海翠 +2 位作者 顾琳虹 周佳 王继红 《眼科新进展》 北大核心 2025年第6期435-439,共5页
目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)损伤及血管生成反应的影响。方法将传至4~6代的hRMEC加入无血清培养基中培养6 h后,分别置于正常浓度葡萄糖(5.6 mmol·L^(-1))、正... 目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)损伤及血管生成反应的影响。方法将传至4~6代的hRMEC加入无血清培养基中培养6 h后,分别置于正常浓度葡萄糖(5.6 mmol·L^(-1))、正常浓度葡萄糖+甘露醇(24.4 mmol·L^(-1))、高浓度葡萄糖(30.0 mmol·L^(-1))、空白siRNA+高浓度葡萄糖及ChREBP siRNA+高浓度葡萄糖进行处理,分别设为对照组、高渗组、单纯高糖组、空白siRNA组及ChREBP敲低组。细胞转染采用Lipofectamine RNAiMAX,转染时间24 h。采用Western blot分析高糖环境下hRMEC中ChREBP表达情况。TUNEL染色、细胞划痕实验、Transwell迁移实验及成管实验分析细胞凋亡、迁移及毛细血管生成情况。选择ChREBP基因正常表达野生型和ChREBP基因敲除突变型小鼠构建相关动物模型,在显微镜下计数小鼠视网膜新生血管发芽数量。结果高糖刺激30 min后hRMEC中ChREBP蛋白相对表达量均显著高于刺激15 min、1 h、2 h、3 h后(均为P<0.05),同时高糖刺激2 h后hRMEC中TXNIP蛋白相对表达量均显著高于刺激15 min、30 min、1 h、3 h后(均为P<0.05)。高糖状态下ChREBP敲低组hRMEC中TXNIP及NLRP3蛋白相对表达量均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组(均为P<0.05)。TUNEL染色、细胞划痕实验及毛细血管成管实验结果显示,ChREBP敲低组hRMEC中相对凋亡率、相对细胞覆盖面积百分比和相对迁移细胞数量百分比均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组,而环状结构数量均显著低于空白siRNA组、单纯高糖组及高渗组(均为P<0.05)。ChREBP敲低组hRMEC中p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR相对表达水平均显著低于空白siRNA组及单纯高糖组(均为P<0.05)。ChREBP基因敲除突变型小鼠视网膜新生血管发芽数为(22.81±4.03)个,显著少于ChREBP基因正常表达野生型的(64.35±11.69)个(P<0.05)。结论ChREBP基因可通过调节高糖状态下hRMEC细胞凋亡、迁移、成管及视网膜新生血管发育而影响糖尿病视网膜病变的发生与发展,这可作为该病潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件结合蛋白 糖尿病视网膜病变 视网膜微血管内皮细胞
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调控糖酵解和生脂的重要转录因子:碳水化合物反应元件结合蛋白 被引量:7
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作者 卢建雄 陈粉粉 杨公社 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期266-269,共4页
碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element bind ing protein,ChREBP)是最近发现和分离的一种重要的转录调控因子,它直接激活多个参与糖酵解和脂肪合成基因的表达,从而调控糖代谢和脂肪酸合成。研究ChREBP表达的调控... 碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element bind ing protein,ChREBP)是最近发现和分离的一种重要的转录调控因子,它直接激活多个参与糖酵解和脂肪合成基因的表达,从而调控糖代谢和脂肪酸合成。研究ChREBP表达的调控机制及生物学效应,将有助于全面认识肥胖、糖尿病等代谢综合征的发病机制。本文综述了碳水化合物调控元件(carbohydrate response ele-ment,ChRE)及ChREBP的结构,ChREBP DNA结合活性的活化过程和分子机制,以及对靶基因的作用。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件结合蛋白 转录因子 糖酵解 脂肪合成
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转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白对肝脏糖脂代谢的调节作用 被引量:4
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作者 周露婷 章卫平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期318-322,共5页
肝脏是体内糖脂代谢的重要器官,转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)是调节肝脏糖酵解及脂肪合成的重要转录因子。ChREBP与Max样蛋白X以异二聚体的形式调控葡萄糖利用及转化为脂肪过程中大量基因的表达。在ob/ob小鼠肝细胞特异... 肝脏是体内糖脂代谢的重要器官,转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)是调节肝脏糖酵解及脂肪合成的重要转录因子。ChREBP与Max样蛋白X以异二聚体的形式调控葡萄糖利用及转化为脂肪过程中大量基因的表达。在ob/ob小鼠肝细胞特异性敲除ChREBP基因后能明显改善其脂肪肝及胰岛素抵抗。阐明ChREBP对糖脂代谢的调控机制及其生物学功能,可进一步解释葡萄糖诱导脂肪形成的过程,并有望为脂肪肝等代谢性疾病的干预治疗提供新的思路。本文对ChREBP的结构特征、调控机制、生物学功能及其与疾病的关系等最新进展进行综述。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件结合蛋白 糖酵解 脂肪生成 脂肪肝
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有氧运动对高糖高脂膳食大鼠肝脏碳水化合物反应元件结合蛋白mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 刘建红 黄森 +1 位作者 林文弢 翁锡全 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期624-626,共3页
目的:观察有氧运动对高糖高脂膳食大鼠肝组织碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为4组:安静对照组、运动对照组、高糖高脂安静组和高糖高脂运动组,每组8只。安静对照组和运动对照组食用普通... 目的:观察有氧运动对高糖高脂膳食大鼠肝组织碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为4组:安静对照组、运动对照组、高糖高脂安静组和高糖高脂运动组,每组8只。安静对照组和运动对照组食用普通饲料,高糖高脂组食用高糖高脂饲料,运动组每天运动1小时,跑速为25m/min,坡度为0°,每周运动6天。6周后,取血检测总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)浓度,并取附睾与肾周脂肪垫称重,用荧光定量PCR技术检测肝组织ChREBP mRNA表达水平。结果:高糖高脂安静组附睾与肾周脂肪垫重量和血TG、TC浓度均显著高于安静对照组(P<0.05),运动对照组则明显低于安静对照组(P<0.05);与高糖高脂安静组比较,高糖高脂运动组体重和附睾与肾周脂肪垫重量均明显降低(P<0.05),血TG浓度亦显著降低(P<0.01);高糖高脂安静组ChREBP mRNA表达显著高于安静对照组(P<0.01),运动对照组与普通安静组无明显差别,而高糖高脂运动组显著低于安静对照组(P<0.01)。结论:有氧运动能有效抑制高糖高脂膳食引起肝脏组织中ChREBP mRNA表达增加,可能是有氧运动降低高糖高脂膳食造成机体肥胖的机理之一。 展开更多
关键词 高糖高脂膳食 碳水化合物反应元件结合蛋白 有氧运动
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碳水化合物反应元件结合蛋白条件性基因敲除小鼠模型的建立及鉴定 被引量:2
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作者 李昊 师建辉 +3 位作者 魏纯纯 麻献华 陈玉霞 章卫平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期142-148,共7页
目的建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞(ES细胞)的基因同源重组,在ChR... 目的建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞(ES细胞)的基因同源重组,在ChREBP基因第8外显子的两侧分别引入loxP位点;将打靶成功的ES细胞显微注射至小鼠囊胚,然后植入假孕雌鼠子宫获得嵌合鼠,进一步获得可种系传代的ChREBP?ox/+小鼠;将ChREBP?ox/+小鼠与Alb-Cre小鼠交配,获得ChREBP的肝脏特异性基因敲除小鼠。结论建立了ChREBP条件性基因敲除小鼠模型,为揭示不同组织中ChREBP的生理功能和病理学意义提供了重要手段。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件结合蛋白 果糖代谢 脂代谢 基因敲除小鼠 基因打靶
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碳水化合物反应元件结合蛋白的研究进展
6
作者 唐慧 潘志雄 +7 位作者 王继文 易军 王淮 易礼胜 邓由飞 甘佳 俄木曲者 付茂忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第1期93-98,共6页
糖脂代谢是人和动物正常生长发育的能源基础,这将直接影响着动物的脂质性状,因此糖脂代谢目前已经成为培育优质畜禽品种的切入点。近年来,发现碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,ChREBP)在调... 糖脂代谢是人和动物正常生长发育的能源基础,这将直接影响着动物的脂质性状,因此糖脂代谢目前已经成为培育优质畜禽品种的切入点。近年来,发现碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,ChREBP)在调控动物糖脂代谢中具有重要的作用,特别在糖脂代谢的主要场所——肝脏中对糖脂代谢发挥着关键作用。作者就ChREBP的结构特征、组织分布、葡萄糖应答机制、生物学功能、表达调控等方面作一综述,以期为今后的研究提供理论依据。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件 肝脏脂肪变性 胰岛素抵抗
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调控糖酵解代谢的重要因子——碳水化合物反应元件结合蛋白研究进展
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作者 刘建红 周志宏 黄森 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期600-602,共3页
碳水化合物反应元件结合蛋白( carbohydrate responseelement binding protein, ChREBP)是一种能与碳水化合物反应元件(carbohydrate response element,ChRE)结合的蛋白质,其组织分布、结构特性及DNA结合的活性与葡萄糖敏感转录... 碳水化合物反应元件结合蛋白( carbohydrate responseelement binding protein, ChREBP)是一种能与碳水化合物反应元件(carbohydrate response element,ChRE)结合的蛋白质,其组织分布、结构特性及DNA结合的活性与葡萄糖敏感转录因子的特征一致,能调节葡萄糖的敏感性,从而调节机体内糖和脂肪的代谢。 展开更多
关键词 反应元件结合蛋白 碳水化合物 糖酵解代谢 转录因子 PROTEIN 调控 DNA结合 组织分布
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碳水化合物结合域对木聚糖酶酶学性质的影响 被引量:1
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作者 蒋文萍 冉秋萍 +4 位作者 刘家书 张慧敏 张迪 江正兵 李华南 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期269-279,共11页
【目的】旨在探究不同来源碳水化合物结合域(CBM)对山毛榉木聚糖的结合能力,并将具有较高结合能力的外源CBM融合到链霉菌L10904木聚糖酶(XYN)的C端和N端,以探究外源CBM对木聚糖酶酶学性质的影响。【方法】通过底物吸附方法,利用考马斯亮... 【目的】旨在探究不同来源碳水化合物结合域(CBM)对山毛榉木聚糖的结合能力,并将具有较高结合能力的外源CBM融合到链霉菌L10904木聚糖酶(XYN)的C端和N端,以探究外源CBM对木聚糖酶酶学性质的影响。【方法】通过底物吸附方法,利用考马斯亮蓝G250法检测溶液中CBM在吸附前后的浓度,计算CBM的底物结合率,筛选到了结合木聚糖能力较好的CBM1和CBM4。为了探究对底物结合能力高的CBM融合位置对木聚糖酶酶学性质的影响,将CBM1和CBM4通过柔性连接肽分别与XYN的C端和N端融合,并在大肠杆菌中表达获得4种重组酶,分别命名为CBM1-XYN、XYN-CBM1、CBM4-XYN和XYN-CBM4。【结果】CBM1和CBM4与木聚糖结合率分别为89%和95%。在60℃,pH 7.0反应条件下,XYN、CBM1-XYN、XYN-CBM1、CBM4-XYN和XYN-CBM4的比活力分别是32 274.81、49 342.21、602.48、230.42和2 362.24 U/mg,CBM1-XYN比活力较XYN比活力提高了1.5倍。酶学性质分析表明,CBM1使XYN温度稳定性和pH稳定性得到了提高,将XYN和CBM1-XYN分别在60℃孵育1 h,CBM1-XYN残余酶活力和XYN残余酶活力分别为81%和28%;在pH 3-11范围内,CBM1-XYN在4℃孵育12 h后能够保持90%以上的酶活力。【结论】在大肠杆菌中成功异源表达了链霉菌来源的木聚糖酶,筛选到了对底物结合率高的两种CBM1和CBM4,并通过蛋白质融合技术成功将CBM融合到XYN上,获得酶学性质得到改良的CBM1-XYN,能够提高木聚糖酶的温度稳定性、pH耐受性及比酶活。 展开更多
关键词 碳水化合物结合 木聚糖酶 融合蛋白 可溶性表达 比活力 温度稳定性 pH稳定性
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cAMP反应元件结合蛋白:抗抑郁药信号转导通路的交汇点 被引量:32
9
作者 卢峻 杨秀岩 +2 位作者 华茜 李卫东 图娅 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期371-374,共4页
本文综述了参与抑郁症和抗抑郁药作用的三条信号转导通路:环磷酸腺苷(cAMP)通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、钙调蛋白激酶(CaMK)通路,以及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)作为上述通路交汇点的... 本文综述了参与抑郁症和抗抑郁药作用的三条信号转导通路:环磷酸腺苷(cAMP)通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、钙调蛋白激酶(CaMK)通路,以及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)作为上述通路交汇点的研究进展,并探讨了新型抗抑郁药的可能作用靶点。 展开更多
关键词 抑郁症 信号转导 CAMP反应元件结合蛋白
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8Hz 90dB次声作用对大鼠海马蛋白激酶A表达及cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响 被引量:5
10
作者 刘朝晖 陈景藻 +2 位作者 邱建勇 鲁睿 袁晓朝 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期198-201,共4页
目的:观察8Hz90dB次声作用对大鼠海马PKA表达及CREB磷酸化水平的影响。方法:采用免疫组织化学方法,观察8Hz90dB次声作用不同时间点大鼠海马PKA表达及p-CREB-1(Ser-133)磷酸化水平。结果:8Hz90dB次声作用后,大鼠海马CA1区各时间点PKA表... 目的:观察8Hz90dB次声作用对大鼠海马PKA表达及CREB磷酸化水平的影响。方法:采用免疫组织化学方法,观察8Hz90dB次声作用不同时间点大鼠海马PKA表达及p-CREB-1(Ser-133)磷酸化水平。结果:8Hz90dB次声作用后,大鼠海马CA1区各时间点PKA表达均上调,相应时间点CREB磷酸化水平亦上调,两者之间的变化呈显著正相关。CA3区除7d组PKA表达上调、CREB磷酸化水平亦上调外,两者之间总变化趋势为显著负相关。DG各时间点PKA表达与CREB磷酸化水平变化之间无显著相关性。结论:8Hz90dB次声作用对大鼠海马各区PKA表达及CREB磷酸化水平均有不同程度的影响,提示次声对学习记忆功能影响的机制可能涉及对cAMP浓度增高→PKA激活→CREB磷酸化→CRE依赖性转录这一分子链产生了干扰作用。 展开更多
关键词 次声 学习记忆 蛋白激酶A CAMP反应元件结合蛋白 海马 大鼠
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加味四逆散对皮质酮和谷氨酸致损伤的PC12细胞中cAMP反应元件结合蛋白及其磷酸化的影响 被引量:6
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作者 严灿 吴丽丽 +3 位作者 潘毅 宋清 冉川莲 刘书考 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期270-274,共5页
目的研究中药复方加味四逆散(JWSNS)对皮质酮和谷氨酸致损伤的PC12细胞中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化的影响。方法以200μmol.L-1Cort和50μmol.L-1Glu损伤的PC12细胞作为体外药理学研究模型,制备JWSNS含药血清,采用免疫组织... 目的研究中药复方加味四逆散(JWSNS)对皮质酮和谷氨酸致损伤的PC12细胞中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化的影响。方法以200μmol.L-1Cort和50μmol.L-1Glu损伤的PC12细胞作为体外药理学研究模型,制备JWSNS含药血清,采用免疫组织化学法和West-ernblot法检测PC12细胞损伤模型中CREB和磷酸化CREB蛋白的表达。结果200μmol.L-1Cort和50μmol.L-1Glu可导致PC12细胞中CREB和p-CREB表达下降(CREB阳性细胞率分别为17.1%±4.2%和20.8%±5.7%,p-CREB表达量分别为0.587±0.123和0.515±0.157,P<0.05或P<0.01),10%JWSNS含药血清能升高CREB和p-CREB的表达(CREB阳性细胞率分别为62.6%±11.7%和79.5%±7.6%,p-CREB表达量分别为1.298±0.112和1.269±0.128,P<0.05或P<0.01)。结论10%JWSNS含药血清能通过调节cAMP-CREB信号通路发挥其神经保护和抗抑郁的作用。 展开更多
关键词 加味四逆散 皮质酮 谷氨酸 PC12细胞 CAMP反应元件结合蛋白
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cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在单眼剥夺弱视大鼠视皮层中的表达研究 被引量:9
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作者 李侲宇 钱益勇 +2 位作者 张振平 康瑛 印湖莲 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期245-250,共6页
目前已对突触可塑性的基本特性有了相当程度的认识 ,但对其发育中神经元可塑性的内在分子机制尚待进一步阐明。不少研究提示 ,c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)在学习、记忆和长时程增强 ( LTP)过程中参与长时程突触的可塑性调节 ,推测其... 目前已对突触可塑性的基本特性有了相当程度的认识 ,但对其发育中神经元可塑性的内在分子机制尚待进一步阐明。不少研究提示 ,c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)在学习、记忆和长时程增强 ( LTP)过程中参与长时程突触的可塑性调节 ,推测其在视觉系统可塑性中也发挥着重要作用。本研究通过建立幼年大鼠单眼剥夺弱视模型 ,应用免疫组织化学方法 ,对视觉发育关键期末 ( P45 )大鼠和成年 ( P90 )大鼠视皮层中 CREB和 p CREB的免疫反应性进行观察、比较和分析。结果 :视觉发育关键期内进行单眼视觉剥夺对大鼠视皮层内总 CREB的蛋白表达没有产生显著影响 ,而 p CREB在 P45大鼠的剥夺眼对侧视皮层单眼反应区的 / 、 层中的蛋白表达较剥夺眼同侧视皮层的相应区域弱 ,该差异在该年龄大鼠的双眼反应区及成年后大鼠视皮层内不存在。结论 展开更多
关键词 CAMP反应元件结合蛋白 CREB 免疫组织化学 大鼠 磷酸化 视觉系统
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气味对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白的影响 被引量:8
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作者 王小艳 董军 陆大祥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期367-370,共4页
目的:探讨不同气味(苹果、香水、樟脑)对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化的CREB(pCREB)的影响。方法:让小鼠在不同气味的环境下生活14d,在第7d开始方形水迷宫训练,3d后进行测试,连续测试5d。测试完后断髓处... 目的:探讨不同气味(苹果、香水、樟脑)对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化的CREB(pCREB)的影响。方法:让小鼠在不同气味的环境下生活14d,在第7d开始方形水迷宫训练,3d后进行测试,连续测试5d。测试完后断髓处死动物,取出脑组织,用免疫组织化学染色观察海马pCREB和CREB表达情况,并进行图像分析。结果:樟脑组和香水组水迷宫的潜伏期较对照组延长,错误次数增多(P<0.05)。免疫组化染色显示鼠海马CREB的磷酸化水平大大降低(P<0.05),但对CREB的表达无明显影响。苹果组与对照组比各指标均无显著差异(P>0.05)。结论:樟脑气味和香水气味对小鼠记忆能力有负面作用,且这种作用可能是通过降低CREB磷酸化水平而实现的。苹果气味对小鼠记忆能力无明显影响。 展开更多
关键词 气味 学习 记忆 CAMP反应元件结合蛋白 海马
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缓激肽诱导胶质瘤细胞内cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的实验研究 被引量:4
14
作者 王振华 薛一雪 +1 位作者 刘丽波 王萍 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1444-1447,共4页
目的观察缓激肽作用下,大鼠C6胶质瘤细胞中转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element bind-ing protein,CREB)磷酸化的动态变化,并探讨其可能的意义。方法应用免疫细胞化学和Western blot方法,观察1μmol.L-1缓激肽作用C6胶... 目的观察缓激肽作用下,大鼠C6胶质瘤细胞中转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element bind-ing protein,CREB)磷酸化的动态变化,并探讨其可能的意义。方法应用免疫细胞化学和Western blot方法,观察1μmol.L-1缓激肽作用C6胶质瘤细胞在不同时相点(0,5,10,15,20,30min)CREB磷酸化的动态变化。结果1μmol.L-1缓激肽作用C6胶质瘤细胞的5到30min的各时相点均能检测到CREB的磷酸化(P<0.01),其中以15min的磷酸化最强(P<0.01)。结论缓激肽可促进大鼠C6胶质瘤细胞中转录因子CREB的磷酸化,此作用可能与其促进血肿瘤屏障的选择性开放有关。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 缓激肽 CAMP反应元件结合蛋白
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cAMP反应元件结合蛋白在LPS致肺微血管内皮细胞损伤过程中的作用 被引量:4
15
作者 徐秀娟 孙耕耘 +1 位作者 尤青海 张丹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期965-969,共5页
目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)炎症损伤过程中的作用。方法体外分离、培... 目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)炎症损伤过程中的作用。方法体外分离、培养RPMVEC基础上,Western blot法检测CREB磷酸化CREB水平,伊文思蓝-白蛋白法检测RPMVEC通透性。结果 LPS刺激RPMVEC后,CREB中Ser133位点磷酸化水平呈时间依赖性地增加,30 min时达到峰值,120 min仍未降至正常水平,加入10μmol·L-1V5681(PKA通路特异性抑制剂)共孵育后,CREB磷酸化几乎被完全抑制,RPMVEC单层通透性明显增加。结论 LPS能诱导RPMVEC中CREB快速磷酸化,PKA通路介导上述过程,CREB在LPS致RPMVEC炎症损伤过程中可能起到保护作用。 展开更多
关键词 CAMP反应元件结合蛋白 蛋白激酶A 脂多糖 肺微 血管内皮细胞 大鼠 通透性 急性呼吸窘迫综合征
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蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响 被引量:2
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作者 张晓静 丛斌 +6 位作者 刘威 李淑瑾 马春玲 倪志宇 付丽红 张国忠 左敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期896-900,共5页
目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶... 目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10μg/L孵育RSC-364细胞1h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(elec-trophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P<0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P<0.01)。结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性。 展开更多
关键词 蛋白质巯基亚硝基化 一氧化氮 CAMP反应元件结合蛋白 RSC-364细胞 关节炎 类风湿
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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量:1
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作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页
以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152~- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多
关键词 NGAL基因 寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应
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cAMP反应元件结合蛋白与神经退行性疾病 被引量:4
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作者 光红梅 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期262-266,共5页
cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response elem ent b ind-ing prote in,CREB)是位于细胞核内的转录因子。CREB的活性受到信号通路中许多因子的调控。CREB活化后与真核生物靶基因CRE序列结合并调节其转录,发挥多种生物学效应。在中枢神经系... cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response elem ent b ind-ing prote in,CREB)是位于细胞核内的转录因子。CREB的活性受到信号通路中许多因子的调控。CREB活化后与真核生物靶基因CRE序列结合并调节其转录,发挥多种生物学效应。在中枢神经系统,CREB调节着神经细胞生长发育,参与神经细胞突触可塑性、长时程记忆的形成过程。CREB参与阿尔采末病、血管性痴呆、亨廷顿舞蹈病及H IV-相关痴呆等神经退行性疾病的病理生理机制研究也取得了进展,成为以CREB作为靶点控制神经退行性疾病病程的理论基础。 展开更多
关键词 CAMP反应元件结合蛋白 神经退行性疾病 磷酸化
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活化蛋白-1和cAMP反应元件结合蛋白在脂多糖注射大鼠肺组织中的变化及地塞米松的影响 被引量:2
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作者 洪新 郭振辉 +1 位作者 毛宝龄 钱桂生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期121-124,共4页
目的探讨活化蛋白-1(AP-1)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在急性肺损伤(ALI)发生发展中的可能作用,以及地塞米松的抗炎作用机制。方法采用脂多糖(LPS)5mg/kg颈静脉注射复制ALI大鼠模型,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)观察ALI大鼠肺组... 目的探讨活化蛋白-1(AP-1)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在急性肺损伤(ALI)发生发展中的可能作用,以及地塞米松的抗炎作用机制。方法采用脂多糖(LPS)5mg/kg颈静脉注射复制ALI大鼠模型,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)观察ALI大鼠肺组织AP-1和CREB的改变和地塞米松的影响。结果ALI大鼠肺组织AP-1的DNA结合活性在2h达到峰值,12h后接近正常水平。CREB的活性在1h即到达峰值,但直到12h并未完全达到正常水平。地塞米松对AP-1和CREB的DNA结合活性均有显著抑制作用。结论AP-1和CREB可能在大鼠的急性肺损伤的发生中发挥重要作用,在转录水平的调节可能是糖皮质激素发挥抗炎作用的重要机制之一。 展开更多
关键词 活化蛋白-1 CAMP反应元件结合蛋白 脂多糖类 大鼠 吸吸窘迫综合征 成人
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cAMP反应元件结合蛋白在药物依赖形成中的作用 被引量:3
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作者 孟爱民 刘景生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期365-368,共4页
反复应用成瘾性药物引起中枢神经系统特定部位cAMP信号系统出现适应性改变 ,cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein ,CREB)是受cAMP调节的主要转录因子 ,在动物产生药物依赖时脑内CREB含量及磷酸化程度发生变化 ... 反复应用成瘾性药物引起中枢神经系统特定部位cAMP信号系统出现适应性改变 ,cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein ,CREB)是受cAMP调节的主要转录因子 ,在动物产生药物依赖时脑内CREB含量及磷酸化程度发生变化 ,与动物躯体依赖和精神依赖有关。 展开更多
关键词 CAMP反应元件结合蛋白 药物依赖形成 分子机制
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