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睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
被引量：
5
1
作者
张国华
徐国宾
+1 位作者
刘英民
夏铁安
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期966-969,共4页
从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析...
从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。
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关键词
睾酮假单胞菌
3α-羟类固醇脱氢酶基因
质粒载体
构建
表达
胆汁酸
血清
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职称材料
题名
睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
被引量：
5
1
作者
张国华
徐国宾
刘英民
夏铁安
机构
北京大学第一医院检验科
青岛市环保局崂山分局
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期966-969,共4页
文摘
从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。
关键词
睾酮假单胞菌
3α-羟类固醇脱氢酶基因
质粒载体
构建
表达
胆汁酸
血清
Keywords
Comamonas testosteroni , 3α hydroxysteroid dehydrogenase, recombinant plasmids, gene expression, bile acids
分类号
R446.1 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
张国华
徐国宾
刘英民
夏铁安
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002
5
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