雷公藤红素诱导未折叠蛋白反应信号通路中真核细胞翻译起始因子2α活化抑制多发性骨髓瘤细胞生长 被引量：5

1

作者 彭彬 宋瑜婷 +3 位作者 张雪 王莹 曹帆帆 张登海 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期963-969,共7页

目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/... 目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/L、凋亡实验0.0~4.0μmol/L、周期阻滞实验0.0~1.5μmol/L)处理不同时间(增殖实验1~3 d、凋亡实验1 d、周期阻滞实验1 d)后,检测细胞增殖、凋亡、周期阻滞情况;用蛋白质印迹法检测肌醇需求酶1(IRE1)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和活化转录因子6(ATF6)3条UPR信号通路中主要分子的表达,包括葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF6、PERK、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、IRE1、磷酸化IRE1(p-IRE1)。用慢病毒包被的含短发夹RNA(shRNA)载体对eIF2α表达进行干扰,观察雷公藤红素对干扰eIF2α表达后的RPMI 8226细胞UPR信号分子表达、凋亡和细胞周期的影响。结果雷公藤红素以剂量和时间依赖方式抑制4种多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导凋亡、使细胞周期阻滞在G0/G1期,其中RPMI8226细胞对雷公藤红素最敏感。在RPMI8226细胞,雷公藤红素处理浓度在0.5~2.0μmol/L作用30 min^24 h时均能使UPR的PERK通路中p-eIF2α表达水平升高(P<0.05或P<0.01),其下游CHOP表达也相应增加(P<0.05或P<0.01),而对其他2条通路ATF6和IRE1影响不明显。用慢病毒干扰eIF2α表达后,雷公藤红素上调CHOP表达、诱导凋亡和周期阻滞的作用均减弱或消失。结论雷公藤红素能抑制多种多发性骨髓瘤细胞增殖,活化UPR的PERK信号通路中eIF2α分子可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 雷公藤红素 多发性骨髓瘤 未折叠蛋白反应 真核细胞翻译起始因子2α

在线阅读 下载PDF 职称材料

真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)研究进展 被引量：8

2

作者 双宝 韩英鹏 +1 位作者 李明 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期156-160,共5页

真核细胞翻译起始因子5A（eIF5A）是真菌、动植物体内普遍存在的蛋白质翻译起始因子。研究发现其不仅仅在部分蛋白质翻译起始中发挥作用,还在人体癌症发生、促进动植物细胞增殖、细胞衰老和死亡以及一些植物环境胁迫应答等方面都有一定... 真核细胞翻译起始因子5A（eIF5A）是真菌、动植物体内普遍存在的蛋白质翻译起始因子。研究发现其不仅仅在部分蛋白质翻译起始中发挥作用,还在人体癌症发生、促进动植物细胞增殖、细胞衰老和死亡以及一些植物环境胁迫应答等方面都有一定的调控作用。进一步研究真核细胞翻译起始因子5A（eIF5A）的功能,对其生产实践中应用具有非常重要的意义。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子5A DHS 基因功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

小干扰RNA抑制真核翻译起始因子5A2对MKN28胃癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量：2

3

作者 孟庆彬 于健春 +5 位作者 康维明 马志强 周立 叶欣 曹战江 田树波 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期482-487,共6页

目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)... 目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)对EIF5A2的抑制效果。检测EIF5A2蛋白在2例人胃癌及匹配的非癌胃黏膜组织的表达。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭力,Western blot法检测CyclinD1、CyclinD3、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-cadherin、Vimintin、C-myc及转移相关蛋白1(MTA1)的表达水平。结果 EIF5A2在MKN28细胞及人胃癌组织内呈高表达。EIF5A2 siRNA#1可明显抑制MKN28细胞内EIF5A2 mRNA及蛋白的表达。抑制EIF5A2后可明显抑制MKN28细胞增殖(P均<0.01)、迁移(P<0.001)及侵袭能力(P<0.001)。抑制EIF5A2后,Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,CyclinD1、CyclinD3、MTA1及C-myc表达明显受抑制。结论siRNA下调EIF5A2可能通过抑制CyclinD1、CyclinD3抑制MKN28细胞增殖,并通过抑制MTA1、C-myc及上皮间质转化抑制MKN28细胞迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子5A2 胃癌 小干扰RNA 增殖 转移

在线阅读 下载PDF 职称材料

真核细胞翻译起始因子5A与自然流产相关性的初步研究

4

作者 秦晓黎 刘晓瑞 +1 位作者 田福举 林羿 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期470-475,482,共7页

目的初步探讨真核细胞翻译起始因子5A(e IF5A)的表达与自然流产的相关性。方法采用免疫荧光染色、real-time PCR和Western blotting技术检测e IF5A-1和e IF5A-2在自然流产模型小鼠、正常生育力对照组小鼠子宫组织以及在自然流产和人工... 目的初步探讨真核细胞翻译起始因子5A(e IF5A)的表达与自然流产的相关性。方法采用免疫荧光染色、real-time PCR和Western blotting技术检测e IF5A-1和e IF5A-2在自然流产模型小鼠、正常生育力对照组小鼠子宫组织以及在自然流产和人工流产蜕膜组织中的表达。结果小鼠子宫组织及人蜕膜组织中e IF5A-1和e IF5A-2均有表达,但e IF5A-1表达水平明显高于e IF5A-2;流产组织标本中e IF5A-1、e IF5A-2mRNA及蛋白水平表达均低于对照组。结论 e IF5A表达下调可能与自然流产的发生和发展有关。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子5A 自然流产 动物模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

真核细胞翻译起始因子4E与头颈鳞癌关系的研究进展

5

作者 卢恕来 高文信 《国外医学（口腔医学分册）》 CAS 2004年第4期276-277,共2页

真核细胞翻译起始因子4E在细胞质和细胞核中均起着重要作用,它在头颈鳞癌中表现为强特异性过度表达,并与头颈鳞癌的发生发展及预后密切相关,可作为检测头颈鳞癌的可靠指标,判断其恶性度及预测复发有高敏感性,并可作为基因治疗的新靶点。

关键词 真核细胞 翻译起始因子4E 头颈鳞癌 肿瘤 基因治疗 分子生物学 生物指标

在线阅读 下载PDF 职称材料

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化 被引量：2

6

作者 潘红 王军 +2 位作者 朱冠南 曹修丽 李燕 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1573-1577,共5页

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,... 目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子2α 激活转录因子4 未折叠蛋白反应 缺氧缺血性脑损伤

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

7

作者 袁晓琴 陈仕怡 +5 位作者 刘梦茜 李春燕 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期151-156,共6页

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG... 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。 展开更多

关键词 鸡真核生物翻译起始因子2α 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析 被引量：1

8

作者 卢晓昭 彭鸿娟 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期296-299,共4页

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸... 目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。 展开更多

关键词 日本血吸虫 表达序列标签 基因克隆 真核生物翻译起始因子2α

在线阅读 下载PDF 职称材料

毛白杨翻译起始因子基因PtoeIF5A2的克隆及其表达特性分析 被引量：2

9

作者 管阳 王宏芝 +4 位作者 张杰伟 陈亚娟 朱丹 丁莉萍 魏建华 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期63-69,共7页

真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个... 真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个氨基酸,预测蛋白分子质量为18 kDa,等电点为5.76。Real-Time qRT-PCR分析表明:PtoeIF5A2在6个月毛白杨幼苗叶片中的表达量最高,约为其在幼根中表达量的5倍。PtoeIF5A2响应了干旱、ABA(200μmol·L-1)、低温(4℃),尤其是NaCl(300 mmol·L-1)胁迫。在NaCl胁迫24 h后,PtoeIF5A2的表达量上调25倍,结合其启动子中含有6个病原体与高盐响应(GT-1 box)元件,推测该基因在响应高盐胁迫时起着重要作用。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子5A 毛白杨 盐胁迫 PtoeIF5A2

在线阅读 下载PDF 职称材料

真核翻译起始因子2α激酶在肾脏疾病中的作用研究进展 被引量：3

10

作者 郑笑慈 吴嵽 徐昕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1453-1461,共9页

肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、... 肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、免疫和代谢相关疾病等的发生发展过程中发挥重要作用。研究提示eIF2α激酶可能参与多种肾脏疾病的病理过程,因此,本文对eIF2α激酶家族及其在肾脏疾病中的可能作用等方面的研究进展进行归纳总结,以期为肾脏疾病的防治提供新的参考和理论依据。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子2α激酶 肾脏疾病 整合应激反应 内质网应激

在线阅读 下载PDF 职称材料

有氧运动调控eIF2α/ATF4通路改善AD小鼠学习记忆功能

11

作者 夏杰 梁菲 +2 位作者 赵娜 王璟 徐波 《西安体育学院学报》 北大核心 2025年第5期623-633,共11页

目的探究有氧跑台运动对APP/PS1转基因AD小鼠学习记忆及eIF2α/ATF4信号效应机制的影响;方法将3月龄雄性APP/PS1转基因小鼠和野生型小鼠分为野生型对照组(WT-Sed)、野生型运动组(WT-Exe)、APP/PS1对照组(APP/PS1-Sed)和APP/PS1运动组(AP... 目的探究有氧跑台运动对APP/PS1转基因AD小鼠学习记忆及eIF2α/ATF4信号效应机制的影响;方法将3月龄雄性APP/PS1转基因小鼠和野生型小鼠分为野生型对照组(WT-Sed)、野生型运动组(WT-Exe)、APP/PS1对照组(APP/PS1-Sed)和APP/PS1运动组(APP/PS1-Exe);WT-Exe和APP/PS1-Exe组进行为期12周的有氧跑台运动干预;干预结束后,采用Morris水迷宫实验检测小鼠的空间学习和记忆能力;采用免疫组化检测p-eIF2αS51水平,免疫荧光检测ATF4的核转位,TUNEL荧光检测神经元凋亡水平;采用蛋白免疫印记检测ATF4、CREB、p-CREBS133、BDNF、SYN、PSD95、GSK3β、p-GSK3βS9、p-GSK3βY216、p-TauS396、Tau、CHOP、CASPASE12、BAX和BCL2的蛋白水平;结果与WT-Sed组相比,APP/PS1-Sed组小鼠潜伏期显著增加,平台象限时间百分比和平台穿越次数显著减少,海马p-eIF2αS51、ATF4、p-TauS396、p-GSK3βY216、CHOP、CASPASE12、BAX蛋白水平及BAX/BCL2比值显著升高,p-CREBS133、BDNF、SYN、PSD95蛋白水平显著降低,TUNEL阳性细胞数量显著增加;与APP/PS1-Sed组小鼠相比,APP/PS1-Exe组小鼠潜伏期显著降低,平台象限时间百分比和平台穿越次数显著增加,海马p-eIF2αS51、ATF4、p-TauS396、p-GSK3βY216、CHOP、CASPASE12、BAX蛋白水平及BAX/BCL2比值显著降低,p-CREBS133、BDNF、SYN、PSD95蛋白水平显著升高,TUNEL阳性细胞数量显著减少;结论跑台运动能够抑制APP/PS1小鼠海马eIF2α/ATF4信号通路过度激活,进而提高CREB介导的突触可塑性,降低GSK3β激活介导的Tau蛋白过度磷酸化,减少CHOP介导的神经元凋亡,从而改善AD小鼠学习记忆功能. 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 跑台运动 内质网应激 真核翻译起始因子2α 激活转录因子4

在线阅读 下载PDF 职称材料

Mnk2和eIF4E在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：4

12

作者 曾博 冯沿芬 +9 位作者 黄启涛 陈景福 张昕 韩向前 张水深 邹健勇 苏春华 陈振光 罗红鹤 雷艺炎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期349-352,共4页

目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本9... 目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本98例及正常食管黏膜上皮组织20例,应用免疫组化SP法检测癌组织及正常食管黏膜组织中Mnk2和eIF4E的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果:Mnk2在食管癌组织中的阳性率68.4%(67/98),eIF4E的阳性率为61.2%(60/98),Mnk2与eIF4E表达呈正相关(P<0.05),且Mnk2蛋白过表达与食管鳞癌的浸润深度、病理分期密切相关(P<0.05)。结论:Mnk2在食管癌组织中的过表达与浸润深度、TNM分期有关,同时与eIF4E在食管癌的表达相关,两者在食管癌的发展中有协同作用。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 MAPK相互作用激酶-2 真核细胞翻译起始因子4E

在线阅读 下载PDF 职称材料

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制 被引量：1

13

作者 王贺彬 汪雅芳 +3 位作者 沈妙言 李娜 赵丽晶 滕博 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期39-43,I0001,共6页

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E... 目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。 展开更多

关键词 小干扰RNA 真核细胞翻译起始因子4E 喉肿瘤 HEP-2细胞 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

hnRNP K shRNA对K562细胞效应的初步研究 被引量：1

14

作者 黄莲芬 冯文莉 +1 位作者 罗宏伟 孙成铭 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期1071-1075,1147,共6页

目的:探索RNA结合蛋白K(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K)shRNA逆转录病毒对K562细胞的效应。方法:HindⅢ/EcorⅠ双酶切和测序鉴定pSUPER retro hnRNP K shRNA逆转录病毒载体,用包装得到的逆转录病毒感染K562细胞,G... 目的:探索RNA结合蛋白K(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNP K)shRNA逆转录病毒对K562细胞的效应。方法:HindⅢ/EcorⅠ双酶切和测序鉴定pSUPER retro hnRNP K shRNA逆转录病毒载体,用包装得到的逆转录病毒感染K562细胞,G418稳定筛选后,分别用流式细胞仪,MTT实验,瑞氏染色,RT-PCR分析细胞周期和细胞凋亡,细胞增殖,细胞形态学,hnRNP K和真核细胞翻译起始因子4E(Eukaryotic translation initiation factor-4E,eIF4E)mRNA表达变化。结果:克隆载体序列正确。与空载对照组K562细胞相比,hnRNP K干扰组G2/M期细胞比例明显增多(P<0.05),而细胞凋亡则没有显著变化(P>0.05),细胞增殖能力降低,双核和多核细胞明显增多(P<0.05),hnRNP K和eIF4E mRNA表达较空载对照组分别降低了55.22%和55.27%。结论:hnRNP K基因沉默能使K562细胞周期阻滞于G2/M期,对细胞凋亡没有显著影响,降低细胞增殖能力,下调eIF4E mRNA表达,使双核和多核细胞增多,提示该基因可能与细胞分裂有关。 展开更多

关键词 RNA结合蛋白K SHRNA 逆转录病毒载体 真核细胞翻译起始因子4E

在线阅读 下载PDF 职称材料

YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭 被引量：2

15

作者 田祯 庄皓冉 +6 位作者 江楚雯 尹靖 韦晓莹 张枝林 史琳 张育 沈维干 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期8-16,共9页

目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的S... 目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的SMMC-7721和SK-HEP1肝癌细胞模型,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;应用反转录和实时定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平;利用染色质靶向酶切检测(cleavage under targets and release using nuclease,CUT&RUN)-qPCR实验检测YAP能否与EEF1A2基因的启动子序列结合。结果:EEF1A2在肝癌组织中高表达,并与肝癌细胞的迁移能力呈正相关;EEF1A2可以促进低迁移能力的SMMC-7721细胞和高迁移能力的SK-HEP1细胞迁移和侵袭,调控细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Snail和E-cadherin的表达;YAP可以上调EEF1A2的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭;CUT&RUN-qPCR实验结果显示YAP可以与EEF1A2基因的启动子序列结合。结论:YAP可以通过与EEF1A2基因的启动子序列结合,促进EEF1A2的表达,进一步促进肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 真核细胞翻译延伸因子1A2 Yes相关蛋白 细胞迁移 细胞侵袭 肝癌细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

CML细胞eIF4E和Trib2基因mRNA表达分析

16

作者 黄莲芬 冯文莉 +1 位作者 万根平 罗红伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1358-1360,共3页

目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠... 目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠定基础。方法:分离骨髓单个核细胞,用Trizol裂解提取RNA,RT-PCR检测eIF4E基因和trib2基因mRNA的表达水平。结果:初步分析显示部分CML病人eIF4E基因mRNA表达水平很高,为CML疾病进展机制进一步研究奠定了基础。结论:部分CML病人骨髓标本中eIF4E和TRIB2基因mRNA表达水平较高,eIF4E和trib2有可能成为CML病人新的治疗靶点。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 真核细胞翻译起始因子4E Trib2

在线阅读 下载PDF 职称材料

结肠腺癌中eIF2c的表达及与细胞凋亡的关系 被引量：4

17

作者 刘爱东 唐慧 +1 位作者 庞久玲 闫丰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期40-43,共4页

目的 :检测结肠腺癌组织中真核翻译起始因子2c(eukaryotic translation initiation factor 2c,eIF2c)的表达,分析其与细胞凋亡的关系。方法:以69例结肠腺癌患者为研究对象,留取肿瘤组织为观察组,留取正常结肠黏膜组织为对照组。应用免... 目的 :检测结肠腺癌组织中真核翻译起始因子2c(eukaryotic translation initiation factor 2c,eIF2c)的表达,分析其与细胞凋亡的关系。方法:以69例结肠腺癌患者为研究对象,留取肿瘤组织为观察组,留取正常结肠黏膜组织为对照组。应用免疫组化法检测e IF2c、半胱氨酸肽酶-3(Caspase-3)的表达,应用Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达。构建过表达eIF2c结肠癌SW480细胞系,应用Western blot检测BAX的表达。结果:2组中eIF2c的阳性率差别有统计学意义(56.5%vs. 13.0%,χ^2=28.750,P=0.000)。eIF2c在不同肿瘤最大径(68.1%vs. 31.8%,χ^2=8.021,P=0.005)、浸润深度(81.2%vs. 35.1%%,χ^2=14.849,P=0.001)、有无坏死(48.0%vs. 78.9%%,χ^2=5.366,P=0.021)、淋巴结转移(83.3%vs.42.2%,χ^2=10.765,P=0.001)和癌栓(87.5%vs. 47.2%,χ^2=8.134,P=0.004)的分组中,差异有统计学意义。e IF2c与Caspase-3呈负相关性(r=-0.69,P=0.000),eIF2c与BAX呈负相关性(r=-0.66,P=0.000)。生存分析显示,eIF2c与生存时间相关(χ^2=14.00,P=0.000)。过表达e IF2c结肠癌细胞系中BAX表达下降。结论:e IF2c在结肠腺癌中高表达,与临床病理特征和预后相关,e IF2c异常表达与凋亡因子有关联。 展开更多

关键词 结肠腺癌 真核翻译起始因子2c 凋亡 预后

在线阅读 下载PDF 职称材料

内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)通路对肝星状细胞激活及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响 被引量：2

18

作者 黎凤炎 刘泽峰 +4 位作者 夏雨艳 王文娟 李琪 唐利瑕 张国 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期968-974,共7页

目的探讨内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)/真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法收集11例肝穿刺病理提示S1~S4肝纤维化患者和9例肝血管瘤、肝腺瘤患者术后周围正常肝组织病理切片,进一步行... 目的探讨内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶(PERK)/真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法收集11例肝穿刺病理提示S1~S4肝纤维化患者和9例肝血管瘤、肝腺瘤患者术后周围正常肝组织病理切片,进一步行组织免疫组化检测PERK、eIF2α、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)表达情况;使用不同浓度的内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(0、125、250、500、1000 nmol/L)作用于人HSC-LX2,使用qRT-PCR检测PERK mRNA及Western Blot检测PERK、肌醇需要酶1(IRE1)、激活转录因子6(ATF6)、CHOP及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。使用慢病毒转染构建PERK稳定过表达LX-2组及对照组,并通过qRT-PCR检测PERK、eIF2α、α-SMA mRNA,Western Blot检测PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达,免疫荧光检测胶Ⅰ型原蛋白(COL1A1)表达。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;不符合正态分布的计数资料,两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。结果与正常肝组织相比,肝纤维化患者肝组织中PERK、eIF2α及CHOP表达升高,差异均有统计学意义(Z=−3.56、t=−5.75、Z=−3.52,P值均<0.001)。不同浓度毒胡萝卜素作用后,与溶媒组相比,内质网相关蛋白PERK、CHOP、IRE1、ATF6及α-SMA蛋白表达显著升高(P值均<0.05)。与对照空载慢病毒组相比,PERK稳定过表达组PERK mRNA、eIF2αmRNA、α-SMA mRNA表达及PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达明显升高(P值均<0.05)。细胞免疫荧光结果提示,PERK过表达组COL1A1表达升高(P<0.05)。结论PERK过表达可诱导LX-2细胞α-SMA、胶原蛋白COL1A1表达,提示PERK信号通路可能是HSC活化的重要机制之一。 展开更多

关键词 内质网应激 真核细胞起始因子2 肝星状细胞 胶原Ⅰ型

在线阅读 下载PDF 职称材料

EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

19

作者 何嘉文 李友 +1 位作者 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒 稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

eIF4E基因在非小细胞肺癌中的表达及意义 被引量：8

20

作者 张波 朱成楚 +3 位作者 陈保富 章霞 叶敏华 林爱芬 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第12期1132-1135,共4页

背景与目的以往研究表明,真核细胞翻译起始因子(eukaryotic initiation factor-4E,eIF4E)在多种实体肿瘤中高表达,与恶性肿瘤发生、浸润和转移密切相关。本研究旨在采用免疫组化方法研究eIF4E在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer... 背景与目的以往研究表明,真核细胞翻译起始因子(eukaryotic initiation factor-4E,eIF4E)在多种实体肿瘤中高表达,与恶性肿瘤发生、浸润和转移密切相关。本研究旨在采用免疫组化方法研究eIF4E在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法 70例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,以19例癌旁组织、20例正常肺组织为对照,均采用Envision两步法进行免疫组化检测。结果 eIF4E在NSCLC中的阳性表达率高于在癌旁组织和正常肺组织的表达率;eIF4E在淋巴结转移组阳性表达率高于在无淋巴结转移组中表达率;eIF4E在低分化组中阳性表达率高于在中高分化组中表达率。eIF4E阳性表达与患者性别、年龄、肿块大小、吸烟情况无统计学差异(P>0.05)。结论 eIF4E在NSCLC中有较高的表达率,且与淋巴结转移密切相关,提示NSCLC的发生、侵袭和转移可能与eIF4E相关,eIF4E有可能作为肺癌新的标志物以及评估肺癌进展客观指标。 展开更多

关键词 肺肿瘤 免疫组织化学 真核细胞翻译起始因子

在线阅读 下载PDF 职称材料