慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立 被引量：1

1

作者 张黎 彭海燕 +6 位作者 周明浩 余慧燕 曾晓燕 祁贤 崔仑标 焦永军 史智扬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期630-634,共5页

目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD1... 目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。 展开更多

关键词 H7N9禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒载体 真核表达系统

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葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)

2

作者 孙爱华 邵浙新 +2 位作者 阮萍 毛亚飞 严杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期303-306,310,共5页

目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA... 目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0 5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果　可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论　我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素A 基因 真核表达系统 构建 重组蛋白 鉴定

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慢病毒介导的猫四连接素蛋白过表达系统的构建

3

作者 杨泽昊 胡佳艺 +2 位作者 赵源杰 刘萌萌 陈宇 《热带生物学报》 2025年第1期58-63,共6页

四连接素(Tetranectin)是一种具有结合钙离子和肝素能力的纤溶酶原结合蛋白。通过构建稳定表达猫四连接素蛋白的细胞系,为后续探究其与猫心血管疾病的关系提供实验材料。本研究利用分子克隆技术构建过表达猫四连接素基因的重组慢病毒质... 四连接素(Tetranectin)是一种具有结合钙离子和肝素能力的纤溶酶原结合蛋白。通过构建稳定表达猫四连接素蛋白的细胞系,为后续探究其与猫心血管疾病的关系提供实验材料。本研究利用分子克隆技术构建过表达猫四连接素基因的重组慢病毒质粒,并通过慢病毒感染获得过表达猫四连接素蛋白的HEK293T细胞系,蛋白免疫印迹法验证蛋白表达。慢病毒质粒测序结果表明,实测猫四连接素基因CDS序列与NCBI数据库预测序列一致。经嘌呤霉素筛选过表达细胞系构建成功,猫四连接素重组蛋白以可溶形式分泌于细胞上清中,分子量约为25kDa并带有flag标签。 展开更多

关键词 猫四连接素蛋白 CLEC3B 慢病毒包装系统 真核表达系统

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真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果 被引量：1

4

作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 王缨 储以微 徐薇 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,15,共6页

目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核... 目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P<0·05)。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P<0·01)。结论真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。 展开更多

关键词 真核化的原核表达系统 基因免疫 HBV

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毕赤酵母表达系统 被引量：21

5

作者 韩雪清 刘湘涛 尹双辉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期35-40,共6页

选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响... 选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响其表达的因素等。 展开更多

关键词 毕赤酵母 表达系统 真核表达系统 基因组表达

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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量：10

6

作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页

巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统

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外源基因表达系统的研究进展 被引量：38

7

作者 郭广君 吕素芳 王荣富 《科学技术与工程》 2006年第5期582-587,592,共7页

最近20多年来,随着重组DNA技术的迅速发展,对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入,并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统,它们各有优缺点,在选择时应衡量使用。

关键词 原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统

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人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量：2

8

作者 王欢 刘琼琼 +8 位作者 唐小军 徐鑫 褚楚 熊四平 郑峰 童华 朱进 冯振卿 林红 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期863-869,882,共8页

目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体p... 目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 TROP2 真核表达系统 CHO dhfr-细胞 胰腺癌

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基因表达系统研究进展 被引量：20

9

作者 孙柏欣 刘长远 +3 位作者 陈彦 赵华 赵彤华 李柏宏 《现代农业科技》 2008年第2期205-207,209,共4页

随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵... 随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统等。各种表达系统各具优缺点,对其进行了详细介绍。 展开更多

关键词 基因表达 原核表达系统 真核表达系统

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信号肽及其在蛋白质表达中的应用 被引量：65

10

作者 韦雪芳 王冬梅 +1 位作者 刘思 周鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第6期38-42,共5页

分子生物学研究已进入后基因组时代,其中心任务是更多地关注基因组表达的蛋白质的结构和功能。由于基因功能最终通过其表达产物——蛋白质来实现,因此,要了解基因组全部功能活动,最终也必须回到蛋白质上。另外,在菌株、培养和发酵等逐... 分子生物学研究已进入后基因组时代,其中心任务是更多地关注基因组表达的蛋白质的结构和功能。由于基因功能最终通过其表达产物——蛋白质来实现,因此,要了解基因组全部功能活动,最终也必须回到蛋白质上。另外,在菌株、培养和发酵等逐渐成熟的条件下,构建高效的表达载体以提高外源蛋白质的表达量是降低工业化生产成本的关键。随着研究的深入,发现信号肽对蛋白质的定位有着非常重要的作用,使得信号肽的研究不仅具有重要的理论意义,而且也具有潜在的应用价值。就信号肽的结构和功能,信号肽的捕获方法及其在原核表达系统和真核表达系统中表达外源蛋白质的应用做一些介绍。 展开更多

关键词 信号肽 捕获 原核表达系统 真核表达系统 蛋白质表达

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外源蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的策略 被引量：16

11

作者 刘国奇 王海涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期496-500,共5页

高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运... 高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运用它们之间的关系 。 展开更多

关键词 重组蛋白 CHO细胞 真核表达系统 生物制药

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提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的研究进展 被引量：5

12

作者 肖生科 王磊 陈毓荃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第2期23-26,30,共5页

巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,... 巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,由于受基因内部的结构、分泌信号、甲醇诱导的浓度及诱导时间、培养温度、启动子、表达环境的 pH值等诸多因素的影响 ,一些外源蛋白的表达也存在着表达不够稳定、表达量较低 ,甚至不表达的情况。对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析 ,结合具体实践经验 ,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了综述。 展开更多

关键词 外源基因 巴斯德毕赤酵母 表达量 基因工程 真核表达系统 表达产物

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CD137(人4-1BB)在dhfr-CHO中的表达及活性研究 被引量：2

13

作者 万兵 张利宁 +4 位作者 马春红 宋静 曹英林 李长菲 孙汶生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期678-681,共4页

目的 :构建CD137真核高效表达系统 ,深入研究CD137及其配体在细胞信号转导中的作用。方法 :将构建有CD137全长cDNA序列的pCDNA3质粒 (CMV ILA SEN ,CIS)及pSV2 dhfr(含二氢叶酸还原酶基因 ) ,运用脂质体介导法共转染二氢叶酸还原酶缺陷... 目的 :构建CD137真核高效表达系统 ,深入研究CD137及其配体在细胞信号转导中的作用。方法 :将构建有CD137全长cDNA序列的pCDNA3质粒 (CMV ILA SEN ,CIS)及pSV2 dhfr(含二氢叶酸还原酶基因 ) ,运用脂质体介导法共转染二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞 (dhfr CHO) ;用G4 18筛选出阳性克隆 ;MTX压力选择系统诱导CD137在dhfr CHO细胞的高效表达 ;RT PCR、免疫细胞化学法及流式细胞术测定CD137的表达情况 ;3H TdR掺入法进行活性研究。结果 :CD137为膜型表达 ,CIS转化dhfr CHO细胞CD137表达率为 96 0 7% ;活性研究显示CD137膜蛋白轻度促进抗CD3单抗诱导的PBMC增殖。结论 :获得高效表达CD137的CHO细胞株 ,CD137膜蛋白促进抗CD3单抗诱导的PBMC增殖。 展开更多

关键词 共刺激分子 CD137 真核表达系统 dhfr-CHO

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Pichia pastoris表达β-葡萄糖苷酶基因研究 被引量：4

14

作者 曾黎辉 POULTON JonathanE 吕柳新 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期331-335,共5页

采用Pichiapastoris(毕赤酵母)表达系统表达拟南芥β-葡萄糖苷酶基因(AT5g44640),获得了有活性的目的蛋白.研究了影响β-葡萄糖苷酶基因表达的因素.结果表明,表达载体整合拷贝数、不同P.pastoris菌株、甲醇体积分数、诱导培养时间和诱... 采用Pichiapastoris(毕赤酵母)表达系统表达拟南芥β-葡萄糖苷酶基因(AT5g44640),获得了有活性的目的蛋白.研究了影响β-葡萄糖苷酶基因表达的因素.结果表明,表达载体整合拷贝数、不同P.pastoris菌株、甲醇体积分数、诱导培养时间和诱导培养起始的D(600nm)等对β-葡萄糖苷酶的产量都有一定的影响. 展开更多

关键词 Β-葡萄糖苷酶 基因表达 Pichia-pastoris 产量 酶活性 真核表达系统 拟南芥

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人突变CD59基因在CHO细胞的表达、检测及生物活性研究 被引量：3

15

作者 吴宁 高美华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期456-459,共4页

目的:分别构建两个高效表达人突变CD59的CHO细胞真核表达系统,探讨突变CD59基因表达蛋白糖基化前后抗补体活性的变化,为在基因水平阐明糖尿病血管增殖症的发病机理奠定基础。方法:将两种含不同突变基因的人CD59全长cDNA序列(HM7、HM8)... 目的:分别构建两个高效表达人突变CD59的CHO细胞真核表达系统,探讨突变CD59基因表达蛋白糖基化前后抗补体活性的变化,为在基因水平阐明糖尿病血管增殖症的发病机理奠定基础。方法:将两种含不同突变基因的人CD59全长cDNA序列(HM7、HM8)的重组pALTER质粒运用阳离子脂质体导入法共转染CHO细胞,用含有400μg/ml新霉素类似物(G418)的F12培养基筛选出阳性表达克隆,应用荧光免疫组化(FIH)检测CD59在CHO细胞表面的表达。经染料释放试验检测突变CD59糖基化前后抗补体活性。结果:运用阳离子脂质体导入法将重组pALTER质粒与pcDNA3质粒共转染CHO,成功筛选出的阳性克隆经FIH证明突变CD59可在CHO细胞表达。染料释放法证实两种突变CD59均具有抗补体活性,且在高糖环境下易糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低。结论:建立了两个高效表达突变CD59的真核表达系统,获得阳性克隆细胞株。初步研究证实突变CD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 CD59突变 真核表达系统 CHO细胞 细胞转染 抗补体活性

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抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定 被引量：1

16

作者 徐重新 张霄 +4 位作者 张存政 刘媛 谢雅晶 黄鹰 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期985-991,共7页

通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒... 通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应. 展开更多

关键词 Cry1B毒素 单链抗体 真核表达系统 酶联免疫分析

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SARS-CoV S1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定 被引量：1

17

作者 何仰东 姜曼 +1 位作者 倪兵 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1837-1840,共4页

目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,... 目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白。最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和W esntern b lotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性。结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达。结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 SARS-COV S1蛋白 真核表达系统 甲醇营养型酵母

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暗黑鳃金龟几丁质酶基因的克隆、表达及活性分析 被引量：1

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作者 邹爽 赵丹 +2 位作者 郭巍 徐大庆 张雅昆 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期91-94,105,共5页

本研究通过免疫筛选暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA表达文库,获得其几丁质酶基因Hpchi。序列分析表明Hpchi开放阅读框长1 443bp,编码480个氨基酸,预测分子量为51.4kDa。Hpchi蛋白N-端带有18个氨基酸的信号肽,C-端存在有一个几丁质结合结构域,... 本研究通过免疫筛选暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA表达文库,获得其几丁质酶基因Hpchi。序列分析表明Hpchi开放阅读框长1 443bp,编码480个氨基酸,预测分子量为51.4kDa。Hpchi蛋白N-端带有18个氨基酸的信号肽,C-端存在有一个几丁质结合结构域,催化区位置显示有特异活性位点,判定Hpchi蛋白属于Ⅰ型的几丁质酶。分别构建原核和真核表达载体,转化到大肠杆菌BL21和昆虫细胞系sf9,BTI-Tn-5BI-4(Highfive)中进行表达。SDS-PAGE和Western Bolt杂交试验显示,Hpchi重组蛋白在大肠杆菌及昆虫细胞系中都获得了成功表达。酶活分析表明真核表达的Hpchi重组蛋白具有几丁质酶活性。 展开更多

关键词 暗黑鳃金龟 CDNA表达文库 几丁质酶 真核表达系统 活性分析

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植酸酶基因在原核细胞中表达及植酸酶应用进展

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作者 卢珊 张守纯 +1 位作者 朱航 梁志刚 《现代畜牧兽医》 2007年第7期51-54,共4页

植酸酶（Phytase）是催化植酸及其盐类物质水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称，广泛存在于微生物、麦芽、种子等中。植酸酶可使单胃动物对饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，另外还可降低植酸的抗营养作用。因此植酸... 植酸酶（Phytase）是催化植酸及其盐类物质水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称，广泛存在于微生物、麦芽、种子等中。植酸酶可使单胃动物对饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，另外还可降低植酸的抗营养作用。因此植酸酶在饲料工业中的应用对提高养殖业效益和降低环境污染有重要意义。生产植酸酶的表达系统包括真核表达系统和原核表达系统。真核表达系统主要有丝状真菌表达系统和酵母表达系统；原核表达系统主要是大肠杆菌表达系统。 展开更多

关键词 植酸酶 酶应用 原核细胞 原核表达系统 大肠杆菌表达系统 真核表达系统 基因 本科

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伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建 被引量：8

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作者 方六荣 陈焕春 +2 位作者 肖少波 王革非 马相如 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期306-309,共4页

对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通... 对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通过PCR扩增约 0 .3kb的SV40Poly(A)片段 ,并将其克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1的NotI和PstI位点 ,利用pFastBac1的BamHI和PstI将含有 9个酶切位点以及SV40Poly(A)的片段亚克隆到pUSK(E)的相应位点 ,在插入的同时导致gG基因 5’端编码区约 40 0bp的缺失 ,构建了由gG启动子驱动gG部分编码区缺失的通用转移载体pgG Uni。序列分析进一步证实 :有 7个单一酶切位点可供外源基因直接插入。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 gG基因 gG启动子 通用转移载体 克隆 序列分析 真核表达系统 多价基因工程疫苗 疱疹病毒科 分子生物学

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