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猪圆环病毒2型病毒样颗粒三倍轴区域嵌合猪细小病毒抗原表位的展示策略及免疫原性
1
作者 蔡云凤 李宏 +8 位作者 黄小铭 何庆 丁振宇 余婉婷 罗施乐 陈方志 王乃东 杨毅 湛洋 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期307-318,共12页
为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力,本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示,分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在... 为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力,本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示,分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在大肠杆菌表达系统中所表达的突变体蛋白的可溶性和纯化难易程度,确定合适的外源表位嵌合区。将嵌合PPV抗原表位的Cap蛋白经体外组装获得重组的病毒样颗粒,将此病毒样颗粒免疫小鼠,通过抗体检测来评价其免疫原性。结果显示,PCV2核衣壳表面三倍轴区域存在两个适合用于展示外源表位的氨基酸区域(分别命名为Motif A和Motif B),相同表达条件下,Motif A区域的突变蛋白均以可溶性表达为主,且能一步纯化获得目的蛋白,而Motif B区域的突变蛋白多以包涵体形式存在;Motif A区域嵌合PPV表位后,纯化的重组蛋白能在体外组装成cVLPs,并通过间接免疫荧光试验证明其保留有野生型VLPs内化PK15细胞的能力;形成的cVLPs能刺激小鼠机体产生分别针对PCV2 VLPs、B5-E1表位和PPV VP2蛋白的抗体。综上表明,PCV2 Cap蛋白Loop GH区域Motif A能够将外源表位展示在病毒样颗粒外表面,并且能够被机体免疫细胞识别产生特异性抗体。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 三倍轴区域 外源表位
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基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定
2
作者 王运航 景伟 +3 位作者 穆素雨 孙世琪 郭慧琛 白满元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页
脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。 展开更多
关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 脑心肌炎病毒 病毒样颗粒
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H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒的构建
3
作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国兽药杂志》 2024年第7期1-12,共12页
为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Wes... 为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Western-blot鉴定重组蛋白的免疫活性,再将rBV-HA-M1和rBV-NA以最佳感染复数比例共感染昆虫Sf9细胞,经浓缩后获得病毒样颗粒,同时进行血凝滴度测定和透射电镜观察。透射电镜观察结果显示,表达的HA-M1和NA重组蛋白可以在Sf9细胞中自组装形成病毒样颗粒,浓缩的病毒样颗粒能够凝集1%的鸡红细胞,血凝效价为1∶64。试验结果为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 病毒样颗粒 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中的新型应用
4
作者 张满义 梁军 +3 位作者 于三科 冯泽泰 蒲小峰 张志刚 《中国动物保健》 2024年第8期10-11,共2页
口蹄疫作为一种高度传染性病毒性疾病,主要感染偶蹄类动物,如牛、羊和猪等,对养殖业造成严重影响。疫苗是口蹄疫防控的重要手段之一,近年来研究表明,猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中展现出了新的应用前景。本文就该疫苗的基本特点... 口蹄疫作为一种高度传染性病毒性疾病,主要感染偶蹄类动物,如牛、羊和猪等,对养殖业造成严重影响。疫苗是口蹄疫防控的重要手段之一,近年来研究表明,猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中展现出了新的应用前景。本文就该疫苗的基本特点、应用情况、免疫效果、安全性评估以及在口蹄疫防控中的作用等方面进行综述,旨在为猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中的更广泛应用提供参考。 展开更多
关键词 口蹄疫 猪矿化病毒样颗粒疫苗 防控 新型应用
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猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定 被引量：11
5
作者 王席 李国攀 +2 位作者 陈清清 徐保娟 荣俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1792-1800,共9页
为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacry... 为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化。通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测其组分分布。结果显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53%。Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35~19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VLPs含量为92.67%。本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 病毒样颗粒(vlps) 纯化 鉴定 凝胶过滤层析 离子交换层析
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重组外源基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建与鉴定 被引量：21
6
作者 潘群兴 何孔旺 +3 位作者 王永山 温立斌 茅爱华 郭容利 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1245-1250,共6页
将猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白第165-200位氨基酸多肽基因嵌合在猪细小病毒(PPV)VP2 N端,然后重组到腺病毒pAdEasy-1表达系统中,转染HEK-293A细胞,获得重组腺病毒(rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap)。IFA和Western blotting分析分别可见特异性荧... 将猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白第165-200位氨基酸多肽基因嵌合在猪细小病毒(PPV)VP2 N端,然后重组到腺病毒pAdEasy-1表达系统中,转染HEK-293A细胞,获得重组腺病毒(rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap)。IFA和Western blotting分析分别可见特异性荧光和大小约为64 ku的特异性带,表明rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap在HEK-293细胞中成功地表达了PPV∶VP2和PCV2∶Cap蛋白。红细胞凝集试验证实,表达的嵌合PPV∶VP2-PCV2∶Cap蛋白具有与PPV全病毒类似的血凝活性。电镜观察嵌合PPV∶VP2-PCV∶Cap蛋白的粗提物,发现可自行装配成许多病毒样粒子[PPV∶VLP(PCV2)]。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪圆环病毒2型 嵌合 病毒样颗粒
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新城疫病毒样颗粒研究进展 被引量：9
7
作者 戈胜强 赵明 +4 位作者 吴晓东 王静静 刘华雷 包静月 王志亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期686-691,共6页
病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是指利用异源宿主系统表达的病毒结构蛋白自行组装成不含病毒基因组、不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。VLPs具备构想逼真、安全、稳定、可刺激体液和细胞免疫应答、作为载体表达其他... 病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是指利用异源宿主系统表达的病毒结构蛋白自行组装成不含病毒基因组、不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。VLPs具备构想逼真、安全、稳定、可刺激体液和细胞免疫应答、作为载体表达其他抗原以及可设计成区分自然感染与免疫接种等诸多优点。这些优点使得VLPs在过去30年中成为新一代疫苗制备平台。作者就新城疫VLPs相关研究进展进行较为详尽的综述,以期为中国新城疫VLPs的研究提供参考。 展开更多
关键词 新城疫病毒 病毒样颗粒 疫苗
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冠状病毒颗粒样疫苗研究进展 被引量：9
8
作者 宋丽丽 毕玉彧 +2 位作者 甘书钻 孙新宽 磨美兰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期102-106,共5页
冠状病毒主要包括严重急性呼吸道综合征病毒、鸡传染性支气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒和鼠肝炎病毒等,给人类健康和养殖业带来巨大风险,避免风险的有效手段是研制出高效安全的疫苗。病毒样颗粒是由病毒的一个或多个结构蛋白自动组装... 冠状病毒主要包括严重急性呼吸道综合征病毒、鸡传染性支气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒和鼠肝炎病毒等,给人类健康和养殖业带来巨大风险,避免风险的有效手段是研制出高效安全的疫苗。病毒样颗粒是由病毒的一个或多个结构蛋白自动组装而成,但不含病毒核酸的空壳结构,具有安全性高、免疫原性好的优点,可作为冠状病毒病的候选疫苗。论文就病毒颗粒样疫苗的免疫机制、冠状病毒的结构蛋白在病毒组装和成熟中的作用、应用杆状病毒表达系统构建病毒样颗粒疫苗的优点、常见冠状病毒的颗粒样疫苗研究概况进行综述,为相关病毒颗粒样疫苗研究提供参考。 展开更多
关键词 冠状病毒 杆状病毒表达系统 病毒样颗粒 疫苗
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猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装 被引量：8
9
作者 冷勇 宋振辉 +2 位作者 卿家超 翟少华 买买提.艾孜子 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1432-1437,共6页
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M和sM结构蛋白基因，将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual，获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM，将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆... 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M和sM结构蛋白基因，将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual，获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM，将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM，在Cellfection作用下，将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM。通过WesternBlot、间接免疫荧光试验（IFA）进行检测，结果显示：重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rBac-M和rBae-M-sM分别感染sf9昆虫细胞，进行TGEV病毒样颗粒（VLPs）的体外组装试验。结果表明，M蛋白在sf9细胞内单独表达，M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达，都可形成TGEV病毒样颗粒，而且病毒粒子大小不等，直径在61～101nm。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒（TGEV） M基因 sM基因 SF9细胞 病毒样颗粒
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犬细小病毒病毒样颗粒研究进展 被引量：4
10
作者 王斌 徐绮嫔 +3 位作者 郭慧琛 曹随忠 孙世琪 姚学萍 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期81-85,共5页
犬细小病毒病毒样颗粒(VLPs)是利用表达系统体外表达犬细小病毒衣壳蛋白VP2后,自我组装而成,与天然病毒具有相似的形态和空间结构,其不含有病毒的遗传物质,且具有较好的安全性和免疫原性,能有效刺激机体产生良好的免疫反应。犬细小病毒... 犬细小病毒病毒样颗粒(VLPs)是利用表达系统体外表达犬细小病毒衣壳蛋白VP2后,自我组装而成,与天然病毒具有相似的形态和空间结构,其不含有病毒的遗传物质,且具有较好的安全性和免疫原性,能有效刺激机体产生良好的免疫反应。犬细小病毒病毒样颗粒在生物医药领域的应用主要集中于研发病毒样颗粒疫苗,而应用病毒样颗粒作为生物载体亦是目前的关注热点。此外,近年来利用不同表达系统表达犬细小病毒VP2蛋白后组装获得病毒样颗粒的报道层出不穷。基于此,论文综述了犬细小病毒病毒样颗粒的获得及其应用研究进展,以期为相关科研工作者提供参考。 展开更多
关键词 犬细小病毒 病毒样颗粒 体外组装 生物应用 疫苗
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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒组装研究 被引量：5
11
作者 董虎 郭慧琛 +4 位作者 敖大 韩世充 闫丹 刘湘涛 孙世琪 《安徽农业科学》 CAS 2014年第13期3902-3906,共5页
[目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础。[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源... [目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础。[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源多肽的口蹄疫病毒样颗粒。[结果]大肠杆菌表达的口蹄疫衣壳蛋白主要以可溶性存在,在缓冲体系中融合标签被切除衣壳蛋白VP0、VP3和FLAGVP1组装成病毒样颗粒,其大小约25 nm左右。FLAG序列成功插入GH-loop可变区第150-151氨基酸位点之间,外源多肽的插入没有影响衣壳蛋白VP1的空间结构。[结论]口蹄疫loop可变区引入外源抗原是可行的,但外源多肽的大小及理化性质会影响病毒样颗粒的组装效率。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 原核表达 GH-loop 嵌合型病毒样颗粒
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含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用 被引量：2
12
作者 冯春燕 杜方原 +5 位作者 刘丹丹 Pershin Andrey 王彩霞 张永宁 吴绍强 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3287-3293,共7页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 参考物质 病毒样颗粒 检测方法
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口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建 被引量：3
13
作者 窦小龙 任晓冰 +3 位作者 魏婕 苗书魁 冉多良 马文戈 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期11-14,共4页
为制备Asia 1型口蹄疫病毒（FMDV）双层结构病毒样颗粒，选择牛病毒性腹泻病毒（BVDV）流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169～270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1～211位氨基酸，两者之间设计柔性肽连接，人工合成 ... 为制备Asia 1型口蹄疫病毒（FMDV）双层结构病毒样颗粒，选择牛病毒性腹泻病毒（BVDV）流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169～270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1～211位氨基酸，两者之间设计柔性肽连接，人工合成 p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列，全基因长990 bp。合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体 p7257-P43连接，构建成表达质粒 p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽胞杆菌 WB800，经筛选、鉴定，获得表达 p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的 LB中培养后，菌体超声破碎可检测到目的蛋白。Western blot 结果显示，该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体，具有良好的反应原性。电镜观察显示，融合蛋白组装为直径约50 nm大小的病毒样颗粒（VLP）。 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 融合蛋白 枯草芽胞杆菌
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含非洲马瘟病毒部分核酸序列的病毒样颗粒的研制 被引量：1
14
作者 孙敏 梁成珠 +4 位作者 王群 张晓文 肖西志 耿娟 陈吉祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期637-643,共7页
VP7蛋白是非洲马瘟病毒(AHSV)群特异性蛋白,其编码基因S7基因常被用作AHSV RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测的靶标基因。本研究旨在构建耐RNase的内含AHSV部分核酸序列的病毒样颗粒。首先合成S7基因保守序列,然后克隆到含有噬菌体包膜蛋白... VP7蛋白是非洲马瘟病毒(AHSV)群特异性蛋白,其编码基因S7基因常被用作AHSV RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测的靶标基因。本研究旨在构建耐RNase的内含AHSV部分核酸序列的病毒样颗粒。首先合成S7基因保守序列,然后克隆到含有噬菌体包膜蛋白基因的带组氨酸纯化标签的假病毒表达载体pNH-MS2his上,成功构建原核表达载体pNH-MS2his-VP7。将重组质粒pNH-MS2his-VP7转化BL21(DE3),并进行诱导表达及镍离子亲和层析纯化后,得到含AHSV部分RNA片段的病毒样颗粒。试验证实该病毒样颗粒均匀性和稳定性良好,可作为AHSV PCR检测的质控品和标准品使用。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 组氨酸标签 病毒样颗粒 检测
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PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究 被引量：1
15
作者 徐志文 蒋清蓉 +4 位作者 郭万柱 朱玲 胡秋炅 陈扬 廖晓丹 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1303-1308,共6页
将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经... 将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪圆环病毒 病毒样颗粒 免疫应答
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病毒性出血性败血症病毒N基因的病毒样颗粒制备及定值 被引量：2
16
作者 王群 姜帆 +4 位作者 岳志芹 孙涛 郑小龙 张晓文 房保海 《中国动物检疫》 CAS 2018年第1期100-103,共4页
为制备含有病毒性出血性败血症病毒(VHSV)N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS_2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS_2his-N;将重组质粒pNH-MS_2his-N转化至表达菌株BL21(DE3),... 为制备含有病毒性出血性败血症病毒(VHSV)N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS_2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS_2his-N;将重组质粒pNH-MS_2his-N转化至表达菌株BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化;对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性试验,使用数字PCR对病毒样颗粒进行定值。结果显示,该病毒样颗粒含VHSV N基因序列,并且稳定性良好,定值结果为8×10~6 copies/m L。结果表明,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 病毒样颗粒 N基因 数字PCR
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诺如病毒病毒样颗粒疫苗免疫小鼠诱导的体液和黏膜免疫应答 被引量：2
17
作者 刘悦越 赵荣荣 +2 位作者 赵一荣 张韵祺 杜加亮 《山西医科大学学报》 CAS 2021年第12期1570-1575,共6页
目的观察GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒(Norovirus,NoV)病毒样颗粒疫苗免疫小鼠诱导的体液和黏膜免疫应答。方法7周龄BALB/c小鼠20只被随机分为对照组和疫苗组,每组10只。疫苗组每只小鼠腹腔注射0.1 ml疫苗,含GⅠ.1和GⅡ.4型衣壳蛋白VP1各10μg及... 目的观察GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒(Norovirus,NoV)病毒样颗粒疫苗免疫小鼠诱导的体液和黏膜免疫应答。方法7周龄BALB/c小鼠20只被随机分为对照组和疫苗组,每组10只。疫苗组每只小鼠腹腔注射0.1 ml疫苗,含GⅠ.1和GⅡ.4型衣壳蛋白VP1各10μg及0.08 mg氢氧化铝佐剂,对照组腹腔注射0.08 mg/0.1 ml氢氧化铝佐剂,第0,21天免疫。首次免疫后第7,14,21,28,35天,采集血清和粪便,测定血清GⅠ.1和GⅡ.4型IgG、IgG1、IgG2a、IgM、IgA、组织血型抗原(histoblood group antigen,HBGA)阻断抗体及粪便IgA。采用SPSS 23.0软件统计两组间和不同时间点各型抗体水平的差异。结果疫苗组小鼠第1剂免疫后第7天产生较高水平的NoV型特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgM,IgA在第2剂免疫后第7天明显升高。疫苗组的各型抗体均高于对照组,两组间差异均有统计学意义(P<0.01)。疫苗组不同时间点的抗体,除GⅠ.1型IgG和IgG1外,其他差异均有统计学意义(P<0.01)。疫苗组首剂免疫后第28天和第35天的各型血清IgA抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。首剂免疫后第28天,粪便GⅠ.1型和GⅡ.4型IgA分别为160和80,血清GⅠ.1型和GⅡ.4型抗体阻断效价50分别为400和800。结论GⅠ.1/GⅡ.4诺如病毒疫苗可诱导小鼠产生体液和黏膜免疫应答,可能对NoV引起的疾病具有保护作用。 展开更多
关键词 诺如病毒 疫苗 病毒样颗粒 体液免疫 黏膜免疫 抗体应答
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病毒样颗粒疫苗及其在猪病防控中的应用研究进展 被引量：1
18
作者 庄金秋 梅建国 +2 位作者 李峰 王艳 沈志强 《养猪》 2015年第3期121-124,共4页
病毒样颗粒(VLPs)疫苗因其免疫原性好、安全性好,已成为研制安全高效的预防人和动物病毒性疾病的潜在候选疫苗。文章综述了VLPs疫苗在猪病防控中的应用研究进展,以期为兽医科技工作者和广大养殖业主更好的了解和对疾病进行有效的预防和... 病毒样颗粒(VLPs)疫苗因其免疫原性好、安全性好,已成为研制安全高效的预防人和动物病毒性疾病的潜在候选疫苗。文章综述了VLPs疫苗在猪病防控中的应用研究进展,以期为兽医科技工作者和广大养殖业主更好的了解和对疾病进行有效的预防和控制提供参考。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 疫苗 猪病 防控 研究进展
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口蹄疫病毒样颗粒研究进展 被引量：1
19
作者 魏婕 魏玉荣 易忠 《草食家畜》 2015年第4期6-10,共5页
病毒样颗粒(VLP)具有与真实病毒粒子大小相似的结构,能引起免疫应答但不具有感染性。口蹄疫病毒是无囊膜的RNA病毒,其结构蛋白可组装成VLP,且具有良好的免疫原性。本文对口蹄疫病毒VLP的免疫机制、表达系统及应用、口蹄疫病毒VLP作为抗... 病毒样颗粒(VLP)具有与真实病毒粒子大小相似的结构,能引起免疫应答但不具有感染性。口蹄疫病毒是无囊膜的RNA病毒,其结构蛋白可组装成VLP,且具有良好的免疫原性。本文对口蹄疫病毒VLP的免疫机制、表达系统及应用、口蹄疫病毒VLP作为抗原在诊断和疫苗中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 蹄疫病毒 病毒样颗粒 疫苗
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猪繁殖与呼吸综合征病毒样颗粒疫苗研究进展 被引量：3
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作者 吴忆春 《动物医学进展》 北大核心 2018年第9期72-76,共5页
猪繁殖与呼吸综合征是当前危害世界养猪业最重要的传染病之一,可引起母猪的繁殖障碍和各种年龄的猪呼吸道相关疾病。目前,主要采用灭活疫苗和活疫苗来防控该病。由病毒一种或多种结构蛋白自行组装而成的病毒样颗粒,不含病毒基因组,不能... 猪繁殖与呼吸综合征是当前危害世界养猪业最重要的传染病之一,可引起母猪的繁殖障碍和各种年龄的猪呼吸道相关疾病。目前,主要采用灭活疫苗和活疫苗来防控该病。由病毒一种或多种结构蛋白自行组装而成的病毒样颗粒,不含病毒基因组,不能复制、不具有感染能力。病毒样颗粒具有和真正病毒相似的结构,它们呈递免疫细胞的途径相同,刺激机体产生免疫应答,目前,已经研制了多种人和动物病毒的病毒样颗粒疫苗。论文就病毒样颗粒的特点及猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究现状做以综述,为研究和制备猪繁殖与呼吸综合征新型病毒样颗粒疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 病毒样颗粒 疫苗
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