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3种植物精油对UVA诱导的人皮肤成纤维细胞损伤的修复作用
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作者 刘一丹 王文翠 +3 位作者 李玉红 魏国栋 刘焕燕 马莉 《精细化工》 北大核心 2025年第8期1787-1796,共10页
采用气质联用仪检测了永久花精油、古巴香脂精油和依兰依兰精油的主要成分,通过CCK-8法测定其作用于人皮肤成纤维细胞(HSF)的安全质量浓度,基于UVA诱导的HSF损伤模型,从细胞氧化应激反应、蛋白损伤和炎症反应三方面考察了3种精油对损伤... 采用气质联用仪检测了永久花精油、古巴香脂精油和依兰依兰精油的主要成分,通过CCK-8法测定其作用于人皮肤成纤维细胞(HSF)的安全质量浓度,基于UVA诱导的HSF损伤模型,从细胞氧化应激反应、蛋白损伤和炎症反应三方面考察了3种精油对损伤细胞的修复作用。结果表明,永久花精油、古巴香脂精油、依兰依兰精油分别检测出54、32、46种成分,主要为烯烃类化合物,其作用于HSF的最高安全质量浓度分别为400、175和300 mg/L。3种精油均可以降低HSF中丙二醛的浓度,在照射前加入低质量浓度(0.1 mg/L)的依兰依兰精油的作用效果最佳,抑制率可达20.15%;3种精油均可以提高HSF中超氧化物歧化酶(SOD)的质量浓度,在照射后加入低质量浓度(0.1 mg/L)古巴香脂精油的促进率高达118.09%;3种精油均可以提高HSF中Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的质量浓度,在照射前加入低质量(1 mg/L)永久花精油的促进率高达137.10%;3种精油均可以降低HSF中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、前列腺素(PGE2)、白细胞介素-1(IL-1)的质量浓度,在照射后加入低质量浓度精油效果最佳,其中,质量浓度0.1 mg/L的依兰依兰精油和古巴香脂精油对MMP-1和PGE2的抑制率分别高达50.67%和57.60%,质量浓度1 mg/L的永久花精油对IL-1抑制率高达39.97%。 展开更多
关键词 永久花精油 古巴香脂精油 依兰依兰精油 紫外线A 皮肤成纤维细胞 氧化应激 日化原料
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氧化三甲胺对皮肤成纤维细胞氧化损伤作用的影响及VC对其干预作用 被引量:1
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作者 孙斌 肖瀛 +4 位作者 俞苓 许豪杰 潘亮 周一鸣 刘小杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第11期152-162,共11页
本实验利用氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)处理人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF),通过分析抗氧化性指标、炎症因子分泌水平、细胞胶原蛋白和基质金属蛋白酶水平以及相关基因在mRNA水平的变化规律,研究TMAO对HSF细... 本实验利用氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)处理人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF),通过分析抗氧化性指标、炎症因子分泌水平、细胞胶原蛋白和基质金属蛋白酶水平以及相关基因在mRNA水平的变化规律,研究TMAO对HSF细胞氧化损伤的影响,阐释其对皮肤细胞衰老的作用。结果表明,TMAO处理能够显著升高HSF细胞内活性氧和丙二醛水平(P<0.05),并显著降低还原型谷胱甘肽含量、超氧化物歧化酶活力和总抗氧化能力(P<0.05)。通过逆转录实时荧光定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附检测发现,TMAO处理能显著升高炎症因子肿瘤坏死因子-α、白介素-6、基质金属蛋白酶-1的mRNA水平,并降低胶原合成基因和诱导型一氧化氮氧合酶的mRNA转录水平,同时蛋白质免疫印迹分析结果表明p-p65蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。而VC能够干预TMAO诱导的HSF细胞氧化应激,减轻炎症和减少胶原流失。综上,TMAO对HSF细胞产生氧化应激,可能介导激活核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路,促进HSF细胞NF-κB磷酸化,诱导炎症反应,并降低胶原合成和加速胶原降解,从而可能促进皮肤细胞衰老。 展开更多
关键词 氧化三甲胺 皮肤成纤维细胞 炎症因子 氧化损伤 细胞凋亡 VC
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基于光损伤皮肤成纤维细胞模型的鱼胶原蛋白肽修复性能研究
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作者 蒲春宏 王荣昌 +2 位作者 华中杰 张佳婵 陈朝 《日用化学工业(中英文)》 CAS 北大核心 2024年第11期1375-1381,共7页
鱼胶原蛋白肽(Fish collagen peptides,FCPs)是一类具备多种活性功能的多肽混合物。近几年研究表明,口服鱼胶原蛋白肽能够安全高效地作用于皮肤,发挥抗氧化、抑制黑色素形成、延缓衰老和抗光老化等功效。然而,现有鱼胶原蛋白肽的体外功... 鱼胶原蛋白肽(Fish collagen peptides,FCPs)是一类具备多种活性功能的多肽混合物。近几年研究表明,口服鱼胶原蛋白肽能够安全高效地作用于皮肤,发挥抗氧化、抑制黑色素形成、延缓衰老和抗光老化等功效。然而,现有鱼胶原蛋白肽的体外功效研究较少。该研究利用人皮肤成纤维细胞建立UVA诱导的光损伤模型,从细胞形态和细胞存活率两个方面研究鱼胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞增殖能力的影响。通过测定鱼胶原蛋白肽处理细胞后,其中透明质酸、Ⅰ型胶原、弹性蛋白含量以及总抗氧化能力的变化来研究其抗氧化功效。另外对比分析细胞形态、细胞活力和关键代谢产物等的具体变化来研究鱼胶原蛋白肽对UVA诱导的光损伤细胞的修复作用。该研究为鱼胶原蛋白肽在皮肤光损伤修复领域提供了理论依据,为新型功能食品和胶原蛋白产品的开发与应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鱼胶原蛋白肽 光损伤 皮肤成纤维细胞 修复 抗氧化
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羧甲基壳聚糖膜对皮肤成纤维细胞相容性研究 被引量:24
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作者 郑立 陈西广 +2 位作者 刘万顺 韩笑天 严小军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期314-320,共7页
通过玻璃流延法制备不同分子质量的壳聚糖及羧甲基壳聚糖膜 ,以体外培养的人皮肤成纤维细胞作为对象 ,利用膜的浸渍液培养及膜表面直接培养法研究比较了两种多糖膜的细胞相容性 .实验发现两种多糖膜的浸渍液对细胞均无毒性效应 ,生物安... 通过玻璃流延法制备不同分子质量的壳聚糖及羧甲基壳聚糖膜 ,以体外培养的人皮肤成纤维细胞作为对象 ,利用膜的浸渍液培养及膜表面直接培养法研究比较了两种多糖膜的细胞相容性 .实验发现两种多糖膜的浸渍液对细胞均无毒性效应 ,生物安全性是小分子质量膜好于大分子质量膜 ,羧甲基壳聚糖膜好于壳聚糖膜 .皮肤成纤维细胞在壳聚糖膜上的生长受到抑制 ,生长一段时间后细胞有聚集和脱落现象 ,而羧甲基壳聚糖膜上细胞能很好地贴附、生长 ,没有聚集和脱落现象 . 展开更多
关键词 羧甲基壳聚糖 皮肤成纤维细胞 相容性 壳聚糖
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检测皮肤成纤维细胞cDNA确定Alport综合征COL4A5基因突变 被引量:19
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作者 王芳 丁洁 +1 位作者 俞礼霞 杨霁云 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期219-224,共6页
目的 :检测、分析Alport患者Ⅳ型胶原α5链mRNA及其序列 ,试图建立一种简单、快捷的检测COL4A5基因突变的方法 ,同时明确基因突变对COL4A5基因转录的影响。方法 :取 2 1例X连锁显性遗传型Alport综合征患者和 2例对照的皮肤标本培养后提... 目的 :检测、分析Alport患者Ⅳ型胶原α5链mRNA及其序列 ,试图建立一种简单、快捷的检测COL4A5基因突变的方法 ,同时明确基因突变对COL4A5基因转录的影响。方法 :取 2 1例X连锁显性遗传型Alport综合征患者和 2例对照的皮肤标本培养后提取成纤维细胞总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和直接测序的方法分析Ⅳ型胶原α5链mRNA。对于cDNA序列异常者 ,进而应用PCR和直接测序的方法分析COL4A5基因。结果 :成功进行了原代、传代皮肤成纤维细胞的培养并提取了总RNA ;直接测序揭示对照组Ⅳ型胶原α5链mRNA序列及已检测的 8例患者Ⅳ型胶原α5链 3′端mRNA序列与所发表的序列完全一致 ;通过RT PCR和直接测序发现了 4例新突变 ,并与从基因组DNA样本中检测到的突变相一致。结论 :通过分析皮肤成纤维细胞中Ⅳ型胶原α5链mRNA序列 ,可用以检测Alport综合征患者COL4A5基因突变 ,且本文报道的 4例突变均为新突变 ; 展开更多
关键词 皮肤成纤维细胞 CDNA ALPORT综合征 COL4A5 基因突变 遗传性肾炎
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麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养与核型分析 被引量:8
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作者 赵雪萍 张寒莹 +4 位作者 王子玉 许丹 孙永成 王锋 丁玉华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期67-71,共5页
为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3~4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞... 为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3~4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麇鹿染色体数目为2n=68,核型式为2(M)+64(A),XY(A,M);含10%NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87.78%的贴壁率。 展开更多
关键词 麋鹿 皮肤成纤维细胞 体外培养 核型分析 冷冻保存
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壳聚糖膜的制备及其对人、大鼠皮肤成纤维细胞的相容性 被引量:9
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作者 马建标 王红军 +1 位作者 何炳林 陈家童 《天津工业大学学报》 CAS 2001年第1期1-5,共5页
为考察壳聚糖对皮肤成纤维细胞的相容性 ,采用流延法制备了纯壳聚糖膜和含甘油的壳聚糖膜 ,并在所制备的壳聚糖膜上进行了大鼠皮肤成纤维细胞和人胎儿皮肤成纤维细胞的体外培养 .结果表明 ,壳聚糖膜在培养开始阶段会导致部分贴附细胞的... 为考察壳聚糖对皮肤成纤维细胞的相容性 ,采用流延法制备了纯壳聚糖膜和含甘油的壳聚糖膜 ,并在所制备的壳聚糖膜上进行了大鼠皮肤成纤维细胞和人胎儿皮肤成纤维细胞的体外培养 .结果表明 ,壳聚糖膜在培养开始阶段会导致部分贴附细胞的破坏 ,而进一步培养会促进这些细胞的生长和增殖 .当细胞长满膜表面发生互相接触时 ,细胞产生接触抑制现象 ,不再继续增殖 .研究还发现 ,不论在标准培养板上还是在不同的壳聚糖膜上 。 展开更多
关键词 壳聚糖膜 皮肤成纤维细胞 细胞培养 相容性 皮肤损伤 植皮
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红外线影响人皮肤成纤维细胞中c-Jun、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达 被引量:7
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作者 刘平 杨荣丽 +4 位作者 苏慧 李林丽 宋健文 卢宁 刘钰泽 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期163-169,共7页
目的研究红外线对体外培养成纤维细胞(HSF)中c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,为红外线引起光老化损伤的分子机制提供理论依据。方法提取原代皮肤成纤维细胞培养,成纤维细胞被分为对照组(无红外线照射)和实验组(红外线照射);用MTT检测各... 目的研究红外线对体外培养成纤维细胞(HSF)中c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,为红外线引起光老化损伤的分子机制提供理论依据。方法提取原代皮肤成纤维细胞培养,成纤维细胞被分为对照组(无红外线照射)和实验组(红外线照射);用MTT检测各组细胞活性;用实时定量PCR和免疫细胞化学(ICC)方法检测各组c-Jun和Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达。结果MTT检测显示与对照组比较,实验组各组中红外线照射对HSF的增殖有不同程度的抑制作用;红外线照射下调Ⅰ型胶原m RNA和蛋白的表达,随着照射剂量的增加,Ⅰ型胶原的m RNA和蛋白表达下降越明显(P<0.01);红外线照射成纤维细胞12 h后Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达都呈照射剂量依赖性下调(P<0.05,P<0.01),24 h后Ⅲ型胶原m RNA和蛋白的表达都呈照射剂量依赖性上调(P<0.05,P<0.01);红外线照射上调了c-Jun m RNA和蛋白的表达水平,随着照射剂量的增加,呈照射剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论红外线照射人皮肤成纤维细胞后上调c-Jun表达,抑制Ⅰ型胶原表达,干扰Ⅲ型胶原表达,这可能是其引发和促进皮肤光老化的发生机制之一。 展开更多
关键词 红外线 C-JUN Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 皮肤成纤维细胞
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黑果腺肋花楸花色苷对人皮肤成纤维细胞紫外辐射损伤的保护作用 被引量:16
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作者 张永祥 国石磊 +2 位作者 彭利沙 朱凤妹 李军 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1088-1092,共5页
为了探讨黑果腺肋花楸花色苷对紫外辐射所致人皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护作用,将体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、辐射组和辐射给药组。采用MTT法检测不同浓度花色苷添加量对细胞增殖的保护作用,以选择最优添加浓度。采用化... 为了探讨黑果腺肋花楸花色苷对紫外辐射所致人皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护作用,将体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、辐射组和辐射给药组。采用MTT法检测不同浓度花色苷添加量对细胞增殖的保护作用,以选择最优添加浓度。采用化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,ELISA法检测细胞MMP-1分泌水平。结果表明:UVA辐照剂量为10 J/cm2条件下,与辐射组相比,MTT法显示花色苷添加组浓度为125μg/m L对损伤细胞增殖保护作用有极显著的提高(P<0.01),同时,125μg/m L花色苷添加组能够显著降低辐射损伤后细胞ROS含量以及MMP-1分泌水平(P<0.01)。由此可见,适宜浓度的黑果腺肋花楸花色苷能够降低细胞ROS含量及MMP-1分泌水平,从而对辐射损的细胞起到一定的保护作用。 展开更多
关键词 黑果腺肋花楸花色苷 皮肤成纤维细胞 辐射损伤 细胞内活性氧
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人皮肤成纤维细胞中α1(Ⅰ)前胶原基因转录调控研究 被引量:5
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作者 高春芳 王皓 +2 位作者 徐玲玲 赵文静 孔宪涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期293-298,共6页
为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不... 为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性 .凝胶滞留实验 (EM SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白 .基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞 ,探讨前胶原基因激活阻断的新手段 .结果表明 ,- 2 4 83~ + 4 2bp、 - 2 6 8~ + 4 2bp序列具有强启动调控活性 ,而 - 10 5~ + 4 2bp片段启动活性最低 .EMSA对高启动活性小片段DNA结合蛋白的分析提示 ,- 2 6 8~ + 4 2bp序列中存在转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1的特异结合位点 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 1至靶细胞可竞争性阻断胶原基因启动转录激活 .研究提示 ,人α1(Ⅰ )前胶原基因 - 2 4 83~ + 4 2bp、 - 2 6 8~ + 4 2bp片段有高启动活性 .转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1与 - 2 6 8~ + 4 2bp序列中相应识别序列的结合与其基础高转录活性有关 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 展开更多
关键词 皮肤成纤维细胞 α1(Ⅰ)前胶原 基因转录 调控 启动子 转录因子 纤维 炎症性损伤
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神经肽P物质诱导高糖条件下人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的分子机制 被引量:6
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作者 贾志刚 方勇 +4 位作者 姚敏 俞为荣 徐鹏 贾一韬 倪涛 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1302-1306,共5页
目的探讨神经肽P物质(SP)诱导高糖培养环境中的人皮肤成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的分子机制。方法采用高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞,加入同一浓度(10 nmol/L)SP孵育不同时间,Western blotting检测细胞中核因子κB(... 目的探讨神经肽P物质(SP)诱导高糖培养环境中的人皮肤成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的分子机制。方法采用高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞,加入同一浓度(10 nmol/L)SP孵育不同时间,Western blotting检测细胞中核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)和磷酸化NF-κB亚单位p65(p-NF-κBp65)的表达,免疫荧光方法观测细胞p-NF-κBp65表达和转位情况。将高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、SP组和SP+NF-κB抑制剂(MG132)组(以MG132预处理细胞60 min),Western blotting检测各组细胞内p-NF-κBp65的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液中MCP-1的浓度。结果随着SP作用时间的延长,成纤维细胞IκBα的表达量显著减少,p-IκBα的表达量显著增加(P<0.05);同时p-NF-κBp65的表达量在SP作用后显著增加(P<0.05),并保持递增趋势;免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察证实SP作用后细胞胞核内p-NF-κBp65表达增强。与SP组比较,SP+MG132组细胞p-NF-κBp65表达及细胞培养上清液中MCP-1浓度均显著降低(P<0.05)。结论 SP促进人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的作用机制可能与NF-κB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 P物质 皮肤成纤维细胞 核因子κB 单核细胞趋化蛋白1
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高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响 被引量:6
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作者 张再超 叶希韵 +1 位作者 刘霞 翁宇静 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期323-326,共4页
目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1~3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细... 目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1~3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2)mRNA的表达。以加入含25mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组。结果随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05)。结论高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少。 展开更多
关键词 皮肤成纤维细胞 高糖 RT-PCR Ⅰ型胶原蛋白 Ⅲ型胶原蛋白 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制酶
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二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞中生长因子mRNA表达的比较研究 被引量:3
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作者 刘志国 李刚 +2 位作者 刘旺 肖仕初 夏照帆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期399-401,共3页
探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测... 探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测两种培养系统中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果显示 ,虽然二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞形态不同 ,但二维和三维培养的成纤维细胞均有VEGF/bFGF设计大小的条带显示 ,且两者条带相对灰度无明显差异。 展开更多
关键词 二维 三维 培养 皮肤成纤维细胞 生长因子 MRNA 表达 比较研究
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东方田鼠皮肤成纤维细胞的分离培养及生物学特性 被引量:10
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作者 成钢 王文彬 +3 位作者 王京仁 李淑红 王兴平 罗仍卓么 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第3期78-80,98,共4页
目的探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3 d和5 d的东方田鼠乳... 目的探索和建立东方田鼠皮肤成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。方法采用含10%小牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)和1640两种培养体系,运用组织块贴壁法和胰酶消化法,分别对出生后1、3 d和5 d的东方田鼠乳鼠皮肤成纤维细胞进行原代分离、培养。苏木素-伊红染色及倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态和生长特性。结果 0.25%胰酶消化分离出生后1 d和3 d东方田鼠乳鼠皮肤较出生后5 d组织可获得较多数量细胞,成纤维细胞在体外快速贴壁生长,一般6~7 d长满培养瓶,细胞纯度高,HE染色细胞呈长梭形,胞核明显;DMEM和1640两种培养液均可用于东方田鼠皮肤成纤维细胞的培养,但细胞传代后生长趋缓,只可传代2~3次。本实验运用组织块贴壁法未能培养出皮肤成纤维细胞。结论确定了有效分离东方田鼠皮肤成纤维细胞的日龄和方法,为进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。 展开更多
关键词 东方田鼠 皮肤成纤维细胞 生物学特性
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皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织 被引量:5
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作者 张艳青 张文杰 +4 位作者 胡晓洁 周广东 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期156-160,共5页
目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收... 目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收生物材料聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,体外培养1周后,移植于猪的角膜基质层内,于第8周取材进行大体、组织学检查及超微结构观察。以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照。结果术后8周,实验组角膜逐渐恢复透明,与对照组角膜无明显差别。组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织,呈板层状,排列较规则,与对照组角膜组织相似。超微结构观察及胶原纤维直径检测显示,实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义。荧光显微镜观察到GFP阳性细胞存在。结论皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞,在猪角膜内构建角膜基质样组织。 展开更多
关键词 组织工程 角膜基质 皮肤成纤维细胞
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UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立 被引量:5
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作者 侯巍 郑跃 +3 位作者 许庆芳 刘晨 陆春 赖维 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期703-706,共4页
目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察... 目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm^2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm^2时,细胞存活率保持在>85%;而UVA剂量≥15J/cm^2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm^2时存活率为50%左右,至25 J/cm^2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率>95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。 展开更多
关键词 光老化 急性光损伤 皮肤成纤维细胞
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桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞MMP-1和TIMP-1表达的影响 被引量:6
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作者 陈巧云 王业秋 +1 位作者 陈景华 张宁 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1602-1606,共5页
目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细... 目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细胞活力,分别检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA水平。RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平。酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果 UVA照射ESF-1细胞后,其细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低、MDA水平升高,ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达水平升高,TIMP-1 mRNA的表达水平降低、MMP-1水平升高、TIMP-1水平降低(P<0.01);1×10-5mol/L和1×10-6mol/L桃叶珊瑚苷能够显著改善ESF-1细胞的光损伤(P<0.05或P<0.01)。结论桃叶珊瑚苷能调节光老化ESF-1细胞MMP-1和TIMP-1的表达,减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。 展开更多
关键词 桃叶珊瑚苷 皮肤成纤维细胞 基质金属蛋白酶-1 基质金属蛋白酶抑制剂-1
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SP600125抑制UVA激活皮肤成纤维细胞JNK通路的最佳浓度 被引量:3
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作者 许庆芳 侯巍 +4 位作者 郑跃 刘晨 龚子鉴 陆春 赖维 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期194-199,共6页
【目的】研究抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞JNK通路的最佳SP600125浓度,为研究JNK信号通路在光老化中的作用机制奠定基础。【方法】原代培养取自儿童包皮的皮肤成纤维细胞。用CCK-8法结合荧光倒置显微镜研究不同剂量UVA和不同浓度SP60012... 【目的】研究抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞JNK通路的最佳SP600125浓度,为研究JNK信号通路在光老化中的作用机制奠定基础。【方法】原代培养取自儿童包皮的皮肤成纤维细胞。用CCK-8法结合荧光倒置显微镜研究不同剂量UVA和不同浓度SP600125及两者联合对皮肤成纤维细胞活性和形态的影响,以选择非细胞毒性的UVA剂量和SP600125浓度。再用Western-blot检测UVA辐照后不同时间点皮肤成纤维细胞中磷酸化c-Jun(P-c-Jun)表达以确定其被诱导表达的时间点。最后用Western-blot检测不同浓度SP600125对UVA上调的P-c-Jun表达的抑制。【结果】UVA和SP600125分别辐照细胞和孵育细胞时,UVA≤10 J/cm2和SP600125≤2μmol/L均能保持细胞活性在90%以上。10 J/cm2的UVA辐照不同浓度SP600125孵育的细胞时,≤800 nmol/L的SP600125孵育的细胞活性在90%以上;1μmol/L的SP600125使细胞活性明显下降至67.1%,镜下见部分细胞皱缩、碎裂、死亡;2μmol/L的SP600125使细胞活性进一步下降至7.6%,镜下见绝大部分细胞变形、碎裂、死亡。Western-blot结果显示P-c-Jun在UVA辐照后0.75 h、1.5 h均较0 h升高,3 h后恢复至0 h水平。200~800 nmol/L SP600125呈剂量依赖性地抑制UVA上调的P-c-Jun表达,差异有统计学意义。【结论】低于常用浓度的200~800 nmol/L SP600125即可抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞的JNK通路。JNK通路可能在UVA辐照的皮肤成纤维细胞中起抗凋亡作用。 展开更多
关键词 SP600125 c-Jun氨基末端激酶通路 UVA 皮肤成纤维细胞 光老化
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不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤成纤维细胞冻存效果的影响 被引量:3
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作者 肖雄 邓玉金 +2 位作者 赵海龙 吴有博 李跃民 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期69-74,共6页
通过比较不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻-解冻复苏后细胞存活率、48h贴壁率和细胞生长曲线的影响,筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存方法和冷冻保护剂。结果表明,以100mL/L二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保... 通过比较不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻-解冻复苏后细胞存活率、48h贴壁率和细胞生长曲线的影响,筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存方法和冷冻保护剂。结果表明,以100mL/L二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂进行小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存时,方法3处理组解冻复苏后细胞存活率和培养48h细胞贴壁率均高于方法2处理组(P>0.05),并分别极显著高于方法1和方法4。采用方法3进行冷冻保存时,以100mL/L DMSO作为冷冻剂的细胞贴壁率显著高于100mL/L甘油(GL)组(P<0.05),且冷冻解冻后的细胞呈现正常的分裂增殖生长模式。因此,宜选择100mL/L胎牛血清(FBS)+100mL/L DMSO+DMEM作为冷冻保护液,采用方法3进行小鼠耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存。 展开更多
关键词 冷冻保存 解冻 皮肤成纤维细胞 小鼠
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肝豆状核变性患者离体皮肤成纤维细胞系的建立和生物学鉴定 被引量:3
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作者 张影如 梁秀龄 +1 位作者 刘焯霖 陈嵘 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 1993年第1期31-34,共4页
肝豆状核变性(WD)的离体培养皮肤成纤维细胞模型可用于WD铜代谢的进一步研究,并有可能提供WD患者早期诊断的有效方法。作者建立了WD患者和对照组各5例的离体培养皮肤成纤维细胞系,并进行了各细胞系在不同代数培养时胞浆内铜含量的测定,... 肝豆状核变性(WD)的离体培养皮肤成纤维细胞模型可用于WD铜代谢的进一步研究,并有可能提供WD患者早期诊断的有效方法。作者建立了WD患者和对照组各5例的离体培养皮肤成纤维细胞系,并进行了各细胞系在不同代数培养时胞浆内铜含量的测定,为进一步研究该模型打下基础。 展开更多
关键词 患者 WD 离体皮肤 肝豆状核变性 皮肤成纤维细胞 胞浆 铜代谢 生物学鉴定 离体培养 细胞
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