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彭波半细毛羊冷冻保存睾丸组织支持细胞分离、纯化及鉴定
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作者 刘海霞 王健 +4 位作者 平措班旦 朱爱文 德庆卓嘎 王军 格桑加措 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期249-257,共9页
[目的]睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半... [目的]睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半细毛羊睾丸组织分离支持细胞的技术方法。[方法]将冷冻保存液预处理后冻存的彭波半细毛羊睾丸组织进行复苏,采用苏木精-伊红(HE)染色检测复苏后睾丸组织形态,利用组合酶消化法、差速贴壁法进行睾丸组织支持细胞分离纯化培养,观察细胞生长规律,绘制生长曲线,采用RT-PCR和免疫荧光染色(IF)技术进行睾丸支持细胞特异性基因鉴定。[结果]冻存复苏睾丸组织曲细精索及睾丸间质保存完好。组合酶消化后能获得满足试验需要的生精上皮细胞混悬液,分离培养2~4 h后支持细胞贴壁,形态呈梭形或不规则多边形,培养3~4 d后汇合,其中培养1~2 d生长速度缓慢,培养3~6 d进入对数期,增殖速度加快,培养7~8 d后增殖速度下降。RT-PCR检测显示,GNDF、WT1、ABP、SOX9基因均在彭波半细毛羊睾丸支持细胞中特异性表达;免疫荧光染色显示,特异性抗体GATA4、Vimentin免疫阳性。[结论]经冻存液预处理的冷冻保存睾丸组织复苏后,可分离出满足试验条件的原代支持细胞,应用于科学试验研究。 展开更多
关键词 彭波半细毛羊 冷冻保存 睾丸支持细胞 分离鉴定 细胞培养
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玉米赤霉烯酮致彭波半细毛羊睾丸支持细胞增殖凋亡、氧化应激及NAC保护机制
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作者 朱爱文 王健 +6 位作者 朱戈辉 刘海霞 平措班旦 王军 德庆卓嘎 闫伟 韩大勇 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2752-2764,共13页
旨在研究玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对彭波半细毛羊睾丸支持细胞的生殖毒性及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对睾丸支持细胞抗氧化应激的保护机制。本试验选取体质健康3月龄雄性彭波半细毛羊((13.87±0.46)kg)的睾丸组织用以分离支持细胞... 旨在研究玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对彭波半细毛羊睾丸支持细胞的生殖毒性及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对睾丸支持细胞抗氧化应激的保护机制。本试验选取体质健康3月龄雄性彭波半细毛羊((13.87±0.46)kg)的睾丸组织用以分离支持细胞进行体外染毒试验,试验组ZEA染毒剂量分别为25、50、100、200μmol·L^(-1),对照组(NC组)仅添加0.1%DMSO,每组3个重复,筛选ZEA试验浓度。采用组合酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光染色(IF)法进行彭波半细毛羊睾丸组织支持细胞分离、纯化培养及特异性抗体GATA4和Vimentin鉴定。CCK-8法、EdU法检测睾丸组织支持细胞活率及增殖能力。qRT-PCR和Western blot技术从转录和翻译水平检测细胞增殖(pcna)、凋亡(bax、caspase3、caspase 9)和氧化应激(cat、gsh-px、sod 1)等相关基因和蛋白的表达变化规律以及NAC的保护作用。结果发现,组合酶消化法和差速贴壁法能够获得满足ZEA染毒试验的SCs,随ZEA染毒浓度升高,SCs细胞活性和细胞增殖数量逐渐下降,200μmol·L^(-1)ZEA处理组SCs活性和细胞增殖数量极显著低于NC组(P<0.01);细胞增殖基因pcna的mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著低于NC组(P<0.01);促凋亡相关基因bax、caspase3、caspase 9的mRNA相对表达量极显著高于NC组(P<0.01),CASPASE3蛋白表达量极显著高于NC组(P<0.01),BAX、CASPASE9蛋白表达量显著高于NC组(P<0.05);抗凋亡基因bcl-2的mRNA相对表达量和蛋白表达量显著低于NC组(P<0.05);氧化应激相关基因gsh-px和sod 1的mRNA相对表达量极显著高于NC组(P<0.01),cat的mRNA相对表达量显著高于NC组(P<0.05),CAT、SOD1蛋白表达量极显著于NC组(P<0.01)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后,与NC组对比,试验组cleaved-CASPASE-9、cleaved-CASPASE-3蛋白表达量极显著下降(P<0.01),BAX蛋白表达量显著下降(P<0.05),BCL-2蛋白表达量显著上升(P<0.05)。综上表明,ZEA暴露能够对彭波半细毛羊产生生殖毒性,抑制睾丸SCs增殖,促进SCs凋亡,导致SCs发生氧化损伤,而NAC对ZEA诱导的彭波半细毛羊睾丸SCs氧化损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 彭波半细毛羊 玉米赤霉烯酮 睾丸 支持细胞 增殖凋亡 氧化应激 N-乙酰半胱氨酸
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AMPK/SIRT1介导脂联素促进牦牛睾丸支持细胞乳酸转运的分子机制
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作者 张虔 马睿 +1 位作者 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3495-3506,共12页
AMPK/SIRT1通路在睾丸乳酸转运过程中发挥重要调控作用,且近年来脂联素对动物生殖的调控功能也逐渐被证明,但AMPK/SIRT1通路如何介导脂联素调控牦牛睾丸支持细胞的乳酸转运尚不明确。采集不同年龄牦牛睾丸(初生、幼年、成年及老年)各3头... AMPK/SIRT1通路在睾丸乳酸转运过程中发挥重要调控作用,且近年来脂联素对动物生殖的调控功能也逐渐被证明,但AMPK/SIRT1通路如何介导脂联素调控牦牛睾丸支持细胞的乳酸转运尚不明确。采集不同年龄牦牛睾丸(初生、幼年、成年及老年)各3头份,通过Western blot、组织免疫荧光染色、细胞免疫荧光染色等实验技术,探究AMPK/SIRT1通路介导脂联素促进牦牛睾丸支持细胞乳酸转运的分子机制。结果表明,AMPK、P-AMPK及SIRT1蛋白在不同年龄牦牛睾丸组织中均有表达,在幼年和老年时期的蛋白相对表达量极显著高于初生和成年(P<0.01)。且AMPK及SIRT1蛋白在不同年龄牦牛睾丸中分布相似,主要分布在睾丸支持细胞、间质细胞及各级生精细胞。用不同浓度脂联素(0、5、10、20、50、100 ng·mL^(-1))处理牦牛睾丸支持细胞,当脂联素浓度为10 ng·mL^(-1)时,极显著激活APNR1、AMPK、P-AMPK及SIRT1的蛋白表达(P<0.01),同时MCT1蛋白表达量最高,并且乳酸释放量最大。添加Compound C(AMPK蛋白抑制剂)能极显著抑制AMPK的蛋白表达(P<0.01),但脂联素和Compound C共处理能极显著提高AMPK、P-AMPK及MCT1蛋白表达量(P<0.01)。结果提示,脂联素主要通过结合APNR1,激活AMPK/SIRT1信号通路促进牦牛睾丸支持细胞乳酸转运,在牦牛睾丸发育和精子发生中发挥作用。本研究为促进牦牛生产繁殖提供一定的理论基础和依据。 展开更多
关键词 牦牛 睾丸支持细胞 脂联素 乳酸
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淫羊藿苷通过调节mTORC1和mTORC2平衡改善衰老所致小鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤
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作者 程窈婷 张长城 +4 位作者 付国庆 王坦 毛剑敏 孙建明 赵海霞 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1091-1098,共8页
目的探究淫羊藿苷对自然衰老小鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制。方法将15月龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为衰老模型组、淫羊藿苷低剂量(5 mg·kg^(-1))和高剂量(20 mg·kg^(-1))给药组,另设1月龄小鼠为青年对照组,10... 目的探究淫羊藿苷对自然衰老小鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制。方法将15月龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为衰老模型组、淫羊藿苷低剂量(5 mg·kg^(-1))和高剂量(20 mg·kg^(-1))给药组,另设1月龄小鼠为青年对照组,10只/组。青年对照组与衰老模型组小鼠接受0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃作为溶媒对照,淫羊藿苷给药组小鼠则分别接受不同浓度淫羊藿苷灌胃,连续给药3个月后,检测小鼠睾丸和附睾质量、脏器指数、精子活率和浓度,HE染色观察睾丸组织形态,电镜观察睾丸支持细胞紧密连接超微结构,Western blot检测睾丸支持细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin11表达水平,免疫荧光检测睾丸ZO-1、Occludin、Raptor、Rictor、p-70S6K和p-rps6定位和表达。结果与衰老模型组相比,淫羊藿苷可明显增加衰老小鼠睾丸质量、睾丸指数、附睾指数,提高精子活率和浓度,改善睾丸组织形态及紧密连接超微结构损伤。Western blot结果显示,淫羊藿苷上调ZO-1和Occludin表达,但对Claudin 11的表达无显著影响。免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能上调ZO-1、Occludin及Rictord的表达,下调p-70S6K、p-rps6及Raptor的表达。结论淫羊藿苷可改善自然衰老小鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤,其机制可能与恢复mTORC1和mTORC2的平衡有关。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 衰老 睾丸 支持细胞 紧密连接功能 mTORC1和mTORC2平衡
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聚苯乙烯微塑料长期暴露诱导睾丸支持细胞铁死亡
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作者 李燚 文乙先 +2 位作者 蔡景 张慧莲 韩飞 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第15期1720-1728,共9页
目的探究聚苯乙烯微塑料(polystyrene microplastics,PS-MPs)长期低剂量暴露是否诱导睾丸支持细胞发生铁死亡导致睾丸损伤。方法40只8周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字抽样法分为(n=20):对照组(去离子水)、处理组[PS-MPs,2.5 mg/(kg·... 目的探究聚苯乙烯微塑料(polystyrene microplastics,PS-MPs)长期低剂量暴露是否诱导睾丸支持细胞发生铁死亡导致睾丸损伤。方法40只8周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字抽样法分为(n=20):对照组(去离子水)、处理组[PS-MPs,2.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,持续12个月;HE染色及普鲁士蓝染色检测睾丸组织病理损伤及Fe^(2+)蓄积情况;电子透射显微镜观察睾丸支持细胞线粒体形态。使用小鼠睾丸支持细胞系TM4作为研究模型,分为Con组(常规培养)和MPs组(PS-MPs,2.5μg/mL),2组细胞均连续处理至第100代,显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8检测细胞活性变化,活性氧(reactive oxygen species,ROS)探针、线粒体膜电位探针(JC-1)分别检测TM4细胞ROS和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);利用流式细胞术检测细胞凋亡情况;Fe^(2+)试剂盒检测细胞内Fe^(2+)含量;Western blot检测组织和细胞内铁死亡关键分子的蛋白表达水平。结果PS-MPs长期暴露后,与对照组相比,处理组小鼠睾丸组织曲细精管直径和厚度显著降低(P<0.01),睾丸支持细胞数量减少(P<0.05);睾丸支持细胞线粒体呈现铁死亡特征性改变,睾丸组织Fe^(2+)蓄积增加;PS-MPs暴露可下调铁死亡关键分子谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)蛋白表达水平(P<0.05)。在细胞模型中,PS-MPs长期染毒导致TM4细胞形态改变、活性显著降低(P<0.05),ROS水平明显升高(P<0.01),MMP显著降低(P<0.05);PS-MPs暴露后TM4细胞未发生明显凋亡,但细胞内Fe^(2+)含量显著升高(P<0.01);PS-MPs暴露可下调GPX4和FTL蛋白表达水平(P<0.05)。结论PS-MPs长期低剂量暴露可以诱导睾丸支持细胞线粒体损伤和氧化应激,并激活铁死亡途径,导致小鼠睾丸损伤。 展开更多
关键词 聚苯乙烯微塑料 睾丸损伤 睾丸支持细胞 铁死亡
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聚苯乙烯微/纳米塑料对睾丸支持细胞间质表型转化的影响
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作者 蔡景 文乙先 +2 位作者 张慧莲 李燚 韩飞 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第15期1708-1719,共12页
目的探讨聚苯乙烯微/纳米塑料(polystyrene micro/nanoplastics,PS-MNPs)对睾丸支持细胞的影响及潜在机制。方法60只8周龄C57BL/6N雄性小鼠按照完全随机法分为(n=20):Ctrl组(去离子水)、聚苯乙烯纳米塑料(polystyrene nanoplastics,PS-N... 目的探讨聚苯乙烯微/纳米塑料(polystyrene micro/nanoplastics,PS-MNPs)对睾丸支持细胞的影响及潜在机制。方法60只8周龄C57BL/6N雄性小鼠按照完全随机法分为(n=20):Ctrl组(去离子水)、聚苯乙烯纳米塑料(polystyrene nanoplastics,PS-NPs)组[粒径为20 nm,2.5 mg/(kg·d)]和聚苯乙烯微米塑料(polystyrene microplastics,PS-MPs)组[粒径为5µm,2.5 mg/(kg·d)]。每日灌胃1次,持续6个月。采用HE染色分析睾丸组织病理形态差异;标志蛋白免疫组化分析支持细胞数量变化。采用GO和KEGG富集分析睾丸转录组富集的功能及信号通路。使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4)作为研究模型,分为Con组(去离子水)、2.5NPs组(粒径为20 nm,2.5µg/mL)和2.5MPs组(粒径为5µm,2.5µg/mL),各组TM4细胞均连续处理至130代,CCK-8法及EdU检测细胞活性与增殖能力,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移能力,利用RT-qPCR和Western blot检测调控间质表型转化关键分子mRNA和蛋白水平表达变化。结果病理学分析结果显示,与Ctrl组相比,PS-NPs和PS-MPs组小鼠的睾丸曲细精管间距增大,生精细胞排列松散,并伴有空泡化程度增加。标志蛋白免疫组化结果显示,PS-NPs和PS-MPs组小鼠的睾丸支持细胞数量与Ctrl组相比呈下降趋势,其中PS-NPs组差异具有统计学意义(P<0.01)。对暴露睾丸组织转录组筛选的差异基因进行GO和KEGG富集分析发现,PS-MNPs暴露相关变化基因明显富集到细胞黏附分子信号通路(P<0.05)。PS-MPs暴露TM4细胞明显抑制细胞生长及细胞迁移能力(P<0.05);PS-NPs暴露TM4细胞对细胞生长没有明显影响,但能明显增强细胞迁移能力;PS-NPs暴露后抑制E-cadherin和ZO-1的蛋白表达水平(P<0.01),上调N-cadherin和Vimentin的表达(P<0.01);PS-MPs暴露后上调Vimentin的表达(P<0.01),下调E-cadherin、N-cadherin及ZO-1的表达(P<0.05);PS-MPs和PS-NPs暴露上调Snail2、Twist1和Zeb2的mRNA水平(P<0.01)。结论PS-MNPs暴露会导致TM4细胞增殖和迁移功能异常,并可能通过间质表型转化诱导支持细胞与各级生精细胞间的细胞-细胞接触减少,进而导致睾丸损伤。 展开更多
关键词 微塑料 聚苯乙烯 睾丸损伤 纳米塑料 睾丸支持细胞 间质表型转化
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急性热应激通过降低牛磺酸水平影响猪睾丸支持细胞的功能
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作者 王昕昕 刘小英 +4 位作者 王宜 王芳 赵晗 杜志强 杨彩侠 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1779-1790,共12页
旨在揭示猪睾丸支持细胞对急性热应激的代谢应答。本研究于急性热应激前(Control组)、急性热应激(43℃,0.5 h)刚结束(HS0.5组)和急性热应激后恢复36 h(HS0.5-R36组)收集猪睾丸支持细胞(每组3个重复)进行液相质谱(LC-MS/MS)检测,ELISA验... 旨在揭示猪睾丸支持细胞对急性热应激的代谢应答。本研究于急性热应激前(Control组)、急性热应激(43℃,0.5 h)刚结束(HS0.5组)和急性热应激后恢复36 h(HS0.5-R36组)收集猪睾丸支持细胞(每组3个重复)进行液相质谱(LC-MS/MS)检测,ELISA验证差异代谢物。通过CCK-8、EdU和Annexin V FITC/PI试剂盒检测关键差异代谢物对猪睾丸支持细胞的细胞活力、细胞增殖和细胞凋亡效应。利用ROS、RH123和Mito Tracker染色检测细胞ROS水平、线粒体分布与线粒体膜电位情况。结果,急性热应激前后(HS0.5 vs. Control)、恢复36 h相对急性热应激刚结束(HS0.5-R36 vs. HS0.5)、恢复36 h相对急性热应激前(HS0.5-R36 vs. Control)分别诱导33个、57个和115个显著差异(P<0.05;VIP>1.00)二级代谢物。通路富集分析显示,显著差异代谢物主要参与牛磺酸和亚牛磺酸代谢等通路。ELISA验证结果显示,急性热应激显著降低牛磺酸和γ-氨基丁酸水平,与代谢组检测的变化趋势一致。HS0.5-R36 vs. Control牛磺酸下降约5.7μmol·L^(-1),而添加5.7μmol·L^(-1)牛磺酸处理猪睾丸支持细胞48 h显著增加细胞存活率、促进增殖、抑制凋亡和增强线粒体功能(P<0.05)。急性热应激显著改变猪睾丸支持细胞的代谢,显著降低的牛磺酸部分介导了急性热应激对猪睾丸支持细胞的功能损伤。本研究结果为猪睾丸支持细胞热应激损伤拯救提供了新的参考。 展开更多
关键词 睾丸支持细胞 急性热应激 代谢组学 牛磺酸
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鹿血磷脂对玉米赤霉烯酮诱导下的猪睾丸支持细胞生长抑制的保护效应
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作者 孙义乐 王冰源 +3 位作者 盖广辉 孙丽英 李铁军 韩欢胜 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第4期30-36,共7页
为探讨鹿血磷脂(Deer blood phospholipid,DBP)对玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)诱导下的猪睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)生长抑制的保护效应。试验在ZEA诱导前后,添加不同浓度(0.01、0.05、0.1mg·mL^(-1))DBP处理细胞24h,通过... 为探讨鹿血磷脂(Deer blood phospholipid,DBP)对玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)诱导下的猪睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)生长抑制的保护效应。试验在ZEA诱导前后,添加不同浓度(0.01、0.05、0.1mg·mL^(-1))DBP处理细胞24h,通过光学显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活性,EdU法评估细胞增殖及ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明:30μMZEA处理猪SCs24h后,细胞形态异常,由梭形变为不规则形状;细胞活性极显著下降(P<0.01),细胞增殖受到抑制(P<0.05);而添加DBP后,能显著提高细胞活性,减轻ZEA对细胞活性的抑制(P<0.05),促进细胞增殖(P<0.05),尤其在ZEA处理后,0.1mg·mL^(-1)DBP能显著缓解ZEA导致的细胞增殖抑制(P<0.05);过氧化氢酶(SOD)活性检测显示,0.01和0.1mg·mL^(-1)DBP可显著改善ZEA对SOD活性的抑制(P<O.05)。综上,DBP能够促进猪SCs的生长,并且能够减轻ZEA对猪SCs细胞活性和增殖的抑制,这一保护效应可能与DBP提高细胞抗氧化酶SOD活性有关。 展开更多
关键词 鹿血磷脂 玉米赤霉烯酮 睾丸支持细胞 细胞活性 细胞增殖 SOD活性
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H_(2)O_(2)诱导的犊牛睾丸支持细胞氧化应激模型的建立及其效果
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作者 唐颖 王子铭 +3 位作者 王皓 陈艳茹 РОТАРЬЛюбовьНиколаевна 郑鹏 《黑龙江动物繁殖》 2025年第1期18-23,F0003,共7页
雄性家畜睾丸中的氧化应激会导致其繁殖能力下降。为了建立睾丸支持细胞的氧化应激模型,为研究睾丸的氧化应激机制奠定基础,试验使用50,100,300μmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))处理犊牛睾丸支持细胞,建立睾丸支持细胞氧化应激模型,以未处... 雄性家畜睾丸中的氧化应激会导致其繁殖能力下降。为了建立睾丸支持细胞的氧化应激模型,为研究睾丸的氧化应激机制奠定基础,试验使用50,100,300μmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))处理犊牛睾丸支持细胞,建立睾丸支持细胞氧化应激模型,以未处理细胞作对照,通过检测细胞活力和丙二醛(MDA)含量筛选最佳H_(2)O_(2)处理浓度,然后检测最佳H_(2)O_(2)处理浓度下细胞的活性氧(ROS)含量及谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并利用实时定量PCR分析核因子相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、NADPH醌脱氢酶1(NQO1)基因表达水平。结果表明:与对照相比,用300μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞活力显著降低(P<0.05),且显著低于50,100μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞(P<0.05);MDA含量显著增加(P<0.05),且显著高于50,100μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞,说明300μmol/L H_(2)O_(2)处理浓度为最佳浓度。与对照相比,300μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞中ROS含量显著增加(P<0.05),GSH、SOD活性显著降低(P<0.05),Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1基因的mRNA表达量显著降低(P<0.05)。说明300μmol/LH_(2)O_(2)能够诱导犊牛睾丸支持细胞的氧化应激模型。 展开更多
关键词 犊牛 睾丸 支持细胞 氧化应激 活性氧(ROS) 核因子相关因子2(Nrf2)基因
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山羊睾丸支持细胞外泌体对精子液态保存效果的影响
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作者 张梦美 徐英环 +2 位作者 李鑫康 牛劲聪 刘腾飞 《动物医学进展》 北大核心 2025年第9期68-72,共5页
精子液态保存在山羊养殖业中应用广泛,但精子活力下降较快等弊端极大限制了该技术的发展应用。睾丸支持细胞外泌体(sertoli cells-exosomes,SCs-EXOs)含有多种活性物质,对精子的发育和成熟具有重要作用。目前关于SCs-EXOs对山羊精子液... 精子液态保存在山羊养殖业中应用广泛,但精子活力下降较快等弊端极大限制了该技术的发展应用。睾丸支持细胞外泌体(sertoli cells-exosomes,SCs-EXOs)含有多种活性物质,对精子的发育和成熟具有重要作用。目前关于SCs-EXOs对山羊精子液态保存影响的研究较少,论文探究山羊SCs-EXOs对4℃液态保存过程中精子质量的影响,用超高速差速离心法提取山羊SCs-EXOs,从微观结构、粒径大小以及标志蛋白等方面进行鉴定,结果表明提取的外泌体纯度较高。进一步将不同浓度的SCs-EXOs(10、20、40μg/mL)与精子共孵育,用伊红染色法和计算机辅助精子分析系统(computer-aided spermatozoa analysis,CASA)检测4℃液态保存不同时间(6、12、24、48 h)精子质量的变化,显示精子活率及运动性能随着液态保存时间延长逐渐降低,添加SCs-EXOs能够显著提高精子活率及运动性能。这些结果表明,山羊SCs-EXOs能够改善4℃液态保存过程中精子的质量,研究结果可为SCs-EXOs在提升家畜精液品质方面的应用提供理论基础。 展开更多
关键词 山羊 精子 4℃液态保存 睾丸支持细胞 外泌体
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睾丸支持细胞糖脂代谢在生精细胞发育中的作用及机制
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作者 李舒豪 孔亮 +1 位作者 梁景岩 马坦 《浙江大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期257-265,共9页
睾丸支持细胞在精子发生过程中起重要作用。精子发生的异常与睾丸支持细胞糖脂代谢紊乱密切相关。睾丸支持细胞的代谢环境为缺氧,其主要的代谢方式包括糖酵解和脂肪酸β氧化,其中糖酵解是睾丸支持细胞为生精细胞提供能量的经典途径,而... 睾丸支持细胞在精子发生过程中起重要作用。精子发生的异常与睾丸支持细胞糖脂代谢紊乱密切相关。睾丸支持细胞的代谢环境为缺氧,其主要的代谢方式包括糖酵解和脂肪酸β氧化,其中糖酵解是睾丸支持细胞为生精细胞提供能量的经典途径,而脂肪酸β氧化可能是睾丸支持细胞产生腺苷三磷酸的主要途径。目前睾丸支持细胞糖脂代谢与生精细胞发育的关系、糖代谢与脂代谢之间的联系尚不明确。包括性激素在内的多种激素可以通过调控内分泌影响睾丸支持细胞糖代谢。AMPK、mTOR、Akt等信号通路的激活或抑制可以改变糖酵解相关转运蛋白和基因的表达水平以及脂肪酸生成,影响睾丸支持细胞糖脂代谢过程。一些转录因子如PPARγ可通过直接与响应元件结合来调节下游脂肪酸代谢相关基因,促进睾丸支持细胞脂肪酸氧化。本综述基于睾丸支持细胞糖脂代谢过程以及相关的实验研究结果,阐述了睾丸支持细胞中糖代谢和脂代谢的关键影响因素及其联系,并对男性不育症的临床潜在治疗方向进行了讨论,以期为男性不育症的精准靶向治疗提供参考。 展开更多
关键词 睾丸支持细胞 生精细胞 糖代谢 脂代谢 精子发生 机制 综述
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基于转录组分析CSFV感染猪睾丸支持细胞对屏障功能相关基因的影响
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作者 马尧丹 俞晖 +4 位作者 陈海恩 杨阳开心 葛书君 吴江 康恺 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期22-32,共11页
为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对... 为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析并筛选血睾屏障相关DEGs,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)、WB和IIF对DEGs进行验证。结果显示,CSFV感染24和48 h后,ST细胞均表达了E2蛋白;与Control 24 h相比,CSFV 24 h的ST细胞共鉴定出86个显著差异DEGs(P <0.05);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的ST细胞共鉴定出1 481个显著差异DEGs(P <0.05)。DEGs极显著富集在27个GO功能条目上,主要包括生物学过程、细胞组分和分子功能(P <0.01);极显著富集的KEGG信号通路主要包括肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、晚期糖基化终产物受体(AGE-RAGE)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等(P <0.01)。DEGs的qPCR验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的CLDN11、H2AFX和CDH2表达量极其或极显著上调(P<0.001或P <0.01),TJP1、OCLN和GJA1表达量显著下调(P <0.05);与Control48 h相比,CSFV 48 h的FASLG、TGFB1、IL-6和H2AFX表达量极其或极显著上调(P <0.001或P <0.01),TJP1、OCLN、GJA1、CLDN11和CDH2表达量极显著下调(P <0.01)。差异表达蛋白WB验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的TJP1、CLDN11和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01),CLDN11蛋白表达量极其显著上调(P <0.001);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1、CLDN11、OCLN和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01)。IIF结果显示,与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1蛋白相对荧光面积极显著下调(P <0.01),CLDN11、OCLN和GJA1蛋白相对荧光面积显著下调(P <0.05)。以上验证结果与转录组测序结果基本一致。结果表明,CSFV感染24和48 h均会影响ST细胞屏障功能相关基因的表达,本试验为进一步探究CSFV对ST细胞屏障的影响机制提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 睾丸支持细胞 mRNA差异表达 基因本体论(GO)功能注释 京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析
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奶山羊睾丸支持细胞分离培养与鉴定
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作者 武永杰 刘耿辰 +3 位作者 黄雨祺 马琳 陈鸿 徐永平 《山东农业科学》 北大核心 2024年第11期141-147,163,共8页
本研究以2月龄莎能奶山羊为实验动物分离睾丸支持细胞(SCs),比较三种酶消化法(胰酶消化法、两步酶消化法和两步混合酶消化法)的分离效率,并采用形态学及分子生物学技术评估培养效果。结果显示,两步酶消化法和两步混合酶消化法获得的细... 本研究以2月龄莎能奶山羊为实验动物分离睾丸支持细胞(SCs),比较三种酶消化法(胰酶消化法、两步酶消化法和两步混合酶消化法)的分离效率,并采用形态学及分子生物学技术评估培养效果。结果显示,两步酶消化法和两步混合酶消化法获得的细胞数量以及细胞活率和增殖力均显著高于胰酶消化法。形态学观察两步酶消化法分离的细胞符合典型SCs形态,并能稳定传代至第5代。HE染色可观察到细胞核中的双极小体,油红O染色可见细胞核周围大小不一的脂滴。免疫荧光染色显示SCs特异蛋白WT1和Vimen-tin抗体免疫阳性率大于96%。超微结构观察发现细胞结构完整,细胞器丰富,细胞核呈不规则形状,符合SCs超微结构特征。综上,两步酶消化法操作简单、成本低,且分离的SCs数量多、活力好、纯度高,能在体外稳定培养,为最佳的奶山羊SCs分离方法,可为深入开展奶山羊雄性生殖机能研究提供良好的细胞学模型。 展开更多
关键词 奶山羊 睾丸支持细胞 分离培养方法 鉴定 超微结构
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基于多组学解析布鲁氏菌BvfA对睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体的影响
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作者 宋青山 杨江流 +1 位作者 刘军 贾芳 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1400-1409,共10页
【目的】明确布鲁氏菌BvfA对宿主睾丸支持细胞(TM4细胞)的损伤作用,以揭示布鲁氏菌对宿主的致病机制。【方法】利用RNA-Seq双端测序、Label-free蛋白组学技术和LC-MS非靶代谢组学技术分析感染布鲁氏菌S19△bvfA与S19菌株的TM4细胞的组... 【目的】明确布鲁氏菌BvfA对宿主睾丸支持细胞(TM4细胞)的损伤作用,以揭示布鲁氏菌对宿主的致病机制。【方法】利用RNA-Seq双端测序、Label-free蛋白组学技术和LC-MS非靶代谢组学技术分析感染布鲁氏菌S19△bvfA与S19菌株的TM4细胞的组学差异,采用KEGG数据库对差异表达蛋白及差异代谢物通路进行分析,并利用平行反应监测(PRM)对蛋白表达量进行验证。【结果】感染S19△bvfA和S19菌株的TM4细胞差异表达基因共400个,差异表达蛋白共422个,差异代谢产物共271种。多组学联合分析发现,S19△bvfA和S19菌株感染TM4细胞差异表达基因、差异表达蛋白和差异代谢产物共同富集的KEGG通路为内源性大麻素信号通路,在该通路中发现S19△bvfA菌株感染TM4细胞的线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体(ComplexⅠ)中有20个蛋白表达量下调。PRM验证结果显示,ComplexⅠ中Ndufb11、Ndufa9、Ndufv1、Ndufv2、Ndufs8和Ndufs2蛋白的表达趋势与Label-free蛋白组学技术测定结果一致。【结论】BvfA在布鲁氏菌感染TM4细胞时能引起转录、蛋白质和代谢水平的变化,布鲁氏菌BvfA使睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体蛋白表达下调。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 多组学 BvfA 睾丸支持细胞
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Bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响 被引量:1
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作者 虎巧燕 翟相钦 +3 位作者 李一丹 韩家乐 雷初朝 党瑞华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1040-1051,共12页
旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及mi... 旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及miRWalk)预测miR-101的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将miR-101的模拟物与抑制物分别转染至牛睾丸支持细胞中,利用RT-qPCR、Western Blotting以及CCK-8等技术检测细胞增殖、凋亡及分泌相关基因表达量以及细胞增殖系数。通过4种在线软件预测到26个bta-miR-101的共同靶基因,GO和KEGG富集分析发现这些基因主要富集在核质、蛋白质结合、JAK-STAT的受体信号通路上,这些信号通路与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡等生物过程有着不同程度的关联。RT-qPCR结果显示,bta-miR-101在牛初生期睾丸组织中的表达量显著高于性成熟时期(P<0.05),与实验室前期测序结果一致。转染miR-101的模拟物与抑制物后,发现相较于对照组,miR-101 mimics可以促进增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,并显著升高支持细胞的增殖系数,同时抑制凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05);miR-101 inhibitor可以抑制增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,同时促进凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05)。在细胞分泌方面,miR-101对分泌标志基因GDNF、BMP4的转录有影响,但对雄激素结合蛋白的分泌影响不显著。综上所述,miR-101促进牛睾丸未成熟支持细胞的增殖并抑制其凋亡,对雄激素结合蛋白的分泌无显著影响。 展开更多
关键词 睾丸支持细胞 miR-101 增殖 凋亡
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镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究 被引量:29
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作者 任绪义 周雍 +3 位作者 张建鹏 仲燕 冯伟华 焦炳华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期965-968,共4页
啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸... 啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成 。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 睾丸支持细胞 睾丸组织 镉损伤
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和田羊睾丸支持细胞的体外培养与分离鉴定 被引量:11
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作者 王帅 贾琦珍 +2 位作者 张玲 王连群 陈根元 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1918-1922,共5页
【目的】研究和田羊睾丸支持细胞的体外培养特性。【方法】取新生和田羊睾丸组织,利用两步酶消化后,采用差速贴壁法纯化细胞进行体外培养,并通过形态学观察、HE染色、AKP染色、油红O染色、吖啶橙染色、罗丹明123染色、免疫组化染色、RT... 【目的】研究和田羊睾丸支持细胞的体外培养特性。【方法】取新生和田羊睾丸组织,利用两步酶消化后,采用差速贴壁法纯化细胞进行体外培养,并通过形态学观察、HE染色、AKP染色、油红O染色、吖啶橙染色、罗丹明123染色、免疫组化染色、RTPCR和MTT法检测细胞活性及纯度。【结果】培养基中加入2.00%血清浓度的DMEM/F-12可提高支持细胞纯度,在体外培养传至20代的和田羊睾丸支持细胞形态和核型均为正常;所培养的细胞内波形蛋白表达及标志基因SCF和GDNF的表达均为阳性。【结论】本试验成功建立了和田羊睾丸支持细胞体外培养模型。 展开更多
关键词 和田羊 睾丸 支持细胞 体外培养 鉴定
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成人睾丸支持细胞的分离培养及其免疫豁免机制 被引量:9
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作者 滕琰 薛武军 +2 位作者 冯新顺 田普训 李钊伦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期643-645,649,共4页
目的:建立成人睾丸支持细胞的体外培养方法并探讨其免疫豁免机制。方法:依次用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化制备成人睾丸支持细胞,以SABC染色法检测支持细胞上Fas-L和TGF-β1的表达。将其与成人脾细胞共同培养,用... 目的:建立成人睾丸支持细胞的体外培养方法并探讨其免疫豁免机制。方法:依次用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化制备成人睾丸支持细胞,以SABC染色法检测支持细胞上Fas-L和TGF-β1的表达。将其与成人脾细胞共同培养,用MTT比色法检测其对脾细胞增殖的抑制作用。结果:成人睾丸支持细胞占培养细胞总数的80%以上,活性可达90%。睾丸支持细胞上可表达Fas-L和TGF-β1,体外可抑制共培养的脾细胞增殖。结论:建立了培养成人睾丸支持细胞的方法,其免疫豁免机制可能与Fas-L和TGF-β1的表达有关。 展开更多
关键词 睾丸支持细胞 免疫豁免 FAS-L TGF-Β1
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FSH通过cAMP、Ca^(2+)调节仔猪睾丸支持细胞的增殖 被引量:10
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作者 王鲜忠 周玉兰 +5 位作者 赵伯川 周银涛 陈永军 张姣姣 王怡 张家骅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1240-1245,共6页
本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞增殖的机制。试验以2~3周龄的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,采用体外培养模型,通过细胞数量检测、ELISA和Western blot等方法研究FSH对睾丸支持细胞的调节作用。试验结果如下:(1)在0~50ng·mL-1... 本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞增殖的机制。试验以2~3周龄的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,采用体外培养模型,通过细胞数量检测、ELISA和Western blot等方法研究FSH对睾丸支持细胞的调节作用。试验结果如下:(1)在0~50ng·mL-1内,随着FSH浓度的增加,睾丸支持细胞数量呈增加的趋势(P<0.05);当浓度为50ng·mL-1时,FSH促增殖作用最明显;细胞内cAMP的浓度也随着FSH的浓度而增加(P<0.05);(2)FSH作用后5min内就激活了ERK1/2级联反应,在48h内,ERK1/2的激活有一定的周期性;加入ERK1/2的抑制剂PD98059和U0126明显的降低了FSH诱导的睾丸支持细胞的增殖和PCNA的表达(P<0.05);(3)加入FSH和Forskolin增强了细胞的增殖和ERK1/2的激活(P<0.05);而加入Rp-cAMP则明显降低了FSH诱导的细胞增殖和ERK1/2的激活(P<0.05);L-Ca2+通道抑制剂Verapamil抑制了细胞的增殖和ERK1/2的激活;Rp-cAMP与Verapamil共同作用强于单独作用,表现出一定的协同效应(P<0.05)。结果表明,FSH通过cAMP、Ca2+激活ERK1/2,并通过ERK1/2调节PCNA的表达进而调节支持细胞的增殖。 展开更多
关键词 促卵泡素 细胞增殖 睾丸支持细胞 细胞外调节的蛋白激酶1/2
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小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定 被引量:4
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作者 杨君杰 刘善荣 +4 位作者 杨玲 王凤玫 任传路 胡凯猛 刘厚奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期741-744,共4页
目的:分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法:取18~20d雄性小鼠的睾丸,酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ,与pcDNA3.0连接后构建重组质粒pcDNA3.0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcD... 目的:分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法:取18~20d雄性小鼠的睾丸,酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ,与pcDNA3.0连接后构建重组质粒pcDNA3.0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcDNA3.0-SERZ,获得线性化模板进而合成探针。原位杂交检测SERZ mRNA在培养细胞中的表达;用RT—PCR的方法检测雄激素结合蛋白(ABP)在支持细胞中的表达。结果:支持细胞多为多边形,核呈三角形或不规则形,染色浅,核仁明显,细胞完全铺开,成膜状,相邻细胞之间交织连接,细胞纯度为(85.1±2.5)%。SERZ mRNA在培养细胞的胞质中高水平表达。RT—PCR结果表明我们分离的支持细胞能够表达ABP mRNA。结论:我们成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞,纯度为(85.1±2.5)%。 展开更多
关键词 睾丸 支持细胞 细胞分离 SERZ 雄激素结合蛋白
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