鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

1

作者 袁晓琴 陈仕怡 +5 位作者 刘梦茜 李春燕 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期151-156,共6页

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG... 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。 展开更多

关键词 鸡真核生物翻译起始因子2α 原核表达 多克隆抗体

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日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析 被引量：1

2

作者 卢晓昭 彭鸿娟 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期296-299,共4页

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸... 目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。 展开更多

关键词 日本血吸虫 表达序列标签 基因克隆 真核生物翻译起始因子2α

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真核生物起始因子5 被引量：2

3

作者 万永奇 朱克毅 +1 位作者 王善治 谢维 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期3-5,共3页

真核生物起始因子 5 (eIF 5 )是一种重要的翻译起始因子 ,过去人们认为它只是GTP酶活化因子 ,催化eIF 2上的GTP水解 ,促进 80S起始复合体的形成 .近年来人们发现它不仅可以催化eIF 2上的GTP水解 ,还参与eIF 3功能的发挥 ,与eIF 2、eIF ... 真核生物起始因子 5 (eIF 5 )是一种重要的翻译起始因子 ,过去人们认为它只是GTP酶活化因子 ,催化eIF 2上的GTP水解 ,促进 80S起始复合体的形成 .近年来人们发现它不仅可以催化eIF 2上的GTP水解 ,还参与eIF 3功能的发挥 ,与eIF 2、eIF 3同时结合 ,促进起始因子复合体的形成 . 展开更多

关键词 真核生物起始因子 基因表达 结构 翻译

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新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究 被引量：2

4

作者 詹媛 仇旭升 +4 位作者 曲昱蓉 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-5,共5页

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情... 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。 展开更多

关键词 新城疫病毒 eif4E 4E-BP1 Mnk1 真核翻译起始因子

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核桃翻译起始因子JreIF1A的克隆及抗旱功能分析 被引量：1

5

作者 任得元 赵焕元 +3 位作者 刘玉梅 高向倩 孙宇栋 杨桂燕 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期103-108,共6页

真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,Jre... 真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,JreIF1A的开放阅读框为438 bp,编码的多肽含145个氨基酸,分子量为16344.48 u,理论等电点为5.08。JreIF1A与土瓶草(Cephalotus follicularis)、毛果杨(Populus trichocarpa)等的亲缘关系较近。JreIF1A能被干旱胁迫显著诱导,且在根和叶中具有表达特异性。将JreIF1A转入酵母,对转基因酵母INVSC1(pYES2-JreIF1A)及对照酵母INVSC1(pYES2)分别进行干旱(山梨醇,0.2 mol/L)处理,发现INVSC1(pYES2-JreIF1A)在干旱胁迫下的生长活性显著优于INVSC1(pYES2)。表明JreIF1A基因能不同程度地响应干旱胁迫,其表达可有效改善转基因酵母的抗旱响应能力;JreIF1A基因可作为核桃逆境适应机制研究的候选基因。 展开更多

关键词 核桃 真核翻译起始因子 eif1A基因 逆境响应 酵母转化

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真核生物中mRNA的降解

6

作者 邱平 李节 《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第4期10-12,共3页

真核生物中mRNA的稳定性是决定基因表达水平的一个重要因素。不同mRNA稳定程度差异很大,例如高等真核生物中有些mRNA半衰期为20分钟,而同一细胞中另一些mRNA的半衰期则为24hr以上;酵母细胞中最不稳定的mRNA 5分钟内就彻底降解,最稳定的... 真核生物中mRNA的稳定性是决定基因表达水平的一个重要因素。不同mRNA稳定程度差异很大,例如高等真核生物中有些mRNA半衰期为20分钟,而同一细胞中另一些mRNA的半衰期则为24hr以上;酵母细胞中最不稳定的mRNA 5分钟内就彻底降解,最稳定的半衰期为60分钟以上。mRNA的降解是受精密调控的。近年来有关这方面的研究中最惊人的发现是,在mRNA中发现了调节它自身稳定性的序列。 展开更多

关键词 真核生物 自身稳定性 POLYA 密码子 酵母细胞 基因表达 翻译起始因子 翻译因子 无义突变 结合蛋白

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病毒“劫持”真核细胞翻译系统的研究进展 被引量：2

7

作者 詹媛 仇旭升 +3 位作者 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国家禽》 北大核心 2014年第23期49-54,共6页

病毒依赖于宿主细胞进行复制的同时又受到宿主体内各种条件的制约,为了在宿主细胞内生存并实现快速复制和增殖,病毒通过激活宿主体内各种信号通路来抢夺宿主翻译系统以及逃避先天性免疫。如果病毒无法进行自身m RNA的翻译将对病毒的增... 病毒依赖于宿主细胞进行复制的同时又受到宿主体内各种条件的制约,为了在宿主细胞内生存并实现快速复制和增殖,病毒通过激活宿主体内各种信号通路来抢夺宿主翻译系统以及逃避先天性免疫。如果病毒无法进行自身m RNA的翻译将对病毒的增殖、扩增和进化产生致命性的打击。因此,许多病毒在感染后能够征用或者控制宿主的翻译系统来进行病毒m RNA的翻译。病毒对宿主翻译系统的控制可以发生在翻译起始、延伸和终止3个阶段中的任何一个步骤,可能是对真核翻译因子以及相关信号通路的调控,也可能是通过自身编码的具有类似真核翻译因子活性的病毒蛋白来实现对核糖体的募集,文章就一些特定病毒对宿主翻译系统的抢夺机制进行综述,为病毒特异性治疗的研究提供重要的理论基础。 展开更多

关键词 病毒蛋白合成 真核翻译起始因子 eif4F IRES eif20α

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eIF4E在肾透明细胞癌组织中的表达及意义 被引量：3

8

作者 李刚 刘莹 +1 位作者 种铁 王子明 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期106-110,125,共6页

目的探讨真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在人肾癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测40例肾癌组织及40例癌旁组织中eIF4E蛋白的表达。RT-PCR检测eIF4EmRNA在不同临床分期的... 目的探讨真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在人肾癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测40例肾癌组织及40例癌旁组织中eIF4E蛋白的表达。RT-PCR检测eIF4EmRNA在不同临床分期的肾癌组织与癌旁组织中的表达。Western blot法检测不同临床分期的肾癌组织与癌旁组织中eIF4E和Phospho-eIF4E蛋白的表达。结果 eIF4E蛋白在肾癌组织阳性表达率为77.5%,癌旁组织阳性表达率为27.5%,肾癌组织中eIF4E阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。eIF4E mRNA在肾癌中的表达量高于癌旁组织(0.859±0.064 vs.0.705±0.072,P<0.05),且eIF4EmRNA在Ⅲ期肾癌组织中的相对表达量最高(0.961±0.043)。在临床Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期及Ⅱ期与Ⅲ期肾癌组织间,eIF4E mRNA的表达均有统计学差异(P<0.05)。Western blot法检测发现,肾癌组的eIF4E蛋白和Phospho-eIF4E表达量明显高于癌旁组(分别为:0.676±0.095vs.0.556±0.056;0.605±0.066 vs.0.466±0.045,P<0.05)。在肾癌的不同临床分期中,随着临床分期越高,eIF4E和Phospho-eIF4E蛋白表达量逐渐增高(Ⅰ期:0.629±0.085和0.588±0.058;Ⅱ期:0.699±0.049和0.596±0.061;Ⅲ期:0.812±0.053和0.689±0.046;P<0.05)。Phospho-eIF4E/eIF4E的比值在肾癌组明显高于癌旁组(P<0.05)。但在不同临床分期肾癌之间,Phospho-eIF4E/eIF4E的比值未见统计学差异(P>0.05)。结论eIF4E和PhosphoeIF4E在肾透明细胞癌中高表达,与肾癌的发生、发展有关,为肾癌的诊断及治疗提供了理论依据。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子4E(eif4E) Phospho-eif4E 肾细胞癌 细胞分化

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鼻咽癌组织p-eIF4E和p-4EBP1高表达与预后不良正相关 被引量：4

9

作者 郑军 张春燕 +2 位作者 张毅强 裴晋红 范松青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期531-535,共5页

目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-... 目的探讨磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)和磷酸化的eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)与鼻咽癌(NPC)临床病理特征和预后的相关性。方法免疫组织化学染色法检测314例NPC组织中p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达,利用SPSS16.0软件分析p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达与NPC临床病理特征及预后的相关性。结果 NPC组织中存在p-eIF4E和p-4EBP1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为74.2%(233/314)、72.9%(229/314);p-eIF4E和p-4EBP1蛋白表达在淋巴结转移NPC组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移NPC组织,但与性别、年龄、临床分期和组织类型无关;NPC组织中p-eIF4E与p-4EBP1蛋白表达呈正相关,且p-eIF4E和p-4EBP1蛋白阳性的NPC患者生存时间明显短于p-eIF4E和p-4EBP1阴性患者,是NPC判断预后的独立因素。结论 p-eIF4E和p-4EBP1蛋白过表达可能与NPC的发生、发展及不良预后密切相关,p-eIF4E和p-4EBP1有望成为NPC临床诊治和判断预后的分子标志物。 展开更多

关键词 磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E(p-eif4E) 磷酸化的eif4E结合蛋白1(p-4EBP1) 鼻咽癌(NPC)

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猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析 被引量：1

10

作者 龙熙 张廷焕 +5 位作者 赵久刚 蓝静 柴捷 郭宗义 王金勇 张亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2062-2069,共8页

【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列... 【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能。 展开更多

关键词 猪 真核翻译起始因子2(eif2) eif2S3基因 克隆 序列分析 组织表达谱

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家蚕丝腺组织高丰度表达基因BmeIF5A的克隆和进化分析 被引量：1

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作者 刘文明 李春峰 +2 位作者 范晓东 黄科 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期12-19,共8页

从家蚕丝腺组织克隆得到2种mRNA形式的家蚕Bm eIF5A基因(GenBank登陆号:DQ202521;DQ201182),虽都具有相同的编码160个氨基酸的编码区,但却为不同长短的3′非编码区(3′UTR)。家蚕Bm eIF5A基因包含3个外显子和2个内含子。组织表达谱分析... 从家蚕丝腺组织克隆得到2种mRNA形式的家蚕Bm eIF5A基因(GenBank登陆号:DQ202521;DQ201182),虽都具有相同的编码160个氨基酸的编码区,但却为不同长短的3′非编码区(3′UTR)。家蚕Bm eIF5A基因包含3个外显子和2个内含子。组织表达谱分析发现该基因在丝腺组织里高丰度表达。分析推导的氨基酸序列揭示该基因产物具有eIF5A家族蛋白质共有的保守区。序列同源性分析表明eIF5A家族基因在所有的真核生物中都高度保守。进化生物学的分析显示家蚕的eIF5A基因与昆虫的同源性较高。 展开更多

关键词 真核生物翻译起始因子 翻译起始 丝腺 家蚕

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eIF4E的研究进展及在肺癌中研究现状 被引量：2

12

作者 张波 朱成楚 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第8期931-934,共4页

eIF4E（eukaryotic translation initiation factor4E），真核细胞翻译起始因子，是真核细胞翻译起始和调控的核心成分，通过与mRNA5’端帽子结构结合，在蛋白质翻译起始过程中发挥重要作用。研究证实在动物和人体中包括肺癌在内的大多... eIF4E（eukaryotic translation initiation factor4E），真核细胞翻译起始因子，是真核细胞翻译起始和调控的核心成分，通过与mRNA5’端帽子结构结合，在蛋白质翻译起始过程中发挥重要作用。研究证实在动物和人体中包括肺癌在内的大多恶性肿瘤中存在过表达，它与多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。因此，本文就eIF4E的研究进展以及eEF4E在肺癌中的研究现状作一综述。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子 肺癌 恶性肿瘤 蛋白质翻译 浸润和转移 eif4E 过表达

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核桃JreIF1A基因启动子的鉴定及表达活性分析

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作者 张英杰 闫鹏宇 +3 位作者 李文凯 崔茂凯 张彤 杨桂燕 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2019年第5期15-21,共7页

真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结... 真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结果显示,JreIF1A上游1200bp启动子序列中包含众多与逆境响应相关的元件,病害响应相关的BIHD1OS、热胁迫响应相关的CCAATBOX1、Dof转录因子识别的DOFCOREZM、WRKY识别的WRKY71OS等。将JreIF1A启动子瞬时转入烟草测定GUS酶活性,发现JreIF1A启动子具有表达活性,且受干旱、盐、寒、热等胁迫诱导。表明JreIF1A启动子具有逆境响应表达活性,可能调控JreIF1A基因参与多重逆境响应。 展开更多

关键词 核桃 真核翻译起始因子 eif1A基因 启动子 表达活性

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鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定 被引量：3

14

作者 李梦茹 张文 +6 位作者 段辰星 马良 栗朵朵 彭璟 梁晶晶 罗廷荣 李晓宁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3073-3082,共10页

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1... 【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1基因编码区(CDS)序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋白eIF4A1-Flag,且主要以包涵体形式存在。将鼠源eIF4A1基因克隆至pcDNA3.0载体成功构建获得真核表达载体pcDNA3.0-eIF4A1-Flag,以其转染HEK-293T细胞后,eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,且主要分布在细胞质中。生物信息学分析结果表明,eIF4A1蛋白相对分子量为46.15408 kD,理论等电点(pI)为5.267,含有407个氨基酸残基;属于不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构,也没有信号肽,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。鼠源eIF4A1蛋白的主要互作蛋白有10个,除eIFs家族蛋白外,还包括Paip1和Pdcd4互作蛋白。【结论】eIF4A1主要是分布在细胞质,为不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构和信号肽,通过构建原核/真核表达载体表达获得的融合蛋白eIF4A1-Flag可用于筛选和鉴定eIF4A1互作蛋白,为深入探究eIFs的结构及生物学功能提供技术支持。 展开更多

关键词 鼠源 真核生物翻译起始因子(eifs) eif4A1基因 原核表达 真核表达 生物信息学分析

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eIF3亚家族与恶性肿瘤发生的关系 被引量：4

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作者 韩丽芳 刘昭前 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第10期1195-1200,共6页

eIF3是相对分子质量最大和最复杂的一个真核细胞翻译起始因子,它在真核细胞翻译调控中发挥非常重要的作用。最近研究发现,eIF3的许多亚基在人类肿瘤中表达量发生改变,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。本文主要对eIF3亚家族与肿瘤发生... eIF3是相对分子质量最大和最复杂的一个真核细胞翻译起始因子,它在真核细胞翻译调控中发挥非常重要的作用。最近研究发现,eIF3的许多亚基在人类肿瘤中表达量发生改变,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。本文主要对eIF3亚家族与肿瘤发生的关系进行综述。 展开更多

关键词 eif3 翻译起始因子 肿瘤

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eIF3a在低氧诱导的右心重构中的作用及机制

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作者 李文群 李晓晖 李元建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期159-159,共1页

目的探讨翻译起始因子3a（eIF3a）在低氧诱导的右心重构中的作用及机制.方法低氧（10%O2）21天诱导右心重构模型,HE、Masson和TUNEL染色观察右心室组织病理变化.TGF-β1（5μg·L^-1）诱导原代心肌成纤维细胞增殖和分化,MTS和EdU检... 目的探讨翻译起始因子3a（eIF3a）在低氧诱导的右心重构中的作用及机制.方法低氧（10%O2）21天诱导右心重构模型,HE、Masson和TUNEL染色观察右心室组织病理变化.TGF-β1（5μg·L^-1）诱导原代心肌成纤维细胞增殖和分化,MTS和EdU检测细胞增殖.ELISA、Real-timePCR和Westernblot检测TGF-β1、eIF3a、p27、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ、ANP和BNP的表达.结果低氧诱导心脏右心室组织中心肌细胞肥大和凋亡增多、肌纤维排列紊乱、胞外胶原沉积增多,并伴有TGF-β1、eIF3a、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ、ANP、BNP表达的上调和p27表达的下调.TGF-β1促进心肌成纤维细胞增殖,明显上调eIF3a、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ的表达和下调p27的表达,TGF-β1的作用又被siRNA下调eIF3a表达所逆转.结论eIF3a在低氧诱导的右心重构中起重要作用,机制涉及eIF3a/p27. 展开更多

关键词 翻译起始因子3a(eif3a) 右心室重构 心肌成纤维细胞

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IL-33通过激活NF-κB信号通路上调eIF3a的表达介导小鼠肺肌纤维母细胞增殖分化促进肺纤维化 被引量：1

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作者 高云星 付裕 +3 位作者 陈晓 李泽朋 何晓伟 李先伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期693-700,共8页

目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立... 目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立肺纤维化小鼠模型。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原纤维沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。分离培养小鼠原代成纤维细胞,分为对照组、 IL-33组、 IL-33联合二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Transwell^(TM)实验观察细胞迁移能力。实时定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、 Col3和α-SMA mRNA的表达。Western blot法检测IL-33、 Col1、 Col3、 α-SMA、磷酸化核因子κB抑制物α(p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、真核翻译起始因子3a(eIF3a)及核内NF-κB p65的蛋白水平。结果 与对照组相比,BLM组IL-33、 p-IκBα、 p-NF-κB p65、 eIF3a的表达及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高,同时α-SMA、 Col1和Col3的表达明显上调。与BLM组相比,IL-33组p-IκBα、 p-NF-κB p65和eIF3a的表达及NF-κB p65核转移水平进一步增加,肺组织α-SMA、 Col1和Col3的表达进一步上调;而抗IL-33抗体的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验表明IL-33能够明显提高成纤维细胞增殖和迁移的能力、显著上调IκBα、 NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB p65核转移水平及eIF3a的表达,明显促进α-SMA、 Col1和Col3的表达。而IL-33的这些作用能够被PDTC所逆转。结论 IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而上调eIF3a的表达,进而诱导肺MFb增殖分化而促进PF的发生发展。 展开更多

关键词 白细胞介素33(IL-33) 核因子κB(NF-κB) 真核翻译起始因子3a(eif3a) 肌纤维母细胞 肺纤维化

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