表达小反刍兽疫病毒F蛋白的重组山羊痘病毒疫苗的研究 被引量：6

1

作者 曲林茂 陈伟业 +5 位作者 胡倩倩 胡森 张倩 支海兵 黄克和 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期415-420,共6页

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-P... 本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28d以相同剂量进行二次免疫。分别于一免后21d和二免后14d采血后分离血清进行病毒中和试验。结果表明,一免后21d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1∶40、≥1∶80、≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次别为1∶20、1∶40、1∶20,全部阳转;二免后14d,GPV中和抗体效价≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次为1∶20、1∶80、1∶40。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础。 展开更多

关键词 小反刍兽疫 F蛋白 山羊痘病毒载体 重组疫苗 中和抗体

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共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达 被引量：2

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作者 鲁会军 霍晓伟 +3 位作者 任静强 常巧呈 金扩世 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期30-35,共6页

为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A... 为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 P1-2A基因 3C基因 IL-18基因 表达

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采用非洲地区广泛应用的绵羊痘弱毒株构建表达小反刍兽疫病毒H蛋白的重组疫苗 被引量：4

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作者 孙一瑞 张敏敏 +3 位作者 李翠翠 李博文 陈伟业 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期226-229,共4页

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因的重组绵羊痘病毒(SPV),本研究利用e GFP报告基因和gpt筛选基因筛选纯化了PPRV H基因的重组SPV(rSPV-PPRV-H)。通过PCR、序列测定和间接免疫荧光的方法对rSPV-PPRV-H进行鉴定。结果显示PPRV的H基因... 为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因的重组绵羊痘病毒(SPV),本研究利用e GFP报告基因和gpt筛选基因筛选纯化了PPRV H基因的重组SPV(rSPV-PPRV-H)。通过PCR、序列测定和间接免疫荧光的方法对rSPV-PPRV-H进行鉴定。结果显示PPRV的H基因重组至rSPV-PRRV-H中并表达PPRV H蛋白;同时病毒的生长曲线也显示外源H基因的插入并未影响亲本病毒的复制。将该重组病毒经皮内注射途径免疫绵羊,免疫剂量为105.5 TCID50,间隔4周,免疫两次,中和试验结果显示rSPV-PPRV-H免疫绵羊后能够诱导其产生高滴度的抗PPRV的特异性中和抗体,抗体转阳率为100%(6/6)。本研究为rSPV-PPRV-H作为PPRV疫苗提供了实验依据。 展开更多

关键词 小反刍兽疫 H蛋白 绵羊痘病毒载体 重组疫苗

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猪圆环病毒病研究与综合防控策略

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作者 张国红 张沥引 邓远明 《北方牧业》 2016年第6期22-23,共2页

(接上期)5公共卫生安全意义与疫苗研究Mauro等指出:人的TT病毒(TTV,一种肝炎病毒)与其他动物圆环病毒有很多特异的型,尤其是鸡贫血病毒(CAV)。目前尽管只有一个学者报道过在给肝炎(非AG型)患者输血后,能分离出TTV,该病毒也属于动物圆环... (接上期)5公共卫生安全意义与疫苗研究Mauro等指出:人的TT病毒(TTV,一种肝炎病毒)与其他动物圆环病毒有很多特异的型,尤其是鸡贫血病毒(CAV)。目前尽管只有一个学者报道过在给肝炎(非AG型)患者输血后,能分离出TTV,该病毒也属于动物圆环病毒属,并且在该病例中检测出了猪圆环病毒(PCV)抗体。由于该病毒很广泛地存在于猪体内,人和猪在环境接触、食物链关系等方面联系非常紧密。 展开更多

关键词 猪圆环病毒病 鸡贫血病毒 环境接触 防控策略 肝炎病毒 公共卫生 疫苗研究 灭活疫苗 痘病毒载体疫苗 白细胞干扰素

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狂犬病疫苗研究进展 被引量：1

5

作者 江馗语 《中国工作犬业》 2015年第11期15-17,共3页

在全球共有150多个国家和地区存在狂犬病,每年大约有2~6万人死于该病,其中99%发生在亚洲和非洲等发展中国家。有关国际组织已经制定了全球消灭狂犬病的目标路线图,计划到2015年和2020年,分别在拉美国家和东南亚国家消灭人类和犬的狂犬病。

关键词 狂犬病疫苗 狂犬病病毒 疫苗预防 痘病毒载体疫苗 中和抗体 伪狂犬病毒 拉美国家 重组病毒 国际社会 细胞免疫应答

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绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备 被引量：2

6

作者 胡换仪 汪建中 +4 位作者 刘昌锦 林敏 刘小兰 魏黄思梧 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期328-337,共10页

【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其... 【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其插入到基础质粒载体pSW中,构建重组转移载体pSW-EGFP-His;采用脂质体转染的方法使该载体与SWPV(SWPV-JX20G株)同源重组,经蚀斑纯化获得rSWPV-EGFP-His。重组病毒进行PCR和SDS-PAGE鉴定,扩增并纯化EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗GFP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗GFP单克隆抗体进行效价及特异性鉴定。【结果】PCR和SDS-PAGE结果显示,成功构建并纯化到rSWPV-EGFP-His,该病毒感染PK15细胞可稳定表达EGFP-His蛋白,蛋白大小约27 ku,为可溶性表达,镍柱纯化的EGFP-His蛋白溶液呈明显的绿色。EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠血清抗体效价高达1∶256000。采用杂交瘤技术制备了9株能稳定分泌抗EGFP-His单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA和Western blotting结果显示,9株单克隆抗体中的7株针对GFP的线性表位,另外2株单克隆抗体针对GFP的构象表位。【结论】本研究成功制备了EGFP-His蛋白和9株抗EGFP-His的单克隆抗体,为后续建立GFP的免疫学检测方法提供了必备材料。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 猪痘病毒载体 真核表达 单克隆抗体

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疫苗

7

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第4期44-46,共3页

关键词 疫苗研究 抗原决定基 痘病毒载体 重组疫苗 乙型肝炎病毒 单克隆抗体 免疫反应 启动子调控 免疫源性 杂交瘤

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疫苗

8

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第6期53-56,共4页

关键词 抗原决定基 百日咳杆菌 抗体活性 带状疤疹病毒 启动子 单克隆抗体 融合蛋白 基因克隆 外膜蛋白 痘病毒载体

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疫苗

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第11期62-68,共7页

912245 从霍乱毒素到亚单位疫苗[英]/Holmgren,J.…∥Cur.Sci.-1990,59(13～14).-665～669[译自DBA,1990,9(23)90-13452] 过去10年来的广泛研究已提供了找到一些口服疫苗候选者,它们是非活细菌和提纯的B亚单位抗原或产生B单位基的霍乱弧... 912245 从霍乱毒素到亚单位疫苗[英]/Holmgren,J.…∥Cur.Sci.-1990,59(13～14).-665～669[译自DBA,1990,9(23)90-13452] 过去10年来的广泛研究已提供了找到一些口服疫苗候选者,它们是非活细菌和提纯的B亚单位抗原或产生B单位基的霍乱弧菌(Vibrio cholerae)01的减活突变体.重组DNA技术可以制备一系列的霍乱弧菌01突变体,它们缺失编码霍乱毒素A和B单位基的基因或仅A亚单位基因.这些菌株对感染能起保护免疫反应,但有50%以上的接种者发生腹泻. 展开更多

关键词 疫苗研究 痘病毒载体 抗原抗体 免疫反应 蛋白免疫 中和抗体 交叉免疫电泳 金丝雀痘病毒 重组疫苗 单克隆抗体

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新禽流感疫苗研制成功

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《湖南畜牧兽医》 2005年第4期38-38,共1页

由国家禽流感参考实验室研制的H5N1、亚型重组禽流感病毒灭活疫苗、H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗已经取得成功。研制者称H5N1、亚型重组禽流感病毒灭活疫苗，其种子株是采用当前国际先进的禽流感病毒反向基因操作技术构建而成，... 由国家禽流感参考实验室研制的H5N1、亚型重组禽流感病毒灭活疫苗、H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗已经取得成功。研制者称H5N1、亚型重组禽流感病毒灭活疫苗，其种子株是采用当前国际先进的禽流感病毒反向基因操作技术构建而成，对禽类及哺乳动物高度安全，免疫力高，对鸡的有效免疫力可达10个月以上， 展开更多

关键词 禽流感 重组禽流感病毒灭活疫苗 重组鸡痘病毒载体活疫苗 研制 免疫保护力

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禽流感疫苗获突破鸡免疫保护期更长

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《河北畜牧兽医》 2005年第3期57-57,共1页

在农业部和科技部共同主持下，具有国际先进水平的新型高效的重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型)和禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗。由农业部动物流感重点开放实验室研制成功。该两种疫苗近日通过农业部兽药审评委员会评审．获得农业部新... 在农业部和科技部共同主持下，具有国际先进水平的新型高效的重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型)和禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗。由农业部动物流感重点开放实验室研制成功。该两种疫苗近日通过农业部兽药审评委员会评审．获得农业部新兽药证书。 展开更多

关键词 鸡 免疫保护期 重组禽流感病毒灭活疫苗 禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗 农业部动物流感重点开放实验室

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我国研制出新禽流感疫苗

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《农村科技》 2005年第8期53-53,共1页

我国研制的H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗、H5亚型禽流感重组鸡痘病毒栽体活疫苗已经取得成功。新型疫苗能够彻底切断高致病性禽流感——H5N1亚型禽流感病毒通过水禽向家禽、哺乳动物和人类传播的传播链。

关键词 H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗 H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗 研制 中国

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我国率先推出两种防禽流感疫苗

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作者 唐国策 《中国牧业通讯》 2005年第11期25-25,共1页

关键词 H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗 H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗 中国农科院哈尔滨兽医研究所 反向基因操作技术

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两个新型H5亚型禽流感疫苗研制成功

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《饲料工业》 北大核心 2004年第4期3-3,共1页

关键词 禽流感 H5N1亚型灭活疫苗 重组禽痘病毒活载体疫苗 研制 生物安全性

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两个新型H5亚型禽流感疫苗研制成功

15

作者 甄云肖 《中国牧业通讯》 2004年第6期15-15,共1页

关键词 中国 H51亚型 禽流感 灭活疫苗 重组禽痘病毒活载体疫苗 免疫保护力 生物安全评价

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我国禽流感疫苗研制处于世界领先

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作者 章光 《农业知识（科学养殖）》 2006年第2期41-41,共1页

我国禽流感科技攻关取得了大批成果：中国自行研制的H5N2灭活苗、H5N1基因重组灭活苗、H5禽流感重组禽痘病毒活载体疫苗等系列疫苗，可分别用于鸡、水禽、肉禽的免疫接种，有效降低免疫成本，保证各种不同禽类的免疫需要。

关键词 疫苗研制 禽流感 重组禽痘病毒活载体疫苗 世界 免疫接种 自行研制 科技攻关 基因重组 H5N1 灭活苗

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新型禽流感疫苗研制成功

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《河南畜牧兽医》 2004年第5期44-44,共1页

关键词 禽流感疫苗 H5N1亚型灭活疫苗 重组禽痘病毒活载体疫苗 生物安全评价 新兽药评审

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