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HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达被引量：1: 1; 作者张晓娟李旭 +1 位作者栾正刚马晓春《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期143-145,共3页; 目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测... 展开更多; 关键词高迁移率族蛋白1基因人脐静脉血管内皮细胞真核细胞表达载体转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究被引量：3: 2; 作者陈创夫乔军 +2 位作者王金富田晶华张高轩《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页; 应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的... 展开更多; 关键词 VP2基因基因疫苗免疫真核细胞表达载体鸡病传染性法氏囊病病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

丙型肝炎病毒NS3区7个抗原表位融合基因载体的构建及在真核细胞的表达被引量：1: 3; 作者杨素霞李煜 +2 位作者杨梅英高江平洪宝发《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期567-569,共3页; 目的建立丙型肝炎病毒非结构蛋白3(NS3)区7个辅助T细胞抗原表位融合基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达产物,为进一步研究应用HCVNS3序列进行预防HCV感染的DNA免疫的研究创造条件。方法合成3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖NS3区7个... 展开更多; 关键词肝炎病毒丙型非结构蛋白3-DNA免疫真核细胞基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达被引量：2: 4; 作者张明霞周福元 +3 位作者刁志宏何海棠侯金林骆抗先《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页; 目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感... 展开更多; 关键词乙型肝炎病毒变异真核细胞表达载体永生化B淋巴母细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达: 5; 作者苏秀芬姜艳芳 +1 位作者王峰牛俊奇《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1092-1095,共4页; 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达,为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法:从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1(+)/NS345中扩增出HCV NS5A基因片段,构建pCI-neo/NS5... 展开更多; 关键词肝炎病毒 NS5A蛋白真核细胞表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1: 6; 作者张小鹰吴风云 +3 位作者何金花廖晓莉王威蒋建伟《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期278-287,共10页; 为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRN... 展开更多; 关键词 RNA干扰增殖细胞核抗原真核细胞表达载体 HEPG2细胞肝癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建被引量：1: 7; 作者黄环吴永忠 +3 位作者李少林郭启帅林远洪彭志平《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期399-402,共4页; 目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家... 展开更多; 关键词 EGFR家族 RNA干扰真核细胞表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建被引量：2: 8; 作者闻晓波宋佰芬 +1 位作者姜海芳崔玉东《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期54-57,共4页; 根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表... 展开更多; 关键词新城疫病毒 F基因 HN基因真核细胞表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

宿主miRNA调节沙门氏菌感染的研究进展被引量：1: 9; 作者刘亚娟保雨 +2 位作者彭祥伟刘力石宝石《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期973-977,共5页; Micro RNAs（mi RNA）是由真核细胞表达的一类长约19 nt～25 nt的内源性非编码小RNA分子,在调控宿主转录后的基因表达起着关键作用,为免疫细胞中的关键分子。在动物、植物以及病毒中均能够检测到mi RNA的存在,通过mi RBase数据库查到目... 展开更多; 关键词 miRNA 沙门氏菌感染宿主真核细胞表达小RNA 基因表达免疫细胞非编码; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达被引量：1: 1; 作者张晓娟李旭栾正刚马晓春; 机构中国医科大学附属第一医院重症医学科; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期143-145,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30901438/C160402); 文摘目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测转染后HMGB1基因的表达改变。结果构建HMGB1全长基因真核细胞表达载体成功,酶切鉴定及测序鉴定表明载体构建正确,转染HUVEC后可检测到外源性蛋白的表达,对照组无外源性蛋白表达。结论成功构建了HMGB1全长基因真核细胞表达载体并可转染至HUVEC中。; 关键词高迁移率族蛋白1基因人脐静脉血管内皮细胞真核细胞表达载体转染; Keywords high-mobility group box 1 human umbilical venular endothelial cell eukaryotic expression plasmid transfect; 分类号 R364.5 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究被引量：3: 2; 作者陈创夫乔军王金富田晶华张高轩; 机构石河子大学塔里木农垦大学; 出处《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页; 文摘应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的蛋白。免疫雏鸡后 2 0 d,在体内可检测到特异性抗体。; 关键词 VP2基因基因疫苗免疫真核细胞表达载体鸡病传染性法氏囊病病毒; Keywords chicken infectious bursal disease virus VP 2 gene DNA vaccines immune; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名丙型肝炎病毒NS3区7个抗原表位融合基因载体的构建及在真核细胞的表达被引量：1: 3; 作者杨素霞李煜杨梅英高江平洪宝发; 机构解放军总医院泌尿外科北京市疾病预防控制中心北京放射医学研究所; 出处《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期567-569,共3页; 文摘目的建立丙型肝炎病毒非结构蛋白3(NS3)区7个辅助T细胞抗原表位融合基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达产物,为进一步研究应用HCVNS3序列进行预防HCV感染的DNA免疫的研究创造条件。方法合成3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖NS3区7个辅助T细胞抗原表位,细胞通过重叠延伸PCR方法,将它们拼接在一起构建了一个多肽融合基因,经克隆测序后,插入真核表达载体pEGFPN3和pBuDCE中,用构建的pEGFPDR4质粒分别转染293T和B淋巴细胞系046W,用pBuDCEDR4质粒转染293T细胞,用Western印迹和流式细胞仪检测其表达。结果经测序证实成功的将丙型肝炎病毒NS3区7个辅助T细胞抗原表位基因序列拼接成融合基因,构建的pEGFPDR4质粒在293T和B淋巴细胞系046W中均表达了预期的融合蛋白36kD。构建的pBuDCEDR4质粒在293T细胞中可观察到预期的13kD的多肽融合蛋白。结论本研究建立了能够在真核细胞表达HCVNS3区7个辅助T细胞抗原表位融合基因的细胞系。; 关键词肝炎病毒丙型非结构蛋白3-DNA免疫真核细胞基因表达; Keywords Hepatitis C viruses nonstructual proteins DNA immunization eukaryotic cell expression; 分类号 R373.21 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达被引量：2: 4; 作者张明霞周福元刁志宏何海棠侯金林骆抗先; 机构南方医科大学南方医院感染内科; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页; 基金全军医学科学技术研究"十五"计划重点课题(01Z046); 文摘目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶SacⅠ和KpnⅠ分别将野生型和突变型p3.8Ⅱ质粒进行双酶切,插入EBV-plpp真核细胞表达载体,转染LCLs,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞能够稳定表达。结果与结论DNA序列分析表明,野型HBVDNA核心区第60、87、97位氨基酸发生了预期的突变,WesternBlotting和微粒子免疫荧光法证明转染的LCLs能稳定表达HBV抗原,证实成功构建了预期细胞模型。; 关键词乙型肝炎病毒变异真核细胞表达载体永生化B淋巴母细胞; Keywords hepatitis B virus mutation eukaryotic expression vector immortalized B-lymphoblasts; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达: 5; 作者苏秀芬姜艳芳王峰牛俊奇; 机构吉林大学第一医院感染症科; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1092-1095,共4页; 基金卫生部博士点专项基金资助课题(20040183047); 文摘目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达,为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法:从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1(+)/NS345中扩增出HCV NS5A基因片段,构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒。用脂质体将其转染HL-7702细胞,通过Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白。结果:用PCR方法扩增的HCV NS5A基因全长1344bp,与PGEM-T重组,测序证实所克隆的NS5A基因片段大小正确;成功地构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒,瞬时转染HL-7702细胞表达NS5A蛋白,Western blotting印迹法显示其相对分子质量约为56000。结论:HCV NS5A的真核表达载体pCI-neo/NS5A在HL-7702细胞中能有效表达NS5A蛋白,NS5A蛋白可导致病毒复制、肝细胞癌发生,且NS5A区为IFN敏感性决定区。; 关键词肝炎病毒 NS5A蛋白真核细胞表达; 分类号 R [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1: 6; 作者张小鹰吴风云何金花廖晓莉王威蒋建伟; 机构暨南大学医学院生化教研室广东省佛山市南海区妇幼保健院检验科浙江省温州市平阳县人民医院广东省广州市番禺区中心医院检验科; 出处《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期278-287,共10页; 基金广东省科技计划(2009B080701051) 广东省医学科研基金(A2007322)资助项目~~; 文摘为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.; 关键词 RNA干扰增殖细胞核抗原真核细胞表达载体 HEPG2细胞肝癌; Keywords RNA interference proliferating cell nuclear antigen eukaryotic expression vector HepG2 cell line hepatocelluar carcinoma; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤] R73-362 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建被引量：1: 7; 作者黄环吴永忠李少林郭启帅林远洪彭志平; 机构重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆市肿瘤研究所重庆医科大学基础医学院放射医学教研室; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期399-402,共4页; 基金重庆市自然科学基金资助课题(2005-BB-5134); 文摘目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家族同源性基因为靶基因,根据shRNA的设计原则,设计实验组及对照组shRNA。体外合成2段编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火,克隆到相应载体pGensil-1的polⅢ启动子下游。结果:经酶切和DNA测序鉴定成功构建了EGFR家族同源性基因的RNA干扰表达载体,分别命名为pGensil-1-E及pGensil-1-C。为下一步体外、体内实验奠定了基础。; 关键词 EGFR家族 RNA干扰真核细胞表达载体; Keywords EFGR family RNA interference Eukarvotic expression vector; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建被引量：2: 8; 作者闻晓波宋佰芬姜海芳崔玉东; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江八一农垦大学生命科技学院; 出处《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期54-57,共4页; 文摘根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表达载体pEGPF-N1上,经鉴定,成功构建含有NDVF和HN基因的真核细胞表达载体pEGPF-N1-F和pEGPF-N1-HN,为下一步研究NDVF和HN蛋白在细胞凋亡中的生物学功能奠定基础。; 关键词新城疫病毒 F基因 HN基因真核细胞表达载体; Keywords Newcastle disease F gene HN gene eukaryotic cell expression vector; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名宿主miRNA调节沙门氏菌感染的研究进展被引量：1: 9; 作者刘亚娟保雨彭祥伟刘力石宝石; 机构西南大学动物科技学院重庆市畜牧科学院家禽研究所; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期973-977,共5页; 基金现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-43-15); 文摘 Micro RNAs（mi RNA）是由真核细胞表达的一类长约19 nt～25 nt的内源性非编码小RNA分子,在调控宿主转录后的基因表达起着关键作用,为免疫细胞中的关键分子。在动物、植物以及病毒中均能够检测到mi RNA的存在,通过mi RBase数据库查到目前为止发现的mi RNA共有28645种,其中已经确定的小鼠mi RNA有1 000多种,; 关键词 miRNA 沙门氏菌感染宿主真核细胞表达小RNA 基因表达免疫细胞非编码; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达	张晓娟李旭栾正刚马晓春	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究	陈创夫乔军王金富田晶华张高轩	《动物科学与动物医学》	2001	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	丙型肝炎病毒NS3区7个抗原表位融合基因载体的构建及在真核细胞的表达	杨素霞李煜杨梅英高江平洪宝发	《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达	张明霞周福元刁志宏何海棠侯金林骆抗先	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达	苏秀芬姜艳芳王峰牛俊奇	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响	张小鹰吴风云何金花廖晓莉王威蒋建伟	《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
7	RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建	黄环吴永忠李少林郭启帅林远洪彭志平	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
8	新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建	闻晓波宋佰芬姜海芳崔玉东	《黑龙江八一农垦大学学报》	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
9	宿主miRNA调节沙门氏菌感染的研究进展	刘亚娟保雨彭祥伟刘力石宝石	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料