地高辛标记核酸探针检测重组人白细胞介素1受体颉颃剂中DNA残余量的研究

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作者 王超 刘庚 张林波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期54-58,共5页

试验旨在建立重组人白细胞介素1受体颉颃剂(interleukin-1receptor antagonist,IL-1ra)原液中宿主菌DNA残余量的检测方法。以重组白细胞介素1受体颉颃剂工程菌基因组DNA为模板,优化试验条件,借助超声波手段,制备地高辛标记的核酸探针,... 试验旨在建立重组人白细胞介素1受体颉颃剂(interleukin-1receptor antagonist,IL-1ra)原液中宿主菌DNA残余量的检测方法。以重组白细胞介素1受体颉颃剂工程菌基因组DNA为模板,优化试验条件,借助超声波手段,制备地高辛标记的核酸探针,并以此探针进行狭缝杂交及显色反应。结果显示,在24批次重组人IL-1ra原液中,每人份使用剂量的宿主DNA残余量均小于10ng。结果表明,该方法灵敏度较高、特异性较强、重复性较好、操作步骤安全且较为方便,可用于重组人IL-1ra原液及半成品的DNA残余检测。 展开更多

关键词 DNA残余量 地高辛 重组人白细胞介素1受体颉颃剂 狭缝杂交

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白细胞介素1受体颉颃剂抑制脂多糖促奶牛外周血单个核细胞氧化应激损伤作用的研究

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作者 郭咏梅 齐敬宇 +2 位作者 闫素梅 赵艳丽 郭晓宇 《饲料工业》 CAS 2024年第4期100-105,共6页

试验以脂多糖(LPS)为刺激源,以细胞活力、抗氧化指标和炎症因子为判断指标,探讨白细胞介素1受体颉颃剂(IL-1Ra)通过抑制白细胞介素1β(IL-1β)的活性,对LPS诱导外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)氧化损伤的... 试验以脂多糖(LPS)为刺激源,以细胞活力、抗氧化指标和炎症因子为判断指标,探讨白细胞介素1受体颉颃剂(IL-1Ra)通过抑制白细胞介素1β(IL-1β)的活性,对LPS诱导外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)氧化损伤的缓解作用。试验采用单因子完全随机设计,PBMCs被随机分为7个组(每组6个重复),分别给予不同的处理:第1组是阴性对照组(Neg组),完全培养基培养30 h;第2组损伤组(Dam组),是在完全培养基中培养6 h后,再经10μg/mL的LPS工作液培养24 h;第3至7组(R0.25、R0.5、R1、R5组和R10组)细胞分别经浓度为0.25、0.5、1、5、10 ng/mL的IL-1Ra培养6 h,接着经10μg/mL的LPS工作液培养24 h。结果表明:与Neg组相比,Dam组的细胞活力、抗氧化相关酶[包括总抗氧化能力(T-AOC)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)]的活性显著降低,丙二醛(MDA)浓度、炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、一氧化氮(NO)含量均显著升高(P≤0.05)。与Dam组相比,R1组显著逆转了氧化损伤引起的上述抗氧化活性的降低和炎症因子浓度的升高,其他IL-1Ra处理组对上述指标的逆转效果不同程度地低于R1组(P≤0.05)。上述结果说明,LPS通过诱发PBMCs产生大量IL-1β进而导致细胞氧化损伤,IL-1Ra剂量依赖性地缓解了LPS引起的氧化损伤,添加剂量以1 ng/mL为宜。 展开更多

关键词 奶牛外周血单个核细胞 氧化应激 剂量依赖性 白细胞介素1受体颉颃剂 预保护作用

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重组人白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用 被引量：1

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作者 汪庆童 张玲玲 +2 位作者 孙妩弋 吴丽 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第6期643-647,共5页

目的研究重组人白细胞介素1受体拮抗剂(RhIL-1Ra)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的影响,探讨部分机制。方法将SD大鼠随机分为6组:正常组、AA组、AA+RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid,sc)和AA+anakinra组。弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,检测... 目的研究重组人白细胞介素1受体拮抗剂(RhIL-1Ra)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的影响,探讨部分机制。方法将SD大鼠随机分为6组:正常组、AA组、AA+RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid,sc)和AA+anakinra组。弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,检测体重、足爪肿胀度、多发性关节炎指数、T、B细胞增殖度、腹腔巨噬细胞产生的IL-1、TNF-α和PGE2水平及关节滑膜的病理学改变。结果RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)改善了AA大鼠踝关节的炎性肿胀和病理学改变,RhIL-1Ra(40mg/kg,tid×7d)显著提高了ConA诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)抑制了LPS诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra使AA大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1、TNF-α和PGE2减少。结论RhIL-1Ra对AA大鼠有治疗作用,影响腹腔巨噬细胞功能和T、B淋巴细胞可能是其发挥作用的部分机制。 展开更多

关键词 受体 白细胞介素1/拮抗剂和抑制剂 关节炎 实验性/免疫学 关节炎 实验性/药物疗法 巨噬细胞 腹膜/代谢

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中枢白细胞介素-1受体参与应激镇痛

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作者 邹长江 魏明芬 刘卉 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期512-515,共4页

目的 :观察中枢白细胞介素 1(interleukin 1,IL 1)受体在足击镇痛及条件恐惧应激刺激诱发镇痛中的作用。方法 :本实验用脑室注射 (intracerebroventricularinjection ,icv)生理盐水 (normalsaline ,NS)或白细胞介素 1受体拮抗剂 (inte... 目的 :观察中枢白细胞介素 1(interleukin 1,IL 1)受体在足击镇痛及条件恐惧应激刺激诱发镇痛中的作用。方法 :本实验用脑室注射 (intracerebroventricularinjection ,icv)生理盐水 (normalsaline ,NS)或白细胞介素 1受体拮抗剂 (interleukin 1receptorantagonist,IL 1ra)并用热辐射甩尾测痛法检查IL 1ra对足击镇痛及条件恐惧应激刺激诱发镇痛效应的影响 ;结果 :(1)icvNS的大鼠 ,足击引起痛阈上升 ;而icvIL 1ra 30min后足击不引起明显的痛阈上升 ,但icvIL 1ra 90min后足击仍出现明显的痛阈上升。(2 )icvNS的大鼠 ,条件恐惧应激刺激也引起明显的痛阈上升 ,且该条件恐惧应激刺激诱发的镇痛效应能被icvIL 1ra明显衰减。 (3)icvIL 1ra本身对基础痛阈无明显影响。结论 :中枢IL 1受体参与足击及条件恐惧应激刺激诱发的镇痛效应。 展开更多

关键词 白细胞介素-1 药理学 受体 拮抗剂 抑制剂 纳络酮 镇痛 应激 动物实验

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大鼠慢性颈髓损伤后颈髓中IL-1β的表达及其与神经细胞凋亡的关系 被引量：2

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作者 宋兴华 曹力 +6 位作者 艾尔肯 徐小雄 盛伟斌 张克远 盛军 刘大鹏 温浩 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2007年第3期222-225,F0003,共5页

目的:观察白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在慢性颈髓损伤大鼠颈脊髓中的表达及其与神经细胞凋亡的关系。方法:4月龄SD大鼠随机分为3组:A组(模型组),破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水1... 目的:观察白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在慢性颈髓损伤大鼠颈脊髓中的表达及其与神经细胞凋亡的关系。方法:4月龄SD大鼠随机分为3组:A组(模型组),破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水10μl,以后每周注射一次;B组(药物干预组),建立模型后立即腹腔注射IL-1受体阻滞剂(IL-1Ra,1mg/μl)10μl,以后每周注射一次;C组(对照组),切开颈椎后方皮肤后即缝合。分别饲养3、5个月后,腹腔麻醉取C4～C6脊髓。免疫组化法测定颈脊髓IL-1β的表达,TUNEL法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况,Western Blot及定量RT-PCR分别测定caspase-3的蛋白表达及mRNA含量。结果:相同时间点颈脊髓IL-1β的表达A、B、C三组间均有显著性差异(P<0.05),A、B组同组间不同时间点比较也有显著性差异(P<0.05)。5个月时A、B、C三组神经细胞凋亡数分别为32.38±4.75个、16.56±3.89个、1.82±0.64个,三组间比较有统计学差异(P<0.01)。颈脊髓caspase-3的蛋白表达随着时间延长表达增强,使用IL-1Ra后,其表达明显减弱(P<0.05)。caspase-3 mRNA含量(拷贝数取对数)3个月时A组为8.46±0.32,B组为8.30±0.26,C组为7.95±0.36;5个月时A组为8.92±0.85,B组为8.50±0.78;C组为8.05±0.46,相同时间点各组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论:IL-1β在大鼠慢性颈脊髓损伤的脊髓组织中有异常表达,其可能通过激活caspase-3基因参与诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 白细胞介素1Β 慢性颈脊髓损伤 白细胞介素1 受体阻滞剂 大鼠

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IL-1ra基因修饰角膜内皮细胞及其表达 被引量：4

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作者 袁进 陈家祺 +2 位作者 刘祖国 王智崇 周世有 《眼科新进展》 CAS 2006年第1期2-6,共5页

目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFPhIL1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础。方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL1rac... 目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFPhIL1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础。方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL1racDNA片断,插入PEGFPC2载体,构建真核表达质粒PEGFPhIL1ra。以阳离子聚合物为介导,对饲细胞培养下的角膜内皮细胞(cornealendothelialcells,CECs)进行体外转染。通过绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)示踪检测转染效率,蛋白免疫印迹检测外源性IL1ra基因在角膜内皮细胞内表达强度。结果以cDNA文库为模板扩增出hIL1racDNA,通过酶切、DNA测序证实PEGFPhIL1ra构建正确。20%～25%的转染角膜内皮细胞中有绿色荧光。Westernblotting检测可见转染角膜内皮细胞内有相对分子量为44000的hIL1raGFP融合蛋白表达,3d时蛋白表达水平达到峰值,并且持续至5d,7d时表达水平开始回落,9d时表达处于较低水平,对照组在观察期内均未见蛋白表达。结论阳离子聚合物介导下重组质粒PEGFPhIL1ra可对角膜内皮细胞实现有效转染并且持续表达IL1ra蛋白。 展开更多

关键词 白细胞介素-1受体桔抗剂 基因转染 角膜内皮细胞

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β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马S100β表达的作用及机制 被引量：7

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作者 杨杰 刘勇 +3 位作者 钱亦华 胡海涛 邱芬 郭世萍 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期322-325,共4页

目的　探讨 β 淀粉样蛋白 (Aβ)对S10 0 β表达的影响及作用机制。 方法　采用Aβ2 5-3 5和IL 1ra ,选择大鼠海马CA1区进行定位注射 ,通过行为学测试、刚果红染色和免疫组化技术结合图像分析的方法 ,对不同时间大鼠的学习记忆、淀粉样... 目的　探讨 β 淀粉样蛋白 (Aβ)对S10 0 β表达的影响及作用机制。 方法　采用Aβ2 5-3 5和IL 1ra ,选择大鼠海马CA1区进行定位注射 ,通过行为学测试、刚果红染色和免疫组化技术结合图像分析的方法 ,对不同时间大鼠的学习记忆、淀粉样沉积、GFAP和海马CA1区S10 0 β表达的变化进行观测。 结果　Aβ2 5-3 5注射后 ,大鼠的学习记忆能力明显下降 ;海马CA1区出现Aβ沉积 ,并有大量GFAP阳性胶质细胞包绕 ;实验组S10 0 β阳性细胞数目在 3、7、2 1d较对照组均有明显增多 ,细胞平均面积只在 2 1d才有明显增大。脑内注射IL 1ra后 3、7d,S10 0 β阳性细胞数目明显低于同组的Aβ大鼠 ,而高于对照组。结论　Aβ2 5-3 5脑内注射可建立具有类似阿尔茨海默病的局部病理改变和学习记忆损害的AD动物模型 ;Aβ2 5-3 5可上调大鼠海马CA1区S10 0 β的表达 ,实验早期以S10 0 β阳性细胞的数目增加为主 ,后期表现为细胞体积的增大 ;IL 1ra脑内注射可明显降低Aβ2 5-3 5上调S10 0 β表达的作用 ,其机制是阻断由Aβ2 5-3 5激活的小胶质细胞释放的IL 1对星形胶质细胞的活化作用。 展开更多

关键词 Β-淀粉样蛋白 S100β白细胞介素1受体拈抗剂 海马 大鼠 学习记忆

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毕赤酵母中表达HSA/IL1ra融合蛋白的产物不均一现象的研究 被引量：1

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作者 戴寿沣 沈其 +1 位作者 陈静 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第2期134-138,共5页

目的:探索HSA/IL1ra融合蛋白在毕赤酵母中表达的产物不均一现象的原因及可能的影响因素。方法:通过去糖基化和抑制糖基化实验验证不均一产物的由来,并考察了不同融合方式、不同克隆菌株、不同表达宿主对产物不均一现象的影响。结果:糖... 目的:探索HSA/IL1ra融合蛋白在毕赤酵母中表达的产物不均一现象的原因及可能的影响因素。方法:通过去糖基化和抑制糖基化实验验证不均一产物的由来,并考察了不同融合方式、不同克隆菌株、不同表达宿主对产物不均一现象的影响。结果:糖基化不均一引起产物不均一现象,且在SMD1168中没有此类现象,个别毕赤酵母GS115克隆中也没有此现象。结论:HSA/IL1ra融合蛋白在毕赤酵母中表达的产物不均一现象,是由于融合蛋白在毕赤酵母中表达时糖基化不均一引起的,且不同融合方式、不同克隆、不同宿主对该现象有影响。 展开更多

关键词 毕赤酵母 受体 白细胞介素1/拮抗剂和抑制剂 融合蛋白 白介素1-受体拮抗剂 产物不均一 糖基化

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HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究

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作者 沈其 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期260-264,共5页

目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra... 目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用。结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性。 展开更多

关键词 受体 白细胞介素1/拮抗剂和抑制剂 血清白蛋白 重组融合蛋白质类/分离和提纯 重组融合蛋白质类/生物合成 黑色素瘤

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大塚制药公司率先在世界上进行IL1β衍生物的临床试验

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作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第1期17-18,共2页

日本大塚制药公司已开始白细胞介素(IL)1β的临床试验,并宣布已进入第二阶段,该公司在日本着手临床试验估计是1988年5月开始的。这比1988年9月在美国开始临床试验的美国Immunex公司-美国Syntex公司还早,似乎是世界上首次临床试验。在日... 日本大塚制药公司已开始白细胞介素(IL)1β的临床试验,并宣布已进入第二阶段,该公司在日本着手临床试验估计是1988年5月开始的。这比1988年9月在美国开始临床试验的美国Immunex公司-美国Syntex公司还早,似乎是世界上首次临床试验。在日本,大日本制药公司曾决定1989年1月开始IL1α的临床试验,但目前看来已稍推迟(参阅本刊1988年12月5日号)。 IL1有α和β两种分子型。二者能与同一受体结合,所以作用几乎相同。 展开更多

关键词 临床试验 IL1 制药公司 受体结合 白细胞介素 入第 白血球减少症 抗癌剂 内科教授 抗癌效果

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甲状腺激素T_3减轻小鼠再灌注肾脏炎症反应 被引量：2

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作者 王盼梁 何康 +1 位作者 张明 张建军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期364-367,共4页

目的观察甲状腺激素T3预处理对小鼠缺血-再灌注(IR)肾脏白介素-10(IL-10)、内源性白介素-1受体阻滞剂(IL-1Ra)表达的调控及其对中性粒细胞浸润的影响,探讨T3对IR肾脏的保护作用及可能的机制。方法120只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=30)... 目的观察甲状腺激素T3预处理对小鼠缺血-再灌注(IR)肾脏白介素-10(IL-10)、内源性白介素-1受体阻滞剂(IL-1Ra)表达的调控及其对中性粒细胞浸润的影响,探讨T3对IR肾脏的保护作用及可能的机制。方法120只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=30):正常对照组(假手术)、单纯IR组(仅行肾脏IR)、T3+IR组(肾脏IR前48 h行T3预处理)、NaOH+IR组(肾脏IR前48 h注射等量0.1 mol/L NaOH),建立肾脏IR模型。各组于再灌注后24 h取血标本进行肾功能检测(肌酐、尿素氮);取肾脏标本采用PAS染色评估肾脏组织形态学改变,髓过氧化物酶(MPO)染色评估中性粒细胞浸润情况;real-time PCR检测肾脏再灌注后1、3、6、12、24、48 h的IL-10、IL-1Ra mRNA的表达。结果再灌注后24 h T3+IR组血肌酐、尿素氮水平较单纯IR组降低(P<0.05)、肾脏损伤程度轻(P<0.05);MPO染色示T3+IR组中性粒细胞浸润较单纯IR组明显减少(P<0.05)。再灌注后12 h,T3+IR组IL-10、IL-1Ra mRNA表达高于单纯IR组,并持续至再灌注后48h,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯IR组和NaOH+IR组在上述各项指标的变化上无明显差异。结论 T3能在肾脏再灌注的晚期阶段发挥作用,促进IL-10、IL-1Ra的表达,减轻中性粒细胞浸润所产生的炎症反应,改善肾功能。 展开更多

关键词 三碘甲状腺原氨酸 肾 再灌注损伤 白细胞介素10 白细胞介素1受体阻滞剂

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药理学

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《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第4期246-251,共6页

IGF-1经PI3K／Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡；15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响；β淀粉样肽前体蛋白N端肽段对糖尿病鼠脑凋亡相关改变的作用；大鼠体内硝基精氨酸的手性代谢动力学；大蒜多糖对阿霉素所... IGF-1经PI3K／Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡；15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响；β淀粉样肽前体蛋白N端肽段对糖尿病鼠脑凋亡相关改变的作用；大鼠体内硝基精氨酸的手性代谢动力学；大蒜多糖对阿霉素所致小鼠心脏毒性的拮抗作用；克罗米酚对骨髑间质干细胞增殖和向成骨细胞分化的影响；西洋参有效部位的抗肿瘤作用研究；PLC对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响；人参皂苷Rg1延缓细胞衰老过程中端粒长度和端粒酶活性的变化；托吡脂对青霉素诱发大鼠痫性放电和海马区相关递质含量的影响；盐酸埃他卡林对内皮素系统的影响；磷脂酰肌醇-3-激酶在胰岛素与表皮生长因子激活MAPK信号通路中的不同作用；重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对大鼠胶原性关节炎的治疗作用；动态观察不同的药理性阻断剂对膜磷脂PtdIns（4，5）P2的代谢过程的影响特征；二苯乙烯苷对高胆固醇血症致β-淀粉样肽增高大鼠模型的影响；沉默Cdk7导致pRb和Cdk2磷酸化水平下降并诱导HepG2细胞凋亡；2，3-二甲基-2-丁胺新衍生物对脑神经细胞钾通道的影响；非诺贝特对高脂血症兔血清及脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α；TSA抑制NB4细胞去乙酰化酶活性并促进细胞周期素激酶抑制剂表达；松果菊苷对TNF-α诱导的SH-SYSY细胞凋亡的保护作用；健康人连续口服不同剂量胺碘酮的血药浓度的临床研究；PGA1对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响；紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究；异甘草素对脑缺血再灌注小鼠认知功能障碍及能量代谢的影响；黄芪提取物对局灶性脑缺血再灌注损伤的抗氧化及线粒体保护作用；雏菊叶龙胆酮对局灶性脑缺血损伤的保护作用及机制探讨；原花青素对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究；大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响；一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响；当归多糖硫酸酯抗小鼠L6565逆转录病毒的作用；三氟拉嗪诱发细胞凋亡及对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位表达和P38磷酸化的抑制作用；灵芝多糖对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响；竹芪口服液对动物心血管、呼吸、神经系统的影响及急性毒性研究；多药耐药基因MDR1 C3435T多态性与口服环孢素A清除率的关系。 展开更多

关键词 局灶性脑缺血再灌注损伤 HEPG2细胞凋亡 白细胞介素-1受体拮抗剂 细胞钙离子浓度 磷脂酰肌醇-3-激酶 药理学 心脏微血管内皮细胞 一氧化氮合酶抑制剂 MAPK信号通路

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