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病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术及其在大豆基因功能研究和育种中的应用潜力 被引量:4
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作者 王爽 郭兵福 +4 位作者 郭勇 张丽娟 金龙国 杨慧 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期536-540,共5页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS植株的获得策略及其在大豆中的应用等内容进行了综述并对今后的发展趋势进行了讨论。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 病毒载体 功能基因 育种
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芦笋病毒诱导基因沉默体系的初步构建
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作者 吴贺 李云宾 +3 位作者 董陈文华 林春 刘正杰 毛自朝 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期31-41,共11页
【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄... 【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄红素脱氢酶编码基因(AoPDS)和镁螯合酶Ⅰ亚基编码基因(AoCH42)为报告基因,基于苹果潜伏球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)沉默载体,采用真空渗透法通过农杆菌对芦笋露白种子进行侵染,经表型和qRT-PCR检测,构建芦笋的VIGS体系,并进一步验证编码芦笋NADH-脱氢酶铁硫蛋白亚基S8基因(AoNDUFS8)的功能。【结果】侵染21 d后,AoPDS和AoCH42沉默植株分别出现白化和黄化表型;AoNDUFS8沉默植株长势瘦弱,发育迟缓。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,植株侵染后,目的基因表达均下降,预示成功构建芦笋VIGS体系。【结论】基于ALSV的VIGS体系能有效沉默芦笋中的目的基因,为后续芦笋功能基因组分析提供了实践基础。 展开更多
关键词 芦笋 病毒诱导基因沉默(vigs)体系 PDS CH42 基因功能
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基于病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法的LsRGL1基因在生菜中的功能分析
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作者 陈丽 范双喜 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-26,60,共7页
为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡... 为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡切片、实时荧光定量PCR(qPCR)方法、酶联免疫吸附法(ELISA)分别研究空白对照组(无TRV载体)、阴性对照组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2空载体)和试验组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2-LsRGL1重组载体)中植株表型、花芽分化、LsRGL1基因的相对表达量和内源激素质量分数的变化。结果表明:病毒侵染后,试验组植株的茎长相对于空白对照组和阴性对照组的茎长明显增大,且试验组各项表型数据均大于2个对照组的表型数据,而空白对照组与阴性对照组各项表型数据之间并未出现明显差异;石蜡切片结果表明试验组植株已经开始花芽分化,相较于对照组提前进入生殖生长时期;qPCR分析结果显示,试验组中LsRGL1基因的相对表达量相较于空白组和阴性对照组的显著下调,且下调幅度均超过50%。试验组中内源激素赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的含量显著高于对照组的含量,而茉莉酸(JA)含量显著下降。综上可知,沉默LsRGL1基因加快了生菜的抽薹。 展开更多
关键词 生菜 表达分析 内源激素 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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苏麦3号小麦穗部病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系的建立及验证 被引量:3
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作者 吴磊 姜朋 +2 位作者 张瑜 马鸿翔 张旭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗... 为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗中PDS基因表达量下调了77%(P<0.05)。接种BSMV∶00的小麦穗受到赤霉病菌侵染后,穗部平均病小穗数和DON毒素含量分别为2.75个和4.55μg/g,与接种无菌水对照无显著差异(P>0.05)。说明在苏麦3号穗部VIGS系统中,通过接种病毒能使靶标基因沉默;接种赤霉病菌后,苏麦3号病小穗数和DON毒素含量不受接种病毒的影响,对赤霉病菌的抗性保持不变,建立的VIGS体系可以应用于小麦赤霉病抗性候选基因的功能分析。 展开更多
关键词 小麦 赤霉病抗性 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)在园林植物中的研究与应用
5
作者 张丽英 《河南林业科技》 2022年第2期32-34,共3页
基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物... 基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物的基因组研究夯实基础。 展开更多
关键词 基因沉默 vigs 园林植物 病毒诱导
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中国番茄黄化曲叶病毒利用根吸收法诱导基因沉默(VIGS)的初步研究 被引量:4
6
作者 张召军 王晓彬 +3 位作者 王慧 刘林 张心阁 何秀霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期143-146,共4页
以含硫黄素酶Su基因的中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNA作为载体,通过冻融法将其转化到农杆菌中,利用根部吸收法进行农杆菌侵染,对农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系进行了优化,探讨对病毒诱导基因沉默效率的影响。结果显示以OD600值为1.5... 以含硫黄素酶Su基因的中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNA作为载体,通过冻融法将其转化到农杆菌中,利用根部吸收法进行农杆菌侵染,对农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系进行了优化,探讨对病毒诱导基因沉默效率的影响。结果显示以OD600值为1.5的含质粒pBinPLUS-2mβ-Su,pBinPLUS-1.7A的农杆菌菌液1∶1混合进行根部吸收法侵染22-25 d的番茄幼苗,目的基因Su沉默导致番茄幼苗出现光漂白现象,半定量RT-PCR检测目的基因Su mRNA被显著降解,该体系的建立有利于对植物基因进行高通量功能分析。 展开更多
关键词 病毒诱导基因沉默 硫黄素酶Su基因 根吸收法
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植物基因功能鉴定新工具——病毒诱导基因沉默技术的研究进展 被引量:18
7
作者 张增艳 姚乌兰 辛志勇 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2006年第1期100-105,共6页
病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术是指带一段靶基因序列的VIGS重组病毒侵染植物、引起植物同源基因沉默与表型变异,进而通过表型变异进行基因功能分析的方法,是近年发展起来的从反向遗传学方向快速鉴定植物基... 病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术是指带一段靶基因序列的VIGS重组病毒侵染植物、引起植物同源基因沉默与表型变异,进而通过表型变异进行基因功能分析的方法,是近年发展起来的从反向遗传学方向快速鉴定植物基因功能的技术,是转录后基因沉默机制的一种表现。①VIGS的分子机制,涉及基因沉默的起始、维持和信号放大、传播共3个阶段;②VIGS技术、载体与方法学的发展;③VIGS作为基因功能研究的优越性,如不必进行转基因、操作方法简便、获得结果快速等;④应用VIGS对植物抗病途径、代谢与发育调控中参与基因功能进行研究的概况。同时,展望了VIGS技术作为植物功能基因组学功能分析的高通量技术平台的美好前景。 展开更多
关键词 病毒诱导基因沉默 基因功能分析 病毒载体
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病毒诱导的基因沉默技术及其在植物中的研究进展 被引量:15
8
作者 张新华 李富军 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期419-424,共6页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是近年来发现的一种转录后基因沉默现象,是植物抵抗病毒侵染的一种自然机制。现已被开发为快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术。与传统的植物转基因技术相比,VIGS无需... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是近年来发现的一种转录后基因沉默现象,是植物抵抗病毒侵染的一种自然机制。现已被开发为快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术。与传统的植物转基因技术相比,VIGS无需构建转基因植株,而且具有操作简便、获得表型快速等优点,目前已广泛应用于与植物抗病、逆境胁迫、细胞信号转导以及生长发育等相关基因功能的研究。该文就VIGS技术的作用机理、主要操作规程、在植物基因功能研究方面的应用以及存在的问题进行综述。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 病毒载体 植物 基因功能
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病毒诱导基因沉默技术引入普通生物学实验教学实践 被引量:4
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作者 朱峰 纪兆林 钱坤 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期127-129,共3页
普通生物学实验具有实践性强和操作性强等特点,在大学生物类专业人才培养中占有显著地位。为了能在实验教学中充分锻炼和培养学生的实验操作技能、创新能力和意识,提高教学质量,将当前生物学研究前沿技术--病毒诱导的基因沉默(Virus-ind... 普通生物学实验具有实践性强和操作性强等特点,在大学生物类专业人才培养中占有显著地位。为了能在实验教学中充分锻炼和培养学生的实验操作技能、创新能力和意识,提高教学质量,将当前生物学研究前沿技术--病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing, VIGS)技术引入普通生物学实验教学中。通过实验教学,明显提高了学生的兴趣,培养了学生独立工作能力和创新思维能力,使学生初步具备一定的科研能力和创新能力。 展开更多
关键词 普通生物学 病毒诱导的基因沉默 实验教学 创新能力
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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建
10
作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(vigs) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建
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VIGS诱导GS同工酶基因沉默对烤烟氮代谢的影响 被引量:4
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作者 郭玉鸽 张路阳 +3 位作者 党伟 杨铁钊 杨惠娟 李波 《中国烟草学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期79-87,共9页
【背景和目的】谷氨酰胺合成酶(GS)是烤烟氮代谢的关键酶,为探究沉默GS同工酶基因对烤烟氮代谢的影响。【方法】采用病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术构建GS同工酶基因(NtGS1、NtGS2)瞬时沉默表达载体,测定了... 【背景和目的】谷氨酰胺合成酶(GS)是烤烟氮代谢的关键酶,为探究沉默GS同工酶基因对烤烟氮代谢的影响。【方法】采用病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术构建GS同工酶基因(NtGS1、NtGS2)瞬时沉默表达载体,测定了烤烟品种中烟100叶片经VIGS处理10 d,20 d和30 d的NtGS1-1、NtGS1-2、NtGS2相对基因表达量和谷氨酰胺合成酶(GS)、硝酸还原酶(NR)活性以及叶片可溶性蛋白、总氮、烟碱含量和烟株生物量。【结果】沉默NtGS1基因的处理对NtGS1-1沉默效率最高为50.4%,对NtGS1-2沉默效率最高为56%,沉默NtGS1和NtGS2基因的处理对NtGS2沉默效率最高为54.9%;沉默NtGS1和NtGS2的烟株叶片重、GS、NR活性、可溶性蛋白、总氮、烟碱含量都显著低于对照。【结论】本研究建立的VIGS体系有效下调了GS同工酶基因的表达,同时沉默NtGS1和NtGS2(TRV::GS1::GS2)可抑制叶片氮素同化利用,降低氮代谢关键酶活性与含氮化合物含量。 展开更多
关键词 病毒诱导基因沉默 GS同工酶 烤烟 氮代谢
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病毒诱导的基因沉默技术在双子叶植物中的应用研究进展 被引量:6
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作者 张琴琴 纪兆林 朱峰 《河南农业科学》 北大核心 2020年第2期1-8,共8页
病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是能够快速鉴定基因功能的反向遗传学重要方法之一,是一种RNA水平转录后的基因沉默现象。因其具有试验周期短、操作方法简单、成本低、效率高、获得表型快以及高通量等优点,被大... 病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是能够快速鉴定基因功能的反向遗传学重要方法之一,是一种RNA水平转录后的基因沉默现象。因其具有试验周期短、操作方法简单、成本低、效率高、获得表型快以及高通量等优点,被大量运用于植物基因功能研究中。阐述了VIGS技术的作用机制,综述了VIGS技术在茄科、豆科、蔷薇科、葫芦科、锦葵科和菊科等双子叶植物中的应用及存在的问题,对前景进行展望,为进一步拓展VIGS的应用提供参考。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 双子叶植物 茄科 豆科 蔷薇科 葫芦科 锦葵科 菊科
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利用病毒诱导的基因沉默技术沉默TSWV的NSm基因 被引量:2
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作者 张萍萍 桂敏 +3 位作者 李慧芳 张美玲 李永忠 刘雅婷 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期582-589,共8页
【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)在全球范围内严重危害农业生产,病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术主要用于植物内源基因的功能研究,而其沉默植物外源病毒基因用于病毒防控... 【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)在全球范围内严重危害农业生产,病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术主要用于植物内源基因的功能研究,而其沉默植物外源病毒基因用于病毒防控鲜有报道。本研究利用VIGS技术在辣椒中沉默植物外源病毒TSWV的NSm基因,为辣椒产业防控TSWV病害奠定技术基础。【方法】以辣椒(Capsicum annuum L.)为研究材料,首先构建辣椒PDS基因的沉默载体pTRV2-PDS以评估该沉默载体在辣椒中的有效性,再构建TSWV NSm基因的沉默载体pTRV2-NSm评估该沉默载体对TSWV NSm基因的沉默效果。【结果】构建的沉默载体pTRV2-PDS在辣椒中有效,沉默载体pTRV2-NSm可以高效沉默TSWV的NSm基因,NSm的表达量仅为对照组的4.6%,且表现出对TSWV的抗性。【结论】构建的沉默载体pTRV2-NSm可以沉默TSWV的NSm基因,并使辣椒对TSWV产生一定的抗性。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 烟草脆裂病毒 NSm基因
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病毒诱导基因沉默技术在豆科植物中的应用 被引量:5
14
作者 魏正欣 孙虎 +3 位作者 向艳涛 蒋浩中 沙爱华 刘良军 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期497-502,共6页
病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种基于转录后基因沉默的反向遗传学研究方法,用于快速鉴定基因功能。该技术具有实验周期短、操作简便、低成本、高效率、获得表型快以及高通量等优点,被广泛地应用于植物基因... 病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种基于转录后基因沉默的反向遗传学研究方法,用于快速鉴定基因功能。该技术具有实验周期短、操作简便、低成本、高效率、获得表型快以及高通量等优点,被广泛地应用于植物基因功能研究。豆科植物作为人类食品中淀粉、蛋白质、油和蔬菜的重要来源之一,具有重要的经济价值。本文从VIGS的技术原理、VIGS载体的开发和改良、VIGS在豆科植物中的应用等方面进行了综述,分析了VIGS技术在豆科植物中存在的问题,并展望了其应用前景。 展开更多
关键词 豆科植物 病毒诱导基因沉默 vigs载体
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石蒜同源基因沉默体系构建及鳞茎发生基因功能验证 被引量:1
15
作者 肖潇 夏宜平 +3 位作者 崔柳 张佳平 洪震 任梓铭 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第1期89-101,共13页
本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp... 本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp;经双酶切后与烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)载体TRV2-GFP连接,从而构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)重组载体;转化根癌农杆菌后,用菌液侵染损伤刺激后的鳞茎块。侵染2 d后,观察到鳞茎维管组织中存在绿色荧光;实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorogenic quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测发现,沉默组LiCWIN基因表达量显著降低。侵染40 d后,相较于空载体对照组,LiCWIN基因沉默组小鳞茎发生数量下降且发育迟缓。上述结果表明,VIGS体系在海滨石蒜鳞茎组织中成功沉默了功能基因,且对小鳞茎后期发育的表型产生了持续影响。特别是LiCWIN基因沉默后,小鳞茎发生受阻。本研究为石蒜鳞茎发生发育关键基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 石蒜属 基因功能 瞬时验证 病毒诱导的基因沉默 体系构建 CWIN基因 小鳞茎发生
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利用VIGS技术在本氏烟中沉默枸杞PDS同源基因的研究 被引量:3
16
作者 曲玲 李彦龙 +6 位作者 焦恩宁 赵建华 秦垦 尹跃 周旋 安巍 曹有龙 《宁夏农林科技》 2021年第2期25-30,F0002,共7页
【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的V... 【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的VIGS空载体中,通过农杆菌介导的侵润接种,将重组的病毒沉默载体pTRV2-PDS转入本氏烟中。【结果】本氏烟幼苗被侵染接种后,沉默处理植株的叶片呈现整叶白化的表型,而阴性对照植株叶片一直未出现变白的症状,qRT-PCR检测表明,接种17 d后,与阴性对照植株相比,沉默处理植株PDS基因的表达显著地被抑制(P<0.05),说明枸杞PDS基因的同源基因在本氏烟中得到了有效沉默。【结论】该VIGS体系的构建,可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选,旨在提高枸杞基因功能研究的效率。 展开更多
关键词 枸杞 八氢番茄红素脱饱和酶基因(PDS) 病毒诱导基因沉默(vigs) 本氏烟
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病毒诱导的基因沉默 被引量:18
17
作者 徐幼平 徐秋芳 +2 位作者 宋晓毅 张志新 蔡新忠 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期119-131,共13页
病毒诱导的基因沉默"(virus-induced gene silencing,VIGS)一词最早用于描述被病毒侵染的植物的恢复"现象,是一种植物抗病毒侵染的自然机制,现在已被开发成通过插入目的基因片段的重组病毒抑制植物内源基因表达的遗传技术,用... 病毒诱导的基因沉默"(virus-induced gene silencing,VIGS)一词最早用于描述被病毒侵染的植物的恢复"现象,是一种植物抗病毒侵染的自然机制,现在已被开发成通过插入目的基因片段的重组病毒抑制植物内源基因表达的遗传技术,用于基因功能分析.VIGS由小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)驱动,siRNA单链与RNA诱导的沉默复合物(RNA induced silencing complex,RISC)结合后,特异性地和与siRNA同源的靶标RNA结合,并降解RNA模板.已有源于15种不同类型病毒的VIGS载体得到开发和应用.在VIGS载体中插入的目的片段、重组VIGS病毒载体的植物导入方法、沉默处理时的寄主生育期、沉默处理后的植物培育条件等均显著影响VIGS的效率.作为一种新型的基因鉴定和功能研究技术工具,VIGS具有无需事先知道目的基因全长序列、获取表型迅速、无需构建转基因植株等诸多优点,已越来越广泛地被应用于植物基因功能研究. 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 机理 载体 沉默效率 功能基因组学
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病毒诱导的基因沉默及其在植物基因功能研究中的应用 被引量:21
18
作者 陶小荣 周雪平 +1 位作者 崔晓峰 钱亚娟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期777-783,共7页
RNA介导的基因沉默是近年来在生物体中发现的一种基于核酸水平高度保守的特异性降解机制 .病毒诱导的基因沉默 (virusinducedgenesilencing ,VIGS)是指携带植物功能基因cDNA的病毒在侵染植物体后 ,可诱导植物发生基因沉默而出现表型突... RNA介导的基因沉默是近年来在生物体中发现的一种基于核酸水平高度保守的特异性降解机制 .病毒诱导的基因沉默 (virusinducedgenesilencing ,VIGS)是指携带植物功能基因cDNA的病毒在侵染植物体后 ,可诱导植物发生基因沉默而出现表型突变 ,进而可以研究该目的基因功能 .至今 ,已经建立了以RNA病毒、DNA病毒、卫星病毒和DNA卫星分子为载体的VIGS体系 ,这些病毒载体能在多种寄主植物 (包括拟南芥、番茄和大麦 )上有效抑制功能基因的表达 .VIGS已开始应用于N基因和Pto基因介导的抗性信号途径中关键基因的功能研究、抗病毒相关的寄主因子研究以及植物代谢和发育调控研究 .在当前植物基因组或EST序列大量测定的情况下 。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 基因功能 病毒载体
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利用BSMV-VIGS技术快速分析小麦TNBL1基因的抗黄矮病功能 被引量:9
19
作者 赵丹 赵继荣 +4 位作者 黄茜 李宁 刘艳 黄占景 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2106-2110,共5页
小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技... 小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA序列,推导该基因编码1个NBS-LRR蛋白,将其命名为TNBL1。本研究利用大麦条纹花叶病毒(BSMV)诱导的基因沉默(virus-inducing gene silencing,VIGS)技术,快速分析TNBL1是否参与小麦抗黄矮病反应。通过PCR添加酶切位点、定向酶切与连接,将TNBL1特异的292bp片段反向整合到BSMV-γ链的多克隆位点上,获得重组载体BSMV-γ:TNBL1as,体外转录BSMV-VIGS载体的3个组分(BSMV-TNBL1as、BSMV-α和BSMV-β),等量混合、摩擦接种到抗黄矮病的小麦易位系YW642幼苗叶片上,使YW642中TNBL1基因沉默,然后接种BYDV病原进行黄矮病抗性鉴定。结果表明,TNBL1基因沉默后的YW642对BYDV敏感、显现感病症状,其体内BYDV含量较未发生基因沉默的YW642中的明显增加,证明TNBL1基因是正向调控小麦抗BYDV反应的1个重要基因。 展开更多
关键词 小麦 中间偃麦草 黄矮病 病毒诱导的基因沉默 NBS-LRR
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病毒诱导番茄的基因沉默 被引量:11
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作者 马红珍 裴冬丽 +3 位作者 耿慧霞 王来 王文静 李成伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1531-1537,共7页
该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄... 该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄表现出明显的光漂白现象。半定量RT-PCR检测表明,PDS的mRNA被显著降解。该沉默体系的建立为下一步大规模验证番茄基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 八氢番茄红素脱氢酶 病毒诱导基因沉默 烟草脆裂病毒
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