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利用同位素标记相对和绝对定量技术筛查神经管畸形胚胎孕鼠血清差异蛋白质谱 被引量:2
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作者 安东 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期315-319,323,共6页
目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清... 目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。 展开更多
关键词 神经管畸形 同位素标记相对和绝对定量技术 蛋白组学
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基于同位素相对标记与绝对定量技术结合质谱技术的幼年特发性关节炎血清蛋白质组学研究 被引量:1
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作者 刘琴 孙红 +1 位作者 余东阳 胡红兵 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第20期2619-2623,共5页
目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的... 目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的差异蛋白,并进行生物信息学分析。结果相对于健康体检组,JIA组共鉴定差异蛋白106个,其中49个表达上调,57个表达下调;JIA组和RA组中有26个差异蛋白均表达上调,37个表达下调。通过GO富集分析和KEGG通路分析,结果表明血液凝溶系统、免疫系统、脂质代谢与JIA的发病机制密切相关。通过STRING分析得到研究JIA机制的PPI网络的关键节点AHSG、APOH、脂联素等多个候选蛋白。结论本研究分析了JIA患者的血清蛋白质组,为JIA的诊断、JIA发病机制的探讨提供了实验依据。 展开更多
关键词 幼年特发性关节炎 蛋白质组学 同位素相对标记与绝对定量技术 质谱技术
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用于相对和绝对定量的等量异位标签-二维液相色谱-串联质谱法分析雌二醇和血清剥夺对乳腺癌细胞内蛋白质含量的影响 被引量:6
3
作者 朱镭 倪国新 +3 位作者 张政希 徐学敏 胡晓芳 李伟 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期270-278,共9页
雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定... 雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定量的等量异位标签(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chrom atography-tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)对雌二醇(17β-oestradiol,E2)和血清各自以及共同作用对MCF7乳腺癌细胞内蛋白质表达的影响进行了比较,共鉴定到置信度在95%以上的蛋白质576种,其中各组相对于正常培养组的细胞共找到26种差异在1倍以上的蛋白质,其中10种上调,16种下调。研究发现E2和血清可显著影响细胞内与蛋白质合成相关的蛋白质的水平。实验结果表明:iTRAQ-LC-MS/MS是进行多个样品差异蛋白组比较的一种有效方法。 展开更多
关键词 用于相对和绝对定量的等量异位标签(iTRAQ) 二维液相色谱-串联质谱 雌激素 血清剥夺 乳腺癌细胞
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同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用 被引量:1
4
作者 陈永熙 李娅 +5 位作者 张文 陈晓农 王伟铭 张群业 黄秋花 陈楠 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期513-516,共4页
目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴... 目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%~90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。 展开更多
关键词 相对和绝对定量的同位素标签试剂 定量蛋白质组学 人肾小管上皮细胞
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基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展 被引量:12
5
作者 周愿 单亦初 +1 位作者 张丽华 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期496-502,共7页
定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了... 定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法,包括相对定量方法和绝对定量方法,并对其发展进行了展望。 展开更多
关键词 定量蛋白质组学 稳定同位素标记 相对定量 绝对定量
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基于同位素标记相对和绝对定量技术研究藏香猪冷鲜肉冰温保鲜分子机制
6
作者 杨飞艳 辜雪冬 +3 位作者 孙术国 罗章 谢司伟 黄文阳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第5期46-54,共9页
本研究基于同位素标记相对和绝对定量技术研究冰温-2℃和冷藏4℃条件下,藏香猪冷鲜肉蛋白质组变化及其与微生物指标(菌落总数)、理化品质(总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β... 本研究基于同位素标记相对和绝对定量技术研究冰温-2℃和冷藏4℃条件下,藏香猪冷鲜肉蛋白质组变化及其与微生物指标(菌落总数)、理化品质(总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β-转角相对含量)变化的关系。结果表明:与4℃贮藏条件相比,-2℃贮藏条件下猪肉菌落总数、TVB-N含量、弹性以及蛋白质二级结构变化速率相对较低。蛋白质组学分析结果表明,在-2℃和4℃贮藏条件下,猪肉中共179个蛋白发生了明显变化,其中,丰度显著差异蛋白143个。-2℃下16 d/0 d和4℃下16 d/0 d相比较有丰度差异蛋白97个,其中共有丰度差异蛋白61个。这些差异蛋白主要涉及结构蛋白、代谢酶、应激蛋白和钙调节蛋白等。差异表达蛋白的表达量与菌落总数、理化品质(TVB-N含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β-转角相对含量)之间的相关性分析表明,肌球蛋白、原肌球蛋白、钙蛋白酶抑制蛋白表达量均与肉弹性、β-折叠相对含量呈极显著正相关(P<0.01),与菌落总数、TVB-N含量、β-转角相对含量呈显著或极显著负相关(P<0.05,P<0.01),相对于这3类蛋白,热休克蛋白与肉理化品质、蛋白质二级结构呈现相反的相关关系。结论:冰温贮藏能有效抑制腐败微生物增殖和猪肉蛋白质降解,降低藏香猪冷鲜肉TVB-N含量和减少蛋白质二级结构变化,维持肉弹性,进而达到冷鲜肉贮藏保鲜效果。本研究为深入理解冰温保鲜的分子机制、合理设计冰温贮藏条件提供了参考。 展开更多
关键词 藏香猪肉 同位素标记相对和绝对定量 蛋白质组学 品质特征 相关性
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苦马豆素对家兔脾脏免疫功能及代谢的影响
7
作者 赵金香 陶大勇 +3 位作者 杜国丰 张家鸣 沈佳宜 矫继峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期74-80,共7页
为了探讨苦马豆素通过消化系统对家兔脾脏免疫功能和代谢的影响,将体重为(1.9±0.12)kg的24只家兔随机分成对照组与试验组,每组雌、雄各半。试验组家兔饲喂含有小花棘豆的自制颗粒饲料,饲喂苦马豆素剂量为2 mg/(kg·d),对照组... 为了探讨苦马豆素通过消化系统对家兔脾脏免疫功能和代谢的影响,将体重为(1.9±0.12)kg的24只家兔随机分成对照组与试验组,每组雌、雄各半。试验组家兔饲喂含有小花棘豆的自制颗粒饲料,饲喂苦马豆素剂量为2 mg/(kg·d),对照组家兔饲喂自制颗粒饲料中不含小花棘豆。所有家兔单笼饲养,自由饮水,每天观测并记录家兔的健康状态。在试验的第60天,采取所有家兔脾脏,对脾脏进行基于iTRAQ的定量蛋白质组学分析、生物信息学分析及关键蛋白质的Western blot验证。结果显示,所有试验组家兔均呈现明显的中毒现象。与对照组相比,共鉴定出315个与新陈代谢(81%)及免疫相关(15%)的差异表达蛋白质(>1.5倍或<1/1.5倍)。而且,苦马豆素中毒家兔脾脏细胞分解代谢处于激活状态,但其免疫反应处于抑制状态。说明苦马豆素抑制了家兔脾脏的免疫功能,激活了脾脏组织的分解代谢。 展开更多
关键词 苦马豆素 小花棘豆 脾脏 同位素标记的相对和绝对定量技术 蛋白质组 免疫 家兔
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激光捕获显微切割技术纯化的人支气管上皮癌变各阶段组织的定量蛋白质组学研究 被引量:1
8
作者 曾谷清 程爱兰 +4 位作者 易红 李茂玉 李国庆 李建玲 廖力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第6期538-547,共10页
为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用... 为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)鉴定支气管上皮癌变进程中各阶段的差异表达蛋白质.结果共鉴定了1 036个蛋白质,筛选出102个与人支气管上皮癌变相关的差异蛋白质,在这些差异蛋白质中,有的在支气管上皮癌变过程中进行性上调,有的在支气管上皮癌变过程中进行性下调,有的呈阶段特异性改变.功能分析表明,这些差异蛋白质涉及代谢、细胞凋亡、增殖、分化、信号传导、转录、翻译、细胞黏附、免疫反应与发育等.Western blotting及免疫组织化学技术验证了其中2个差异蛋白(S100A9和CKB)的表达,证实了定量蛋白质组学结果的可靠性.研究结果提示:这些差异表达蛋白质与支气管上皮癌变相关,并可成为肺鳞癌的早期诊断标志物,进一步研究差异蛋白质的生物学功能,将有助于阐明支气管上皮的癌变机制,从而为肺鳞癌的早期诊断与发病机制研究提供新思路. 展开更多
关键词 人支气管上皮癌变 肺鳞癌 生物标志物 激光捕获显微切割技术 同位素标记相对和绝对定量
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基于iTRAQ定量蛋白质组学的三文鱼新鲜度分析 被引量:11
9
作者 马聪聪 张九凯 +3 位作者 韩建勋 邢冉冉 郝建雄 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第21期44-51,共8页
新鲜度是三文鱼重要的品质之一,对其加工适用性具有较大影响。为探究三文鱼肌肉蛋白与新鲜度之间的潜在联系,本实验采用同位素标记相对和绝对定量技术研究了0℃贮存条件下不同贮存时长中三文鱼蛋白质的变化情况。与新鲜对照组(0 d)相比,... 新鲜度是三文鱼重要的品质之一,对其加工适用性具有较大影响。为探究三文鱼肌肉蛋白与新鲜度之间的潜在联系,本实验采用同位素标记相对和绝对定量技术研究了0℃贮存条件下不同贮存时长中三文鱼蛋白质的变化情况。与新鲜对照组(0 d)相比,3个不同贮存时间(5、10 d和15 d)的三文鱼共有62种蛋白质发生显著变化,通过进一步的生物信息学分析发现这些蛋白主要富集在代谢通路和糖酵解/糖异生通路中。对3个比较组的差异蛋白进行了综合分析,共从中筛选出28个可能与三文鱼贮存期间新鲜度变化相关的蛋白,其中2个蛋白在贮存初期上调,但随着贮存时间的延长开始降解;10个蛋白在贮存5 d时就发生显著下调,随着贮存时间的延长继续发生不同程度的降解;3个蛋白在贮存5 d时含量没有发生明显变化,但贮存10 d后开始减少;13个蛋白在贮存10 d以内含量不变,但贮存15 d后发生明显降解,这些蛋白在糖代谢、肌肉收缩、蛋白骨架和能量代谢过程中发挥重要作用。综上,上述蛋白都是与三文鱼新鲜度相关的差异蛋白,本研究为揭示不同贮存时间三文鱼新鲜度变化机理提供了一定的参考。 展开更多
关键词 蛋白质组学 三文鱼 同位素标记相对和绝对定量 新鲜度 生物信息学
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iTRAQ技术及其在蛋白质组学中的应用 被引量:63
10
作者 谢秀枝 王欣 +3 位作者 刘丽华 董世雷 皮雄娥 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期616-621,共6页
近年来随着蛋白质组学的迅速发展,其相应的方法学研究也取得了巨大的进步,一系列新技术融入了蛋白质组学研究中,极大地促进了这门学科的发展.相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术与高度敏感性和准确性的串联质谱及多维液相色谱联用技... 近年来随着蛋白质组学的迅速发展,其相应的方法学研究也取得了巨大的进步,一系列新技术融入了蛋白质组学研究中,极大地促进了这门学科的发展.相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术与高度敏感性和准确性的串联质谱及多维液相色谱联用技术已成为蛋白质定性和定量研究的主要工具之一.该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性.由于其能够同时对多达8种样品进行标记分析,故在生命科学的各个领域得到了广泛的应用.本文对iTRAQ的原理、实验流程、优缺点及近几年的应用进展进行综述. 展开更多
关键词 相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术 蛋白质组学 串联质谱 多维液相色谱 生物标记物
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利用转录组及iTRAQ技术筛选高油酸油菜抗病相关基因 被引量:4
11
作者 张振乾 肖钢 +5 位作者 官春云 邬贤梦 熊兴华 李云昌 胡琼 陈社员 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期16-24,共9页
高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号... 高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号转导通路和植物病原体互作3个分类,将注释的基因和蛋白进行关联,并对其中可能与抗病相关的基因进行定量PCR验证。结合前人研究发现,基因表达或蛋白表达发生显著变化的基因gi|260505503(多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白)、gi|226346102(HSR203J类蛋白)、gi|470103214(钙调蛋白类)与抗病相关;而gi|297843222(结合蛋白)、gi|18397961(2-铁,2-硫-铁氧化还原类蛋白)、gi|196052306(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基)、gi|18423437(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(辅酶)1α-复形5)和gi|297794581(激酶家族蛋白)等基因差异显著。 展开更多
关键词 菌核病 高油酸油菜 转录组 同位素相对标记与绝对定量技术 定量PCR
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应用iTRAQ-HPLC-MS技术筛选奶牛脂肪肝病尿液蛋白标志物 被引量:4
12
作者 孙雨航 夏成 +2 位作者 舒适 孙玲伟 徐闯 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期844-852,共9页
应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选并鉴定脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,为诊断奶牛脂肪肝病提供新的生物标志物。收集40头奶牛的尿液,分为脂肪肝病组A1、A2和健康对照组B1、B2,每组各10头奶牛。组内每10个样品等量混合... 应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选并鉴定脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,为诊断奶牛脂肪肝病提供新的生物标志物。收集40头奶牛的尿液,分为脂肪肝病组A1、A2和健康对照组B1、B2,每组各10头奶牛。组内每10个样品等量混合后进行试验,将符合要求的样品进行iTRAQ标记后利用高效液相色谱法层析,经串联质谱鉴定。共筛选出110个差异表达蛋白,其中50个表达下调,60个表达上调;通过生物信息学分析得到了4个关键性蛋白:玻连蛋白(Vitronectin,VTN)、脂质运载蛋白(Lipocalin,LCN2)、凝血酶原(Prothrombin,F2)和丛集素(Clusterin,CLU)。本试验成功筛选出脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,并鉴定出其中4种与奶牛脂肪肝病存在密切关系的关键性调节因子,如能进一步证实为奶牛脂肪肝病的重要生物标志物,将会为奶牛脂肪肝病的早期检测和诊断提供新的方法。 展开更多
关键词 同位素标记相对和绝对定量技术 差异表达蛋白 奶牛脂肪肝病 蛋白标志物
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桑树硬枝扦插生根过程基部皮层的差异蛋白质组分析 被引量:5
13
作者 杜伟 班月圆 +3 位作者 唐壮 杜小龙 郭锡杰 程嘉翎 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期593-602,共10页
应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),分析桑树硬枝扦插生根不同阶段插穗基部皮层的蛋白质组差异,为从分子水平研究桑树扦插生根调控机制提供基础信息。在扦插初期、膨大期、发根期3个阶段的插... 应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),分析桑树硬枝扦插生根不同阶段插穗基部皮层的蛋白质组差异,为从分子水平研究桑树扦插生根调控机制提供基础信息。在扦插初期、膨大期、发根期3个阶段的插穗基部皮层共鉴定到4 427种蛋白质,通过对同位素报告基团相对含量的定量检测,共检出2 875种蛋白质。其中,扦插初期和膨大期的差异蛋白质有595种,扦插初期和发根期的差异蛋白质有660种,膨大期和发根期的差异蛋白质有231种。从表达差异显著的蛋白质中筛选出GDP-D-甘露糖基-3’,5’-异构酶、凝集素KM+、生长素IAA水解酶、热激蛋白hsp70、丙二烯氧化物环氧酶、细胞色素b6、过氧化物酶等可能与生根过程密切相关的蛋白质,通过GO功能注释和KEGG数据库比对分析,这些差异蛋白质在扦插生根中主要执行的功能包括代谢过程、多细胞组织进程、定位系统建立、生物学调控、刺激应答、细胞要素、细胞器要素、催化活性和蛋白质结合等,并主要参与次生代谢产物的生物合成、淀粉和蔗糖代谢、内质网蛋白质加工、苯丙素生物合成、糖酵解和糖异生等代谢通路。 展开更多
关键词 桑树 硬枝扦插 生根 蛋白质组 同位素标记相对和绝对定量技术 液相色谱-串联质谱法
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蛋白质组学实验技术及其应用 被引量:25
14
作者 赵静 王宏伟 +1 位作者 田二杰 周变华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期116-120,共5页
蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,从整体、动态和定量的角度去研究基因的功能,是后基因组计划的一个重要组成部分。与基因组学相比,蛋白质组学更能从细胞和生命的整体水平上阐明生命现象的本质和活动规律,因此受到了各国学者的高度重... 蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,从整体、动态和定量的角度去研究基因的功能,是后基因组计划的一个重要组成部分。与基因组学相比,蛋白质组学更能从细胞和生命的整体水平上阐明生命现象的本质和活动规律,因此受到了各国学者的高度重视。蛋白组学的发展离不开其相关实验技术的突飞猛进,这些技术不仅可以进行蛋白质的分离和鉴定,还可以进行目的蛋白的筛选和样品的分析,为生命科学领域相关研究提供了新的思路和解决办法。论文主要综述了包括双向电泳、免疫共沉淀、酵母双杂交、蛋白质芯片及同位素标记相对和绝对定量技术等蛋白质组学实验技术的原理及特点,并概述了这些技术在生命科学中的重要应用。 展开更多
关键词 蛋白质组学 双向电泳 酵母双杂交 免疫共沉淀 蛋白质芯片 同位素标记相对和绝对定量技术
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应用iTRAQ技术筛选先天性心脏畸形胎儿母亲血清差异表达蛋白 被引量:6
15
作者 陈骊珠 马巍 +1 位作者 张墨 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期510-514,518,共6页
目的筛选先天性心脏畸形(CHD)母体血清差异表达蛋白质,明确和CHD相关的候选标志物。方法收集40例CHD胎儿(实验组)母亲血清和10例正常胎儿(对照组)母亲血清,其中实验组包括法洛氏四联征10例,室间隔缺损10例,共同动脉干10例,其他少见先天... 目的筛选先天性心脏畸形(CHD)母体血清差异表达蛋白质,明确和CHD相关的候选标志物。方法收集40例CHD胎儿(实验组)母亲血清和10例正常胎儿(对照组)母亲血清,其中实验组包括法洛氏四联征10例,室间隔缺损10例,共同动脉干10例,其他少见先天性心脏畸形10例。每组10例标本等体积混合后,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对蛋白质进行鉴定和相对定量。结果孕妇外周血血清中共鉴定到蛋白质606个,实验组与对照组差异达到1.5倍以上的蛋白质47个,其中23个在实验组中上调,24个在实验组中下调。结论基于i TRAQ技术的蛋白质组学方法能鉴定出多种CHD相关的差异蛋白,CHD发生是一个多种蛋白质分子参与的结果。 展开更多
关键词 同位素标记相对和绝对定量技术 先天性心脏畸形 蛋白质组学 血清标志物 产前诊断
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强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白的差异表达研究 被引量:3
16
作者 蔡安季 戴勇 +2 位作者 李武县 李紫微 涂植光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2084-2087,共4页
目的检测强直性脊柱炎外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白表达水平,探讨其与强直性脊柱炎发病的关系。方法收集10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照,提取外周血单个核细胞,采用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测强直性脊柱... 目的检测强直性脊柱炎外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白表达水平,探讨其与强直性脊柱炎发病的关系。方法收集10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照,提取外周血单个核细胞,采用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中的急性时相反应蛋白表达水平,并运用Western blot方法进行验证差异表达的触珠蛋白(Hp)和铜蓝蛋白(Cp)。结果基于质谱分析的蛋白组学显示,19种急性时相反应蛋白在强直性脊柱炎外周血单个核细胞中蛋白表达水平明显升高(P<0.05),主要包括补体C3、纤粘蛋白(FN1)、血浆酶原(PLG)、转铁蛋白(TF)、Hp和Cp;Western blot检测Hp和Cp的表达水平与相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测结果具有相同的变化趋势。结论急性时相反应蛋白差异表达可能参与了强直性脊柱炎的发生、发展,有望作为强直性脊柱炎的临床生物标记物。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 外周血单个核细胞 急性时候反应蛋白 差异表达 相对和绝对定量的等量异位标签技术
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基于iTRAQ技术的黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉差异蛋白的研究 被引量:4
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作者 马晓聪 郑景辉 +3 位作者 赵媚 蔡涛 黄婕 岳桂华 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第9期2109-2112,2311,共5页
目的:基于iTRAQ技术分析黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用蛋白,对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析,探讨黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用机制。方法:大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,分别给予相应干预后取大鼠的... 目的:基于iTRAQ技术分析黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用蛋白,对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析,探讨黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用机制。方法:大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,分别给予相应干预后取大鼠的主动脉组织。通过iTRAQ方法分析得到差异蛋白,将相关的差异蛋白基因通过DAVID数据库搜索结合GO数据库搜索进行功能注释和富集分析,采用KEGG数据库进行信号转导通路分析,STRING数据库进行蛋白质相互作用分析。结果:共鉴定出56种差异蛋白,生物信息学分析发现,差异蛋白主要参与了26种生物学过程、20种细胞组分、15种分子途径,差异蛋白参与4条信号转导通路,差异蛋白基因的功能主要包括ATP能量代谢、氧气转运、线粒体质子转运ATP合酶,差异蛋白主要富集在氧化磷酸化信号通路上。结论:黄连解毒汤可能通过上调ATP合酶基因蛋白Q6PDU7,P19511,D3ZAF6促进线粒体氧化磷酸化功能达到保护血管的作用。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 自发性高血压大鼠 主动脉 同位素相对和绝对定量 生物信息学
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特发性弱精子症精浆蛋白差异表达研究 被引量:4
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作者 王轶 刘博深 +3 位作者 傅丰文 张昊昱 靳风烁 孙中义 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期823-829,835,共8页
目的探讨精浆蛋白在成年男性特发性弱精子症中的差异表达情况。方法纳入2017年1-5月我院泌尿外科门诊特发性弱精子症患者15例作为试验组,年龄24~47岁。同时,纳入精液正常成年男性15例作为对照组,年龄21~44岁。用等重同位素多标签相对定... 目的探讨精浆蛋白在成年男性特发性弱精子症中的差异表达情况。方法纳入2017年1-5月我院泌尿外科门诊特发性弱精子症患者15例作为试验组,年龄24~47岁。同时,纳入精液正常成年男性15例作为对照组,年龄21~44岁。用等重同位素多标签相对定量蛋白质组学(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)的方法研究成年男性正常精浆蛋白以及特发性弱精子症患者的精浆蛋白表达情况。结果共发现精浆中2 784个蛋白质。其中,与正常组相比,特发性弱精子症患者精浆中表达上调蛋白数为14个,精浆中表达下调蛋白数为79个(表达差异倍数>1.2倍,且P<0.05)。经斑点印迹技术验证蛋白INF2表达水平与iTRAQ结果一致。经GO(gene ontology)蛋白功能注释及富集分析,特发性弱精子症精浆中差异蛋白功能主要包括调节钙离子跨膜转运、胞浆内转运以及螯合、蝶呤钼辅因子合成及代谢、调节铜离子跨膜转运等。经KEGG蛋白通路注释及富集分析,特发性弱精子症精浆中差异蛋白主要富集于叶酸生物合成、金黄色葡萄球菌感染等通路。结论特发性弱精子症患者精浆蛋白同正常成年男性精浆蛋白存在差异,其可能是引起特发性弱精子症的原因。 展开更多
关键词 弱精子症 精浆差异蛋白质组 等重同位素标签相对定量蛋白质组学
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五指山猪和长白猪背最长肌蛋白组学研究 被引量:2
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作者 孙瑞萍 陈婷 +7 位作者 王峰 晁哲 刘海隆 刘圈炜 黄丽丽 邢漫萍 郑心力 魏立民 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期562-570,共9页
为比较五指山猪和长白猪生长后期肌肉生长发育的差异,以6、8月龄五指山猪和长白猪为试验对象,采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对其背最长肌总蛋白进行鉴定,结合生物信息学技术筛选品种间和品种内差异蛋白,并对其进行KEGG通路... 为比较五指山猪和长白猪生长后期肌肉生长发育的差异,以6、8月龄五指山猪和长白猪为试验对象,采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对其背最长肌总蛋白进行鉴定,结合生物信息学技术筛选品种间和品种内差异蛋白,并对其进行KEGG通路富集分析。结果表明:4组样品中共鉴定到1713个蛋白;五指山猪和长白猪品种间比较,6、8月龄猪中分别有460、337个差异的蛋白;品种内2个生长阶段比较,五指山猪和长白猪中分别有421、275个差异蛋白;2种比较均为上调的差异蛋白数多于下调差异蛋白数;KEGG通路分析发现,在五指山猪和长白猪品种间,6、8月龄在2个品种间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为34、33个,在品种内,五指山猪和长白猪在2个生长阶段间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为24、14个;在品种内发现了调控骨骼肌分化过程中发挥着重要作用的PI3K/AKT信号通路和影响脂肪沉积的PPAR信号通路,在品种间除了这2种外,还发现有肌纤维类型发育相关的糖酵解/糖异生信号通路;品种内2个比较组在PPAR和PI3K/AKT信号通路分别有10、9个共同表达的基因,品种间2个比较组在糖酵解/糖异生、PI3K/AKT和PPAR信号通路分别有10、13、9个共同表达的基因,对这些信号通路中共同表达的基因进行分析后筛选到一些与肌肉生长发育和脂肪代谢相关的关键基因。 展开更多
关键词 五指山猪 长白猪 背最长肌 蛋白组学 同位素标记相对和绝对定量技术 信号通路 脂肪沉积
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iTRAQ联用串联质谱鉴定食管鳞状细胞癌差异表达蛋白质及蛋白质相互作用网络 被引量:3
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作者 赵云岗 张天 +9 位作者 谷娟 王广超 向慧妮 刘瑞敏 晁玮霞 贾彩云 韩大正 杨文义 马远方 齐义军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期85-92,共8页
基于质谱的蛋白质组学结果不仅具有重复性差和覆盖率低等缺陷,并且针对数十至百个差异表达蛋白质分子的分析非常具有挑战性,而蛋白质与蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPIN)分析能够在一定程度上弥补上述不足... 基于质谱的蛋白质组学结果不仅具有重复性差和覆盖率低等缺陷,并且针对数十至百个差异表达蛋白质分子的分析非常具有挑战性,而蛋白质与蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPIN)分析能够在一定程度上弥补上述不足,使各种组学研究结果具有一致性和可比性。本研究应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)联用串联质谱技术鉴定了与食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)相关的差异表达蛋白质244个(ESCC中,升高和降低的蛋白质分别为119个和125个),基因本体论(gene ontology,GO)富集与肿瘤十大特征相关的17个GO条目;以该17个条目包含的117个蛋白质为种子蛋白搜索STRING(http://www.string-db.org)数据库,构建包含96个存在相互作用的PPIN和21个离散蛋白质。用Cyto Hubba算法确定34个中心节点蛋白质和36个瓶颈蛋白质,非重复49个中心节点和/或瓶颈蛋白质中含7个目前已报道的癌基因表达蛋白(PPP2R1A、CTNNB1、ENO1、EZR、TPM4、COL1A1、TPM3),确定与该7个癌蛋白直接相互作用的4个蛋白质(FN1、ITGB1、TAGLN和YWHAZ)可能为参与食管癌变的关键蛋白质,并应用Western印迹实验验证了FN1、ITGB1、TAGLN和YWHAZ等4个关键蛋白质在ESCC中具有显著的表达差异,表明PPIN分析是确定具有重要生物学意义分子的有效途经之一。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 蛋白质-蛋白质相互作用网络 中心节点蛋白质 瓶颈蛋白质
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